Бактериологическое исследование кормов на листериоз

Обновлено: 19.04.2024

Листериоз природно-очаговая зоонозная инфекция. Возбудитель Listeria monocytogenes. Официальная регистрация заболевания, как нозологической единицы, в стране проводится с 1956 г. у животных, у людей с 1992 г.

Кроме L. monocytogenes известны и другие виды: L. grayi, L. murreyi, L. innocuai, L. welshimeri, L. seeligeri, l. ivanovii.

В рекомендациях не уделено внимания оценке результатов серологических исследований, выявлению иммунологического фона, носительства, реконвалесцентов.

При листериозе многообразны механизмы передачи возбудителя: фекально-оральный, контактный, аспирационный, трансплацентарный. Листериоз пищевая инфекция. Заражение человека происходит алиментарным путем при употреблении молочных продуктов, продуктов моря, рек, мяса от больных животных, овощей с овощехранилищ, где не соблюдены санитарные нормы хранения и где водятся крысы. Возможно профессиональное заражение ветеринаров, работников боен, мясокомбинатов, животноводческих ферм, акушеров, гинекологов.

Диагноз листериоза представляет трудности в связи с многообразием клинических проявлений, отсутствием четких анамнестических и эпидемиологических данных, а также длительностью бактериологического исследования до 2-4 недель. На листериоз исследуют слизь из носоглотки при ангинозной форме, отделяемое глаз глазной форме, кровь и СМЖ при сепсисе, менингитах, энцефалитах, менингоэнцефалитах, меконий от новорожденных, околоплодную жидкость, плаценту, отделяемое родовых путей у женщин, родивших мертвых или больных детей, материал от мертворожденных.

В рамках эпизоотологического обследования на ООИ исследовали грызунов и других диких животных, клещей, которым отводится важная роль в инфицировании внешней среды и формировании природных очагов.

При исследовании 75 пулов клещей, внутренних органов биопробных животных в некоторых пробах выявили одновременно ДНК листерий и туляремийных микроорганизмов, а также ДНК листерий и ДНК боррелий, что указывает на возможность развития микст-инфекций при нападении и присасывании клещей к коже человека.

При серологическом скрининге в сыворотках людей (более 5000 человек) выявляли антитела к листериям 1/2а, 4в серогрупп в титрах 1:100 - 1:3200. Учитывая, что у листерий имеются общие антигены с стафилококками, тифо-паратифозными бактериями, проводили адсорбцию этих сывороток смесью антигенов и отмечали снижение титров антител к листериям. Иммуноглобулины к листериям выделяли из пула сывороток людей (1:400-1:3200), красили ФИТЦ. Специфичность флюоресцирующих иммуноглобулинов подтверждена в РИФ с коллекционными штаммами листерий.

Таким образом, диагноз листериоза может быть заподозрен или поставлен при достоверной разности титров антител в парных сывороток больных с характерной клинической картиной (РА с цветным диагностикумом, РСК, НРИФ, РНАГ), при исследовании СМЖ (НРИФ, ПЦР, ИФА, бак. анализ, микроскопия) и бактериологическом исследовании методом обогащения с УИС.

Что вы знаете о листериозе? Лечение листериоза

Листериоз - это редкое инфекционное заболевание, вызываемое микробами Listeria monocytogenes, которые могут находиться в овощах и продуктах животноводства, в почве, в кормах и экскрементах животных. В основном заражаются листериозом сельскохозяйственные животные: козы, овцы, свиньи, коровы, кролики, лошади и домашняя птица. Попадают микробы листерии в организм животных через корма и воду, а основным распространителем возбудителя инфекции являются грызуны.

Человек может заразиться листериозом при употреблении молочной и мясной продукции больного животного без должной обработки, а также известны случаи заражения листериями при обработке шерсти, пера, пуха, щетины и другого сырья животных и птиц. Листерии могут попасть в организм человека также при употреблении немытых овощей и непригодной для питья воды. Медицине известны случаи инфицирования человека листериями через микротравмы на коже и половым путем.

Риск заражения листериозом во много раз возрастает при беременности, так как у будущей матери происходит снижение иммунитета и изменение обмена веществ, что делает ее организм более чувствительной к инфекциям. Листериоз крайне негативно влияет на развитие плода: если даже ребенок не умрет в утробе матери, у него будут обнаружены серьезные отклонения в развитии. Поэтому диагностике листериоза у беременных женщин придают особенно важное значение.

Листерии представляют собой маленькую и подвижную палочку, которая относится к группе коринебактерий и не образует спор. Листерейную палочку можно спутать с дифтерийной из-за внешнего сходства этих двух возбудителей инфекции. Листерии могут жить и в мертвых продуктах растениеводства и животноводства. Например, в силосе, сене, отрубях, семенах овса, мясокостной муке и соленом мясе. Также они способны размножаться в навозе, трупах животных и на почве.

Заболеваемость людей листериозом не очень высокая, так им болеют только 20% людей инфицированных листериями. В основном болезнь поражает лиц пожилого возраста, новорожденных и людей, страдающих различного рода иммунодефицитом. Чаще всего выявляются больные листериозом среди сельскохозяйственных работников и лиц, занятых на производстве по переработке мяса птиц и животных.

Длительность инкубационного периода после заражения листериями у новорожденных детей может составить пять дней, а у взрослых он колеблется от 18 до 70 дней. В некоторых случаях после заражения листериозом человек может не заболеть, а стать только носителем инфекции. В начале заболевания листериоз легко принять за грипп из-за того, что симптомы этих двух инфекции очень похожи. Так же как и при гриппе больной жалуется на сильное повышение температуры, боль в мышцах, невыносимую головную боль, озноб и слабость. Но в отличие от гриппа, у больных листериозом на коже в области суставов появляется сыпь эритематозного характера, а на лице образуется фигура в виде "бабочки". У больного листериозом нарушается стул, появляется тошнота, а иногда и рвота. Увеличение лимфатических узлов наблюдается не во всех случаях, все зависит от формы листериоза.

Принято выделять четыре клинические формы листериоза: нервная, ангинозно-септическая, глазо-железистая и тифоидная. При нервной форме листериоза происходит абсцесс мозга, менингит и энцефалит. Эти заболевания могут стать причиной паралича и различных психических расстройств. Чаще всего у людей встречается ангинозно-септическая форма листериоза, которая проявляется в виде ангины с тифоподобным течением и нервным синдромом. При этой форме листериоза у больного наблюдается увеличение миндалин и лимфатических узлов, покраснение горла и незначительное повышение температуры.

Ангинозно-септическая форма листериоза завершается полным излечением. Глазо-железистая форма листериоза возникает после контакта с больными животными и может проявиться в виде отека век и конъюнктивита. Также наблюдается увеличение лимфоузлов и повышение температуры. Характерными симптомами тифоидного листериоза является появление сыпи, снижение давления, увеличение печени и селезенки. Часто тифоидный листериоз сопровождают гепатит и желтуха.

Диагностируют листериоз на основании лабораторных исследований, при этом очень важно провести дифференциальную диагностику болезни, чтобы отличить каждую форму болезни от заболевания со схожими симптомами. Например, для отличия тифоидной формы листериоза от брюшного тифа или псевдотуберкулеза. Лечение листериоза проводится с учетом его клинической формы. В основном при листериозе назначают медикаментозную терапию из антибиотиков тетрациклинового ряда в сочетании со стрептомицином, преднизолоном и антигистаминными препаратами.

Несмотря на то, что на ранних стадиях листериоз можно полностью вылечить, в большинстве случаях болезнь диагностируется слишком поздно и его лечение редко заканчивается успешно. При поражении центральной нервной системы листериями летальный исход составляет 90%. Профилактика листериоза состоит из соблюдения санитарно-гигиенических мероприятий при использовании в пищу продуктов животноводства и растениеводства, а специфические меры обработки мест скопления листерий еще не разработаны.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Основу распознавания листериоза составляют выделение и идентификация возбудителя.

Бактериологические исследования листерий

Материалы для исследования на листерии — кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорождённых дополнительно — меко-ний, пупочная кровь; секционный материал (кусочки мозга, печени, селезёнки, лимфатические узлы). Посевы рекомендуют делать в первые 7-10 сут болезни. Кровь и СМЖ засевают на плотные среды (глюкозный, глкжозо-печёночный или КА с глюкозой). Выросшие колонии отбирают для дальнейших исследований по наличию гемолитической активности (на средах с кровью) либо по способности приобретать сине-зелёную окраску при косом освещении.

Серологические исследования листерий

Обычно ставят РА с листериозным диагностикумом. Реакция специфична и положительна со второй недели с последующим нарастанием титра AT; последние сохраняются не менее 1~2лет после выздоровления (реакция может быть использована для ретроспективного анализа).

Биологическая проба в выявлении листерий

Для биологической диагностики листериоза лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных введением кортизона (4~5 мг в/м за 4 ч до заражения). После гибели животного (обычно на 2-6-е сутки) проводят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листе-рии размножаются в мёртвых тканях, и для избежания диагностических ошибок часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5~ 10 сут при температуре 4-6° С, а затем подвергнуть повторному исследованию.

Лечение листериоза. Профилактика листериоза

Основу лечения и профилактики листериоза составляет проведение адекватной антибиотикотерапии (цефалоспорины, аминогликозиды). Ведущее значение в профилактике листериоза имеют соответствующие ветеринарно-санитарные мероприятия. Определённый вклад вносят своевременное проведение дератизации и немедленное изъятие и уничтожение продуктов, испорченных грызунами (или подозрительных продуктов!). Больных лиц следует госпитализировать, а за населением неблагополучного пункта устанавливают наблюдение.

Листерии. Listeria. Особенности листерий. Эпидемиология листерий. Заболеваемость листериями у животных. Заболеваемость листериями у человека. Носительство листерий.

Род Listeria семейства Corynebacteriacea отдела Firmicutes образуют небольшие палочковидные бактерии, образующие короткие цепочки из 3~5 клеток. В мазках из молодых S-колоний располагаются в виде палисадника либо V- и Y-образно.

Эпидемиология листерий

Listeria monocytogenes распространена повсеместно.

Листериоз — зооноз с природной очаговостью и множественными источниками инфекции. Основной природный резервуар листерий — грызуны, травоядные и птицы, а также большинство сельскохозяйственных и домашних животных. Листерии устойчивы во внешней среде; при умеренных и низких температурах в почве сохраняются (и даже размножаются) в течение месяцев и лет. На фураже жизнеспособны до 3 лет; длительно переживают и размножаются в мясе и молоке при 4-6 °С. При кипячении листерии погибают в течение 3-5 мин; также неустойчивы к действию дезинфицирующих веществ.

Заболеваемость листериями у животных может носить эпизоотический характер (особенно у молодняка). Основные пути заражения листериями — алиментарный и трансмиссивный (через кровососущих членистоногих). Характерный признак заболевания листериоза — выраженный моноцитоз в периферической крови, что обусловило видовое название возбудителя. Из организма больного животного листерия выделяется с мочой, испражнениями, носовым отделяемым, молоком, околоплодной жидкостью.

Заболеваемость листериями у людей носит преимущественно профессиональный характер. Основные пути заражения листериями — контактный (через кожу и слизистые оболочки), алиментарный, аэрогенный (при работе с кормами) и трансмиссивный. Листериоз регистрируют во всех возрастных группах, чаще у новорождённых, при нарушениях питания, у лиц с иммунодефицитами и сопутствующей патологией.

Бессимптомное носительство листерий. Доказана возможность бессимптомного носительства листерий. У женщин листерии можно выделить из влагалища и шейки матки. Особую опасность представляет носительство у беременных, так как возможно заражение плода (трансплацентарно) и новорождённого (при аспирации инфицированных плодных вод).

При подозрении на листериоз бактериологическая диагностика включает микроскопическое исследование исходного материала, посевы на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культурно-биохимическим и серологическим свойствам, а также постановку биологической пробы на лабораторных животных.
Морфологические и культуральные свойства. Микроскопическому исследованию подвергают тонкие мазки-отпечатки из головного мозга, внутренних органов и тканей. При приготовлении мазков-отпечатков - чистым предметным стеклом 3—4 раза прикасаются к поверхности среза органа. Мазки готовят непосредственно из материала, а также после выдержки (подращивания) проб в термостате в течение 4—6 часов. Мазки окрашивают по Граму, а также методами флуоресцирующих антител.
Возбудитель листериоза — полиморфная, чаще палочковидная бактерия длиной 0,5—2,0 мкм; она хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, грамположительна (однако в старых культурах могут встречаться единичные грамотрицательные палочки).

Люминесцентно-серологическое исследование проводят с использованием прямого и непрямого методов флуоресцирующих антител в соответствии с Наставлением по лабораторной диагностике листериоза животных (от 1971 г. с изменением от 31 июля 1974 г)*. С помощью двух методов можно идентифицировать возбудителя в культурах, обнаружить листерии в органах и тканях, а также определить их серогрупповую принадлежность.
Для выделения культуры листерий из органов и обязательно из головного мозга проводят обильные множественные посевы или предварительно готовят суспензию из головного мозга и паренхиматозных органов на физиологическом растворе в соотношении 1 : 5 и из нее делают посевы. Для культивирования листерий используют обычный или печеночный агар и бульон с добавлением 1% глюкозы и 2—3% глицерина (pH среды 7,2—7,4), а также кровяной агар и специальные среды.
При хранении патологического материала в холодильнике при +4 °С происходит размножение и накопление листерий. Поэтому в качестве дополнительного метода рекомендуется часть исследуемого материала помещать в холодильник и сохранять в течение 30 дней для проведения повторных исследований через каждые 10 дней при отрицательном результате первичного посева. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С с ежедневным просмотром в первые 3—4 дня. При отсутствии роста наблюдение за посевами проводят в течение 2 недель.
Характерным для возбудителя листериоза является легкое помутнение бульона и появление мелких росинчатых колоний на агаре, наличие бетта-гемолиза на кровяном агаре. Просмотр посевов на плотных средах целесообразнее проводить с использованием осветителя ОИ-19 с голубым фильтром в проходящем свете: колонии листерий имеют в отличие от колоний других микроорганизмов голубую окраску с зеленоватым оттенком и мелкозернистую структуру. Выделенные культуры изучают микроскопически с окраской мазков по Граму, а также с применением прямого и непрямого методов флуоресцирующих антител.
При получении смешанной культуры ее очищают общепринятыми методами, а также путем заражения молодых белых мышей массой до 16 г. Определение подвижности проводят методом висячей или раздавленной капли. На подвижность исследуют 6 — 12-часовую бульонную культуру, выращенную при комнатной температуре. Листерии, выращенные при данной температуре, обладают активной подвижностью.
Для определения ферментативных свойств чистую культуру пересевают на пестрый ряд (глюкоза, мальтоза, рамноза, салицин, трегалоза, дульцит, инулин, раффиноза). Листерии разлагают с образованием кислоты (без газа) глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, трегалозу и не разлагают дульцит, инулин, раффинозу.
Ставят пробу на каталазу. К суточной бульонной культуре добавляют равный объем свежеприготовленного 5%-ного пероксида водорода, при исследовании агаровой культуры в пробирку вносят несколько капель пероксида водорода. При наличии фермента каталазы пероксид водорода разлагается с образованием пузырьков газа (пены). Способность выделять фермент каталазу является характерным признаком листерий.
Для дифференциации листерий от возбудителя рожи свиней можно использовать индикаторные среды, метод основан на редукции и оксидации красок в средах при выращивании листерий.
Исследуемую бульонную культуру или смыв агаровой культуры засевают в объеме 2—4 капель не менее чем на 2 индикаторные среды: например, с нейтральным красным в смеси с метиленовой синью, метиловым красным. Пробирки встряхивают и помещают в термостат при температуре 37—38 °С вместе с контрольными (незасеянными) средами. Результат учитывают через 3; 6; 24 и 48 ч.
Возбудитель листериоза через 3—6 ч обесцвечивает среду с нейтральным красным в смеси с метиленовой синью до цвета бульона, лишь у поверхности на границе с воздухом остается окрашенный ободок. При встряхивании цвет частично восстанавливается, поэтому посевы просматривают, не встряхивая пробирки. Среда с метиловым красным обесцвечивается через 3—6 ч, но восстановления цвета среды не происходит, Контролем служат незасеянные индикаторные среды. Возбудитель рожи свиней не обесцвечивает ни одну из вышеуказанных сред.
Серотипизация. Серологическая идентификация листерий проводится с поливалентной листериозной агглютинирующей сывороткой, представляющей собой смесь кроличьих листериозных агглютинирующих сывороток и содержащей факторы (антитела) Н-АВ и О-II, V, VII, IX. Поливалентная сыворотка в капельной реакции агглютинации на стекле агглютинирует все известные серотипы и подтипы листерий. Типовые сыворотки агглютинируют культуры листерий соответствующих типов ("серогрупп"). Сыворотка 1-го серотипа (серогруппы) содержит 0-фактор II, а сыворотка 2-го серотипа (серогруппы) — О-факторы V, VI. Серологическая типизация листерий осуществляется в соответствии с Наставлением по лабораторной диагностике листериоза.
Постановка биологической пробы. Для определения вирулентных свойств ставят биопробу. Биологическое исследование проводят на 2—3 белых мышах массой 18 г. Суспензию из головного мозга и внутренние органов или культур вводят животным под кожу или внутрибрюшинно в дозе 0,3—0,5 см3. Для повышения эффективности биопробы мышам за 3 —4 ч до заражения инъецируют внутримышечно кортизон в дозе 5 мг. При положительной биопробе животные погибают через 2—6 сут после заражения. При вскрытии отмечают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. В отдельных случаях этих поражений может не быть.
Очень чувствительны к подкожному заражению 5 - 6-дневные мыши-сосуны, которые гибнут через 18—36 ч. К заражению листериями восприимчивы и кролики при внутривенном заражении культурой листерий в дозе 0,5 — 1 млрд. микробных тел .
Из внутренних органов павших животных делают мазки-отпечатки и высевы на питательные среды. Срок наблюдения за подопытными животными - 14 сут.

Дифференциация листерий от возбудителя рожи.
При бактериологическом исследовании мяса на листериоз и рожу свиней (срок исследования — 7 лет) проводят дифференциацию выделенных культур по морфологическим, биохимическим признакам и вирулентности (данные представлены в табл.).

Таблица. Дифференцирующие признаки листерий и возбудителя рожи свиней

Признак	Возбудидель листериоза	Возбудитель рожи свиней
Морфология в мазках - отпечатках	Неспорообразующие короткие палочка с закругленными концами. Располагаются поодиночке, попарно, в форме римской цифры V .	Неспорообразующие, тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки, иногда нити.
Рост на МПА	Мелкие росинчатые, прозрачные колонии. Через 2-3 суток наблюдается помутнение колоний.	Мелкие росинчатые, прозрачные колонии.
Рост на МПБ	Небольшое помутнение с образованием слизистого осадка, поднимающегося при встряхивании в виде косички.	Легкое помутнение, поднимающегося при встряхивании осадок в виде облака.
Морфология в мазках из культуры	Короткие, прямые, овоидные палочки, иногда почти кокки, располагаются поодиночке или кучками.	Короткие, прямые или слегка изогнутые палочки; При хроническом течении инфекции- как короткие, тонкие палочки, так и удлиненные цепочки и нити.
Окраска по Граму	Положительная	Положительная
Подвижность	Подвижен в молодой 6-12 часовой культуре, выращенной при комнатной температуре.	Неподвижен
Салицин	Разлагает	Не разлагает
Проба на каталазу	Положительная	Отрицательная
Индикаторные среды	Обесцвечивает	Не обесцвечивает
РА с позитивной листериозной сывороткой	Положительная	Отрицательная
Коньюктивальная проба на морских свинках	Положительная	Отрицательная
Внутрикожная проба	Положительная	Отрицательная

При необходимости дополнительной дифференциации бактерий листериоза от бактерий рожи свиней применяют посевы: на питательный желатин, на углеводную среду с салицином, на мясо-пептонный печеночный агар с 0,01 % теллурита калия, на мясо-пептонный агар с кровью, а также ставят конъюнктивальную пробу на морских свинках.
Бактерии листериоза в отличие от бактерий рожи свиней на желатине дают медленный рост в виде узловатой нити с неровными краями и пушистыми отростками, желатин не разжижают, ферментируют салицин, вызывают гемолиз на агаре с кровью, растут на мясо-пептонном печеночном агаре с 0,5 % глюкозы, 3 % глицерина и 0*01 % теллурита калия в виде мелких черных колоний и вызывают кератоконъюнктивит у морских свинок.

Ветеринарно-санитарная оценка при пастереллезе, роже свиней и листериозе.
Туши и все субпродукты от больных и подозрительных по заболеванию животных выпускать в сыром виде запрещается.
При истощении и наличии дегенеративных или других патологических (абсцессы) изменений в мускулатуре - туша со всеми внутренними органами подлежит утилизации.
При отсутствии патологических изменений в туше и внутренних органах решение об использовании их принимают после бактериологического исследования (за исключением листериоза) на сальмонеллы; при обнаружении в мышцах или внутренних органах сальмонелл внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожают, а туши выпускают после проварки или перерабатывают на консервы.
При отсутствии патологических изменений в мускулатуре туши, но отрицательном результате бактериологического исследования на сальмонеллы туши обезвреживают действием высокой температуры (проварка, изготовление мясных хлебов и консервов) по установленным режимам, а внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожение. При отсутствии сальмонелл тушу, шпик и внутренние органы разрешается перерабатывать на вареные или варено-копченые колбасы, а также на варено-копченые грудинки и корейки или консервы с соблюдением установленного термического режима или направляют на проварку.
Внутренние органы, кишки и кровь, имеющие патологические изменения, а также головы от больных листериозом животных во всех случаях направляют на утилизацию с обезвреживанием при температуре не ниже 100 °С или проварку при этой же температуре в течение 1 ч.
Шкуры дезинфицируют согласно наставлению по их дезинфекции. При пастереллезе птицы внутренние органы утилизируют, тушки направляют на проварку, прожарку или на переработку на консервы. При листериозе — голову и пораженные органы утилизируют. Тушки и непораженные органы проваривают. При рожистой септицемии внутренние органы утилизируют, а тушку при отсутствии изменений в мышцах проваривают, при наличии дегенеративных изменений утилизируют.

И в заключение - фильм, созданый специалистами ВНИИМП, о пищевом листериозе и методах его определения в продуктах питания:

Читайте также: