Анализ на вич метод real-time что это

Обновлено: 24.04.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.

Антитела к ВИЧ-1/2 и антиген ВИЧ-1/2 (HIV Ag/Ab Combo): показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

ВИЧ-инфекция - инфекционная болезнь, развивающаяся в результате многолетнего персистирования (постоянного пребывания) в лимфоцитах, макрофагах и клетках нервной ткани вируса иммунодефицита человека (далее - ВИЧ), характеризующаяся медленно прогрессирующим дефектом иммунной системы, который приводит к гибели больного от вторичных поражений, описанных как синдром приобретенного иммунодефицита (далее - СПИД).

ВИЧ (Вирус Иммунодефицита Человека) – вирус, относящийся к семейству ретровирусов (семейство РНК-содержащих вирусов, заражающих преимущественно позвоночных), который поражает клетки иммунной системы человека. Через несколько недель с момента заражения начинают вырабатываться антитела к ВИЧ.

Показания на проведение исследования

Показаниями для назначения анализа является подготовка к госпитализации и плановому оперативному вмешательству. В профилактических целях следует провести исследование при подозрении на заражение при половом контакте. В первую очередь это касается лиц групп риска: употребляющих наркотики, вводимые внутривенно, часто меняющих половых партнеров и не использующих средств защиты.

Вирус иммунодефицита человека размножается в организме человека достаточно медленно, и количественный результат в отношении антигенов и антител к вирусу можно получить, как правило, не ранее чем через 3-6 недель после инфицирования. При этом клинические симптомы заболевания еще отсутствуют.

Через три месяца антигены ВИЧ и антитела к вирусу определяются практически у всех заболевших. Благодаря появлению новых комбинированных тест-систем четвертого поколения получение точного результата качественного анализа на ВИЧ-инфекцию возможно уже через две недели с момента попадания вируса в организм. При этом исследовании выявляют антиген р24 ВИЧ – белок вирусного капсида (внешней оболочки вируса).

Анализ на антитела к ВИЧ 1/2 и антиген ВИЧ 1/2 назначают на этапе планирования и при ведении беременности, когда возможна передача вируса плоду. Анализ проводят и после родов, поскольку ребенок ВИЧ-положительной матери может быть инфицирован во время прохождения через родовые пути и при кормлении грудью.

Лихорадка, потеря веса без объективных причин, повышенная утомляемость, увеличение регионарных лимфатических узлов, потливость, особенно в ночное время, длительный кашель, диарея – эти устойчивые клинические симптомы неясного происхождения, отмечаемые в течение 2-3 недель, также служат показанием к проведению исследования на антитела к ВИЧ 1/2 и антиген ВИЧ 1/2.

Кожные проявления также могут быть симптомом ВИЧ-инфекции, поскольку развиваются на фоне ослабления иммунитета. К их числу относится рецидивирующая герпетическая сыпь, поражающая обширные участки кожи, полость рта, половые органы. Герпес поражает и глубокие слои кожи с развитием язвенно-некротической формы. Образуются язвы и эрозии с последующим образованием рубцов, которых не бывает при обычном герпесе.

Еще один характерный симптом ВИЧ-инфекции – волосатая лейкоплакия, которая связана с активацией латентной инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр (что свидетельствует об иммуносупрессии). Заболевание проявляется нитевидными образованиями белого цвета с дальнейшим ороговением пораженных участков языка и слизистой оболочки рта.

Обширные грибковые поражения (в первую очередь дрожжевыми грибками рода Candida) также служат типичным признаком, сопровождающим ВИЧ-инфекцию. Сначала кандидоз поражает слизистую оболочку рта и пищевода, затем распространяется на слизистые желудочно-кишечного и мочеполового тракта. При этом формируются обширные очаги, характеризующиеся болезненностью и склонностью к изъязвлению.

ВИЧ-инфекция может сопровождаться развитием обширного папилломатоза. У ВИЧ-инфицированных женщин папилломы цервикального канала склонны быстро вызывать рак шейки матки.

СПИД-индикаторным заболеванием служит саркома Капоши – многоочаговая сосудистая опухоль, которая поражает кожные покровы и слизистые оболочки. Ее очаги в виде красноватых или буроватых узелков и бляшек сливаются, быстро распространяясь по всему телу. Со временем они образуют опухолевые поля, которые изъязвляются и нагнаиваются.

К числу патологических состояний, которые почти у всех пациентов сопровождают ВИЧ-инфекцию, относят полиаденопатию (увеличение лимфатических узлов). Как правило, в первую очередь увеличиваются под- и надключичные, подбородочные, околоушные и шейные лимфоузлы. В дальнейшем к ним может присоединяться увеличение паховых и бедренных лимфатических узлов. Они могут быть мягкими или плотными на ощупь, безболезненными и подвижными. Иногда несколько лимфоузлов сливаются, образуя своеобразный конгломерат. Воспаление двух и более групп лимфоузлов считают признаком генерализованной лимфаденопатии. Поражение лимфатических узлов может наблюдаться в течение нескольких лет, при этом периоды обострения сменяются ремиссией.

К легочным заболеваниям, сопровождающим ВИЧ-инфекцию, относят туберкулез и пневмонию.

Анализ на антигены и антитела к ВИЧ рекомендуют сделать, если у пациента выявлены заболевания, передаваемые половым путем (сифилис, хламидиоз, гонорея, генитальный герпес, бактериальный вагиноз).

Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.

Суть этого метода звучит в самом названии.

Поначалу исторический экскурс.

Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.

Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.

Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.

Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.

Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.

Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.

В случае с ВИЧ это РНК.

И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).

Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).

По прошествии нескольких часов число фрагментов – несколько миллиардов.

Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.

Метод силен своей универсальностью.

Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.

ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).

Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.

У метода очень высокая чувствительность и оперативность.

Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.

Инкубационный период не мешает проведению исследования.

Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.

К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.

Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.

Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.

А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.

Когда делают ПЦР на ВИЧ

От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.

Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.

Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.

Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.

ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.

Праймеры – это специальные реагенты.

Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.

Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.

Его делают не всегда, а в особых случаях.

И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.

Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.

По истечении пяти дней после предполагаемого заражения - 80%.

Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.

Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.

Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.

Важно знать диагноз как можно раньше.

ПЦР анализ на ВИЧ
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Наименование	Срок	Цена
Прием венеролога	900.00 руб.
ДНК ВИЧ (кровь)	5 д.	3450.00 руб.

Как делают

Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:

исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции

Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.

По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% - 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.

Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.

ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.

То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.

Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.

Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.

Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:

новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции

Все остальные условия являются необязательными.

Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.

Берется венозная кровь и проводится анализ.

Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.

Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.

Для этого нужна очень чистая лаборатория.

При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.

Для этого используют референц-лабораторию.

Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.

К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.

Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.

Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.

Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.

Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.

Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.

До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.

Те ли препараты назначают или нужно другие.

Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.

Результаты анализов

Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.

Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.

Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.

Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:

при резкой потере веса
при длительной диарее (около 3-х недель)
при лихорадке невыясненной этиологии
при росте лимфоузлов в разных местах
при лимфо- и лейкопении
при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях

Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.

Какой бы ни был результат - это не повод заниматься лечением самостоятельно.

К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.

Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.

Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.

Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.

Расшифровка результатов:

РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
20 – 10 6 копий/мл
более чем 10 6 копий/мл

Самый опасный третий и четвертый результат.

Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный

Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.

Это занимает период от двух до десяти дней.

Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.

Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.

Но даже положительный результат не окончательный.

Пересдача крови на анализ тоже делается.

На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.

Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.

При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.

При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.

Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.

Даже положительный результат остается тайной.

Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.

Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.

В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.

Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.

Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции

ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.

Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.

Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.

Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.

Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.

С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.

Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.

Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.

Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.

Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).

Еще важна и скорость ПЦР анализа.

Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.

Но есть у метода и негативные качества.

Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.

Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.

Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.

Хотя сам метод очень чувствительный.

Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.

А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.

Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.

На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.

Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.

Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.

Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.

Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.

Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.

Человечество слишком поздно осознало опасность, которую представляет вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).

Вызываемое им заболевание – синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД).

Правда, на начало XXI века медики научились эффективно бороться с этой инфекцией.

Никто не станет отрицать, что ведущую роль в этом направлении сыграло совершенствование лабораторных методов выявления инфекции.

А также исследования показателей крови уже зараженных людей.

Виды анализов

По своим характеристикам, ВИЧ относится к категории гемотрансмиссивных инфекций.

Заражение здорового человека происходит при попадании возбудителя в кровеносное русло.

Там вирус связывается с лимфоцитами и другими мишенями, начинает активную репликацию.

Зараженные клетки не сразу, но истощаются и погибают.

За счет этого и возникает иммунодефицит.

Благодаря компенсаторным способностям человеческого организма, инфекция очень долго (до нескольких лет) протекает бессимптомно.

В этом и заключается главная опасность инфекции.

Единственно, что может оказаться информативным в начальных стадиях болезни, это – анализы крови.

В клинической практике они применяются по разным направлениям:

первичная диагностика – это исследования, которые прямо указывают на наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в организме обследуемого человека
иммунограмма – направлена на оценку показателей иммунной системы, таких как количество лимфоцитов CD4, которые являются главной мишенью для вирусов
вирусная нагрузка – помогает оценить степень активности инфекции и эффективность проводимой антиретровирусной терапии
общий анализ крови (ОАК), который проводится инфицированным людям для общей оценки поражения организма вирусом
биохимические исследования позволяют оценить функцию основных жизненно важных органов – печени, почек, кроветворной системы и так далее

Сложность в том, что показатели последних двух пунктов меняются в основном на продвинутых стадиях заболевания.

Но если человек вовремя прошел диагностику и узнал о своем статусе, он теперь может держать заболевание под полным контролем.

Достаточно лишь стать на учет в специализированном центре и вовремя сдавать необходимые анализы.

Типичный алгоритм обследования пациента предлагаем рассмотреть в виде следующей таблицы:

Кровь на ВИЧ

Экспресс-метод и ИФА при ситуации, рискованной по заражению или при характерных симптомах (лихорадка, увеличение лимфоузлов, частые простуды, диарея, похудание и так далее)

Повторный анализ

Положительный ответ первого исследования.

Клинический анализ крови

Установление диагноза ВИЧ-инфекции, в дальнейшем – по показаниям

Биохимический анализ крови

Установление диагноза ВИЧ-инфекции, в дальнейшем – по показаниям

Кровь на CD-4 клетки

Установление диагноза ВИЧ-инфекции, сначала двукратно с периодом в 7 дней, в дальнейшем каждые 6-12 месяцев, при ухудшении здоровья – немедленно

Вирусная нагрузка

Установление диагноза ВИЧ-инфекции, перед началом АРТ и дальше – через 3 месяца до получения негативных результатов, в дальнейшем каждые 6 месяцев

Как и любая патология, ВИЧ-инфекция имеет индивидуальные черты у каждого инфицированного человека.

Поэтому предложенная таблица – лишь ориентир.

Точные сроки и перечень необходимых анализов назначаются врачом, который ведет пациента.

Также меняются сроки проведения мониторинговых обследований после того, как пациент начинает прием препаратов антиретровирусной терапии (АРТ).

Показатели общего анализа крови при ВИЧ

На ранних стадиях инфекции, показатели общего анализа крови меняются мало или вообще остаются в переделах нормы.

Внимательный врач может связать некоторые граничные колебания лейкоцитов (формулы белой крови) с эпизодами повторных рецидивных простуд и респираторных инфекций.

В более продвинутых стадиях заболевания, когда компенсаторные возможности организма слабеют, в ОАК возникают такие изменения:

Анемия. Снижение количества эритроцитов ниже возрастной и половой нормы связывают с повреждением ВИЧ клеток костного мозга и общим истощением организма. Степень анемии коррелирует с активностью ВИЧ-инфекции: малокровие нарастает при прогрессировании заболевания и наоборот, отступает на фоне АРТ-терапии.

Лейко- и лимфопения являются типичными явлениями для ВИЧ. В общем анализе крови можно обнаружить стойкое снижение количества лейкоцитов (ниже 4*10 в 9 степени) и лимфоцитов (ниже 13%), показатели этих клеток помогают врачам составить предварительный прогноз и разработать меры по защите человека от других инфекций (например – назначить профлечение бисептолом).
Тромбоцитопения. Падение уровня тромбоцитов ниже нормы (180*10 в 9 степени) весьма характерно для ВИЧ-инфекции, в течение 10 лет, такое явление возникает у 45% инфицированных людей. Вызывают тромбоцитопению два механизма: аутоиммунное повреждение тромбоцитопению и снижение количества их предшественников (мегакариоцитов).

Для пациента очень важно соблюдать сроки, когда врач рекомендует сдавать ОАК.

Это поможет вовремя заметить опасные осложнения ВИЧ-инфекции и предотвратить их.

Кроме того, нельзя забывать о риске развития побочных реакций в ответ на прем препаратов АРТ-терапии.

Показатель СОЭ

Очень важными данными ОАК, является скорость оседания эритроцитов или, сокращенно – СОЭ.

Норма – 4-10 мм в час.

Когда СОЭ ускоряется, это свидетельствует о нарушении белкового баланса крови.

К сожалению, показатель абсолютно неспецифичен: СОЭ возрастает при любой инфекции, травмах, онкологии.

Для пациентов характерно такое сочетание, когда скорость оседания эритроцитов повышена до 30-40-50 мм в час.

А человек чувствует себя более-менее нормально.

Такая картина связана со снижением количества белых кровяных телец.

В частности, тех лимфоцитов, какие синтезируют белки-иммуноглобулины.

Уменьшение количества этих иммунных белков влечет за собой относительное повышение белков-альбуминов, что и отражается в росте СОЭ.

Показатели биохимии крови

Биохимический анализ крови для пациентов очень важен.

С его помощью можно оценить функцию почек и, что более важно – печени.

ВИЧ очень часто соседствует с вирусными гепатитами.

Поэтому показатели трансаминаз помогают вовремя сориентироваться и дообследовать пациента.

Кроме того, контроль за функцией печени и почек позволяет вовремя заметить негативные реакции организма на АРТ-препараты.

Биохимия – важнейший комплекс анализов.

Однако из-за многогранности показателей интерпретировать их должен только специалист.

В этой статье мы просто не сможем осветить все детали таких исследований у пациентов.

Основная задача врачей состоит в том, чтобы выявить ВИЧ как можно раньше.

Проблема заключается в том, что заболевание долгое время не имеет симптомов.

В начальной острой фазе оно протекает как под маской гриппа.

В дальнейшем наступает латентный период, который может продолжаться 10 лет и более.

На протяжении этого времени нет никаких симптомов.

И даже в фазе преСПИДа не всегда удается заподозрить патологию.

Поэтому в России больше половины больных получают диагноз, когда количество CD4 лимфоцитов ниже 200 в мкл.

В этот период уже развиваются выраженные нарушения клеточного иммунитета.

Присоединяются оппортунистические инфекции.

Даже в развитых странах с современной медициной, таких как США и Германия, до 30% пациентов получают диагноз лишь на стадии СПИДа.

В этот период уже прогрессируют инфекционные поражения легких у больных и других органов.

Массовое обследование всех людей на ВИЧ не проводится ни в одной стране.

Есть лишь определенные категории пациентов, для которых проведение диагностики является обязательным.

Также некоторым людям оно рекомендовано, но не обязательно.

В первую очередь на ВИЧ обследуют:

пациентов, которым предстоит хирургическое вмешательство
тем, кто контактировал с носителем ВИЧ тем или иным способом
людей, имеющих клинические и лабораторные признаки дефицита клеточного иммунитета
у детей, рожденных от серопозитивных матерей
доноров крови или любого другого биоматериала

Рекомендовано обследование:

при госпитализации в стационар
при наступлении беременности

инъекционным наркоманам
в случае выявления любых ИППП в кожно-венерологическом диспансере (сифилис, вирусные гепатиты, гонорея и другие)
при высокой половой активности и частой смене партнеров

В перечисленных ситуациях анализ на ВИЧ берут далеко не всегда.

Только если пациент сам считает, что это необходимо.

Алгоритм диагностики ВИЧ следующий:

пациенту проводят скрининговое исследование
в случае положительного результата назначается подтверждающий тест

Любые диагностические тесты имеют определенную чувствительность и специфичность.

Для скрининговых тестов основным требованием является чувствительность.

Это означает, что риск ложноотрицательных результатов минимальный.

Очень важно не пропустить инфекцию, если она присутствует в организме.

При этом специфичность играет меньшую роль.

Специфичность – это показатель, отражающий вероятность ложноположительного результата.

Ложнореактивный тест в процессе скринингового обследования не страшен.

Потому что после скрининга в любом случае требуется подтверждение диагноза.

Для подтверждающего теста на первом месте уже стоит специфичность.

Потому что нельзя допустить, чтобы человек, не страдающий ВИЧ, ошибочно получил этот диагноз.

Скрининговые тесты обычно предполагают одновременное выполнение анализа на:

Преимущества этих методов состоят в том, что вместе они обладают высокой чувствительностью.

Данные способы полностью автоматизированы, проводятся быстро и недорого стоят.

Для окончательной диагностики применяют иммуноблоттинг.

Этот тест тоже серологический.

То есть, он основан на определении антител.

Но, в отличие от ИФА, имеет более высокую специфичность.

Суть метода состоит в том, что антигены вируса разделяются по молекулярной массе при помощи электрофореза.

Затем они переносятся на мембрану.

Она используется как индикатор.

Также существует ещё один метод – ПЦР.

Он редко используется как подтверждающий.

Но в некоторых ситуациях ПЦР необходима.

Она позволяет оценить вирусную нагрузку.

Это дает возможность вовремя определить, что антиретровирусная терапия стала неэффективной.

ПЦР позволяет подобрать оптимальное лечение и дать прогноз дальнейшему развитию заболевания.

Также ПЦР применяется в случае перинатального пути заражения.

У новорожденных серологическая диагностика малоинформативна.

Потому что у них в крови циркулируют материнские антитела к ВИЧ.

Они не имеют защитного значения.

Но способны проникать в кровь ребенка уже с 32 недели гестации.

Эти антитела определяются в крови в течение 1-1,5 лет после рождения.

Соответственно, все серологические тесты (анализы на антитела) всегда будут положительными.

И не важно, страдает ли реально ребенок этой инфекцией, или же это материнские иммуноглобулины, и малыш полностью здоров.

В этом случае методом выбора остается ПЦР.

Он определяет не антитела, а РНК вируса иммунодефицита.

Лабораторная диагностика

Ранняя диагностика возможна только при проведении скринингового обследования.

То есть, до возникновения каких-либо специфических симптомов дефицита клеточного иммунитета.

Скрининговые исследования имеют чувствительность до 100%, если проводится комботест.

То есть, одновременное проведение ИФА и выявления антигена р24.

При этом специфичность стандартного исследования составляет 99,5%.

Это означает, что у одного человека из 200 результат будет ложноположительным.

В последующем он будет опровергнут в ходе подтверждающего теста.

Для подтверждения используется иммуноблоттинг.

Некоторые клиники используют также ПЦР.

Но этот метод менее эффективен.

Он имеет меньшую чувствительность, чем серологические исследования.

Поэтому ПЦР не используется как основной способ подтверждения диагноза.

Иммуноблоттинг тоже может выдавать ложноотрицательные результаты.

Но только в случаях, когда диагностика проводится слишком рано.

Бывают ситуации, когда скрининговый тест положительный за счет выявления антигена р24.

Он начинает определяться раньше, чем вырабатываются антитела.

В этом случае иммуноблоттинг может быть отрицательным.

Потому что он не определяет антиген р24.

В такой ситуации (положительный скрининговый тест при отрицательном подтверждающем) рекомендовано повторное обследование.

Его нужно пройти через 3 недели.

Если же наблюдаются клинико-иммунологические признаки острой фазы ВИЧ, показано проведение ПЦР.

В нашей клинике вы можете пройти диагностику инфекции без очередей, по предварительной записи.

О том какие анализы
на ВИЧ сдать
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Клиника

Симптомы заболевания имеют определенное диагностическое значение.

В данной статье не будет обсуждаться этиология, патогенез, эпидемиология, профилактика ВИЧ – это темы отдельных публикаций.

А вот клинические симптомы стоит упомянуть.

Они возникают:

1. В период первичного заражения
2. В терминальной стадии

То есть, клинические признаки появляются в самом начале и в самом конце заболевания.

В начальный период симптомы неспецифичны.

Это повышенная температура тела, увеличение лимфоузлов, ломота в теле.

У человека может снижаться масса тела.

Во рту появляются язвы.

Обычно человек получает диагноз грипп или инфекционный мононуклеоз.

Редко его направляют на лабораторную диагностику с целью определения ВИЧ.

В дальнейшем симптомы появляются уже на стадии нарушения клеточного иммунитета.

Эти клинические признаки связаны с возникновением кандидоза, опоясывающего герпеса.

В дальнейшем могут присоединяться пневмоцистная пневмония, сепсис, появляются онкологические образования.

В 50% случаев ВИЧ обнаруживают уже на стадии клинических признаков дефицита клеточного иммунитета.

Методы диагностики

Скрининговым методом диагностики является ИФА.

Также проводится определение антигена р24.

Альтернативой являются экспресс-тесты на ВИЧ.

Большинство из них используют в качестве клинического материала капиллярную кровь.

Её берут либо из пальца, либо из мочки уха.

Такая кровь не требует центрифугирования.

Поэтому экспресс-тесты проводятся быстро, без специального оборудования.

Преимущества таких тестов:

возможность проведения на дому или в клинике, где не оборудована клинико-диагностическая лаборатория
быстрые результаты (через 15 минут)
возможность сразу же обследовать потенциального носителя инфекции в случае контакта с ним (например, при травме иглой)
возможность быстрой диагностики перед экстренными операциями

Недостатки таких тестов:

стоят дороже, чем ИФА
менее достоверны (тесты старых поколений не определяют антиген р24, а оценивают только уровень антител)
недостаточно информативны в острой фазе ВИЧ (реактивность теста ниже, чем ИФА)

Экспресс тесты дают ориентировочные результаты.

В дальнейшем они должны быть подтверждены с помощью других методов (иммуноблоттинга или РИФ).

Существуют также домашние тесты.

Но они дают большое количество ложноотрицательных результатов.

Во-первых, по причине меньшей чувствительности.

Во-вторых, из-за частых ошибок пациентов, которые проводят тестирование без участия медицинского персонала.

Еще один метод, достойный обсуждения, называется полимеразная цепная реакция.

С помощью ПЦР редко осуществляется подтверждение диагноза.

Метод имеет недостаточно высокую чувствительность.

Основные причины:

1. Тест проверяет наличие РНК ВИЧ 1 типа. В подавляющем большинстве случаев именно этот вирус вызывает заболевание в России. Тем не менее, 0,5% клинических случаев приходится на ВИЧ-2. Данный тип вируса обнаруживается с помощью серологических методов. Но он не определяется при ПЦР. Потому что для этого требуется проведение отдельного исследования на ВИЧ-2. Но оно удваивает стоимость диагностики, а потому большинству пациентов не назначается.

2. ВИЧ постоянно мутирует. В связи с этим появляются новые фрагменты РНК. Их изменение приводит к тому, что ПЦР может дать ложноотрицательный результат. Данный недостаток компенсируется, если проводится ПЦР с двойной мишенью. То есть, в процессе диагностики ведется поиск не одного, а двух специфичных фрагментов РНК. В этом случае вероятность отрицательного результата у ВИЧ-инфицированного пациента стремится к нулю.
3. Организм некоторых людей сдерживает ВИЧ-инфекцию. Их называют элитные контроллеры. Даже без антиретровирусной терапии репликация вируса подавляется. В результате его количество может снижаться ниже определяемого уровня. Кроме того, контроль ВИЧ-инфекции иммунитетом может быть временным. Он встречается гораздо чаще, чем постоянный. Тогда результат будет ложноотрицательным лишь в определенный период. А при повторном тестировании через несколько месяцев он может выдать положительный результат.
4. Успешная антиретровирусная терапия. Целью лечения является подавление репликации ВИЧ и снижение вирусной нагрузки до неопределяемого уровня. В случае успеха, ПЦР становится отрицательной. Хотя в реальности вирус в организме присутствует.

Таким образом, для первичной диагностики инфекции у взрослых пациентов молекулярный метод применяется редко.

Для ПЦР существует 5 основных показаний:

1. Оценка вирусологической нагрузки. Потому что ПЦР определяет не только сам факт наличия вируса в организме. Оценивается также количество копий РНК в мл. По этому показателю можно судить об эффективности лечения и стадии патологического процесса.
2. Первичная диагностика ВИЧ у новорожденных. У младенцев в крови циркулируют антитела матери. Поэтому ИФА будет всегда положительным. У новорожденных предпочтительным методом, позволяющим установить диагноз, остается ПЦР.

3. Диагностика на ранних сроках. Как уже говорилось, РНК вируса – это наиболее ранний маркер ВИЧ. ПЦР становится положительной за 2 недели и более до того, как начнут определяться антитела в крови.
4. Уточнение спорных результатов серологических тестов.
5. Проверка донорской крови.

Иногда требуется дифференциальная диагностика между ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Для этой цели тоже можно использовать ПЦР.

Но следует заметить, что иммуноблотинг тоже дает возможность диф диагностики.

И даже экспресс-тесты последних поколений различают два типа вируса.

Сроки

Существуют сроки, через какое время становятся положительными разные исследования на ВИЧ.

Слишком рано после контакта с больным сдавать анализы нет смысла.

Потому что они будут отрицательными.

Период, когда можно выявить вирус и подтвердить ВИЧ, называют серологическим окном.

Через такой промежуток времени только начинается выработка антител.

Они определяются через 1 месяц только у 60% больных.

Через 6 недель – у 80%.

Через 8 недель – у 90%, а через 12 недель – у 95% людей, заразившихся ВИЧ.

Именно через 3 месяца рекомендуют проходить обследование большинству людей.

Потому что тогда результат теста будет с большой вероятностью правильным.

Антиген р24 начинает определяться немного раньше, чем антитела к ВИЧ (приблизительно на 5 дней).

На ранних стадиях для диагностики может применяться только ПЦР.

В среднем РНК вируса начинает определяться за 2 недели до появления антител.

Бывают случаи, когда ПЦР дает положительный результат через 14 дней после инфицирования.

При этом следует понимать, что отрицательный ПЦР на 2-3 неделе не исключает заражения.

При таком результате теста следует провести диагностику повторно через некоторое время.

Обычно диагностика не проводится раньше 3 недель после вероятного заражения.

Но бывают исключения из этого правила.

Например, если имел место контакт с потенциальным вирусоносителем.

Тогда его можно проверить на ВИЧ.

Это позволяет убедиться в отсутствии вируса на момент контакта.

Высокая достоверность исследования возможна только через 3 месяца.

При отрицательном результате теста человек считается здоровым.

Проведение повторного исследования через 6 месяцев после возможного заражения возможно лишь в исключительных случаях.

Например, если появились признаки острой фазы инфекции.

Следует также учесть, что результаты диагностики через 12 недель после контакта достоверны только тогда, когда на протяжении данного периода не было других контактов с ВИЧ-инфицированным.

При сдаче анализов ответ центра диагностики человек получает достаточно быстро.

Он может узнать результаты через сутки.

Исключение – проведение ПЦР.

В этом случае приходится ожидать итогов 1-2 недели.

Все диагностические тесты на ВИЧ вы можете сделать в нашей клинике.

Вы получите высокоточную диагностику и быстрые результаты.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;

тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

Для проведения исследования в медицинских офисах необходимо предъявить СНИЛС и документ удостоверяющий личность. Запись на исследование В случае получения положительного или сомнительного результата на COVID-19 и при необходимости проведения подтверждающего тестирования обра.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Читайте также: