Бактероиды в мазке из зева

Обновлено: 12.05.2024

Учение об инфеционном мононуклеозе (ИМ) в последние годы существенно продвинулось. Установлена полиэтиологичность заболевания. Рекомендовано различать Эптштейна-Барр вирусный мононуклеоз, цитомегаловирусный мононуклеоз, герпес 6 типа мононуклеоз. Показано, что клиническая картина болезни мало зависит от этиологии мононуклеоза и определяется в основном путем заражения. При проникновении инфекции воздушно-капельным или контактным путем заболевание проявляется вовлечением в процесс глоточного лимфоидного кольца, тогда как при парентеральном заражении тропным органом выступает печень или другие висцеральные органы. Такие представления многое объясняют в клинике заболевания, но по-прежнему остается неясным механизм возникновения экссудативного выпота на слизистой ротоглотки и патогенез ангины. Одни исследователи считают их бактериальными, возникающими за счет активации стрепто-стафилококковой и грибковой флоры, другие — вирусной или вирусно-бактериальной природы . Противоречивые представления о патогенезе нашли отражение в рекомендованных схемах лечения — от обязательного назначения антибактерильных средств до полного их исключения . Отсутствие четких рекомендаций по этому вопросу можно объяснить прежде всего тем, что в полости рта и носа закономерно обнаруживается чрезвычайно разнообразная микробная флора. По данным многочисленных литературных источников, при бактериологическом исследовании в ротовой полости и носоглотке у здоровых людей постоянно обнаруживаются: стрептококки, стафилококки (S. epidermidis, S. Pneumoniae, S. аureus), Enterococcus, Lactobacillus, Actinomices, пептострептококи, Neisseria, Actinomyces, Clostridium, Pseudomonas и другие неферментирующие энтеробактерии. Менее аэриремые части олонизирют анаэробы — бактероиды, фузобактерии, вейлонеллы,актиномицеты, спирохеты родов Leptospira, Borrelia, Treponema, микоплазмы (M. orale, M. salivaru) и разнообразные простейшие.

Нередко бывает трудно провести четкую грань между сапрофитами и патогенными микробами . В свою очередь неограниченная колонизация любым видом бактерии способна привести к развитию инфекционной патологии , а при транслокации микроорганизмов в непривычные места обитания — вызывать различные нарушения. В связи с этим, более углубленное изучение биоценоза ротоглотки при ИМ позволит с новых позиций оценить роль дисбиотических нарушений в развитие ангины при ИМ и патогенетически обосновать терапию.

Однако применяемые на сегодняшний день в клинической практике методы диагностики дисбиоза имеют определенные ограничения и недостатки. Так при классическом бактериологическом исследовании не представляется возможным оценить роль некультивируемых микроорганизмов в инфекционном процессе. Трудности в диагностике хронических и латентных инфекций могут возникать и при использовании молекулярно-биологических методов, при которых частота ложноположительных результатов и невозможность адекватной количественной оценки резко возрастает. Соответственно для реализации задачи требуется подключение специализированных лабораторий с арсеналом культуральных и некультуральных методов, позволяющих обеспечить количественный анализ полимикробной инфекции в каждом конкретном случае. Как правило, это требует значительных материальных и временных затрат, не совместимых со стоимостью и временем пребывания больного в стационаре. Еще более важна несовместимость с темпом развития воспалительного процесса. Возникает необходимость внедрения новых экспресс-методов диагностики инфекционного статуса пациента.

Таким методом можно считать метод масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ), позволяющий в ускоренном режиме, минуя стадию культивирования и тестовых ферментаций, определить спектр доминирующих микроорганизмов (более 104 клеток в пробе) по молекулярным маркерам — клеточным высшим жирным кислотам, альдегидам и стеринам.

Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией (ГХ-МС) позволяют получить уникальную информацию о количестве структурных мономерных химических компонентов, входящих в состав липидов микробной клетки, — жирных кислот, альдегидов, спиртов и стеринов, специфичных для таксонов микроорганизмов разного уровня — от вида до семейства . Эти компоненты (маркеры) могут быть определены среди других химических составляющих суммарной биомассы биологических объектов и использованы для детектирования микроорганизмов.

Материалы и методы исследования

Суть анализа состоит в прямом извлечении с помощью химической процедуры высших жирных кислот из подлежащего исследованию образца, их разделении на газовом хроматографе в капиллярной колонке высокого разрешения и анализа состава в динамическом режиме на масс-спектрометре. Хроматограф соединен в едином приборе с масс-спектрометром и снабжен компьютером с соответствующими программами автоматического анализа и обработки данных, сам процесс анализа занимает 30 мин, а с учетом времени пробоподготовки и расчета данных — не более 2,5 часов.

Внедрение МСММ позволяет сократить время и стоимость исследования, минуя стадии повторных пересевов первичных колоний и тестовых ферментаций, которые особенно сложны, трудоемки и длительны для анаэробов. В этом методе применен математический аппарат количественного реконструирования состава микроорганизмов в очаге воспаления по составу их маркеров в биопробе, что позволяет контролировать инфекцию в динамике заболевания, а также эффективность лечения.

Под нашим наблюдением находились 22 ребенка с диагнозом инфекционный мононуклеоз, в возрасте от 3-х до 14 лет. Группу сравнения составили 10 детей без клинических признаков острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ), гиперемии слизистой ротоглотки и миндалин, которые находились на лечении в офтальмологическом отделении МДГКБ г. Москвы с диагнозами: миопия, травма глаза, увеит, помутнение роговицы, перелом орбиты.

В период разгара заболевания всем пациентам проводили забор пробы с миндалин бактериологическими тампонами, которые хранили в замороженном состоянии (при -5 °С).

Таблица 1. Реконструированный по методу МСММ состав микроорганизмов в мазке (на тампоне) пациента М.В., 14 лет, с диагнозом инфекционный мононуклеоз (размерность — число микробных клеток с домножением на коэффициент 105)

Результаты и их обсуждение

У всех детей с ИМ диагностировалось средне-тяжелое состояние с типичными клиническими проявлениями: лихорадка, наложения на миндалинах, болезненность при глотании, увеличение размеров лимфатических узлов, гепатоспленоменгалия, количественные и качественные изменения мононуклеаров, положительный Лайм-тест. У 19 детей (86,4%) начало заболевания было острым, у остальных (1-3,6%) отмечалось постепенное нарастание симптомов интоксикации.

Используя метод масс-спектрометрии микробных маркеров, оказалось возможным установить в ротоглотке наличие микроорганизмов, принадлежащих к 56 таксону. Результаты сравнительного анализа микробного сообщества в смывах из миндалин у детей с ИМ (п = 22) показали систематическое клинически значимое увеличение численности бактерий 27 таксонов, по сравнению с детьми без поражения ротоглотки (п = 10). К ним относились следующие виды микроорганизмов: Moraxella, Fusobacterium, Streptococcus (оральные и анаэробные S. mutans), Prevotella, Propionibacterium (P. acnes, P. jensenii, P. Freudenreichii), группа видов Eubacterium/Clostridium, актинобатерий Streptomyces, Actinomyces Bacteroides fragilis, Peptostreptococcus anaerobius, вирусы герпеса и другие микроорганизмы. Наибольшая кратность увеличения концентрации маркеров микроорганизмов — на два порядка и более, выше концентрации маркеров в группе сравнения в мазке у детей с ИМ, отмечена для фузобактерий, бактероидов, стрептомицетов, анаэробного пептострептококка. До 30 раз увеличивалась численность моракселл и пропионобактерий, на порядоквозростала численность бактерий группы Eubacterium/Clostridium, а также стрептококков, нокардий, превотел, актиномицетов.

Концентрация маркеров других микроорганизмов не превышала в среднем уровень колонизации слизистой зева у детей группы сравнения. К ним относились представители родов Staphylococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus, , часть клостридий, Pseudonocardia. Микроскопические грибы (не кандида) — плесневые, дерматофиты и другие оказались в дефиците у детей с ИМ, по сравнению с детьми без ИМ.

Таким образом, данные, полученные методом МСММ, позволили верифицировать и количественно определить состав микробного сообщества в ротоглотке при ИМ у детей.

Выявленные изменения позволяют рассматривать ангину при ИМ скорее всего как заболевание, обусловленное ассоциацией различных условно-патогенных микроорганизмов, концентрация которых превышает численность микробов у здоровых детей минимум на 2 порядка. Доказательство наличия дисбиоза у детей с ангинами при ИМ открывает новые перспективы в расширении этиотропной и патогенетической терапии этого заболевания, направленной с одной стороны на ликвидацию избыточного роста условно-патогенной флоры, а с другой — на нормализацию количественного и качественного состава микробиотопа ротоглотки. В качестве примера приводим следующее наблюдение.

Ребенок от I беременности, протекавшей с угрозой прерывания. Роды срочные, физиологические. Вес при рождении 3550 г, длина — 54 см. На грудном вскармливании до 1 года, развивался нормально, профилактические прививки получала по календарю. Перенесла ОРВИ, ветряную оспу.

Заболела остро 26/1Х, когда поднялась температура до 38 °С, появилась боль в горле. 28/1Х (3 день болезни) на фоне фебрильной температуры диагностирована ангина. 29/1Х (4 день болезни) госпитализирована в МДГКБ. До госпитализации девочка медикаментозную терапию не получала.

При осмотре состояние среднетяжелое, фебрильно лихорадит до 39 °С, аппетит снижен. Кожа бледная, чистая. Пальпируются увеличенные до 2 см шейные лимфоузлы, подвижные, безболезненные. Носовое дыхание затруднено, в носовых ходах — слизь. В легких хрипов нет. Тоны сердца звучные, ритмичные. Зев гиперемирован, отечный, миндалины увеличены до III степени, в лакунах бело-желтые наложения. Живот мягкий, безболезненный, печень выступает ниже реберного края на 2 см, селезенка — на 1 см. Стул и диурез в норме.

Лихорадка сохранялась до 3/Х (8 день болезни), наложения на миндалинах — до 5/Х (10 день болезни).

С 4/Х (9 день болезни) отмечено улучшение состояния, аппетита, носового дыхания. 6/Х (11 день болезни) ребенок был выписан домой в удовлетворительном состоянии на амбулаторное долечивание. При осмотре оставались увеличенными шейные лимфоузлы до 0,8 см, незначительная гиперемия слизистых ротоглотки, увеличение миндалин до II степени, без наложений, печень пальпировалась на 1 см ниже реберного края.

Анализ крови 29/!Х (4 день болезни): НВ — 129 г/л, Эр — 4,24 х 1012/л, Л — 11,6 х 109/л, п — 2%, с — 27%, л —19%, м —12%, Тр — 166 х 109/л, СОЭ — 20 мм/час, атипичные мононуклеары — 40%. Анализ крови 4/Х (9 день болезни): НВ —135 г/л, эр — 4,43 х 1012/л, Л — 6,3 X 109/л, с — 30%, л — 30%, м — 2%, Тр — 209 х 109/л, СОЭ — 13 мм/час, атипичные мононуклеары — 20%.

Биохимический анализ крови 30/М (5 день болезни): белок — 75 г/л, АлАТ — 172 ед/л , АсАТ — 121 ед/л.Посев из зева на дифтерию от 29/К (4 день болезни) — отрицателен. Результаты посева из зева на флору методом ХМСМ от 29/К (4 день болезни) представлены в таблице 1.

Как видно из данных таблицы, у ребенка с ИМ имел место дисбиоз ротоглотки на фоне лакунарной ангины. По данным МСММ отмечалось клинически значимое увеличение численности бактерий 26 из исследуемых 56 таксонов.

Заключение

Поражение ротоглотки принято считать важнейшим клиническим признаком инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусами семейства Герпес. Однако до сих пор не разработаны методы этиотропной терапии данного заболевания, что связано, в первую очередь, с отсутствием однозначного ответа о природе ангины при ИМ. Результаты наших исследований, полученных методом хрома- то-масс-спектрометрии, позволили выявить полимикробную инфекцию ротоглотки у детей с ИМ за счет более чем двукратного превышения нормальных значений численности бактерий 27 таксонов, что мы склонны трактовать как декомпенсированный дисбиоз. При этом мы не выявили этиопато- генетическую роль какого-либо конкретного бактериального патогена. Можно предположить, что в патогенезе ангины при ИМ значимую роль играет совокупность многих условно-патогенных представителей микрофлоры, действующих в условиях вирусного поражения лимфоидных образований ротоглотки. Можно предположить, что синдром ИМ возникает при попадании вируса семейства Герпес (Эпштейна-Барр вирус, цитомегаловирус, герпес 6 типа) в лимфоидные образования рото-носоглотки (тропный орган), в результате чего запускается лимфопролиферативная линия патогенеза, снижается защитная роль мукозального иммунитета, активизируются колонисты небных миндалин, вследствие чего возникает дис- биоз. Полученные данные дают основание для назначения препаратов, предназначенных для коррекции микробиоценоза ротоглотки.

Выводы

Поражение ротоглотки и синдром ангины при инфекционном мононуклеозе имеют вирусно-бактериальную природу и являются следствием развития дисбиоза, связанного с повышением концентрации многих представителей нормофлоры (полимикробной инфекции) в условиях вирусной персистенции.
Наличие дисбиоза в ротоглотке у детей с ИМ патогенетически обосновывает назначение лекарственных средств для восстановления мукозального иммунитета и нормализации микрофлоры.

В случае клинических проявлений ангины при ИМ следует назначать подробное микробиологическое исследование (например — методом масс-спектрометрии микробных маркеров) для выявления агентов полимикробной инфекции с целью определения тактики лечения.

Слизистая оболочка верхних дыхательных путей представляет собой первую линию защиты организма против разнообразных патогенных факторов окружающей среды, таких как бактериальные, грибковые, вирусные, промышленные химические раздражители и загрязнения и обеспечивает противовирусный иммунитет. Повреждение слизистой или сухость облегчают проникновение вируса в организм. После того, как враг попал в организм и начал повреждать клетки, огромное значение играет выработка интерферонов, которые обеспечивают их невосприимчивость к действию вируса.

Противовирусный иммунитет – это очень сложный процесс, в котором участвует множество ресурсов иммунной системы. К сожалению, иммунные реакции не всегда срабатывают так, как об этом пишут в учебниках по биологии. Часто какой-либо процесс может быть нарушен, что приводит к осложнениям и проблемам. Когда снижен иммунный ответ, нужны средства, поднимающие иммунитет. Они могут быть природными, либо купленными в аптеке, главное – это эффективность и безопасность.

Слизистая оболочка верхних дыхательных путей большей частью покрыта тонким специализированным эпителием, создающим восприимчивый (чувствительный) барьер, который постоянно бомбардируется экзогенным живым или мертвым антигенным материалом.

Вдыхаемый воздух содержит значительное количество потенциально вредных веществ (газы, взвешенные корпускулярные частицы, бактерии, вирусы, микоплазмы, грибы, в том числе дрожжи, риккетсии, пыльцу, частицы слущенного эпителия человека и животных и др.). Согласно концепции местного иммунитета, слизистые оболочки и кожа как покровы, обращенные во внешнюю среду, защищают внутреннюю среду организма и сохраняют постоянство внутренней среды путем тесного взаимодействия эволюционно выработанного комплекса неспецифических и специфических механизмов защиты.

Местный иммунитет ЛОР-органов - это барьерная функция слизистых оболочек, включающая лимфоэпителиальные органы глотки, расположенные на пересечении воздухоносных и пищепроводных путей, первыми реагирующие на очередное антигенное раздражение (инфекцию) включением механизмов иммунной защиты, и неспецифические защитные факторы слизистой оболочки (мукоцилиарный транспорт, продукция лизоцима, лактоферрина, интерферона и др.)

А теперь непосредственно о микрофлоре верхних дыхательных путей и полости рта. Важно понимать, что ЛОР-органы не являются исключением в отношении микробной стерильности, т. е. в норме мы можем выявлять определенные микроорганизмы в носу, глотке и наружном ухе. Эти микробы в условиях сохранения иммунной резистентности не только не приносят нам никакого вреда, но и наоборот, оказывают положительное влияние. Они образуют так называемую биопленку (толщиной от 0,1 до 0,5 мм) – полисахаридный каркас которой, состоящий из микробных полисахаридов и муцина, предотвращает заселение организма патогенными микроорганизмами. Благодаря выделению микроорганизмами биопленки различных кислот, спирта, лизоцима (антибактериальное вещество) и стимуляции образования иммуноглобулина А тормозится развитие патогенных микробов. Кроме того, нормальные микроорганизмы препятствуют выделению токсинов патогенными бактериями.

Это лишний раз подтверждает важность сбалансированной микрофлоры для полноценной жизнедеятельности всего организма.

Нормальная микрофлора глотки разнообразна, поскольку здесь смешивается микрофлора полости рта и воздухоносных путей. Представителями резидентной микрофлоры считаются: нейссерии, дифтероиды, и гемолитические стрептококки, энтерококки, микоплазмы, коагулазоотрицательные стафилококки, моракселлы, бактероиды, боррелии, трепонемы, актиномицеты. В верхних дыхательных путях преобладают стрептококки и нейссерии, помимо этого встречаются стафилококки, дифтероиды, гемофильные бактерии, пневмококки, микоплазмы, бактероиды. Слизистая оболочка гортани, трахеи, бронхов в норме стерильна. Следует сказать, что вышеуказанный видовой спектр микроорганизмов не является неизменным. Его состав зависит от многих факторов: сопутствующей патологии, возраста, условий внешней среды, условий труда, питания, перенесенных заболеваний, травм и стрессовых ситуаций и т.д.

Такие состояния, как острые и хронические заболевания всего организма, а особенно уха, горла, носа и полости рта, аллергия, неблагоприятные физические факторы (переохлаждение, инсоляция и т. д.), химические агенты, физическое, интеллектуальное и психоэмоциональное перенапряжение, прием антибактериальных, гормональных и цитостатических препаратов, недостаточное питание, гиповитаминоз, профессиональные вредности, курение, алкоголь провоцируют нарушение нормального микробиологического равновесия в ЛОР-органах и являются причинами нарушения качественного и количественного состава микрофлоры ротоглотки. Существует бактериологическое понятие, которое характеризует изменение соотношения представителей нормальной микрофлоры, снижение числа или исчезновение некоторых видов микроорганизмов за счет увеличения количества других и появления микробов – это дисбактериоз.

Терапия дисбактериоза должна быть строго индивидуальной и направленной в первую очередь на ликвидацию источника проблемы. Например, пока не будет адекватно пролечен аденоидит (консервативно или оперативно), от дисбактериоза вряд ли возможно избавиться. Вопрос о необходимости приема антибиотика определяется исключительно течением основного заболевания: если дисбактериоз глотки вызван наличием у ребенка хронического панкреатита, то антибактериальные средства тут неуместны; если же дисбактериоз связан с запущенной формой хронического синусита или аденоидита – без этой группы лекарственных препаратов, скорее всего, не обойтись. Воспалительные очаги в носо- и ротоглотке должны быть обязательно устранены – кариозные зубы пролечены, аденоидные вегетации, небные миндалины санированы и т.д. Помните, что они могут не только вызывать местные воспалительно-инфекционные процессы и дисбактериоз ротоглотки, но и являться источником аутоинфекции и аутоинтоксикации всего организма. Убедительные данные свидетельствуют, что возникновение ряда заболеваний респираторной, желудочно-кишечной, сердечно-сосудистой систем, опорно-двигательного аппарата обусловлено очаговой инфекцией в ротоглотке. Поэтому санация полости рта и ЛОР-органов – это обязательное условие и первый шаг к выздоровлению при многих патологических процессах.

Не стоит также забывать о мерах профилактики развития инфекционно-воспалительных процессов ротоглотки и ЛОР-органов. Так, стандартными мерами профилактики являются: ежедневные гигиенические мероприятия (туалет носа), регулярное посещение врача, рациональное питание, закаливание, создание оптимального микроклимата (влажность, температура), лечение сопутствующей патологии.

Кроме вышеперечисленных мер профилактики, помочь решить проблему инфекционно-воспалительных заболеваний ЛОР-органов и помочь восстановить нормальный микробиоценоз слизистой оболочки может прием средств растительного происхождения на основе прополиса.

Прополис – это смесь природных смол, вырабатываемых пчёлами из соединений, собираемых с разных частей растений, бутонов и выделений. Современные противомикробные применения прополиса включают рецептуры для лечения синдрома простуды (инфекции верхних дыхательных путей, обычная простуда и гриппоподобные инфекции), для заживления ран, лечения ожогов, акне, простого и генитального герпеса, и нейродермита.

Мазок из зева – это доступный бактериоскопический метод исследования. В результате удается выявить состояние микробиома, выделить возбудителя, например, бактерии, вирусы или простейшие и определить чувствительность микроорганизмов к лекарственным препаратам. Именно при ангине этот метод исследования оказывается основным.

Ангина и ее особенности

Ангина – сложное и опасное инфекционное заболевание, характеризующееся острым воспалением небных миндалин или других лимфоидных образований в ротоглотке.

Спровоцировать воспаление могут грибки, бактерии или вирусы.

В клинической практике принято выделять несколько видов ангин, и классификация основана степени тяжести, состоянии пациента и какие структуры миндалин поражаются.

В рамках статьи интересует вопрос диагностики и причины возникновения воспаления. В 80% случаев причиной ангины является гемолитический стрептококк группы А, и как раз его будут искать при исследовании мазка из зева. В остальных 20% случаев возбудителями могут быть:

стафилококки;
аденовирусы;
грибки.

Лечение назначается в зависимости от причины воспаления. Известно, что антибиотики, столь эффективные в лечении бактериальной пневмонии, не влияют на вирусы, а вот противовирусные не влияют на бактерии.

Когда рекомендовано проведение мазка из зева?

Показаниями для забора материала – мазка из зева, последующего посева на микрофлору будет:

все виды ангины;
формирование налета на миндалинах;
гнойные образования рядом с миндалинами;
подозрения на мононуклеоз;
подозрение на коклюш;
для исключения дифтерии;
для определения антибиотикочувствительность;
для оценки течения болезни и результатов лечения.

Как подготовиться к процедуре?

Забору биологического материала должна предшествовать подготовка. Эти простые действия помогут избежать ошибок и получить достоверные результаты.

Во-первых, рекомендовано рассказать врачу о принимаемых лекарствах, особенно, антибиотиках. В некоторых случаях может быть принято решение об их отмене и прекращении приема. Если исследование проводится с целью оценки эффективности лечения - в отмене препаратов нет необходимости.
Во-вторых, за 1-3 дня до проведения процедуры запрещено применять ополаскиватели для полости рта с антисептической направленностью. Исключено использование спреев, в составе которых есть антисептики, средства с антимикробной направленностью и тем более антибиотики.
В-третьих, исследование проводится утром, натощак. Перед процедурой не рекомендовано чистить зубы, завтракать и даже пить воду и нельзя использовать жвачки.

Результаты исследования

Исследование направлено на выявление микроорганизмов и определение их количества. В мазке из зева можно обнаружить следующую патогенную микрофлору:

Эти микроорганизмы могут спровоцировать множество заболеваний и воспалительных процессов: ангины, фарингиты, скарлатину и даже пневмонию. В домашних условиях можно самостоятельно сделать тест на этого возбудителя с помощью стрептатеста.

Может не только вызывать ангину, но и стать причиной системных поражений. Стоит отметить, что эти виды микроорганизмов могут быть неактивными, не представлять опасности для организма, сдерживаться работой иммунитета. Однако, при стечении обстоятельств, например, на фоне снижения иммунитета, может вызвать болезни, в том числе, и ангину.

Это клетки, которые высвобождаются при аллергических реакциях и указывают на неинфекционную природу воспаления.

В мазке могут обнаруживаться и другие микроорганизмы:

пневмококки;
стафилококки;
стрептококки;
нейсерии;
вирус простого герпеса;
грибки рода Candida.

Если содержание этих микроорганизмов не превышает определенного количества, то нет необходимости проводить лечение с целью их полного уничтожения. Такие дисбиотические нарушения могут стать причиной серьезных последствий.

Положительный результат говорит о росте представителя условной или условно-патогенной микрофлоры, которые могу вызвать те или иные болезни и последствия. Отрицательный результат говорит об отсутствии бактериальных возбудителей, и, в таком случае, можно предположить вирусную или грибковую природу болезни.

При выявлении возбудителя среди бактерий, исследование продолжается, и следующий этап – определение чувствительности к антибиотикам.

Мазок из зева на микрофлору – простой, но надежный метод определения возбудителя и его антибиотикочувствительности. Эти данные с высокой точностью выявляют возбудителя, на основе которых составляется план лечения, и можно контролировать его результаты.

Для определения причин развития болезней верхних дыхательных путей берут мазок из зева – этот метод диагностики позволит выявить тип возбудителя инфекционных, воспалительных процессов. Чтобы анализ был точным, нужно правильно подготовиться к забору биологического материала.

Показания к процедуре

Мазок берут, чтобы изучить состав микрофлоры носоглотки, выявить возбудителя патологии, его чувствительность к антибиотикам.

В каких случаях назначают мазок:

длительный насморк, который не проходит более 7 дней;
аллергия;
частые рецидивы фарингита, тонзиллита, ларингита;
диагностика стрептококковой ангины;
наличие проявлений инфекций, вызванных золотистым стафилококком;
при подозрении на дифтерию, коклюш, менингит, грибковые патологии;
туберкулёз;
гайморит, аденоидит;
мононуклеоз, абсцессы.

Мазок из зева входит в состав профилактического осмотра, анализ назначают детям, посещающим учебные учреждения, медработникам, лицам, которые работают с продуктами или в дошкольных и школьных заведениях.

Мазок на определение состава микрофлоры ЛОР-органов назначают всем беременным.

Подготовка к забору материала

Соблюдение правил подготовки к сдаче мазка во многом определяет достоверность результатов.

Правила подготовки:

за неделю прекратите принимать антибактериальные препараты в виде таблеток;
за 5 дней откажитесь от использования спреев, мазей, ополаскивателей с антибактериальным и антисептическим действием;
перед забором материала из ротоглотки нельзя есть, пить, жевать жвачку, курить, при необходимости сделать анализ полости рта противопоказано чистить зубы.

Как правильно брать мазок и зева и носа?

На достоверность анализа влияет и профессионализм медицинского персонала, при погрешностях во время взятия, хранения и транспортировки биоматериала результат бакпосева будет недостоверным.

Техника проведения процедуры:

Пациент широко открывает рот, запрокидывает голову.
Медсестра стерильным или одноразовым шпателем надавливает на язык, ватным тампоном собирает слизь, налёт со слизистых глотки, поверхностей миндалин.
Полученный материал помещают в пробирку с питательным раствором, который позволяет сохранить жизнеспособность бактерий в процессе транспортировки.
Полученный биоматериал отправляют в лабораторию, время доставки не более 2 часов.

Перед исследованием слизистой полости носа удаляют слизь, корки, кожные покровы ноздрей смазывают медицинским спиртом. Пациент немного запрокидывает голову, стерильным тампоном проводят поочерёдно по стенкам правого и левого носовой хода. Собранные в пробирку образцы, отправляют в лабораторию.

Методики изучения биоматериала

При микроскопическом исследовании полученный биоматериал окрашивают по Грамму, изучают после обработки иммерсионными маслами. Метод позволяет выявить грамположительные, грамотрицательные бактерии, кокковую флору, коккобацилл.

Бактериологический посев – один из основных методов диагностики, поскольку каждый микроорганизм может размножиться только в определённой среде, при комфортном уровне pH и влажности, при исследовании важно соблюдать полную стерильность.

Если обнаружен рост микрофлоры, обязательно проводят тесты на антибиотикочувствительность, многие микробы способны быстро вырабатывать иммунитет к лекарствам – на фоне неэффективной терапии развиваются тяжёлые осложнения.

Мазок-отпечаток – специфический анализ для изучения состав клеток слизистой в носу. Образец наносят на предметное стекло, подсчитывают число эозинофилов, других частиц. Исследование назначают при предрасположенности к аллергии.

При неэффективности антибактериальной терапии делают тесты на фагочувствительность. Результат позволяет подобрать бактериофаги для устранения проявлений инфекционных патологий – это современные противомикробные препараты, которые вызывают гибель только определённых видов бактерий.

Наиболее точный метод исследования – ПЦР-диагностика, позволяет выявить ДНК возбудителя инфекционного процесса, достоверность составляет более 95%.

Расшифровка результатов анализа

На слизистых каждого человека обитает около 50 полезных микробов, представителей сапрофитной и условно-патогенной микрофлоры, изучение отделяемого из горла и носа позволяет определить количественное соотношение и состав этиологически значимых микроорганизмов.

Список микробов

· стрептококк мутанс, зеленящий стрептококк;

· палочка Фридлендера (клебсиелла пневмония);

· непатогенные нейссерии (neisseria spp) – neisseria perflava, neisseria subflava;

· грибки рода кандида;

· стрептококки вида A;

· escherichia coli (эшерихия коли) – кишечная палочка;

Результат вписывают в бланк, в нём указывают род, вид, количество микроорганизмов, уровень патогенности. После определения типа возбудителя проводят тесты на определение чувствительности микробов к антибактериальным средствам, бактериофагам.

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии грибков и болезнетворных бактерий, это означает, что инфекция имеет вирусное происхождение. Положительный результат наблюдается при наличии опасных микроорганизмов, или активном росте представителей условно-патогенной микрофлоры.

По времени бактериологическое исследование занимает 5–7 дней, в экстренных случаях делается экспресс-тест для выявления антигенов к бактериям, грибкам, результат можно получить уже через полчаса.

Условно-патогенные микроорганизмы, представители сапрофитической микробиоты при сильном иммунитете не вызывают патологические процессы, но при ослаблении защитных функций их число стремительно увеличивается, развиваются болезни воспалительного характера. В норме их количество не должно превышать 10*3–10*4 КОЕ/мл, но у людей с иммунодефицитными состояниями даже при таких показателях могут возникнуть тяжёлые болезни.

О чём говорят повышенные показатели

Наличие большого количества грибков и бактерий в мазке – признак развития ЛОР-заболеваний, каждый микроорганизм провоцирует определённые патологии.

Какие болезни вызывают патогенные микроорганизмы:

стафилококки – фарингит, тонзиллит, гингивит, синусит, активный рост бактерий чаще всего наблюдается у детей и людей преклонного возраста;
стрептококки – ангина, скарлатина, синусит;
грибки рода кандида – кандидоз ротовой полости, нередко сопровождается осложнениями, которые затрагивают органы дыхательной системы;
пневмококки, нейссерии – воспаление лёгких, бронхит, отит среднего уха, остеомиелит, болезни верхних дыхательных путей, ротоглотки;
дифтерийная коклюшная палочка, в норме бактерии в мазке отсутствуют, при положительном результате определяют уровень концентрации микробов, чтобы сделать заключение о степени развития патологии;
гемолитический стрептококк – тяжёлые формы ангины, которые практически всегда дают осложнения на сердце.

Мазок из носоглотки – эффективный метод диагностики заболеваний ЛОР-органов, определяет тип возбудителя патологического процесса, стадию развития болезни, позволяет подобрать эффективные методы терапии и снизить риск развития осложнений.

Клинико-диагностическое значение метода масс-спектрометрии микробных маркеров при рецидивирующем течении хронического фарингита

Статья посвящена применению нового метода диагностики — масс-спектрометрии микробных маркеров при хроническом фарингите (ХФ) рецидивирующего течения. Данный метод основан на количественном определении маркеров микроорганизмов: жирных кислот, альдегидов, спиртов и стеролов непосредственно в клиническом материале (мазках из горла). Технология позволяет определять по уровню микробных маркеров концентрацию 57 микроорганизмов в клиническом материале в течение 3 часов после его поступления в лабораторию.

В настоящее время основными этиологическими факторами при ХФ являются: Streptococcus группы А, С и G, Staphylococcus spp., Streptococcus pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Moraxella catarrhalis, Candida spp., грамотрицательные бактерии [3–5]. При обострении ХФ имеют значение вирусы (адено-, рино-, герпесвирусы).

Лечение ХФ включает местные антисептики и анестетики, иммунотерапию (Имудон, Полиоксидоний, Ликопид, лизаты бактерий, др.), по показаниям применяется системная антибактериальная терапия. Однако комплексная терапия в большом числе случаев оказывает временный эффект — рецидивирующее течение ХФ отмечается у более 40% пациентов [6].

Материалы и методы исследования

В настоящей работе впервые при ХФ рецидивирующего течения применили новый метод диагностики — масс-спектрометрию микробных маркеров (МСММ). Данный метод основан на количественном определении маркеров микроорганизмов: жирных кислот, альдегидов, спиртов и стеринов непосредственно в клиническом материале (мазке из зева) при ХФ. Технология позволяет определять по уровню микробных маркеров концентрацию 57 микроорганизмов (10 5 клеток/грамм) в клиническом материале через три часа после его поступления в лабораторию [7, 8]. По содержанию маркеров далее, с помощью математических методов, производится пересчет их уровня на количество микробных клеток на грамм биоматериала.

По результатам проведенного исследования выдается заключение в виде таблицы, включающей следующие показатели: общее содержание микроорганизмов, суммарный уровень токсинов, содержание полезного вещества — плазмалогена, наличие (или отсутствие) 57 микроорганизмов и их концентрация. Проводится сравнение показателя пациента с нормативными значениями (повышение значения более чем в 2 раза считается значимым отклонением от нормы).

В зеве при ХФ с помощью МСММ определяли следующие микроорганизмы:

кокки и бациллы (Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Enterococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis);
анаэробы (Bacteroides hypermegas, Bacteroides fragilis, Bifidobacterium spp., Blautia coccoides, Clostridium spp. (группа C. tetani, Clostridium difficile, Clostridium hystolyticum/Str. pneumoniae, Clostridium perfringens, Clostridium propionicum, Clostridium ramosum), Eubacterium spp., Eggerthella lenta, Fusobacterium spp., Haemophilus spp., Lactobacillus spp., Peptostreptococcus anaerobius 18623, Peptostreptococcus anaerobius17642, Prevotella spp., Propionibacterium spp. (Propionibacterium acnes, Propionibacterium freudenreichii, Propionibacterium jensenii), Ruminicoccus spp., Veillonella spp.);
актинобактерии (Actinomyces spp., Actinomyces viscosus, Corynebacterium spp. Nocardia, spp., Nocardia asteroides, Mycobacterium spp., Pseudonocardia spp., Rhodococcus spp., Streptomyces spp., Streptomyces farmamarensis);
энтеробактерии (семейство Enterobacteriaceae, Helicobacter pylori, Campylobacter mucosalis);
грамотрицательные палочки (Alcaligenes spp., Kingella spp., Flavobacterium spp., Moraxella spp., Acinetobacter spp., Porphyromonas spp., Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia);
грибы и дрожжи (Aspergillus spp., Candida spp., кампестерол, ситостерол);
вирусы и бактерии (Herpes spp., цитомегаловирус, вирус Эпштейна–Барр, Chlamydia trachomatis).

В приложении к заключению представлены антибактериальные препараты с учетом клинически значимых микроорганизмов.

МСММ позволяет оценивать суммарное содержание микроорганизмов, уровни эндотоксина, плазмалогена.

Суммарное содержание микроорганизмов значительно повышается при неблагоприятном состоянии слизистых носоглотки, в том числе при снижении местного иммунитета (при этом могут быть местно снижены: активность фагоцитов, продукция секреторного иммуноглобулина А, др.), что характерно для пациентов с ХФ, условно-патогенная микрофлора увеличивается в количестве и приобретает патогенные свойства.

Эндотоксин представляет собой липополисахарид ( ЛПС ), который вырабатывается в основном грамотрицательными микроорганизмами, клостридиями (C. tetani) и др., вызывает симптомы интоксикации [9].

Плазмалоген — это альдегидогенный липид, который вырабатывается кишечной микробиотой в норме: эубактериями, бифидобактериями, пропионобактериями, клостридиями (они составляют более половины колонизации кишечной стенки) [10]. Плазмалоген защищает от окисления ненасыщенные жирные кислоты, регулирует высвобождение из клеток холестерина. Максимальное его количество обнаружено в миелине нервных клеток, сердечной мышце, почках, сперме [11], в значимых — патогенных, условно-патогенных микроорганизмах (микробах, грибах, вирусах).

Клиническая характеристика пациентов

Проведено обследование 62 пациентов с ХФ (мазок из задней стенки глотки, зева, метод МСММ). Среди обследованных лиц: мужчин было 18, женщин — 44. Возраст пациентов колебался от 25 до 63 лет, средний возраст — 39,7 года.

Длительность ХФ колебалась от 4 до 29 лет, средняя продолжительность болезни составила 16,3 года. Все пациенты отмечали рецидивирующее течение ХФ, они неоднократно проходили лечение у оториноларингологов, иммунологов.

Катаральная форма ХФ отмечена у 40% лиц, атрофическая — у 10%, гиперпластическая — у 50% лиц. 80% пациентов имели лимфаденопатию шейных лимфоузлов.

Сопутствующие заболевания: у 10% больных имела место герпесвирусная инфекция (лабиальная форма), у 5% лиц — хроническая Эпштейна–Барр-вирусная инфекция (перенесли инфекционный мононуклеоз, в крови отмечался повышенный уровень IgG к капсидному, ядерному антигенам вируса Эпштейна–Барр, на момент исследования в зеве методом полимеразной цепной реакции — вирус Эпштейна–Барр не выявлялся), у 70% — хронический тонзиллит (из них 20% имели гиперплазию миндалин), 20% лиц перенесли тонзилэктомию, частые острые респираторные вирусные инфекции — 25% лиц, у 20% — хронический синусит, у 10% — хронический гайморит, 5% имели хронический стоматит (рецидивирующее течение). В обследованную группу не включены пациенты с системными заболеваниями (которые могут возникать при осложненном течении ХФ, хронического тонзиллита). У большей части обследованных имели место несколько сопутствующих заболеваний.

Все пациенты с ХФ в период проведения обследования МСММ имели жалобы на боль, першение в горле, стекание слизи по задней стенке глотки.

Результаты и обсуждение

У обследованных пациентов (n = 62) определяли следующие показатели:

суммарное содержание микроорганизмов;
уровень токсинов, плазмалогена;
количество значимых — патогенных, условно-патогенных микроорганизмов (микробы, грибы, вирусы).

1. Определяли суммарное содержание микроорганизмов (рис. 1) в мазке из зева методом МСММ. Как следует из рис., у 85% пациентов данный показатель увеличен:

у 40% — от 11 до 15 раз;
у 28% пациентов — от 6 до 10 раз;
у 23% увеличение колебалось от 2 до 5 раз по сравнению с нормой;
у 9% увеличение менее чем в 2 раза.

2. Оценивали уровень эндотоксина. Как следует из рис. 2, у 87% пациентов с ХФ увеличено содержание эндотоксина в мазке из зева:

у 48% лиц показатель увеличен от 2 до 5 раз по сравнению с нормой;
у 28% — от 6 до 10 раз;
у 9% — от 11 до 20 раз;
у 15% — от 21 до 50 раз.

3. Определяли количество плазмалогена у пациентов с ХФ (рис. 3). Как следует из полученных результатов, продукция плазмалогена снижена у 71% пациентов с ХФ:

у 61% лиц — от 2 до 5 раз;
у 11% — от 6 до 10 раз;
у 9% — от 11 до 20 раз;
у 12% — от 21 до 50 раз;
у 2% — от 51 до 100 раз;
у 5% — от 101 и более.

4. Проведено выявление в зеве у лиц с рецидивирующим течением ХФ методом масс-спектрометрии микроорганизмов, которые в норме не встречаются или встречаются в количествах до 80 × 10 5 клеток на 1 грамм. К ним относятся:

анаэробные Peptostreptococcus spp., Streptococcus pneumoniae;
грамотрицательные бактерии — Kingella spp., Porphyromonas spp. и др.;
некоторые виды клостридий (Blautia coccoides, Clostridium difficile).

На рис. 4 представлены частота встречаемости данных микроорганизмов (в виде процента лиц с повышенным содержанием данных микроорганизмов) и степень их повышения.

5. Проведено определение содержания маркеров условно-патогенных микроорганизмов, которые в зеве в норме встречаются в достаточно большом количестве (от 100 до 900 × 10 5 на 1 грамм).

У лиц с ХФ их уровень значительно увеличивается (рис. 5) [12, 13]. Как следует из рис. 5, основными микроорганизмами из данной группы при ХФ являются: Streptococcus spp., Staphylococcus aureus, Bacteroides fragilis, Clostridium spp. (группа C. tetani), Eubacterium spp., Eggerthella lenta, Nocardia spp.

6. Проведена оценка уровня вирусов группы герпеса — цитомегаловируса и герпеса (рис. 6, 7).

По результатам анализа (рис. 6) было установлено, что содержание маркеров цитомегаловируса (метод МСММ) превышает норму у 79% пациентов:

у 39% — от 11 до 20 раз;
у 29% — от 21 до 50 раз;
у 18% — от 6 до 10 раз;
у 10% — от 51 до 100 раз;
у 4% людей с ХФ повышение — от 2 до 5 раз.

У пациентов с ХФ наблюдается увеличение уровня Herpes spp. (рис. 7). Повышение содержания маркеров герпеса обнаружено у 45% пациентов с ХФ:

у 46% — от 6 до 10 раз;
у 25% — от 21 до 50 раз;
у 14% — от 11 до 20 раз;
у 11% превышение по сравнению с нормой — от 2 до 5 раз;
у 4% — свыше 51 раза, что указывает на значимость данного вируса в патогенезе рецидивирующего течения ХФ.

Показатель вируса Эпштейна-Барр превышен у 8% пациентов с ХФ по сравнению с нормой.

7. Определяли содержание грибковых маркеров в зеве при ХФ: Aspergillus spp., Candida spp., кампестерол, ситостерол (микроскопические грибы).

Повышение уровня грибковых маркеров Aspergillus spp. обнаружено у 47% пациентов:

у 76% повышение — от 2 до 5 раз;
у 24% более чем в 5 раз.

Повышение уровня Candida spp. выявлено у 45% пациентов:

у 100% повышение — от 2 до 5 раз;
у остальных лиц — увеличение менее чем в 2 раза.

8. Выявлена общая закономерность у всех обследованных пациентов с рецидивирующим течением ХФ (n = 62):

8.1. Повышено содержание грамотрицательных бактерий (Kingella spp. и др.), в связи с этим можно предположить, что пациенты с ХФ находятся в группе повышенного риска развития осложненного течения уже имеющихся инфекционно-воспалительных процессов [14] в урогенитальной области, появления урогенитальных заболеваний при наследственной предрасположенности, неблагоприятных условиях (переохлаждение, дисфункции яичников, риск заболеваний, передающихся половым путем, др.).

Заключение и выводы

1. Метод масс-спектрометрии микробных маркеров (57 микроорганизмов) в мазке из зева у пациентов с рецидивирующим течением ХФ может быть рекомендован как дополнительный к основным методам диагностики (посевы, полимеразная цепная реакция из зева) в сложных клинических случаях и при неэффективности терапии.

2. Новыми критериями эффективности терапии при ХФ может являться нормализация:

исходно повышенного общего количества микробиоты;
исходно повышенного уровня эндотоксина;
исходно сниженного содержания плазмалогена.

3. При анализе результатов МСММ из зева при ХФ клиническое значение имеет:

повышение содержания микроорганизмов, которые в норме не встречаются или встречаются в небольшом количестве;
повышение уровня микробиоты в 10 и более раз, которая встречается в норме в большом количестве.

5. Учитывая, что у всех пациентов с рецидивирующим течением ХФ увеличен уровень маркеров кампилобактера и грамотрицательных микроорганизмов, рекомендуется проведение:

консультации гастроэнтеролога;
консультации уролога (гинеколога);
по показаниям — дополнительного обследования (лечения).

местных антисептиков в виде спреев, полосканий (Гексорал, Октенисепт, Мирамистин, Сиалор, морская вода и др.), анестетиков (при болях в горле);
бактериофагов с широким спектром антибактериального действия (Секстафаг, Пиобактериофаг поливалентный, Интести-Бактериофаг (жидкости), Отофаг (гель));
противовирусных препаратов с местным (Генферон, Гриппферон (спреи, капли)), системным действием (в виде инсуфляций: свечей — Кипферон, Генферон, Виферон), таблетированных форм (Валвир, Ацикловир и др.) [16];
антигрибковых препаратов — местного и системного действия (Метрогил — гель, пимафуцин — свечи, таблетированная форма и др.);
системной антибактериальной терапии (при выявлении патогенных бактерий в высокой концентрации, наличии признаков интоксикации, лихорадки, появлении лимфаденопатии, синдрома хронической усталости, пиелонефрита, артрита и др. (осложненном течении ХФ));
иммунотерапии при частом рецидивировании ХФ, высоком содержании условно-патогенной микрофлоры в зеве (Имудон, Ликопид, Полиоксидоний, КИП, др.) [17];
пробиотических препаратов, оказывающих иммунокоррегирующий эффект, антагонистическое действие на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы в зеве при ХФ.

Литература

Будьте здоровы!

ССЫЛКИ К РАЗДЕЛУ О ПРЕПАРАТАХ ПРОБИОТИКАХ

Читайте также: