Анализ крови лошадей на инфекции

Обновлено: 27.03.2024

Микроскопия мазка крови является одним из методов диагностики векторных (трансмиссивных заболеваний), зачастую на приеме в клинике. Наиболее распространенные из них: анаплазмоз, эрлихиоз, бабезиоз, гепатозооноз, цитозооноз кошек, дирофиляриоз, гематропные микоплазмозы. Реже чума собак, токсоплазмоз, лейшманиоз.

Возможные находки при окраске мазка – вирусные и бактериальные включения, тельца Жолли, и др.

Анаплазмозы ‒ это трансмиссивные заболевания, которые вызываются Anaplasma phagocytophilum и Anaplasma platys ‒ грамотрицательными внутриклеточными паразитическими протобактериями, принадлежащими семейству Anaplasmataceae.

Основными переносчиками A. phagocytophilum являются клещи комплекса Ixodes ricinus-persulcatus. В Европе основным переносчиком являются клещи Ixodes ricinus, а в России и Азии ‒ Ixodes persulcatus и Dermacentor silvarum.

A. phagocytophilum передается между разными стадиями клеща (от личинки нимфе и далее имаго), но не трансовариально (от имаго ‒ яйцам). Заражение собак и кошек происходит при питании на них инфицированных нимф или имаго клещей, которые, в свою очередь, заражаются при питании на диких животных-резервуарах. Инфицирование возможно, если клещ находится на животном в прикрепленном состоянии в течение 36-48 часов. После попадания A.phagocytophilum в кровяное русло микроорганизм прикрепляется к поверхности нейтрофилов, а затем проникает в клетки путем эндоцитоза. A. phagocytophilum вызывает нарушение функции нейтрофилов, что определяет возможность выживания микроорганизма внутри данных клеток. A. phagocytophilum может поражать клетки костного мозга и мегакариоциты, однако их роль в патогенезе инфекции остается неясной.

Эрлихиозы ‒ это группа трансмиссивных заболеваний, которые вызываются внутриклеточными, грамотрицательными бактериями Ehrlichia canis, Ehrlichia ewingii и Ehrlichia chaffeensis и переносятся клещами. Бактерии образуют морулы в фагосомах циркулирующих лейкоцитов. Ehrlichia canis поражает моноциты и вызывает моноцитарный эрлихиоз собак (МЭС), который является одной из наиболее значимых инфекций домашних собак по всему миру. Ehrlichia ewingii поражает гранулоциты и вызывает гранулоцитарный эрлихиоз собак. Ehrlichia chaffeensis поражает мононуклеарные лейкоциты, вызывая моноцитарный эрлихиоз человека; собаки являются резервуарными хозяевами. Географическое распространение того или иного патогена обычно ограничено ареалом переносчиков и резервуарных хозяев.

Тяжесть клинических симптомов при эрлихиозе зависит от таких факторов, как размер инокулума, функционального состояния иммунной системы хозяина, вида и штамма микроорганизма и наличия сопутствующих инфекций. Клиническая картина может осложняться тем, что у разных микроорганизмов могут быть одни и те же переносчики, поэтому часто встречаются коинфекции такими патогенами, как Babesia spp. и Bartonella spp.

E. canis переносится преимущественно коричневым собачьим клещом (Rhipicephalussanguineus), инфекция встречается у собак в Азии, Африке, Америке, Европе. Существует несколько штаммов E. canis, которые отличаются вирулентностью. Личинки клещей заражаются при питании на инфицированных собаках. Возможна трансстадиальная передача инфекции E. canis (от личинки нимфе и имаго).

Очевидной возрастной или половой предрасположенности к МЭС у собак не наблюдается, однако данные, что немецкие овчарки более восприимчивы к заболеванию. Прогноз на исход заболевания у собак этой породы обычно менее благоприятный. У собак смешанных пород заболевание встречается реже. Была описана спонтанная инфекция E. canis у кошек в Северной и Южной Америке, однако клинический эрлихиоз у данного вида встречается редко.

Микроорганизм размножается в мононуклеарных фагоцитах путем бинарного деления; при разрушении инфицированных клеток происходит заражение здоровых клеток.

Микроорганизмы Ehrlichia и Anaplasma можно непосредственно наблюдать при окрашивании по Романовскому мазков периферической крови. Они выглядят как базофильные короткие палочки или плейоморфные коккобациллы размером от 0,2 до 1,0 мкм, обнаруживаемые поодиночке или в скоплениях внутри ограниченных мембраной клетки-хозяина цитоплазматических вакуолях, так называемых морулах. Различные микроорганизмы инфицируют преимущественно различные клетки крови, в том числе нейтрофилы и эозинофилы, лимфоциты и моноциты, а также тромбоциты (A.platys). Количество свободно циркулирующих микроорганизмов часто ниже предела выявления с помощью световой микроскопии. Вероятность выявления возбудителей возрастает при исследовании мазков лейкоцитарной пленки.

Бабезиоз (пироплазмоз) – это широко распространенное трансмиссивное заболевание, вызываемое кровепаразитами рода Babesia, переносчиками которого являются клещи. В зависимости от географического месторасположения, переносчиками бабезиоза могут быть Rhipicephalus sanguineus, Dermatocentor reticulatus, Haemaphysalis eliptica. Передача Babesia spp. происходит при укусе клеща-переносчика. Возможна прямая передача малой бабезии Babesia gibsoni при укусах с глубоким повреждением кожи (у бойцовых собак). На сегодняшний день классификация бабезиоза собак включает деление на большую и малую формы. B. сanis является наиболее распространенной большой бабезией и имеет три отдельных подтипа: B. сanis vogeli (распространена в Африке, Азии, Европе, Америке), B. canis canis (в Европе), B. canis rossi (в Африке). К малым бабезиям собак относят: B. gibsoni (встречается в Африке, Азии, Австралии, Европе, Америке), B. conradae (в Калифорнии), B. microti-like (в Северно-Западной Испании).

Бабезиоз кошек не изучался столь подробно, как бабезиоз собак. У кошек были обнаружены несколько видов малых бабезий, включая Babesia felis, B. cati и B. leo. Инфекция обычно встречается у животных в возрасте до трех лет, породной или половой предрасположенности не наблюдается. Виды больших бабезий также могут вызывать болезни у кошек.

Патогенность бабезий определяется, главным образом, видом и штаммом микроорганизма. В патогенезе заболевания играют роль возраст инвазированного животного и характер иммунного ответа. Цикл развития бабезий протекает в эритроцитах собак или кошек. После деления дочерние формы бабезий выходят из эритроцитов, разрушая их, и проникают в еще не зараженные красные клетки крови. Цикл размножения повторяется. Две основные формы Babesia, большие и мелкие формы, могут быть идентифицированы микроскопически.

Паразиты могут выглядеть в мазке крови как светло-голубые микроорганизмы парной каплевидной формы внутри эритроцита, имеющие темно-фиолетовое ядро (Babesia canis) или как тонкие кольца с эксцентрично расположенным фиолетовым ядром (в виде кольца-перстня), например B.gibsoni.

Нутталлиоз лошадей (nuttalliosis) - это пироплазмидоз, характеризующийся повышением температуры, угнетенностью общего состояния, анемией, желтушностью слизистых оболочек, нарушением сердечно-сосудистой и пищеварительной систем. Нутталлиоз лошадей имеет более широкое распространение на юге страны, вызывается кровопаразитом Nuttallia equi из сем. Piroplasmatidae.

H. canis способен вызывать воспалительные скелетные поражения: поражения надкостницы и периостит. Кроме того, высокая пораженность животных проявляется лихорадкой, летаргией, анемией и истощением. Часто может протекать бессимптомно. Особенно тяжело протекает такая форма при коинфицировании эрлихиями, бабезиями и другими возбудителями трансмиссивных инфекций. Как правило, при заражении.

С использованием микроскопических методов гематоциты Hepatozoon довольно часто диагностируются в нейтрофилах.

В условиях клиники диагностика может быть осуществлена путем обнаружения гамонтов в крови (окрашенный мазок). Однако, чувствительность такого метода крайне низка. Повысить чувствительность исследования можно путем получения концентрата белых клеток крови с помощью седиментации в гематокритном капилляре с последующей окраской выделенного слоя лейкоцитов.

Цитозооноз – трансмиссивное инфекционное заболевание с широким диапазоном географического распространения. Возбудитель - гемопротозойный паразит Cytauxzoon felis, который передается векторным путем ( иксодовые клещи Dermacentor variabilis и Amblyomma americanum, Amblyomma cajennense и др. ) . Относится к отряду Piroplasmida, семейству Theileriidae.

Хотя C. felis является видом, наиболее распространенным среди домашних кошек в США, это только один из нескольких видов из рода Cytauxzoon.

Заражение C. felis или близкородственными простейшими , встречается у широкого круга диких видов кошачьих. Предполагаемый резервуар-хозяин, который обитает в Соединенных Штатах рысь (Lynx rufus rufus), а также крупные и дикие крупные кошки.

Больные и здоровые кошки могут жить вместе без передачи возбудителя при отсутствии вектора. Паразит может присутствовать в организме в двух формах – неэритроцитарной (стадия шизонта) и эритроцитарной (пироплазмы).

Заболевание наблюдается у кошек разного возраста и пола. Породной предрасположенности нет.

В жизненном цикле C. felis половая фаза размножения происходит в кишечнике клеща . Оокинеты выходят из кишечника, попадают в полости организма и мигрируют в слюнные железы, где они размножаются как инфекционные спорозоиты. После того, как они попадают в организм хозяина во время проглатывания клеща , они проникают и развиваются, прежде всего, внутри фагоцитов. Они сначала визуализируются как нечеткие везикулярные структуры в цитоплазме инфицированных клеток и позже, как большие, отчетливые, ядерные шизонты, которые активно подвергаются делению по шизогонии и бинарному делению. Созревшие шизонты отпочковываются (мерозоиты) и в конечном счете, заполняют всю клетку хозяина. Фагоциты заполняют просветы сосудов практически в каждом органе , вплоть до образования тромбов.

Клетка-хозяин, разрушаясь , высвобождает мерозоиты в кровь или тканевую жидкость. Мерозоиты появляются в макрофагах, а через 1-3 дня после этого они наблюдаются в эритроцитах. Затем они внедряются в незараженные эритроциты и вызывают паразитемию поздней стадии, которую можно обнаружить при микроскопии мазков крови , обычно от 1 до 3 дней до клинической болезни.

В мазке крови Cytauxzoon felis похож на Babesia gibsoni, мелкие одиночные включения в виде кольца (перстня) с небольшим темным ядром внутри эритроцита.

Dirofilaria immitis и Dirofilaria repens – паразитические нематоды, принадлежащие надсемейству Filarioidea. Окончательными хозяевами паразитов являются собаки, в редких случаях – кошки. Кроме собак, заражению повержены лисы, волки, койоты, дикие кошки, хорьки, ондатры, носухи, морские львы, а также люди. Промежуточными хозяевами являются комары родов Aedes, Anopheles и Culex.

После инокуляции 2-3 месяца личинки находятся в подкожной клетчатке и мышцах, за это время они два раза линяют.

Dirofilaria repens вызывает кожную форму дирофиляриоза. Взрослые черви, достигающие длины 15 см, локализуются в подкожной клетчатке. Жизненный цикл сходен с таковым D. immitis. Продолжительность препатентного периода составляет 6-8 месяцев. Инвазия обычно протекает в субклинической форме, в некоторых случаях может развиваться дерматит, сопровождающийся локальной алопецией, зудом, эритемой и образованием корочек.

У лошадей возможно обнаружить в мазке крови микрофилярий круглых гельминтов Setaria equina семейства Filariidac подотряда Filariata, которые вызывают заболевание сетариоз лошадей. Половозрелые сетарии паразитируют в брюшной и грудной полостях, печени, перикарде и других органах, личинки — в крови. Преимагинальные стадии развития могут проникать в переднюю камеру глаза. Сетарии — биогельминты. Промежуточными хозяевами являются кровососущие комары родов Aedes и Culex. Известно, что личинки паразита циркулируют в крови лошадей и мулов. Максимальное их количество в периферической крови наблюдается вечером, когда происходит активизация комаров и нападение их на животных для кровососания. В организме насекомых личинки развиваются в грудных мышцах, а потом мигрируют к хоботку. За 12 — 16 суток они становятся инвазионными. Заражение непарнокопытных животных происходит во время нападения на них для кровососания инвазированных промежуточных хозяев. Паразиты достигают половой зрелости в организме лошадей в течение 8 — 10 мес.

При микроскопии окрашенного мазка микрофилярии трудно идентифицировать до вида или рода.

Гемотропные микоплазмозы - гемоплазмы – это мелкие (0,3-0,8 мкм) некультивируемые микроорганизмы, которые локализуются на поверхности эритроцитов и вызывают гемолитическую анемию различной степени тяжести у инфицированных животных. Гемоплазмы поражают широкий круг млекопитающих, включая человека, распространены повсеместно.

Минимум три вида гемоплазм вызывают инфекции у домашних и диких кошек: Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum и Candidatus Mycoplasma turicensis. M. haemofelis (ранее называемая штаммом из Огайо, или крупной формой Haemobartonella felis) является наиболее патогенным организмом, вызывающим гемолитическую анемию от умеренной до выраженной у иммунокомпетентных кошек. Данное заболевание называется инфекционной анемией кошек. При цитологическом исследовании мазков крови M. haemofelis имеют форму кокков, иногда образующих цепи по три-шесть микроорганизмов.

Ca. M. haemominutum (ранее называемая калифорнийским штаммом, или малой формой H. felis) обычно меньше, чем M. haemofelis. Связи между инфицированием данным организмом и заболеванием у иммунокомпетентных кошек установлено не было. При цитологическом исследовании мазков крови Ca. M. haemominutum обнаруживаются как кокки малого размера, от 0,3 до 0,6 мкм в диаметре. Однако достоверно отличить M. haemofelis от Ca. M. haemominutum с помощью данного метода невозможно. Ca. M. haemominutum встречается у кошек по всему миру, инфекции наблюдаются у 20% кошек, поступающих на прием в ветеринарные госпитали. Инфекция Ca. M. haemominutum у кошек вызывает незначительное снижение гематокрита. У кошек с коинфекцией FeLV и Ca. M. haemominutum отмечается более выраженная анемия, чем при моноинфекции Ca. M. haemominutum, а прогрессирование миелопролиферативного заболевания, вызванного FeLV, происходит быстрее.

Несколько видов гемоплазм могут поражать собак. У собак, которым была проведена спленэктомия, и в редких случаях при наличии иммуносупрессивных патологий или коинфекций, наблюдается гемолитическая анемия при инфекции Mycoplasma haemocanis (ранее называемой Haemobartonella canis). M. haemocanis представляет собой микроорганизм округлой формы, зачастую формирующий длинные цепи. Распространенность данной инфекции особенно высока у собак, выращенных в питомниках, у которых часто отмечается субклиническая форма болезни.

У собак было обнаружено еще три вида гемоплазм. Candidatus Mycoplasma haematoparvum представляет собой микроорганизм небольшого размера (0,3 мкм) округлой формы, имеющий морфологическое и генетическое сходство с C.. Mycoplasma haemominutum.

Пути передачи инфекции гемоплазм остаются неясными.Очевидно, блохи и другие членистоногие могут играть роль в передаче инфекции гемоплазм у кошек, однако данные экспериментальных исследований по данному вопросу недостаточно убедительны.

M. haemofelis и C. M. haemominutum - оба эти гемопаразита прикрепляются к поверхности эритроцита, при этом C. M. haemominutum является меньшим из двух микроорганизмов, и обычно выглядит в форме темного стержня на поверхности эритроцита.

M. haemofelis большего размера и может образовывать отчетливые тела в виде кольца , которые можно увидеть на эритроцитах в мазке крови. Часто, только один из этих простейших обнаруживают в мазке крови. Некоторые кошки могут быть заражены обоими видами.

Чума плотоядных- острая контагиозная вирусная болезнь домашних собак и диких животных (многих видов отряда хищных), имеющая большое ветеринарное значение. Заболевание вызывается вирусом чумы плотоядных (Canine Distemper Virus, CDV), который является оболочечным, плеоморфным РНК-содержащим вирусом, принадлежащим роду Morbillivirus (семейство Paramyxoviridae). CDV родственен вирусу кори и вирусу чумы крупного рогатого скота и использовался в качестве модели при изучении патогенеза кори. Вирусная оболочка состоит из трех белков: гемагглютинина (Н), белка слияния (F) и матриксного белка (М). Именно Н-белок играет определяющую роль в присоединении вируса к клеткам и проникновении в них. Инфекция у собак может протекать в форме тяжелого заболевания, поражающего различные системы организма ‒ пищеварительную, респираторную и нервную.

Хорьки восприимчивы к заболеванию, в то время как у кошек оно не встречается. Вирус, выделяемый дикими животными (например, енотами), может поражать домашних собак, а вирус, выделяемый домашними собаками, представляет значительную опасность для диких животных, вызывая вспышки заболевания с высоким уровнем смертности. Вирус чумы плотоядных также является одним из патогенов, вызывающих комплекс респираторных инфекций собак (КРИС).

На ранних стадиях заболевания цитоплазматические тельца-включения, содержащие вирус, можно обнаружить в небольшом количестве циркулирующих лимфоцитов и в единичных моноцитах, нейтрофилах и эритроцитах. Включения крупные (до 3 мкм), округлой или овальной формы, различные по цвету – от синевато-серого до пурпурного. Выявление клеток с включениями более вероятно, при исследовании препаратов лейкоцитарной пленки.

Сроки исполнения: 1 день ( плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: цельная кровь.

Метод исследования: микроскопия мазка.

Подготовка пациента, показания и противопоказания: Специальной подготовки животного не требуется.

  • Лихорадка;
  • анемия (обычно регенеративная);
  • тромбоцитопения;
  • гиперглобулинемия;
  • спленомегалия;
  • желтуха и пигментурия;
  • скрининг при выборе донора крови или при подборе животных для разведения;
  • лимфаденопатия.

Противопоказания: не известны.

Метод отбора биоматериала: венепункция периферической вены.

Преаналитика: взятие крови — пробирка с розовой крышкой (с ЭДТА)0,5 мл; для крупных собак можно использовать пробирку с сиреневой крышкой (с ЭДТА) 2 мл. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом.

Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8° С.

Интерпретация результата: в норме кровепаразиты не обнаруживают. Отсутствие кровепаразитов в мазке крови не исключает наличия инфекции.

Результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной диагностики , в т.ч. ПЦР, ИФА или ELISA .


Инфекционная анемия лошадей является тяжелой, остропротекающей вирусной болезнью. До настоящего времени стоит в ряду важнейших проблем ветеринарной вирусологии как с теоретической, так и с практической стороны. Болезнь характеризуется разнообразием форм (острая, подострая, хроническая, латентная, бессимптомная) и течения, а также неадекватностью иммунологического ответа организма на введение вируса, поэтому трудно диагностируется [2].

Диагноз ставится комплексно, учитывая эпизоотические особенности, результаты клинического и лабораторного исследований, гематологические, патолого-анатомические и гистологические изменения.

Инфекционной анемией лошадей болеют только однокопытные: лошади, пони, ослы и мулы. От больных лошадей здоровым вирус передается через укусы кровососущих насекомых. Основные переносчики – слепни. Случаи возникновения инфекционной анемии регистрируется чаще в летний период, из-за большого количества кровососущих насекомых. Инфекционная анемия регистрируется в болотистой, лесистой местности, бассейнах рек. Случаи заболевания лошадей зимой связаны с обострением болезни у лошадей-хроников или переносом вируса при гемотрансфузиях, вакцинации и других операциях.

Болезнь протекает в виде эпизоотий, часто бессимптомно. Эпизоотическая вспышка ИНАН обычно продолжается 3-5 мес. Вначале обнаруживаются заболевшие лошади, у которых болезнь протекает остро или сверхостро, в дальнейшем наблюдаются случаи хронического течения и латентной (скрытой) формы болезни.

Наиболее характерный признак инфекции – анемия – сопровождается резким уменьшением эритроцитов, гемоглобина, разжижением крови, ухудшением ее свертываемости. Поражается ЦНС, развиваются дистрофические изменения в печени, почках, желудочно-кишечном канале, усиливается распад белков, нарушаются обменные процессы. Развивается угнетаются защитные свойства организма и ретикулоэндотелиальной системы. Смерть наступает в результате резкого нарушения деятельности ЦНС, интоксикации, анемии и паралича сердца.

Лабораторный диагноз на инфекционную анемию устанавливают на основании серологических (реакция диффузионной перципитаци), гематологических и патоморфологических исследований. В сомнительных случаях – ставят биологическую пробу [3,4,5].

Для исследования в ветеринарную лабораторию доставляют: сыворотку крови лошадей (5-6 мл) для серологического исследования, кровь (10-12мл), стабилизированную 20% раствором лимоннокислого натрия для гематологического исследования (кровь берут до кормления и поения лошади), кусочки печени, селезенки, почек, сердца, легких и лимфатических узлов, взятых у павших или убитых с диагностической целью животных для гистологического исследования.

Серологический метод основан на обнаружении антител к вирусу инфекционной анемии в сыворотке крови подозрительных по заболеванию лошадей путем постановления реакции диффузной преципитации. В качестве специфического антигена в реакции используют либо вирус, накопленный на культуре лейкоцитов лошади, либо суспензию селезенки больных лошадей.

При остром течении болезни и коротком инкубационном периоде у исследуемого животного могут быть получены отрицательные результаты. В таком случае кровь повторно исследуют через 10-15 дней.

Гематологические исследования включают определение количества эритроцитов в 1мм 3 крови, количества гемоглобина и скорости оседания эритроцитов (СОЭ).

Для больных лошадей характерна повышенная СОЭ, особенно в первые 15 мин (60-70 делений). СОЭ определяют при комнатной температуре.

В начале заболевания при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной.

При вскрытии трупов лошадей, павших от ИНАН находят множественные кровоизлияния на слизистых оболочках, серозных покровах, в подкожной клетчатке и в паренхиматозных органах. Кровоизлияния могут быть мелкими, точечными или более крупными, до нескольких см в диаметре. При тяжелой форме болезни с явлениями токсикоза находят крупнопятнистые кровоизлияния в слизистой кишечника, дыхательных путей, в мышцах и других тканях.

Для биологической пробы отбирают двух жеребят в возрасте 6-12 месяцев из хозяйств, благополучным по инфекционным болезням. Жеребят заражают сывороткой крови или плазмой.

Наблюдения за зараженными животными ведут в течение 90 дней. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят характерных клинических симптомов заболевания – рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических, гематологических исследований. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни и получении отрицательных гематологических и серологических исследований [1].

Лечение инфекционной анемии не разработано, больных лошадей уничтожают. Поэтому переболевшие ИНАН лошади часто приобретают определенную устойчивость к повторному заражению [5].

Библиографический список

Временные методические указания по лабораторной диагностике лошадей (Утверждены 25 марта 1983 г.). – 30 с.

Госманов Р.Г. Ветеринарная вирусология. [Текст] - Учебники и учеб. Пособия для студентов высш. учеб. Заведений / Р.Г. Госманов, Н .М. Колычев - М.: КолосС, 2006. – С. 157-159.

Юров, К.П. Профилактика вирусных болезней лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров. - М.: Колос, 1984. - С. 93-117.

Юров, К.П. Вирусные болезни лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров, Н.В. Крюков, Н.В. Лихачев - М. 1972. - 141-143с.

Юров, К.П. Вирусные болезни лошадей. [Текст] – Учебник / К.П. Юров, В.Е. Садиков - М.: Колос. 1973. – С. 105-138.

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Юров Глеб Константинович, Алексеенкова Светлана Валерьевна, Диас Хименес Кристина Артуровна, Юров Константин Павлович

В статье приведены современная стратегия серологической диагностики ИНАН, а также практическое применение альтернативных методов диагностики ИНАН в лаборатории вирусологии ВИЭВ

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Юров Глеб Константинович, Алексеенкова Светлана Валерьевна, Диас Хименес Кристина Артуровна, Юров Константин Павлович

Специфичность гуморальной иммунной реакции у быков-производителей на маркированную вакцину против ИРТ

Об использовании серологических и молекулярно-генетических методов при диагностике инфекционной анемии лошадей

Антигенные свойства нецитопатогенных штаммов вируса диареи – болезни слизистых крупного рогатого скота

Immunological Methods for Diagnostic of Equine Infectious Anemia

Equine infectious anemia (EIA) is characterized by longterm pathogen persistence regardless of the clinical course: acute, subacute and chronic. Antibodies and virus are presented in the blood of horses simultaneously. Cause of main pathological changes in horses is abnormal immune effect of antigen-antibody complexes. Immune response occurs on the immunodominant viral proteins responsible for the production of antibodies. Standard diagnostic method of EIA that allows to identify infected horses regardless of the clinical course of the infection is the agar gel immunodiffusion (AGID — Coggins test). Alternative methods there is ELISA and immunoblot3ing. For the direct detection of the virus in some cases the method of nested RT3PCR are used

Иммунологические методы диагностики инфекционной анемии лошадей

Г.К. Юров, кандидат биологических наук, С.В. Алексеенкова, кандидат биологических наук,

К.А. Диас Хименес, К.П. Юров, доктор ветеринарных наук.

Ключевые слова: диагностика, иммуноблоттинг, иммуноферментный анализ, инфекционная анемия лошадей, реакция диффузионной преципитации Сокращения: ВИЧ — вирус иммунодефицита человека, ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота, ДСН— додецилсульфат натрия, ДТТ — дитиотрейтол, ИНАН — инфекционная анемия, ИФА — иммуноферментный анализ, МЭБ — Международное Эпизоотическое Бюро, ОТ-ПЦР—полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией, ПААГ — полиакриламидный гель, РДП — реакция диффузионной преципитации, РН—реакция нейтрализации, РНГА — реакция непрямой гемагглютинации, РТГА — реакция торможения гемагглютинации, РСК — реакция связывания комплемента, РТСК — реакция торможения связывания комплемента

Ретровирусная инфекция лошадей, или ИНАН, характеризуется длительной (пожизненной) персистен-цией возбудителя, который наряду с возбудителями лейкоза крупного рогатого скота, ВИЧ, медленных инфекций овец и др. относится к семейству ретровирусов (Retroviridae), подсемейству лентивирусов ^епиутпае). В механизме длительной персистенции вируса и периодических рецидивов болезни ключевую роль играют дефектность ретикулоэндотелиаль-ной системы, низкая иммунная реакция на вирус, стабильная интеграция вирусного генома в ДНК клетки-хозяина и антигенный дрейф. Эти особенности патогенеза обусловливают трудности диагностики и борьбы с заболеванием. Клинически заболевание может протекать в острой, подострой или хронической форме.

В организме лошади вирус поражает макрофаги, моноциты и, возможно, другие типы клеток. Ответная иммунная реакция организма возникает на имму-нодоминантные вирусные белки, ответственные за продукцию антител [5]. Последние обнаруживают с по-

мощью иммунологических (серологических) реакций, представленных в таблице.

Нейтрализующие антитела к поверхностным гликопротеинам вируса появляются в среднем через 30 дней после заражения и обнаруживаются на протяжении многих лет. Однако защитное действие нейтрализующих антител невысокое. Ю. Коно с со-авт. экспериментально доказали, что вирус ИНАН подвержен антигенному дрейфу в течение его репродукции в организме [11]. Сыворотка крови зараженной лошади нейтрализует вирус, который используют для заражения, но она не активна против вновь репродуцированного вируса. Новые антигенные варианты вируса появляются в течение каждого рецидива болезни. При этом у лошади создается состояние нестерильного иммунитета, когда в крови одновременно присутствуют специфические антитела и инфекционный вирус. В результате формируются иммунные комплексы антиген-антитело.

Иммунологические реакции у лошадей на вирус ИНАН

Антитела Тест Специфичность Первое появление Титр Продолжительность

Преципитирующие РДП Групповая 14. 50 дней после заражения, 2. 10 дней после пирексии 1:4.1:16 (до 1:128) В течение жизни

Нейтрализующие РН Типовая к штамму 10.60 дней после заражения 1:128.1:256 (до 1:2048) То же

Иммунологические методы диагностики инфекционной анемии лошадей

Современная стратегия серологическом диагностики ИНАН

РДП — эталонный метод диагностики ИНАН лошадей, принятый за международный стандарт. Специфичность реакции и достоверность результатов были доказаны путем проведения международных испытаний этого теста, организованных профессором В. Тома (Высшая ветеринарная школа, Альфор, Франция) [6]. Установлена строгая корреляция положительных результатов теста с присутствием вируса в крови больных животных [6]. Кровь от лошадей, положительно реагирующих в РДП, содержит инфекционный вирус и при парентеральном введении здоровой лошади вызывает типичное заболевание. Надежность теста позволила МЭБ рекомендовать РДП для диагностики ИНАН при международных перевозках лошадей, их продаже на аукционах, участии в конноспортивных соревнованиях и т. д. [3]. Посредством РДП можно выявлять зараженных лошадей независимо от формы течения и продолжительности инфекционного процесса.

Основной вирусный антиген, участвующий в реакции, — полипептид с молекулярной массой 26 кДа (р26), продукт экспрессии вирусного гена gag, который составляет около 40 % всей массы полипептидов ви-риона. Ген gag представляет собой высококонсервативный участок генома и присутствует у всех антигенных вариантов вируса. В РДП выявляют антитела преимущественно к р26, так как он доминирует в составе антигенов. В редких случаях в РДП можно обнаружить антитела к полипептиду р15. В организме больной лошади вирус реплицируется в моноцитах и макрофагах крови, что обусловливает лихорадку и другие клинические симптомы. Первый раз виремию можно обнаружить уже через 5. 7 дней после заражения, гуморальный иммунный ответ — через 12 дней. В РДП противовирусные антитела обычно выявляют через 15.25 дней после заражения. В очень редких случаях антитела обнаруживаются значительно позже. Инфицированные лошади до конца жизни остаются хроническими вирусоносителями, что обязательно учитывается в современных программах по контролю распространения ИНАН в мире [4].

русом ИНАН лошадей с первичным (врожденным) или вторичным иммунодефицитом [5, 10]. Подобные лошади остаются хроническими вирусоносителями, но их инфекцию невозможно подтвердить серологическими методами. Положительный результат, который не является истинным ложноположительным, но может быть неверно истолкован, встречается у жеребят, которые приобретают пассивный иммунитет с молозивом больной матери, но сами при этом остаются свободными от инфекции. У жеребят, полученных от зараженных кобыл, в крови сохраняются коло-стральные антитела, количество которых постепенно снижается в течение первых трех—шести месяцев жизни. Установить отрицательную динамику антител можно, применив ИФА — альтернативный метод исследования лошадей на ИНАН.

Конкурентный вариант ИФА для определения антител к р26 впервые применили для диагностики ИНАН лошадей в США в конце 80-х гг. прошлого века. Успешные опыты по размножению некоторых штаммов вируса ИНАН в культурах клеток кожи или почки лошади позволили производить достаточное количество вируса, чтобы приготовить диагностический антиген для ИФА. Вирионы очищали центрифугированием в изопикническом градиенте, дезинтегрировали ацетоном и разделяли полученные полипептиды на хроматографической колонке методом гель-фильтрации. Современные тест-системы для диагностики ИНАН в ИФА, как правило, включают в себя антигены рекомбинантных белков, полученных методом генной инженерии. В настоящее время коммерческие ИФА-наборы для серологической диагностики ИНАН производят по 4 схемам: 1) конкурентный вариант ИФА, антиген р26; 2) непрямой вариант ИФА, антиген р26; 3) непрямой вариант ИФА, антиген gp45; 4) непрямой вариант ИФА, антиген р26 + gp45. По результатам сравнительного анализа тест-систем наиболее специфичным считают набор схемы №3, но по чувствительности он уступает всем остальным [17]. В целом ИФА — менее субъективный метод в сравнении с РДП, учет результатов реакции может быть полностью автоматизирован. Преимущества метода — быстрота выполнения (около 2 ч) и высокая чувствительность. Результаты ИФА коррелируют с данными РДП. Противоречивые результаты (положительные в ИФА и отрицательные в РДП) могут быть получены по двум причинам: из-за низкого уровня антител к р26 в образце; из-за содержания в образце антител против межвидовых разновидностей р26, которые можно определить только в ИФА, но не в РДП. Межвидовые разновидности антигена р26 образуются в процессе эволюции лентивирусов в природе [13]. При этом в соответствии с рекомендациями МЭБ, все пробы, положительно реагирующие на ИНАН в ИФА, должны быть проверены в РДП [16].

Иммуноблоттинг — метод, посредством которого выявляют антитела к различным полипептидам вируса ИНАН — р26, gp45 и gp90, гомологичным поверхностным гликопротеинам gp120 и gp41 ВИЧ. Несмотря на тот факт, что белки gp45 и gp90 обнаружены в

РВЖ • СХЖ • № 1/2013

Г.К. Юров, С.В. Алексеенкова, К.А. Диас Хименес, К.П. Юров

составе вируса ИНАН в меньшем количестве, чем р26, они являются иммунодоминантными антигенами и стимулируют образование антител на уровне, более высоком, чем в случае р26. После заражения вначале образуются антитела к gp90, а затем к р26. Это свойство используют для ранней лабораторной диагностики лошадей. Таким образом, иммуноблоттингом можно выявить зараженных лошадей раньше, чем в РДП.

Практическое применение альтернативных методов диагностики ИНАН в лаборатории вирусологии ВИЭВ

В нашей лаборатории при мониторинге, диагностических исследованиях, а также исследованиях лошадей при международных перевозках используют помимо РДП альтернативные методы, в частности им-муноблоттинг с антигеном вируса ИНАН — р26. Порядок применения метода представлен на примере частного случая исследования лошадей.

ДСН-ПААГ электрофорез полипептидов вируса ИНАН и белков-маркеров молекулярной массы от 21 до 97 кДа проводили в буферной системе Лем-ли [14] в 12%-м ПААГ в пластинах толщиной 0,75 мм на аппарате для вертикального электрофореза. Разделение полипептидов в денатурирующих условиях с прогреванием в присутствии ДТТ, окраску 10%-м раствором нитрата серебра проводили по методу, предложенному ранее [2]. После ДСН-ПААГ электрофореза переносили белки на нитроцеллю-лозную мембрану в полусухой буферной системе по методу Бюрнет [8]. Трек, содержащий белки-маркеры, окрашивали раствором Кумаси. Треки, содержащие антиген р26 вируса ИНАН, использовали для постановки иммуноблоттинга. Реакцию проводили с сыворотками крови животных, положительно или сомнительно реагирующими в РДП. После инкубации с сыворотками полоски мембраны инкубировали с иммунопероксидазным коньюгатом против иммуноглобулинов класса G лошадей. В качестве блокирующего раствора использовали овальбу-мин в концентрации 0,2 %. Для проявления реакции применяли субстратную смесь на основе хромогена — ортодианизидина. Результаты частного исследования на ИНАН десяти проб сыворотки крови лошадей методом иммуноблоттинга представлены на рисунке. В пробе № 6 обнаружены антитела к антигену р26 вируса ИНАН, с другими пробами получены отрицательные данные. Результаты исследования всех проб были подтверждены в РДП.

1 2 3456789 10 Маркер

положительный результат, антитела в сыворотке крови больной лошади взаимодействуют с антигеном р26 вируса ИНАН.

ИНАН лошадей характеризуется длительной (пожизненной) персистенцией возбудителя независимо от формы течения болезни — острой, подострой или хронической. При этом в крови лошадей одновременно присутствуют антитела и вирус. Основные патологические изменения у лошадей обусловлены патологическим действием иммунных комплексов антиген-антитело.

К альтернативным методам относят ИФА и имму-ноблоттинг. С помощью иммуноблоттинга можно выявлять антитела к различным полипептидам вируса ИНАН — р26, gp 45 и gp90, гомологичным поверхностным гликопротеинам gp120 и gp41 ВИЧ. Несмотря на тот факт, что белки gp45 и gp90 обнаружены в составе вируса ИНАН в меньшем количестве, чем р26, они являются иммунодоминантными антигенами и стимулируют образование антител на уровне, более высоком, чем р26. Указанное позволяет использовать метод для дифференциации сомнительных и ложноположительных результатов.

G.K. Yurov, S.V. Alexeyenkova, K.A. Dias-Himenes, K.P. Yurov. Immunological Methods for Diagnostic of Equine Infectious Anemia. Equine infectious anemia (EIA) is characterized by long-term pathogen persistence regardless of the clinical course: acute, subacute and chronic. Antibodies and virus are presented in the blood of horses simultaneously. Cause of main pathological changes in horses is abnormal immune effect of antigen-antibody complexes. Immune response occurs on the immunodominant viral proteins responsible for the production of antibodies. Standard diagnostic method of EIA that allows to identify infected horses regardless of the clinical course of the infection is the agar gel immunodiffusion (AGID — Coggins test). Alternative methods there is ELISA and immunoblot-ting. For the direct detection of the virus in some cases the method of nested RT-PCR are used.

You are currently viewing Бруцеллез: почему нельзя покупать мясо и молоко с рук

Студент медицинского факультета УЛГУ. Интересы: современные медицинские технологии, открытия в области медицины, перспективы развития медицины в России и за рубежом.

  • Запись опубликована: 06.06.2019
  • Reading time: 2 минут чтения

Бруцеллез — инфекционное заболевание людей и сельскохозяйственных и домашних животных — коров, овец, коз и других домашних животных, вплоть до кошек, собак.

Возбудители заболевания — патогенная группа бактерий, названных бруцеллами по имени английского ученого Брюса, открывшего в 1886 году эти микроорганизмы.

Особенности заражения бруцеллезом

Выкидыш, рождение мертвого или слабого плода — явное свидетельство заболевания животного. Абортированный плод и плацента содержат неисчислимое количество бруцелл, обладающих большой заразительной силой. Но и в том случае, когда беременность у больного животного нормальная, оно остается переносчиком болезни.

Бруцеллы отличаются большой жизнеспособностью: в почве они живут 3—4 месяца, в замороженном мясе—1—1,5 месяца, в засоленном — более 40 дней, в шерсти и воде — не менее 45 дней, в брынзе из овечьего молока — 40—70 дней.

  • Абортированный плод, моча, испражнения больных животных загрязняют микробами бруцеллеза почву и окружающие предметы.
  • Люди чаще заражаются при убое больного скота, неосторожно разделывая их туши, соприкасаясь с шерстью и шкурами.
  • Когда человек курит или ест в помещении, где находятся больные животные, он может занести микробы в рот грязными руками.
  • Заболевают бруцеллезом, употребляя воду, грязные овощи, фрукты.
  • Источником заражения служат также молоко больных коз, овец, коров и свежие молочные продукты, приготовленные из такого молока.

Человек может заразиться бруцеллезом во все времена года, но в весенне-летний период эта угроза увеличивается; ведь именно тогда происходят окоты и отелы.

Микробы в организм человека проникают преимущественно через пищеварительный тракт, реже — через поврежденную кожу (царапины, ссадины), слизистую оболочку. Возможны заражения и через пыль, например, во время уборки скотного двора, когда бруцеллы вместе с пылью попадают в глаза, дыхательные пути человека.

Признаки бруцеллеза

Бруцеллез — болезнь затяжная. У людей она принимает самые разнообразные формы. Объясняется это разными типами бруцелл и разной сопротивляемостью организма.

Длительность инкубационного периода примерно 2—3 недели, иногда дольше. Бруцеллы размножаются в лимфатических узлах человека, а затем разносятся с кровью по всему организму.

  • общее недомогание;
  • потливость;
  • мышечная боль;
  • затем присоединяются головная боль и мучительная бессонница.

Типичное проявление бруцеллеза — длительное лихорадочное состояние, нередко со значительным колебанием температуры даже в течение дня. Сильнее всего изнуряет боль в суставах и мышцах, особенно спине, пояснице.

Своевременное обращение к врачу, который назначит необходимое лечение, приводит обычно к выздоровлению без особых осложнений. Запущенная болезнь переходит в хроническую форму и длится годами, причиняя человеку много страданий.

Заражения от больных людей очень редки: у больных бруцеллезом родителей дети рождаются здоровыми. Но перенесшие бруцеллез могут вновь и вновь заражаться от больных животных.

Профилактика бруцеллеза

Как и всякую болезнь, бруцеллез легче предупредить, чем лечить. Поэтому профилактике бруцеллеза уделяют большое внимание как медицинские, так и ветеринарные работники. Осуществляются надежные меры, предохраняющие население от заражения и помогающие ликвидировать бруцеллез среди животных.

Работникам неблагополучных по бруцеллезу животноводческих хозяйств, где содержится мелкий рогатый скот, обязательно делают предохранительные прививки.

В России введены строгие санитарно-гигиенические меры. В продажу должно поступать только проверенное мясо. Ищите специальное клеймо: оно предупреждает, что продукт не содержит бруцелл.

Постоянное ветеринарное наблюдение дает возможное своевременно выявлять заболевших животных, немедленно забивать или изолировать их и тем самым предупреждая распространение инфекции. Категорически запрещено покупать не проверенное молоко и мясо.

  • Если у животного произошел выкидыш, то абортированный плод, подстилку непременно надо сжигать. Помещение, почву, все предметы обихода обезвреживают специальными дезинфицирующими средствами.
  • Персонал, ухаживающий за скотом, необходимо допускать к работе только после проверки знаний. Работники должны знать весь комплекс санитарно-гигиенических мер по охране собственного здоровья и здоровья окружающих людей.

Гигиеничное содержание помещений для скота, пастбищ, водопоев предотвратит заболевание животных.

Бруцеллез победим. Об этом свидетельствует значительное снижение заболеваемости этой инфекцией в нашей стране и полная ликвидация бруцеллеза в ряде соседних государств. Но усилиями одних только медиков и ветеринаров нельзя окончательно избавиться от такого тяжелого заболевания. Это забота и владельцев животных.

В борьбе с бруцеллезом, должно участвовать и население, тщательно соблюдая меры личной и общественной профилактики.

Читайте также: