Бактериологическое исследование анаэробных инфекций

Обновлено: 18.04.2024

Обнаружение анаэробной флоры при гнойно-воспалительных процессах.

Анаэробные микроорганизмы составляют абсолютное большинство нормальной микрофлоры человеческого тела. Но при определенных условиях они становятся причиной тяжёлых гнойно-воспалительных заболеваний.

Вне зависимости от локализации очага они имеют общие характерные клинические проявления, обусловленные гнилостным характером поражения, газообразованием. Большинство анаэробных инфекций эндогенны и чаще всего поражают органы места их естественного обитания анаэробов желудочно-кишечный тракт, мочеполовая система, верхние дыхательные пути. Только точная диагностика позволяет обосновать рациональную терапию и ликвидировать потенциально смертельно-опасную инфекцию.

Выделяемые возбудители: бактероиды, вейлонеллы, эубактерии, пептострептококки, актиномицеты, фузобактерии, клостридии, превотеллы, гемеллы, бифидобактерии, порфиромонас, пропионобактерии.

аспираты из полостей (например, полости матки), биологические жидкости из брюшной, плевральной полостей, гнойное содержимое из абсцессов и флегмон;
кусочки тканей при миозитах и мионекрозе (путем погружения кусочка вглубь угольной среды с помощью прилагаемого к ней тампона), отделяемое со дна язв;
желчь;
семенная жидкость (секрет простаты).

Исследование проводится до начала лечения антибактериальными препаратами. Одновременно с посевом на анаэробы рекомендовано назначить посев на микрофлору в аэробных условиях (тесты № 446 или № 465 или № 472 или № 474 и т. д. в зависимости от локализации процесса), сделать мазок на стекле отдельным стерильным тампоном и назначить микроскопическое исследование (тест № 445). В случае если исследование проводится с целью выявления актиномицетов и клостридий, об этом обязательно делается запись на направительном бланке.

Гнойная инфекция глубоких тканей: внутрибрюшной абсцесс, абсцесс лёгкого, эмпиема плевры, абсцессы в полости малого таза, подкожные абсцессы, инфекция культи после ампутации, абсцесс предстательной железы, конъюнктивит, инфекция аортальных шунтов.
Холецистит, вызываемый клостридиальной инфекцией.
Инфекция кожи и мягких тканей: целлюлит, параректальный абсцесс, диабетические язвы стоп.
Гнойный миозит.
Клостридиалъный мионекроз (газовая гангрена).
Клостридиальная септицемия.
Клостридиальное инфицирование матки (особенно после септического аборта), толстой кишки или желчевыводящих путей.
Периодонтальный абсцесс.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Даётся информация об отсутствии или наличии роста. В случае положительного результата определяется чувствительность к антибиотикам.

Анаэробные микроорганизмы, являясь представителями нормальной микрофлоры, в то же время они имеют потенциальные способности для развития инфекционного процесса практически в любом органе. Вследствие разных причин, например, при длительной терапии иммунодепрессантами, антибиотиками, а также в результате травмы, хирургического вмешательства, эти микроорганизмы попадают в кровяное русло, брюшную полость, различные органы и ткани и становятся причиной тяжелых гнойно-воспалительных процессов, сопровождающихся высокой смертностью, особенно при анаэробном сепсисе.

Важную роль анаэробы играют при развитии осложнений после хирургических вмешательств. В амбулаторной практике анаэробные инфекции с большой частотой встречаются у стоматологических, гинекологических больных, у женщин с отягощенным акушерским анамнезом.

Анаэробы являются участниками гнойно- воспалительных процессов, возникающих во всех отделах генитального тракта женщин. Их выделяют как единственного возбудителя или в составе ассоциации с аэробами при таких распространенных заболеваниях, как вагинит, вагиноз, послеродовый эндометрит. Установлена этиологическая роль анаэробов при возникновении воспалительных заболеваний придатков матки и околоматочного пространства, которые часто являются следствием абортов, инструментальных диагностических мероприятий, применения внутриматочных спиралей, хирургических вмешательств. Анаэробы также играют важную роль при возникновении пародонтоза - воспалительного процесса в тканях, прилегающих к зубам. По данным ВОЗ, около 95% взрослого населения планеты и 80% детей имеют признаки пародонтоза. Воспалительный процесс в тканях десны изначально возникает из-за массивных микробных скоплений и выделяемых ими ферментов и токсинов.

Бактериологическая диагностика при подозрении на анаэробную инфекцию весьма актуальна поскольку позволяет назначить наиболее эффективное лечение.

Принципы забора материала на исследование.

Материал для исследования следует брать по возможности до начала химиотерапии и лучше во время вскрытия или дренирования гнойного очага.

Особенно актуально проведение бактериологического анализа при неэффективности антимикробной терапии и при неблагоприятном течении заболевания и возникновении осложнений.

Отбор проб клинического материала при подозрении на анаэробную инфекцию и транспортировка этих образцов в бактериологическую лабораторию имеет ряд трудностей, связанных с необходимостью избежать агрессивного действия кислорода воздуха на строгие анаэробы.

Так как анаэробы являются представителями нормальной микрофлоры человека, материал для исследования следует брать с соблюдением правил асептики и строго с места локализации очага, чтобы исключить загрязнение посторонней микрофлорой.

Оптимальным способом получения проб материала является его аспирация с помощью шприца. Материал, забранный в шприц, должен быть доставлен в лабораторию для исследования в максимально короткий срок. Транспортные среды позволяют сохранить жизнеспособность анаэробных бактерий в течение достаточно продолжительного срока, указанного в инструкции.

Методы исследования.

Исследование клинического материала на анаэробы включает в себя все этапы культурального исследования, принятого в бактериологии, в том числе: выделение анаэробных микроорганизмов на искусственных питательных средах, изучение их свойств и идентификацию. Однако, учитывая физиологические особенности этой обширной группы микроорганизмов и их высокие питательные потребности, культивирование этих микробных патогенов представляется сложным и недоступным для большинства бактериологических лабораторий.

В лаборатории клинической микробиологии ГБУЗ НО "КДЦ" проводятся исследования на анаэробную инфекцию с использованием специального оборудования , импортных питательных сред и тест-систем для идентификации изучаемых микроорганизмов до рода и вида.

Бактериологическая диагностика анаэробной инфекции. Принципы забора материала на исследование. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам. Выделение чистой культуры анаэробной бактерии. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам.

Рубрика	Медицина
Вид	реферат
Язык	русский
Дата добавления	08.06.2016
Размер файла	26,3 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Бактериологическое исследование на анаэробные бактерии и чувствительность к антибиотикам

студент 2 курса

Науменко Николай Петрович

1. Бактериологическое исследование

1.1 Бактериологическая диагностика анаэробной инфекции

1.2 Принципы забора материала на исследование

1.3 Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии

2. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам 2.1 Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам

1. Бактериологическое исследование

бактериологический анаэробный инфекция антибиотик

Бактериологическое исследование -- совокупность методов, применяемых для обнаружения и установления природы бактерий, выделенных от больных, бактерионосителей или из объектов окружающей среды. Б. и. проводят с диагностической целью при инф. болезнях, а также при обследовании на бактерионосительство и определении сан.-гиг. состояния объектов окружающей среды.

Для бактериологического исследования определяется целью исследования, биологическими свойствами микробов, условиями обитания их в исследуемом объекте, патогенезом заболевания (с учетом места наибольшей концентрации возбудителя и путей его выведения из организма).

Так, при сепсисе или болезни, сопровождающейся бактериемией (напр., прибрюшном тифе), для обнаружения возбудителя берут кровь, при дизентерии - испражнения, при пневмонии - мокроту, при подозрении на анаэробную инфекцию - материал из глубоких слоев тканей и т. д. Успех бактериологического исследования в значительной степени зависит от правильности взятия материала и соблюдения определенной осторожности при его транспортировке. У больного материал для исследования рекомендуется брать до начала лечения химиотерапевтическими препаратами!

1.1 Бактериологическая диагностика анаэробной инфекции

1.2 Принципы забора материала на исследование

В лабораториях клинической микробиологии проводятся исследования на анаэробную инфекцию с использованием специального оборудования , импортных питательных сред и тест-систем для идентификации изучаемых микроорганизмов до рода и вида.

1.3 Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии

Выращивание чистой культуры анаэробов производят путем посева материала из изолированной колонии на среду Китта-Тароцци, в составе мясной бульон, глюкоза и кусочки печени или фарша. Для предотвращения доступа кислорода среда покрыта слоем вазелинового масла.

Метод Цейсслера-исследуемый материал рассевают штрихами по поверхности плотной питательной среды, помещают в анаэростат и выдерживают в термостате при 37°С в течение 24-72 часов.

Метод Вейнберга- несколько капель исследуемого материала вносят в пробирку с 4-5 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают запаянным капилляром и переносят в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45-50°С сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После перемешивания этим же капилляром последовательно засевают еще две пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают. Пробирки инкубируют в обычном термостате. Метод Виньяля-Вейона.

2. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам - это свойство микроорганизмов реагировать на действие данных препаратов приостановкой размножения или гибелью. Каждый вид или близкая группа видов имеют характерный спектр и уровень природной чувствительности по отношению к определенному препарату или группе препаратов.

Для чего нужна чувствительность к антибиотикам?

Для успешного проведения лечения антибиотиками, особенно в случаях хронической инфекции, необходимо предварительно определить степень чувствительности к антибиотикам микробов, вызвавших заболевание.

Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата (мкг/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта. Выделяют 3 категории чувствительности-устойчивости микробов:

а) чувствительные подавляются при назначении обычных доз антибиотиков;

б) умеренно-устойчивые штаммы микробов подавляются при введении максимальных доз препарата;

в) устойчивые штаммы микробов не подавляются при введении в организм человека максимально допустимых доз.

2.1 Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам

Современные стандартизованные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам подразделяют на две группы:

1. Диффузные методы:

2. Методы серийных разведений антибиотика в питательной среде:

-разведение препарата в жидкой питательной среде;

-разведение препарата в плотной питательной среде.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Это модификация диско-диффузного метода, однако, пользуясь этим методом, можно определить МПК. Для реализации этого метода используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. Полоски помещают на поверхность засеянной питательной среды. Если бактерии чувствительны к действию препарата, вокруг участков полоски, содержащих его ингибирующие концентрации, образуется эллипсовидная зона задержки роста, в месте пересечения которой с полоской Е-теста получают значение МПК.

Методы серийных разведений

Основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов - величины его МПК. МПК - минимальная концентрация, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной питательной среде.

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде

Антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон). Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком. После инкубации при температуре 37 С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной концентрацией, подавляющая видимый рост исследуемого микроорганизма. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 6). МПК - наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Метод серийных разведений в плотной питательной среде

Этот метод аналогичен методу серийных разведений в жидкой питательной среде, однако определение МПК требует более сложных манипуляций. Готовят двойные серийные разведения препарата от 1:10000 до 1:320000, затем вносят по 1 мл каждого разведения в пробирки, содержащие расплавленный и остуженный до 45 С агар. Затем содержимое пробирок быстро выливают в стерильные чашки Петри и после застывания питательной среды засевают исследуемый микроорганизм. После инкубации определяют МПК по отсутствию роста на чашках, содержащих наименьшие концентрации препарата.

1. Методичка по антибиотикам авторы : Нечаева О.В., Швиденко И.Г., Шуб Г.М.. Информация взята со страниц 59-65

2. Медицинская микробиология ,вирусология и иммунология - под редакцией академика РАММ А.А. Воробьева - Взята информация (Метод выделения чистой культуры анаэробной бактерии)

Раневую анаэробную инфекцию у человека вызывают как спорообразующие анаэробные бактерии (Clostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, Clostridium sordelli, Clostridium histolyticum), так и неспорообразующие анаэробные микроорганизмы родов Bacteroides, Peptococcus, Peptostreptococcus, Veilonella и др.

Методы микробиологических исследований при анаэробной инфекции представлены в схеме 3.

Бактериоскопический метод. Проводится микроскопия окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену и Гинсу-Бурри мазков, приготовленных из раневого отделяемого, отечной жидкости, некротизированной ткани. Обнаружение в препаратах крупных прямых грамположительных палочек, образующих капсулы и центрально или субтерминально расположенные споры (рис. 3), дает основание поставить предварительный диагноз газовой гангрены. Для экспресс-диагностики применяют прямой метод иммунофлюоресценции.

Схема 3. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций

Материал: кусочки некротизированных тканей, экссудат, гной, отделяемое ран, кровь, секционный материал.

Микроскопия окрашенных по Граму, Цилю-Нильсену и Гинсу-Бурри мазков, приготовленных из материала от больного с целью обнаружения крупных грамположительных палочек, образующих капсулы и центрально или субтерминально расположенные споры

Заражение морских свинок материалом от больного в смеси с антитоксическими сыворотками против различных видов клостридий (РН) или без них. Гибель контрольной морской свинки через 30 минут – 4 часа. В РН выживает одна морская свинка, у которой токсин нейтрализуется соответствующим видом сыворотки.

1. день.Посев исследуемого материала на среды Цейсслера (анаэробный кровяной

МПА), Китт-Тароцци, железо-сульфитный агар (ЖСА) и молоко (образование через 3-4 часа губкообразного сгустка, погруженного в прозрачную жидкость). 2 день – учет роста (помутнение и образование газа на среде Китт-Тароцци; черные в виде чечевичек, дисков, комочков ваты колонии в глубине ЖCA; шероховатые, крупные, плоские сероватые колонии с зоной гемолиза на среде Цейсслера). Пересев на среду Китт-Тароцци для выделения чистой культуры.

4 день. Заключение о виде выделенной культуры анаэробов.

Бактериологический метод. Производят посев исследуемого материала на среды Цейсслера (анаэробный кровяной МПА), Китт-Тароцци, железо-сульфитный агар (ЖСА) и молоко. В молоке через 3-4 часа образуется губкообразный сгусток, погруженный в прозрачную жидкость. На среде Китт-Тароцци через сутки регистрируется помутнение и образование газа, на ЖCA - черные колонии в глубине агарового столбика, на среде Цейсслера – шероховатые (реже – гладкие), крупные, плоские сероватые колонии с зоной гемолиза. В глубине плотных питательных сред образуются колонии в виде чечевичек, дисков, комочков ваты и т.д. В мазках из колоний обнаруживают крупные грамположительные палочки (рис. 5). Для выделения чистой культуры возбудителей газовой гангрены типичные колонии пересевают на среду Китт-Тароцци и идентифицируют до вида в соответствии с таблицами 4 и 5.

Рис. 4. Возбудитель газовой гангрены (Clostridium perfringens) в материале от больного. Окраска по Граму. х 900

Рис. 5. Возбудитель газовой гангрены. Чистая суточная культура Clostridium perfringens. Окраска по Граму. х 900

Таблица 4. Биологические свойства неспорообразующих и спорообразующих анаэробов

5.Нагноение ран с подозрением на анаэробную инфекцию.

6.Фекальный запах отделяемого (при клостридальной инфекции- запах прогорклого масла из-за продукции жирных кислот).

7.Некроз инфицированной ткани.

8.Наличие газа в тканях.

9.Черное окрашивание экссудата.

10.Отрицательные результаты обычного бактериологического исследования.

Микробиологическое исследование

При подозрении на анаэробную инфекцию соблюдают особые правила забора и транспортировки материала. Материалом для бактериологического исследования служит гной, серозно-гнойный экссудат, некротические массы, которые забирают из очага поражения;

- материал берут из глубинных отделов ран, свищевых ходов специальным ватным длинным тампоном, пропитанном составом лизированной крови. стерильным шприцом При снятии повязки очищают поверхность раны от лекарств, отмерших тканей, затем забирают материал;

- для транспортировки в лабораторию используют заполненные бескислородной газовой транспортной смесью и герметизированные флаконы с резиновыми пробками. Шприц с содержимым пунктата заполняют газом и для герметизации конец иглы закрывают парафином.

Бактериологическое исследование при подозрении на анаэробную инфекцию.

- посев на гемагар;

- посев на селективную среду или среду для анаэробов - анаэробный агар.

- посев на обогащенные жидкие среды;

- посевы культивируют в анаэростатах. В дальнейшем проводят микроскопию приготовленного мазка. Можно провести хромотографическое исследование, для обнаружения характерных пиков в спектре жирных кислот.

Начинается с изучения выделенных чистых культур. Просматривают выросшие колонии и рассеивают их на 2 чашки- с анаэробным гемагаром и 5% кровяным агаром. Готовят мазки и проводят микроскопию. Чашки с первичным посевом изучают в УФ свете. Для возбудителей B. melaninogenicu s- характерно красное свечение, для колоний Fusobacterium- зеленое. С жидкой среды делают высевы на анаэробный гемагар и кровяной агар. Все высевы инкубируют.

Просматривают посевы. Аэробы идентифицируют по общепринятой схеме бактериологического исследования. Если выросли колонии на анаэробном гемагаре - выдают предварительный ответ о наличие анаэробной инфекции. Далее устанавливают родовую и видовую принадлежность, проводя соответствующие тесты для биохимической идентификации.

Интерпретация результата

Если в результате бактериологического исследования материала выделена культура условно-патогенных микроорганизмов, то для доказательства ее роли в качестве возбудителя данного заболевания необходимо пользоваться критериями этиологической значимости.

Раздел 4

4.1. Ситуационные задачи

№1. В хирургическом отделении больницы у больных в послеоперационной палате появились случаи нагноения ран. Какой материал подлежит микробиологическому исследованию. Что может служить доказательством единого источника этих осложнений?

№2. При исследовании отделяемого из длительно незаживающей операционной раны выделена культура стафилококка. Можно ли считать, что данный микроорганизм является этиологическим фактором инфекции. осложнившей течение послеоперационного периода?

№4. В больницу доставили больного с подозрением на пневмонию. Какой материал необходимо взять для бактериологического исследования?

№5. К врачу обратился больной с симптомами острого гнойного уретрита, признаки которого появились уже через три дня после случайного полового контакта. Укажите основных возбудителей, вызывающих уретрит?

№7. При бактериологическом исследовании материала из раны больного обнаружены Гр (-) палочки с выраженной протеолитической активностью, образующие капсулу. Какой это может быть возбудитель?.

№8. При осмотре раны отмечены отек, крипитация, неприятный запах. При микроскопии гноя обнаружено незначительное количество лейкоцитов, волокна поврежденной ткани, выявлены отдельные Гр(+) бактерии. Аэробная или анаэробная инфекция может быть предположительно установлена у больного? Каков должен быть ход исследования?

№9. При осмотре раны обнаружен гной зеленоватого цвета, который направлен в лабораторию. Какие предположительно бактерии могут вызвать данный инфекционный процесс? Как их идентифицировать? Как правильно определить тактику химиотерапии?

№12. В мазках из мокроты больного с хроническим бронхитом обнаружены Гр (+) кокки расположенные цепочкой и беспорядочно. Можно ли на основании полученных данных поставить этиологический диагноз?

№13. У больного вяло текущее гнойно-воспалительное заболевание среднего уха. Какие микроорганизмы могли вызвать данную инфекцию?

№14. Санавиация доставила в областную детскую больницу ребенка первого полугодия жизни с подозрением на сепсис. Какой материал и на какую среду необходимо посеять для выделения возбудителя? Назовите основных возбудителей сепсиса у детей первого года жизни?.

№15. Через две недели после термического поражения у пациента развился сепсис. Какие микроорганизмы чаще всего вызывают ожоговый сепсис?

№16. У больного выявлена первичная атака ревматизма. С какими микроорганизмами связывают этиологию этого заболевания ?

№17. У больного обнаружен хронический тонзиллит. Укажите основных возбудителей этого заболевания?

№18. В мазке из гнойного отделяемого уретры больного с симптомами острого уретрита гонококков не обнаружено. Какие исследования необходимо провести, чтобы подтвердить отсутствие гонореи?.

№19. При бактериологическом исследовании отделяемого из трофической язвы нижней конечности выделены S .pyogenes и P. aeruginosa. Какие возможны варианты микробиологического диагноза и как его обосновать?

№20. Больной обратился с жалобами на отек и болезненность в области десны, появившейся к вечеру после утренней операции по удалению зуба. Какой материал надо взять для бактериологического исследования. Как правильно провести его забор ? Какой метод используют для выделения возбуди

Список литературы

3.Медицинская микробиология. Гл. ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев - М. : ГЭОТАР Медицина, 1999 г.,-1200 стр.

4.Терапевтический справочник Вашингтонского университета, Практика, Москва, 1995 г. 832 стр.

6.Дмитриенко Т.И., Семенов В.И., Стручанский Л.С. и др. «Материалы VІ Российского съезда врачей- инфекционистов. СПБ, 2003 г. 109-110 стр.

9.Новое в профилактике госпитальной инфекции. Информационный бюллетень. Общество контроля больничной инфекции. №1.Москва , 1997г. 35стр.

10.В.И. Краснопольский, С.Н. Буянова, Н.А.Щукина. Гнойная гинекология. Москва, .Мед.пресс- информ, 2006г. 304стр.

Читайте также: