Бактериологические исследования инфекционных болезней животных
Обновлено: 19.04.2024
ТЕМА 1. Принципы организации и оборудование ветеринарных лабораторий (1.1). Техника безопасности при работе в лаборатории (1.2). Общая схема проведения бактериологической диагностики (1.3). Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала для исследования (1.4).
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Ознакомить студентов с организацией и оборудованием ветеринарных лабораторий, с техникой безопасности при работе. Усвоить общую схему проведения бактериологической диагностики. Освоить технику взятия и консервации патологического материала.
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Оборудование, аппаратура. Органы от трупов животных. Пинцеты, скальпели, ножницы. Деревянный ящик с опилками, металлический ящик, банки, полиэтиленовые мешочки и пленка, 5%-ный раствор карболовой кислоты, 30% раствор глицерина, хлористый натрий, дистиллированная вода. Форма сопроводительного письма на патологический материал. Таблицы, схемы.
Принципы организации и оборудование ветеринарных лабораторий
Лабораторная диагностика проводится ветеринарными лабораториями, которые по масштабу своей деятельности подразделяются на республиканские (областные, краевые), зональные, районные, специальные – на предприятиях, перерабатывающих животноводческую продукцию (мясо-, молочные комбинаты и др.). В ветеринарных лабораториях проводят диагностические исследования инфекционных болезней: на туберкулез, бруцеллез, сибирскую язву, рожу свиней и др.
Бактериологические лаборатории обычно размещаются в нескольких помещениях, которые в зависимости от объема работы и целевого назначения занимают большую или меньшую площадь. В каждой лаборатории предусмотрены: а) боксы для работы с отдельными группами бактерий или вирусов; б) помещения для серологических исследований, приготовления питательных сред, стерилизации, мойки посуды; виварий с боксами для здоровых и подопытных животных.
В лаборатории должно быть следующее оборудование: биологический иммерсионный микроскоп с дополнительными приспособлениями (осветителем, фазово-контрастным устройством, темнопольным конденсором и др.), люминесцентный микроскоп, термостаты, оборудование для стерилизации (автоклавы, сушильные шкафы), рН-метр, аппарат для получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические, аналитические и торзионные весы; аппаратура для фильтрования (фильтры Зейтца и бактериальные свечи), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов – бактериологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др., лабораторная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрасы, флаконы, ампулы, пастеровские пипетки, градуированные на 1, 2, 3, 4, 5 и 10 мл) и другое оборудование.
В лаборатории необходимо иметь место для окраски микроскопических препаратов, где находятся растворы красителей, спирт для обесцвечивания, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место должно быть снабжено газовой горелкой (или спиртовкой) и банкой с дезинфицирующим раствором.
Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами. Химическими реактивами, диагностическими сыворотками и другими материалами.
Пробы для бактериологического исследования берут от больных животных и трупов. Пробы от больных животных исследуются с целью выявления бактерионосителей, бактериовыделителей и постановки этиологического диагноза. Чаще всего для этих целей берут молоко, кровь, кал, мочу, мокроту, гной из абсцессов, экссудат из мест его скопления, истечения из половых органов, соскобы из прямой кишки, с пораженных участков кожи и т. д.
При взятии проб для бактериологического, вирусологического и микологического исследований при жизни животного необходимо соблюдать правила асептики и антисептики. Посуда и инструменты должны быть стерильными, операционное поле или место взятия пробы необходимо тщательно обработать.
Частым объектом исследования является молоко . Перед взятием пробы молока вымя моют кипяченой водой с мылом и вытирают проглаженным полотенцем. Соски обрабатывают 70 °-м спиртом. Руки перед дойкой моют с мылом и затем обрабатывают спиртом. Первые струйки молока удаляют, а затем в стерильную посуду набирают по 25 мл молока из первой и последней порций удоя. Пробы следует брать из каждой доли вымени отдельно. Иногда пробу берут с помощью молочного катетера или пункции. Поле операции готовят у основания соска и вводят стерильную иглу в молочную цистерну.
Моча чаще всего является объектом исследования при подозрении на лептоспироз. Ее берут непосредственно из мочевого пузыря с помощью катетера. В зависимости от цели исследования берут от 50 до 200 мл мочи.
Кал для бактериологического исследования берут из прямой кишки. Пробу помещают в стерильную посуду и закрывают плотной крышкой. При обнаружении на стенке прямой кишки слизи, утолщений и других патологических изменений дополнительно берут соскобы. Соскоб делают хирургической ложкой или шпателем. Пробы слизи помещают отдельно в стерильные пробирки.
Секрет из носа, рта, глотки, гортани берут следующим образом. Нос животного – крылья носа, переднюю часть носовых ходов – обмывают водой, после чего собирают секрет стерильными тампонами. Из глубоких частей носа материал берут тампонами, которые затем помещают в стерильные пробирки, содержащие по 0,5 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Изо рта и глотки берут для исследования слюну, содержимое афт, эпителий афт, слизь. Материал собирают непосредственно в сосуды или с помощью ватных тампонов в зависимости от количества выделяемого секрета.
Трахеальную слизь Для исследования берут через трахеотубус или через специальный носотрахеальный зонд, представляющий собой небольшого диаметра (до 0,5–0,6 см) резиновую трубку, внутрь которой вставлен металлический стержень с кисточкой на конце, а в отверстие одного из концов трубки – наконечник от иглы Сайковича. Зонд через носовое отверстие вводят в трахею, а затем выдвигают из трубки стержень, при этом кисточка вызывает раздражение слизистой оболочки трахеи, в результате чего у животного появляется кашель. Слизь, выделяющаяся во время кашля, попадает на кисточку, которую затем втягивают в трубку и извлекают с зондом. Кисточку со слизью помещают в стерильную посуду.
Содержимое абсцессов, язв, ран берут в зависимости от характера объекта и его локализации. В отдельных случаях делают пункцию стенки абсцесса и материал насасывают шприцем, иногда вскрывают абсцесс и собирают вытекающий экссудат; из язв и ран материал берут методом соскобов на границе пораженной и здоровой ткани.
Соскобы берут при кожных поражениях. При поражении волос и кожи берут для исследования и волосы, и соскобы. Волосы выщипывают, а соскобы делают скальпелем на границе пораженной и здоровой ткани.
Правила взятия проб от Трупов, убитых животных и абортированных плодов . От трупов и абортированных плодов материалом для исследования могут быть различные органы, жидкости, ткани в зависимости от характера подозреваемой болезни. Если труп небольшого животного, то его целесообразно посылать в лабораторию целиком.
Необходимо стараться взять материал для бактериологического исследования в первые часы после гибели животного. Каждую пробу берут и упаковывают отдельно в стерильную посуду. При взятии части органа для исследования поверхность разреза прижигают, при взятии кишечника необходимый отрезок кишки освобождают от содержимого путем выдавливания его от центра участка к периферии, после чего концы кишки перевязывают. Трубчатую кость освобождают от мягких тканей. Кровь из сердца берут в пастеровскую пипетку, которую запаивают.
При подозрении на сибирскую язву кровь для исследования берут из вены уха. При этом готовят 1–2 толстых мазка и не менее 3 тонких мазков. Мазки крови необходимо сразу же помещать под марлевый колпак, чтобы они были недоступны для мух, а после высыхания их немедленно упаковывают. Тонкие мазки перед упаковкой можно фиксировать над пламенем горелки.
Фиксация материала, отправляемого в лабораторию. В теплое время года и при большой удаленности лаборатории материал для бактериологического исследования необходимо фиксировать. Для фиксации применяют 30 %-й раствор химически чистого глицерина. Для растворения глицерина берут прокипяченную в течение 30 мин воду. Можно для консервирования материала использовать стерильное вазелиновое масло. Материал заливают 4-5-кратным количеством консервирующей жидкости.
Материал, предназначенный для вирусологических исследований, консервируют 30–50 %-м раствором глицерина на стерильном изотоническом растворе натрия хлорида. Кишечник и трубчатую кость можно консервировать поваренной солью.
Правила оформления документов на отправляемый материал. На отправляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ (письмо), в котором указывают вид, пол и возраст животного, от которого взят материал для исследования, его номер или кличку, сколько банок с материалом и на какое исследование посылается, краткое описание клинических признаков и патологоанатомических изменений. Указываются также данные о том, лечили животное или нет; если лечили, то какие лечебные средства применяли; как законсервирован материал; эпизоотическая обстановка в хозяйстве и другие сведения.
Микроскопия (люминесцентная, световая, электронная)
Выделение вируса биопроба
Примечание. Для каждой болезни существует перечень показателей, по которым диагноз считают установленным.
Благодаря правильному и своевременному диагнозу удается обеспечить эффективность оздоровительных мероприятий, т. е. быстро купировать возникший эпизоотический очаг и предупредить дальнейшее распространение болезни.
Эпизоотологический метод. Представляет собой систему изучения проявлений эпизоотического процесса. Для характеристики последнего необходимо собрать точную информацию о восприимчивых видах, источнике и резервуаре возбудителя болезни, механизме его передачи, воротах инфекции, интенсивности проявления эпизоотического процесса, сезонности, предрасполагающих факторах, заболеваемости, смертности, летальности. Кроме того, особое внимание обращают на факторы, определяющие пути дальнейшего распространения заболевания — выполнение противоэпизоотических мероприятий и условия внешней среды.
Чтобы охарактеризовать эпизоотическое состояние хозяйства, сопоставляют и оценивают обобщенные эпизоотологические показатели, получаемые путем статистической обработки данных первичного учета заболеваний и профилактических мероприятий.
Клинический метод. При клиническом исследовании животных, подозреваемых в заболевании инфекционной болезнью, необходимо всегда строго соблюдать правила работы, предусмотренные соответствующей инструкцией.
Клиническое исследование рекомендуют начинать с измерения температуры тела животного. Далее осматривают животное в нефиксированном состоянии: обращают внимание на положение тела реакцию на различные раздражители, прием корма и воды, характер фекалий, особенности дефекации и мочеиспускания. Затем приступают к исследованию отдельных систем и органов по схеме, общепринятой в клинической диагностике болезней.
Клинические признаки инфекционной болезни зависят от многих факторов: вида и локализации возбудителя, течения, формы проявления и стадии болезни, резистентности организма и других причин. Во всех случаях клинические признаки одной и той же инфекционной болезни у животных даже одного вида сильно варьируют.
Патоморфологический метод. Включает в себя патологоанатомический и гистологический методы исследований. Патологоанатомический метод считают важным, но не всегда окончательным методом диагностики. Например, если при вскрытии трупа животного (птицы) отмечают характерные изменения — туберкулы, то сразу же диагностируют туберкулез, при обнаружении в селезенке свиньи краевых геморрагических инфарктов — чуму, кровоизлияний на границе мышечного и железистого желудка у кур — болезнь Ньюкасла и т. д.
Порядок патологоанатомического исследования: оценивают состояние трупа, кожи и слизистых оболочек, затем исследуют лимфатическую систему, серозные покровы, мышцы и суставы, органы дыхания, сердце и кровеносные сосуды, печень, селезенку, почки, глотку, пищевод, желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник, мочевой пузырь, органы воспроизводства, головной и спинной мозг.
Однако во многих случаях наряду с патологоанатомическим применяют и метод лабораторных исследований (гистологических, бактериологических и др.). С помощью гистологического метода устанавливают точный диагноз при таких болезнях, как - бешенство (тельца Бабеша—Негри), ринопневмония (внутриядерные включения типа Коудри), оспа (тельца-включения).
Бактериологический метод. Это ценный метод диагностики инфекционных болезней. Для бактериологического исследования от больных или павших животных необходимо правильно взять патологический материал и грамотно оформить сопроводительный документ. Поступивший биоматериал обрабатывают в зависимости от предполагаемой болезни, делают мазки-отпечатки, красят их соответствующими методами, выделяют чистую культуру посевом на питательные (элективные) среды, заражают чувствительных лабораторных животных биоматериалом или выделенной чистой культурой (табл.1).
1. Бактериологический метод диагностики некоторых инфекционных болезней
На основании обнаружения патогенных микроорганизмов в поступившем материале устанавливают этиологический диагноз.
Вирусологический метод. Для вирусологического исследования в лабораторию направляют патологический материал от больных животных, взятый в период проявления у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение, воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, сопровождающиеся серозными или слизистыми истечениями из носовой полости, диарея, образование везикул, афт, иногда аборты), или вынужденно убитых (павших) животных, взятый не позднее чем через 2 ч после их гибели. Вирусологический метод диагностики включает в себя: обнаружение возбудителя в патологическом материале различными методами (электронная, люминесцентная или световая микроскопия, заражение культуры клеток, лабораторных животных и т. д.), выделение и идентификацию вируса в различных серологических реакциях, биопробу.
Гематологический метод. В лабораторию для гематологического исследования отправляют кровь, которую берут с соблюдением правил асептики из яремной вены в пробирки с антикоагулянтом— 10 %-м раствором трилона Б, гепарина, цитрата натрия из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови.
Гематологический метод используют как вспомогательный, а при некоторых инфекционных болезнях (лейкоз крупного рогатого скота, инфекционная анемия лошадей) — в качестве основного метода диагностики. При лейкозе крупного рогатого скота диагноз основан на обнаружении в периферической крови повышения содержания лейкоцитов основного лимфоидного ряда в 1-10-3 мл крови, а при инфекционной анемии лошадей — на основании снижения содержания эритроцитов в 1 • 103 мл крови, гемоглобина и замедленной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
Иммунологический метод. Включает в себя серологическую диагностику — в лаборатории исследуют сыворотки крови для обнаружения антител и аллергическую пробу, с помощью которой в хозяйствах выявляют животных, больных туберкулезом, паратуберкулезом, бруцеллезом, сапом, реже — сибирской язвой, листериозом, туляремией.
— Вы обещали рассказать про анализ, который наша лаборатория делает достаточно часто и который имеет определённые преимущества перед другими лабораториями. Что это за анализ?
— Какой материал берётся у пациента для проведения данного анализа?
— Для исследования можно сдать любой биоматериал, в котором предполагается наличие бактериального агента.
— И откуда чаще всего он берётся?
— Сложно сказать, откуда чаще. Спектр патологий животных, поступающих на приём, довольно велик. Часто берутся мазки с кожи, смывы с глаз, из трахеи и бронхов. При риноскопии берутся мазки из верхних дыхательных путей. Также исследуются биологические жидкости, такие как моча, кровь, синовиальная жидкость или ликвор.
— А разве нельзя взять мазок из носовой полости, не прибегая к риноскопии?
— Можно, но это бессмысленно. В результате исследования данного материала выделятся все микроорганизмы, которые животное могло вдохнуть. В том числе оппортунистические, не являющиеся этиологическим фактором исследуемого заболевания.
— А из желудочно-кишечного тракта материал берётся?
— Для исследования микробиоты толстого отдела кишечника у людей довольно часто делают анализ на дисбактериоз. Однако диагностическая ценность такого исследования у животных до сих пор обсуждается.
— Как проводится бактериологическое исследование?
— Забор материала производят в стерильную ёмкость, или в пробирку с транспортной средой, и в течении получаса доставляют в лабораторию. В результате снижается риск контаминации, то есть загрязнения, а также преждевременной гибели какой-то части микроорганизмов, что часто происходит при транспортировке в отдалённые лаборатории.
Из биоматериала выделяют возбудитель, а затем определяют чувствительность к широкому спектру антимикробных препаратов.
Выделение культуры бактерий проводят путём посева биоматериала на среды общего назначения, селективные и дифференциально-диагностические, они могут быть плотные и жидкие.
Процесс довольно трудоёмкий — из-за использования большого количества питательных сред и биохимических тестов, и длительный, так как окончательный результат выдаётся только на седьмые сутки.
— Возбудителей может быть одновременно несколько?
— Причиной воспалительного процесса может быть как один, так и несколько микроорганизмов.
— Причиной любого воспаления являются микроорганизмы?
—Конечно нет. Воспаление может быть как септическим, так и стерильным. Бактериологическое исследование помогает их дифференцировать.
— Что нужно знать, чтобы получить информативный результат?
— Материал необходимо сдавать до начала проведения антибактериальной терапии и не ранее семи дней после её отмены. В противном случае результаты могут искажаться.
— Как часто сдаётся этот анализ?
— Как правило, одному животному проводят одно основное исследование, в результате которого доктор назначает специфическое лечение, и одно контрольное исследование — для оценки качества проведённой антибиотикотерапии.
— В чём преимущество проведения данного исследования в лаборатории нашей клиники?
— При взятии анализа у нас, биоматериал сразу же попадает в лабораторию. Если речь идёт о сторонней лаборатории, то туда материал попадает за день-два, а если выпадают выходные, то и за три-четыре дня. Это не только продлевает срок выдачи результата, но и повышает риск загрязнения материала. Также длительный срок передачи материала в лабораторию может привести к преждевременной гибели микроорганизмов, что, в свою очередь, часто приводит к ложноотрицательному результату при низкой контаминации.
Но это не главное наше преимущество. Самое важное то, что мы проводим постановку чувствительности бактериальных возбудителей к тридцати пяти антибиотикам и семи антимикотикам.
— А как в других лабораториях?
— В других лабораториях этот анализ делается, как правило, в отношении от восьми до шестнадцати антибиотиков.
— Для чего мы определяем чувствительность к тридцати пяти антибиотикам? Может быть, восемь или шестнадцать достаточно?
— То есть наш анализ серьёзно развязывает руки врачу?
— Да, доктору есть из чего выбрать, у него больше инструментов для решения проблемы. Плюс к этому, в анализе на меньшее количество препаратов преобладают антибиотики третьего и четвёртого поколения. Их использование уменьшает выбор препаратов для последующего лечения. Расширенный анализ, проводимый у нас, позволяет подобрать антибиотик более раннего поколения или скомбинировать несколько антибиотиков из разных групп.
— Как часто появляются у нас такие пациенты, кому нужен большой выбор антибиотиков для проведения лечения?
Инфекционные заболевания весьма часто встречаются в ветеринарной практике. Для владельца животного важно вовремя обратить внимание на симптомы недомогания питомца. Для большинства инфекционных заболеваний эти симптомы неспецифичны: угнетение, отказ от корма, повышенная температура тела, рвота, понос; при некоторых заболеваниях встречается хромота и опухание суставов; возможно изменение цвета мочи.
Для ветеринарного врача, к которому приводят заболевшее животное, важно составить список дифференциальных диагнозов и исключить (или подтвердить) их специальными методами диагностики. Однако стоит помнить, что выбор диагностического метода будет зависеть от вида возбудителя, его локализации и стадии заболевания. Методика, применимая для диагностики одной инфекции, совершенно неприемлема для диагностики другой.
В данной статье представлен обзор основных методов диагностики инфекционных заболеваний, которыми располагает современная ветеринарная медицина.
1. Культивирование
Возбудители многих заболеваний, как правило, достаточно требовательны к питательным средам и достаточно сложны для культивирования invitro. Не для всех возбудителей определены условия культивирования. В некоторых случаях используют синтетические или полусинтетические среды – однако при этом рост возбудителей очень медленный (до нескольких месяцев) и всегда присутствует значительный риск грибковой или бактериальной контаминации, несмотря строгое соблюдение асептики. Кроме того, проведение работ по культивированию возможно только в специализированных микробиологических лабораториях. Поэтому в ветеринарии данный метод не нашел широкого применения при диагностике инфекционных заболеваний; работы, связанные с культивированием возбудителей, проводятся, как правило, только в специальных исследовательских институтах с целью их более детального изучения и разработки диагностических тест-систем.
2. Световая микроскопия
1) Микроскопия фиксированных окрашенных препаратов
Является наиболее доступным и потому распространенным методом диагностики инфекционных (особенно трансмиссивных) заболеваний в ветеринарной медицине. Основан на выявлении возбудителя в клиническом материале по характерной морфологии. Однако, несмотря на свою простоту и доступность, у этого метода есть свои недостатки.
Во-первых, у метода световой микроскопии достаточно ограниченная чувствительность. При незначительном количестве возбудителей в материале результат микроскопии может быть отрицательным.
Во-вторых, необходимо тщательное приготовление и окраска мазков для минимизации возможных артефактов.
В-третьих, лаборанту или врачу, интерпретирующему мазок, требуется достаточный опыт и хорошее знание морфологии как клеток тканей, так и возбудителей и умение отличать последних от возможных рефракционных артефактов или преципитатов красителя. И, в-четвертых, точное определение вида возбудителя при использовании только световой микроскопии возможно далеко не всегда. Поэтому световую микроскопию стараются дополнять другими методами диагностики, основанными на обнаружении специфических антител либо генетического материала возбудителя.
2)Темнопольная микроскопия
Вид оптической микроскопии, в которой контраст изображения увеличивают за счет регистрации только света, рассеянного изучаемым образцом. Как правило, используется для обнаружения спирохет - боррелий и лептоспир. Из-за необходимости наличия специального оборудования в рутинной ветеринарной практике применяется редко. Кроме того, с помощью темнопольной микроскопии невозможно определить видовую принадлежность возбудителя и его патогенность.
3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод ферментативного получения ампликонов (большого количества копий) исследуемых фрагментов ДНК путем повторных циклов репликации и денатурации (разделения цепи ДНК на отдельные нити); при этом происходит копирование только исследуемого участка ДНК (при условии его присутствия в данном образце), поскольку только этот участок соответствует заданным условиям.
Метод ПЦР идеально подходит для обнаружения микроорганизмов, трудно визуализирующихся, медленно растущих или сложных в культивировании. ПЦР является наиболее предпочтительным методом для диагностики заболевания в острый период. Основным лимитирующим фактором при использовании ПЦР является содержание в исследуемой пробе достаточного количества материала (нуклеиновой кислоты возбудителя). Для многих возбудителей известно, что их количество в крови меняется с течением времени; таким образом, в какой-то момент времени ПЦР может показать ложноотрицательный результат у инфицированного пациента. Таким образом, для врача крайне важно знать тропность возбудителя к тканям организма и отправлять на исследование тот материал, в котором вероятность обнаружения возбудителя наиболее высока (например, мочу – при диагностике лептоспироза, плаценту или пунктат семенников при подозрении на бруцеллез, синовиальную жидкость - при исследовании на боррелиоз).
4. Серологические методы диагностики
Данные методы основаны на выявлении у животных специфических антител. Заражение инфекционным агентом, если оно происходит впервые, в течение недели вызывает у животного умеренный рост иммуноглобулинов класса М (IgM) и постепенное увеличение иммуноглобулинов класса G (IgG), которое достигает пика через 14 дней. Определение уровня антител у животных с остро начинающимся заболеванием (таким как бабезиоз) дает мало полезной диагностической информации. Для диагностики хронических заболеваний (например, моноцитарного эрлихиоза) измерение уровня антител будет более полезным.
Продукция антител у каждого животного может сильно варьироваться; этот процесс зависит от возраста, иммунного статуса и генетической принадлежности. Лучший способ оценки степени сероконверсии заключается в исследовании парных сывороток, взятых с интервалом в 2-3 недели. Растущий титр антител указывают на недавнюю и, следовательно, клинически значимую инфекцию, особенно если это подтверждается соответствующими клиническими признаками. Альтернативным методом определения недавней инфекции является измерение уровня IgM, однако в ветеринарной практике данный метод практически не используется.
1) Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA)
Принцип метода заключается в том, один их специфических реагентов (антиген) иммобилизуют на твердой фазе. Затем последовательно добавляют другие специфические реагенты, проводя после инкубации каждого из них промывку с целью удаления несвязавшихся компонентов. Один из специфических реагентов, так называемый конъюгат, содержит ферментную метку. Для визуализации результата в конце реакции добавляют хромогеновый субстрат. Через определенный промежуток времени реакцию останавливают и проводят считывание на спектрофотометре.
Для определения титра антител в сыворотке готовят несколько последовательных разведений; титр антител определяется как обратный последнему видимому разведению (к примеру, если последнее разведение было 1:2000, то титр антител составит 2000). Метод твердофазного ИФА является наиболее предпочтительным для определения наличия антител к возбудителям, антигены которых легкодоступны (т.е. это либо легко культивируемые микроорганизмы, либо те, для которых получены рекомбинантные антигены). Кроме того, он может использоваться и для выявления антигенов возбудителя – например при диагностике инвазии Dirofilariaimmitisили вируса лейкемии кошек.
Для использования полноценного твердофазного иммуноферментного анализа необходимо наличие специального лабораторного оборудования. Однако существует экспресс-модификация ИФА (SNAP, IDEXX Laboratories), где антиген/антитела иммобилизированы не на плашке, а на мембранном фильтре. Эти тесты широко используются в клиниках для диагностики трансмиссивных заболеваний (лейшманиоза, дирофиляриоза, анаплазмоза, эрлихиоза и боррелиоза). Однако они не дают возможность зафиксировать рост или снижение титра антител, а также определить их принадлежность к M или G классу.
2) Метод флюоресцирующих антител (МФА, IFA)
В случае, когда культивирование микроорганизма сопряжено с техническими сложностями либо небезопасно, применяют метод иммунофлюоресценции. При этом может быть обнаружен как сам организм в зараженных клетках и тканях пациента (прямой МФА) либо наличие в сыворотке специфичных антител (непрямой МФА). В непрямом МФА зараженные клетки (как правило, культурального происхождения) зафиксированы на предметных стеклах либо планшетках. Сама процедура исследования схожа с таковой в ИФА. Однако в конъюгате вместо фермента здесь используется специальный краситель, дающий при определенной длине волны флюоресцентное свечение, которое можно видеть в специальный микроскоп. Количество антител также определяется по последнему разведению, давшему положительный результат.
Прямой МФА считается менее чувствительным; используется в тех случаях, когда число зараженных клеток невелико (например, для выявления в мазках крови морул Anaplasmaphagocytophilum).
3) Иммуноблот (вестерн-блот)
Таким образом, в статье были рассмотрены основные методы, применяемые сегодня для диагностики инфекционных заболеваний животных. Особое внимание хотелось бы уделить тому, что не существует какого-либо универсального метода для диагностики того или иного заболевания. Поэтому от врача при постановке диагноза требуется комплексный подход; необходимо учитывать анамнез, длительность заболевания, клинические признаки и данные общих лабораторных исследований.
Кроме того, необходимо умение правильно интерпретировать результаты – ведь даже обнаружение антител (особенно класса G) к тому или иному возбудителю не говорит о том, что именно этот этиологический агент является причиной нынешнего состояния животного. Только грамотное применение и интерпретация специальных методов исследования (не только при диагностике трансмиссивных заболеваний) в сочетании с клинической картиной дает возможность правильно поставить диагноз и назначить адекватное лечение.
Читайте также: