Анализ воды на возбудителей кишечных инфекций

Обновлено: 19.04.2024

Посев кала на возбудителей кишечной инфекции (сальмонеллы, шигеллы) и чувствительность к антибиотикам — метод обнаружения патогенных микроорганизмов, приводящих к развитию бактериальной дизентерии.

Дизентерия (шигеллёзы) — инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода шигелл, которое проходит с поражением слизистой оболочки толстого кишечника и с общей инфекционной интоксикацией организма. Источником инфекции может быть больной острой или хронической формой дизентерии, а также носитель. Путь передачи — фекально-оральный.

группа А — Sh. dysenteriae, в которую входят бактерии Sh.dysenteriae 1 — Григорьева-Шиги, Sh. dysenteriae 2 — Штутцера-Шмитца и Sh. dysenteriae 3–7 Лардж-Сакса (серовары 1–12, из которых доминируют 2 и 3);
группа B — Sh. Flexneri c подвидом Sh. Flexneri 6 — Ньюкастл (серовары 1–5, каждый из которых подразделяется на подсеровары а и в, а также серовары 6, X и Y, из которых доминируют 2а, 1в и 6);
группа Sh.Boydi (серовары 1–18, из которых доминируют 4 и 2);
группа D — Sh. Sonnei. Наиболее распространенными являются виды шигелл Зонне (60–80%) и Флекснера.

Сальмонеллёз — инфекционное заболевание, с фекально-оральным механизмом передачи, чаще передается пищевым путем. Возбудителем болезни являются мелкие подвижные грамотрицательные палочки из семейства Enterobacteriaceae рода Salmonella. Заболевание протекает с преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта (тонкого кишечника), схожее с такими болезнями как энтерит, гастроэнтерит.

Причина заболевания — проникновение сальмонелл в эпителий тонкого кишечника, где позже развивается процесс воспаления. Инкубационный период болезни — 6–8 часов. Сальмонеллёз проявляется остро — с тошнотой, рвотой, спазмами в животе, поносом, лихорадкой, головными болями. При хроническом течении возможно проявление симптомов артрита.

диагностика причины кишечной инфекции;
бактериологический контроль реконвалесцентов кишечных инфекций перед выпиской из стационара, для исключения возможного бактерионосительства;
обследование людей с хроническими заболеваниями кишечника для исключения их инфекционной природы;
обследование контактных лиц с заболевшем кишечной инфекцией;
регулярные обследования декретированных групп населения (работники пищевой промышленности, медицинские работники и работники детских учреждений).

Интерпретация результатов
При росте бактерий дизентерийной и тифопаратифозной группы можно уверенно утверждать об их этиологической роли в развитии данной болезни, или человек может быть бактерионосителем. По чувствительности к антибиотикам, выделенные микроорганизмы могут быть чувствительны, малочувствительны и нечувствительны. При отсутствии роста, но с подозрением на бактериальную причину диареи, посев нужно повторить 3 раза.

В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:

Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.4.1074-01
Общая микробная численность	Не более 50 КОЕ в 1 мл
Общие колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Колифаги	Отсутствие в 100 мл
Споры сульфитредуцирующих бактерий	Отсутствие в 20 мл

Стандартный микробиологический анализ

Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ

Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.

Микробиологический анализ поверхностных водоёмов (пруды, реки, бассейны)

Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.5.980-00
Общие колиформные бактерии	Не более 500 КОЕ в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Не более 100 КОЕ в 100 мл
Колифаги	Не более 100 БОЕ в 100 мл
Возбудители кишечных инфекций (анализ бактерий из сем. Enterobacteriaceae рода Salmonella)	Вода не должна содержать возбудителей кишечных инфекций (полное отсутствие в 1000 мл)

Стандартный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы)

Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы):

Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоочищения водоёма.

Определение бактерий рода Salmonella и рода Enterococcus

При значительном превышении нормативов СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоёма, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonella и Enterococcus).

Глоссарий

Общая микробная численность (ОМЧ)

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.

Общие колиформные бактерии (ОКБ)

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) часов. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнении ее продуктами жизнедеятельности человека.

Колифаги

Споры сульфитредуцирующие клостридии

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.

Определение индекса самоочищения (из МУК 4.2.1884-04)

Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую:

при температуре 37 °С в течение 24 часов;
при температуре 22 °С в течение 72 часов.

ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в том числе фекального);
ОМЧ при 20-22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоёма).

Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.

Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

Вода является неотъемлемой составляющей всех живых систем. В среднем, человек потребляет 2,5 литра воды в день. Наряду с полезным кальцием, магнием и калием вода несет в себе и вредные для здоровья человека элементы, такие как нитраты, нитриты, кадмий и тому подобное. Характеристики употребляемой нами жидкости определяют качество и продолжительность жизни. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2007), около 1,1 миллиарда человек не имеют доступа к безопасным источникам водоснабжения, а около 2 миллиона человек ежегодно умирают от заболеваний, передающихся через питьевую воду. Тошнота и диарея – не самое опасное, что вызывают микроорганизмы. Бактерии и вирусы в прямом смысле могут отравлять нашу жизнь, вызывая болезни с летальным исходом (например, Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма) или опосредовано приводя к смертельным случаям (Helicobacter pylori – возможная причина рака ЖКТ). В Российской Федерации состояние воды регламентируются несколькими нормативами в зависимости от предназначения (смотреть таблицу).

Требования к микробиологическим показателям качества воды в Российской Федерации в зависимости от хозяйственной деятельности человека

Показатель	Природная вода 1	Вода бассейнов 2	Нецентр. водоснаб. 3	Центр. водоснаб. 4	Бутилированная вода 5
Общая микробная численность (ОМЧ), КОЕ / 1 мл	–	–	не более 100	не более 50	не более 20
Общие колиформные бактерии (ОКБ), КОЕ / 100 мл	не более 1000 (питьевая вода) не более 500 (рекреационное назначение)	не более 1	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Термо-толерантные колиформные бактерии (ТКБ), КОЕ / 100 мл	не более 100	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 300 мл
Колифаги, БОЕ / 100 мл	не более 10	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 100 мл	отсутствие в 1000 мл
Споры сульфит-редукторов	–	–	–	отсутствие в 20 мл	отсутствие в 20 мл
Возбудители кишечных инфекций	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл	отсутствие в 1000 мл
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	отсутствие в 1000 мл
Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus)	–	отсутствие в 100 мл	–	–	–

Оценка качества по микробиологическим показателям сводится к определению в объекте доли микроорганизмов, связанных с человеком и его продуктами жизнедеятельности.

Прежде всего, определим единицы измерения количества микробов. КОЕ/мл (колониеобразующие единицы) – количество жизнеспособных микробных клеток в миллилитре. Если производится оценка вирусных частиц в среде, то указывается БОЕ/мл (бляшкообразующие единицы) – количество вирусных частиц в миллилитре.

Общие показатели

Общая микробная численность бактерий (ОМЧ) базовый показатель

Выявляет бактерии, потенциально способные причинить вред здоровью. Этот показатель достаточно информативен, так как высокая ОМЧ является индикатором загрязнения органическими соединениями (например, содержащихся в фекалиях) и различными формами азота. С другой стороны, в ОМЧ входят как опасные бактерии (например, высокопатогенный штамм кишечной палочки Escherіchіa colі), так и практически безвредные и повсеместно встречаемые сенные палочки (Bacillus subtillis).

Общие колиформные бактерии (ОКБ) колодцы, скважины, родники

Группу ОКБ формируют бактерии семейства Enterobacteriacea (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella). Многие представители этой группы относятся к нормальной микрофлоре желудка, поэтому превышение ОКБ может говорить о возможном фекальном загрязнении, связанном с деятельностью человека. Однако в данной группе могут встречаться и свободноживущие микробы, которые не представляют опасности для здоровья.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) колодцы, скважины, родники

ТКБ – более достоверный индикатор загрязнения продуктами жизнедеятельности. Этот показатель свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. В большинстве случаев в этой группе обнаруживается кишечная палочка Escherіchіa colі.

Колифаги колодцы, открытые источники

Колифаги являются вирусами палочки Escherichia coli и рассматриваются эпидемиологами как более чувствительный метод определения загрязнения жидкости микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы более устойчивы к окружающей среде, чем бактерии, в которых они обитают, поэтому этот показатель качества служит достоверной меткой давнего фекального загрязнения. Содержание колифагов свидетельствует о наличии опасных для человека энтеровирусов в воде.

Рекомендуется проводить исследование этой характеристики в случае, если ранее источник не был проверен, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения воды.

Споры сульфитредукторов бытовые нужды

Спорообразующие клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) являются дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения. Клостридии встречаются в кишечнике, однако при попадании в организм в большом количестве могут вызывать пищевые отравления и смертельные заболевания, в том числе, ботулизм. В отличие от относительно неустойчивых ОКБ и ТКБ, споры клостридий могут сохраняться долгое время, поэтому этот микробиологический показатель, как и колифаги, свидетельствует о наличии давнего загрязнения. Относительно высокая устойчивость позволяет использовать споры в качестве индикатора эффективности проведения водоподготовки (хлорирования, озонирования и т.п.).

Определение этого микробиологического показателя качества воды рекомендуется проводить при наличии посторонних запахов и образовании чёрного налёта на трубах, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения жидкости.

Синегнойная палочка бассейны, колодцы, родники

Pseudomonas aeruginosa – распространённый организм, который встречается практически во всех средах, в т. ч. входит в состав микрофлоры кожи. Однако при снижении иммунитета человека и высоком содержании в воде синегнойная палочка может вызывать серьёзные заболевания, поражая лёгкие и почки и приводя к сепсису. Присутствие Pseudomonas aeruginosa в бассейне или ванне является основанием для полной замены содержимого резервуара. Особенность синегнойной палочки – её чрезвычайная устойчивость к нагреванию, дезинфицирующим средствам и антибиотикам.

Золотистый стафилококк бассейны, колодцы, кулеры, родники

Staphylococcus aureus – тесно связанная с человеком бактерия, которая в основном образует колонии на коже, половых органах, респираторном и желудочно-кишечном трактах. Как и синегнойная палочка, золотистый стафилококк встречается у здоровых людей, однако может вызвать развитие болезни при ослаблении иммунитета.

Возбудители кишечных инфекций специфические показатели

В действующих нормативных документах не прописаны конкретные возбудители кишечных инфекций. В эту группу входят микроорганизмы, заражение которыми происходит через жидкие среды (Escherichia, Shigella, Vibrio, Salmonella). Процесс определения этого параметра трудоёмок и требует специальной квалификации микробиолога.

Микробиологические показатели качества воды, не регулируемые СанПиН

Развитие и удешевление технологий и новых методов приводит, с одной стороны, к расширению контролируемых параметров, с другой, к выбору более конкретных микроорганизмов-показателей. Например, руководство ВОЗ рекомендует использовать в качестве индикатора фекального загрязнения наличие кишечной палочки (Escherіchіa colі), а не ОКБ и ТКБ. В странах ЕС помимо палочки определяют наличие энтерококков – специфичной группы микроорганизмов обитателей кишечника человека. Ниже приведены группы микроорганизмов, которые имеют индикаторное значение при оценке микробиологического качества воды.

Энтерококки колодцы, скважины, родники

Enterococcus spp. – широкая группа микроорганизмов, проживающая в кишечнике человека. Наряду с золотистым стафилококком энтерококки являются причиной внутрибольничных инфекций, вызывают у человека (менингит, эндокардит). Ввиду более высокой устойчивости этих микроорганизмов к засолению и температуре, по сравнению с ТКБ, энтерококки – более надежный индикатор фекального загрязнения морей и солёных озёр. Согласно нормативу ЕС, эта группа не должна обнаруживаться в 250 мл. Согласно законодательству США, при превышении содержания Enterococcus spp. 35 КОЕ / 100 мл вводится запрет на купание людей.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты колодцы, родники, поверхностные воды

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов. В неё входят Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые вызывают оппортунистические заболевания, в т. ч. грибковые заболевания кожи и молочницу. Другие организмы-микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger) усиливают аллергические реакции, а иногда вызывают их. Особенно опасны плесневые грибы (Penicillium spp., Aspergillus spp., Fusariam spp., Alternaria spp. and Claviceps spp), образующие канцерогенные микотоксины (патулин, афлотоксин). Исследователи из Европейского союза пришли к выводу, что водопроводная вода не является распространителем микотоксинов, однако в стоячих источниках (например, накопительных резервуарах) могут создаться условия для благоприятного развития грибов. В некоторых странах ЕС содержание грибов строго регламентируется, например, в Швеции в питьевой воде их не может быть более 100 КОЕ / 100 мл.

Сине-зелёные водоросли (цианобактерии) бытовые нужды, воды для купания, кормление животных

Микроорганизмы, содержащие зелёный пигмент хлорофилл – обитатели богатых питательными элементами стоячих водоемов. Сами микроорганизмы не заражают человека, но синтезируют и выделяют в среду цианотоксины, вызывающие поражение внутренних органов млекопитающих: гепатотоксины (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis и Umezakia), нейротоксины (Aphanizomenon и Oscilatoria), почечные токсины (Cylindroapermopsis raciborski).

Таким образом, микробиологические показатели качества воды отражают несколько важных показателей:

Пробы воды для бактериологического анализа отбирают с соблюдением правил стерильности: в стерильные бутылки или стерильными приборами - батометрами.

Для отбора воды из открытых водоемов, сточных вод, воды из бассейнов, колодцев удобен так называемый бутылочный батометр.

При отборе проб сточной жидкости используют металлические черпаки на деревянных или другого металла ручках либо бутыли, укрепленные винтовым зажимом на деревянном или металлическом стержне.

Пробы воды из кранов отбирают после их стерилизации путем фламбирования пламенем горящего тампона, смоченного спиртом, и последующего спуска воды в течение 10 - 15 минут при полном открытом кране. В случае, если кран оголовка скважины находится в заглубленной части шахты, то воду из него сливать не следует (избегая затопления шахты), а использовать только обжиг крана. Если отбираемая вода содержит следы остаточного хлора, то для нейтрализации хлора необходимо перед отбором во флаконы добавить 1,5 % стерильный раствор тиосульфата (гипосульфита натрия) из расчета 4 мл на 1 л воды.

При отборе проб воды из открытых водоемов следует предусмотреть следующие точки: в месте застоя и в месте наиболее быстрого течения (с поверхности и на глубине 50 - 100 см).

При отборе проб сточной жидкости следует предусмотреть точки на этапах ее очистки; воду из колодцев отбирают с поверхности и на глубине 20 - 30 см, воду централизованного водоснабжения - из кранов по разводящей сети. При отборе воды из артезианских скважин предусматривают следующие точки: из крана оголовка скважины, из крана на выходе водоразборных сооружений, из крана после подземного резервуара, перед поступлением в сеть, по разводящей сети.

Отбор проб в бассейнах производят при водообмене, в местах водозабора, на этапах очистки и обеззараживания, перед подачей воды в бассейн, на сливе воды из бассейна, в ванне бассейна - с поверхности и на глубине 20 - 30 см.

Отобранные пробы воды должны сопровождаться документом, содержащим:

1. Наименование пробы воды.

2. Точное наименование места отбора проб воды.

3. Дату и время отбора, а также дату и время доставки пробы воды в лабораторию.

4. Указание температуры отобранной воды.

5. Указание, по чьему заданию и с какой целью производится исследование.

6. Кем произведен отбор пробы воды (фамилия, должность).

Пробы воды доставляют в лабораторию не позднее 5 часов с момента взятия пробы.

1. Прямой посев исследуемой воды на диагностические среды для определения шигелл.

1.1. Питьевая вода.

Воду предварительно фильтруют через мембранные фильтры № 3 в объеме не менее 500 мл. Фильтры помещают на поверхность питательных сред: агара с эозин-метиленовым синим (ЭМС) и бактоагара Плоскарева - антибиотиком и без него. Выбор антибиотика зависит от того, к каким антибиотикам устойчивы штаммы шигелл, выделяемые в данном районе. Посевы подращивают 18 - 24 часа при 37 °C.

1.2. Вода открытых водоемов.

Воду предварительно фильтруют через мембранные фильтры № 3 в объеме не менее 500 мл. Дальнейшее исследование проводят так же, как и при анализе питьевой воды.

1.3. Сточная вода.

Исследуемую воду в количестве 0,1 мл помещают на чашки с дифференциально-диагностической средой (не менее 5 чашек) и растирают шпателем. Посевы инкубируют в термостате при 37 °C 18 - 24 часа.

Дальнейшая идентификация бактерий проводится по общепринятой методике.

2. Посев воды в накопительные среды.

Используют не менее двух сред накопления. Для сальмонелл: магниевую среду, среду Кауфмана, селенитовый бульон, среду с охмеленным суслом. Для шигелл: селенитовый бульон, среду с охмеленным суслом, а также 1 % мясопептонный бульон и 10 % желчный бульон (метод Ростовского-на-Дону НИИЭМГ).

2.1. Посев питьевой воды.

Исследуемую воду фильтруют через мембранный фильтр № 3 (количество фильтров зависит от скорости фильтрации). Фильтры укладывают на поверхность питательной среды Эндо, разлитой в чашки Петри (поверхность фильтра с задержавшимися бактериями остается верхней). Посев подращивают при 37 °C 18 - 24 часа.

После учета выросших на мембранных фильтрах колоний кишечных палочек для определения коли-титра производят следующее: мембранные фильтры, на которых имелся рост мелких единичных бесцветных колоний, помещают в среды накопления - селенитовый бульон или магниевую среду обычной концентрации, разлитые в пробирки по 10 мл, в среду с охмеленным суслом, предварительно разбавленную стерильной водопроводной водой 1:4 и разлитую в пробирки по 10 мл. Посев помещают в термостат на 18 - 24 часа при 37 °C.

При отсутствии мембранных фильтров исследуемую воду распределяют по 500 мл во флаконы и вносят в среды накопления согласно прописям сред. Посевы помещают в термостат на 18 - 24 часа при 37 °C.

2.2. Посев воды открытых водоемов.

Исследуемую воду в количестве 1 л делят на две порции по 500 мл. В каждую порцию вносят накопительные среды по прописям, после чего воду с накопительной средой разливают поровну в 5 флаконов и помещают в термостат на 18 - 24 часа при 37 °C.

2.3. Посев сточной воды.

Сточную воду в количестве 100 мл вносят в накопительные среды по прописям и разливают во флаконы на 10 равных порций. Посевы воды помещают в термостат на 18 - 24 часа при 37 °C.

2.4. Посев воды по методу Ростовского-на-Дону НИИЭМГ (по Р.С. Хомик и А.А. Рындич). Применяется только для шигелл.

В 0,5 - 1 л исследуемой воды добавляют 5 - 10 мл 1 % мясопептонного бульона и помещают в термостат при 37 °C на 18 - 24 часа. Затем произвести посев на среду Эндо, ЭСМ-агар и бактоагар Плоскирева петлей. В этот же день провести посев подращенный в мясопептонном бульоне воды в среды накопления: 10 % желчный бульон или селенитовый бульон, произведя разведение до 10 -8 (берут 0,5 мл воды на 4,5 мл среды накопления). Из разведений делают высев на среды Эндо и ЭМС-агар (по 0,1 мл на каждую чашку) и бактоагар Плоскирева. Чашки с посевами и разведения, откуда делали высев, помещают в термостат при 37 °C на 18 - 24 часа. На следующий день просматривают чашки, а из разведений делают еще один высев на те же плотные среды. Дальнейшее исследование - по общепринятой методике определения шигелл.

3. Высев на дифференциально-диагностические среды.

3.1. Для определения сальмонелл.

Используют висмут-сульфитный агар. Высев из сред накопления производят бактериологической петлей на 2 - 3 чашки. Посевы инкубируют при 37 °C 18 - 24 часа. Просматривают рост на чашках и дальнейшее исследование проводят по общепринятой методике.

3.2. Для определения шигелл.

Используют агар с эозин-метиленовым синим с антибиотиками и без них, бактоагар Плоскирева. Высев из сред накопления производят бактериологической петлей на не менее 5 чашек. Посевы инкубируют в термостате при 37 °C 18 - 24 часа. Просматривают рост на чашках и дальнейшее исследование проводят по общепринятой методике.

4. Ускоренные методы определения сальмонелл и шигелл в воде.

Ускоренные методы определения патогенных энтеробактерий в воде рекомендуется использовать при повторном контроле воды централизованного и нецентрализованного водоснабжения, из которой ранее были выделены сальмонеллы или шигеллы.

4.1. Ускоренный сигнальный метод индикации патогенных энтеробактерий в питьевой воде.

Питьевую воду отбирают в количестве 1 - 2 л. Для посева воды используют параллельно не менее двух сред накопления: среду с охмеленным суслом, магниевую или селенитовую среды. 500 мл исследуемой воды засевают в равное количество магниевой или селенитовой сред двойной концентрации или среды с охмеленным суслом по прописи. Навеску сухой среды с охмеленным суслом в количестве 10 г вносят в 500 мл воды, взбалтывают до растворения в воде. Посевы инкубируют при 37 °C 18 - 24 часа.

Через 6 часов инкубации (ранний высев) из сред накопления три объема по 10 мл фильтруют через мембранные фильтры № 3. На первый фильтр наносят агглютинирующую специфическую сыворотку в количестве 0,5 мл. С помощью бактериологической петли смывают осадок с фильтра, переносят на предметное стекло и проводят реакцию агглютинации. Два фильтра укладывают на поверхность висмутсульфитного агара для подращивания сальмонелл и на ЭМС-агар - для шигелл. Посевы на чашках инкубируют при 37 °C 18 - 24 часа.

Положительная реакция агглютинации может служить сигнальным ответом на наличие соответствующих патогенных энтеробактерий.

Для подтверждения сигнального ответа:

1. На следующий день просматривают рост на фильтрах и, если есть четкие колонии, с каждой проводят пробную реакцию агглютинации на стекле с соответствующей специфической агглютинирующей сывороткой, готовят мазок и окрашивают по Граму. При обнаружении грамотрицательных палочек, дающих реакцию со специфической сывороткой, может быть дан предварительный положительный ответ. Все колонии, которые дали положительную реакцию агглютинации, пересевают на чашки с дифференциально-диагностическими средами и дальнейшее выделение и идентификацию бактерий проводят по общепринятой методике.

2. Наряду с этим, через 18 - 24 часа из сред накопления производят высев петлей на плотные питательные среды: висмут-сульфитный агар и ЭМС-агар с антибиотиком и без него, в зависимости от того, какие штаммы выделяются в данном районе -антибиотикоустойчивые или чувствительные. Посевы инкубируют при 37 °C 18 - 24 часа. Дальнейшее исследование и идентификация выделенных бактерий проводятся по общепринятой методике выделения сальмонелл и шигелл.

4.2. Ускоренное обнаружение сальмонелл в воде централизованного и нецентрализованного водоснабжения с использованием метода люминесцирующих антител.

С помощью красителя бисмарк браун приготавливают нелюминесцирующие мембранные фильтры по способу (Л.Е. Корш и Т.З. Артемовой (1972)). Пробы воды, подозрительные на наличие сальмонелл, фильтруют по 100 мл через 5 мембранных фильтров. Поверхность фильтров обрабатывают кроличьей агглютинирующей специфической сальмонеллезной сывороткой или смесью сывороток. Через 10 - 15 мин препарат помещают на 20 мин во влажную камеру, после чего подсушивают на воздухе. Затем фильтры обрабатывают люминесцирующей сывороткой против глобулинов кролика, время окраски - от 15 до 30 мин во влажной камере при комнатной температуре. Фильтры высушивают на воздухе, помещают на предметное стекло между слоями нелюминесцирующего иммерсионного масла (парафинового или вазелинового), накрывают покровным стеклом, на которое помещают еще каплю иммерсионного масла, и препарат микроскопируют.

При специфическом свечении наблюдается люминесценция по периферии микробной клетки, четко контрастирующая с телом клетки. Окрашенные и высушенные препараты могут храниться в темном месте в течение нескольких недель.

При использовании микроскопа МЛ-2Б возможно ориентировочное количественное определение сальмонелл в воде, для чего в один из измерительных окуляров К 7Х вставляется окулярная сетка Гаженко. Определение ведут по формуле:

где X - количество сальмонелл в 1 мл воды,

S - площадь фильтрующей поверхности в мкм,

S₁ - площадь 1 квадрата сетки Гаженко в мкм,

n - количество клеток сальмонелл в 1 квадрате (среднее арифметическое из 20 квадратов),

V - объем профильтрованной воды в мл.

Для повышения специфичности результатов анализа воды бактерии, задержавшиеся на нелюминесцирующих фильтрах, подращивают на висмут-сульфитном агаре в течение 3 - 4 часов при 37 °C. Образовавшиеся микроколонии обрабатывают и микроскопируют так же, как и отдельные бактерии. Для получения достоверных результатов необходим контроль специфичности.

Затраты времени на анализ: без подращивания - 1 - 1,5 час., с подращиванием - до 5 часов.

Санитарно-химические показатели

Органолептика.: запах, вкус, привкус

Органолептика: запах, привкус

Общая минерализация (сухой остаток)

Остаточный свободный хлор

Остаточный связанный хлор

Остаточный свободный хлор

Озон (только при озонировании)

АПАВ (анионактивные поверхностные вещества)

Остаток после выпаривания

Аммиак и аммонийные соли

Вещества, восстанавливающие КМnО4

Удельная электрическая проводимость

Микробиологические показатели

№ п/п	Наименование показателя
2.0	Вода
2.1	Вода питьевая (мембранный метод):
2.1.1	Общее микробное число
2.1.2	Общие колиформные бактерии, Термотолерантные колиформные бактерии
2.2	Вода открытых водоёмов, сточная:
2.2.1	Общие колиформные бактерии, Термотолерантные колиформные бактерии
2.2.2	Коли-фаги (без обогащения)
2.2.3	Возбудители кишечных инфекций (Salmonella spp.)
2.3	Вода плавательных бассейнов:
2.3.1	Общие колиформные бактерии, Термотолерантные колиформные бактерии
2.3.2	Патогенный стафилококк (S.aureus)
2.3.3	Коли-фаги (с обогащением)
2.4	Дополнительные исследования:
2.4.1	Pseudomonas aeruginosa
2.4.2	Возбудители кишечных инфекций
2.4.3	Энтерококк
2.4.4	Сульфитредуцирующие клостридии
2.4.5	Коли-фаги (без обогащения)
2.4.6	Коли-фаги (с обогащением)
2.5	Санитарно-паразитологические исследования:
2.5.1	Исследование питьевой воды, плавательных бассейнов на яйца, личинки гельминтов и цисты лямблий
2.5.2	Исследование воды открытых водоемов на яйца гельминтов, цисты патогенных кишечных простейших
2.5.3	Исследование питьевой воды расфасованной в емкости на яйца гельминтов, цисты лямблий и ооцисты криптоспоридий
2.5.4	Исследование сточной воды на яйца гельминтов и цисты кишечных простейших
2.5.5	Исследование донных отложений и осадка сточных вод на яйца гельминтов и цисты кишечных простейших
2.6	Исследование на особо-опасные инфекции:
2.6.1	Вода открытых водоемов, сточная вода на холеру
2.6.2	Вода централизованного водоснабжения, в том числе горячая на легионеллез - бактериол. метод; метод ПЦР
2.6.3	Вода плавательных бассейнов, аквапарков, джакузи на легионеллез - бактериол. метод ; метод ПЦР
2.6.4	Вода водных систем охлаждения промышленных предприятий на легионеллез - бактериол. метод; метод ПЦР
2.6.5	Вода централизованной системы кондиционирования и увлажнения воздуха на легионеллез - бактериол. метод; метод ПЦР
2.7	Санитарно-вирусологические исследования:
2.7.1	на культуре клеток выделение энтсровирусов, т.н. вируса полиомиелита
2.7.2	Антиген ротавируса (ИФА)
2.7.3	Антиген вирусного гепатита А (ИФА)
2.7.4	РНК вирусного гепатита А (ПЦР)
2.7.5	РНК ротавирусов группы А, норовирусов 2 генотипа и астровирусов (ПЦР)
2.7.6	на наличие РНК энтеровирусов (ПЦР)

Радиологические показатели

Определяемый показатель
1.	Вода:
1.1	Измерение суммарной активности альфа - бета-излучающих радионуклидов в питьевой воде

Сервисы

Ссылки

Контакты

Графский переулок, д. 4 кор. 2,3,4, Москва, Россия, 129626

Единый консультационный центр Роспотребнадзора

Полезная информация

Читайте также: