Биологические маркеры хронической алкогольной интоксикации

Обновлено: 25.04.2024

Употребление наркотиков наносит невосполнимый вред здоровью и представляет опасность для жизни!

Злоупотребление алкоголем – одна из ключевых причин низкой продолжительности жизни в России. На современном этапе развития медицины диагностика алкоголизма проводится методом врачебного опроса и краткого анкетирования, но с каждым годом все большую значимость приобретают лабораторные исследования. Они позволяют провести количественную оценку алкогольной интоксикации, а также объективно выявлять наличие зависимости.

Цели лабораторной диагностики

Лабораторная диагностика алкогольной зависимости отображает биохимические механизмы развития заболевания, помогает оценить степень интоксикации, составить прогноз и определить эффективность лечения. Анализ крови на алкоголизм проводится в следующих ситуациях:

в рамках профессиональной диспансеризации
при возврате водительского удостоверения, изъятого по причине вождения транспорта в нетрезвом состоянии
при мониторинге эффективности терапии больных алкоголизмом и контроле рецидивов
при диагностике алкогольной зависимости, особенно на ранних стадиях, когда опрос больного неинформативен
при снятии пациента с наркологического учета

Самым страшным последствием является необратимая умственная деградация

Необходимо как можно раньше распознать зависимость и начать ее лечить.

Исследование крови на алкоголизм

Суть лабораторной диагностики заключается в выявлении в крови пациента химических соединений (ферментов, белков, этилового спирта), которые называются маркерами.

По количественному показателю каждого маркера и их соотношению врач определяет продолжительность ремиссии, вероятность алкогольной интоксикации, степень поражения печени и другие особенности здоровья.

Специфический маркер CDT

Карбон-дефицитный трансферрин – наиболее специфичный и информативный маркер хронического алкоголизма. Трансферрин является сывороточным белком, транспортирующим железо. В крови он представлен несколькими изоформами с разным количеством присоединенных кислотных остатков.

При употреблении алкоголя в большом количестве гликозилирование трансферрина нарушается и в крови возрастает концентрация других его изоформ с меньшим количеством остатков сиаловых кислот. Их и оценивают как суммарный углевод-дефицитный трансферрин (CDT). Уровень карбогидрат-дефицитного трансферрина значительно возрастает при ежедневном употреблении более 60 граммов этанола (4-5 алкогольных напитков или 0,75 литра вина в день) в течение не менее двух недель.”

Таким образом, анализ крови на CDT – высокоспецифичный метод диагностики злоупотребления спиртными напитками. Однако для повышения чувствительности диагностики его рекомендуется проводить вместе с исследованием других прямых и непрямых маркеров алкоголизма. Комплексная диагностика позволяет исключить неалкогольные причины повышения углево-дефицитного трансферрина, такие как беременность, галактоземию, последствия приема гормональных препаратов.

Прямые маркеры

У человека, злоупотребляющего алкоголем, в крови может быть обнаружен этанол и его метаболиты – этилглюкоронид и этилсульфат.

Положительные результаты анализа подтверждают прием алкоголя в течение последних суток.

В практической наркологии возникают ситуации, требующие подтверждения или отрицания наличия у обследуемого человека алкогольной зависимости. Существующие стандартные лабораторные методики являются давно устаревшими и выявляют только имеющуюся на данный момент степень интоксикации. Помочь наркологу в диагностике болезни они не могут. В современных способах используется принцип выявления специфических маркеров, позволяющих установить факт приёма спиртных напитков на протяжении длительного срока. Сдача крови на алкоголизм позволяет заподозрить наличие алкозависимости даже в межзапойный период, когда человек не принимал алкоголь несколько дней и даже недель. В настоящее время ведётся работа над прохождением обязательного тестирования лиц, получающих права, разрешение на оружие. Несомненную пользу методики окажут и в практике судебных расследований.

Почему стандартная лабораторная диагностика не выявляет болезненной зависимости

Анализ крови на алкоголизм невозможен при использовании проб, реагирующих на наличие спирта или его метаболитов в биологических жидкостях. Происходит это ввиду быстрой элиминации молекул этанола и продуктов его расщепления.

Процесс катаболизма алкоголя в организме выглядит следующим образом:

Распад этилгидрата под воздействием ферментов алкогольдегидрогеназ до ацетальдегида.
Дальнейшее расщепление ацетальдегидных молекул до уксусной кислоты с участием альдегиддегидрогеназ (дегидрогеназ) печени.
Появление конечных продуктов разложения: воды и углекислого газа.

Весь процесс по времени длится несколько часов. Через сутки в биологических жидкостях организма выявить даже следы алкоголя можно только очень чувствительными методиками.

Для этого медицинскими экспертизами использовались и ещё используются реакции:

Раппопорта с дополнением Архангеловой.
Мохова-Шинкаренко.
Проба Попова.
Микрометод Видмарка в модификации Шоймоша.
Фотометрический метод по Карандаеву.
Методика газожидкостной хроматографии.

Некоторые из них являются предварительными, другие более точные. Одни просты в применении, а часть довольно дорогостоящие и требует специального оборудования.

В качестве объектов исследования у пациентов забираются:

Выдыхаемый воздух.
Моча.
Кровяная ткань.

С их помощью устанавливается как факт наличия алкоголя в организме, так и его количества. Но результат показывает только сиюминутную картину и позволяет произвести функциональную оценку концентрации спирта.

Люди часто интересуются, как называется анализ крови на алкоголизм, позволяющий по выявлению маркеров непрямого распада этанола установить факт длительного приёма спиртных напитков. Биомаркеры являются веществами, появляющимися в организме на фоне деструкции внутренних органов метаболитами спирта.

Анализ крови на хронический алкоголизм по маркеру CDT

Выявить с большой долей вероятности алкогольную зависимость можно при помощи маркера – углеводдефицитного трансферрина (УДТ). Английский синоним этого вещества сarbohydrate-deficient transferrin (CDT), в переводе на русский – карбогидрат-дефицитный трансферрин. Данный сывороточный белок выполняет в организме функцию транспорта железа. В состав его изоформ включает до 8 сиаловых кислот.

При длительной алкоголизации (не менее 60 мл спирта в сутки) УДТ теряет часть сиаловых кислот, и приобретает вид новых изоформ. Их нахождение при исследовании биоматериала оценивают в качестве суммарного CDT, значения которого возрастают при употреблении спиртных напитков, длящемся не менее 2 недель. Одноразовые приёмы не меняют уровень показателя. Диагностическая ценность данных сохраняется до 2 недель после последнего принятия алкоголя. В норме содержание УДТ не превышает 1,2%. При полученном значении 2,5% делается вывод о вероятности наличия алкозависимости. Маркер крови на алкоголизм имеет специфичность на уровне 80-90%.

Необходима коррекция результатов при:

Беременности.
Применении гормонов.
Галактоземии.
Врожденных обменных нарушениях.

Результат более точный у мужчин, чем у женщин и относится к наиболее специфическим. В сомнительных случаях для уточнения применяются другие методики. В комплексе они представляют полноценную картину имеющейся проблемы.

Порядок сдачи

Пройти методику можно в наркологическом диспансере, имеющем необходимое оборудование. Также исследование проводится в сертифицированных медцентрах, платных лабораториях.

Исследование содержания гамма-глютамилтранспептидазы (ГГТП)

Учёт среднего объёма эритроцита

Замечено, что длительное употребление алкоголя негативно отражается на некоторых лабораторных показателях. Наиболее специфичным отклонением является повышение уровня MCV (mean cell volume).

В комплексе обследования пациентов учитываются все три анализа. Конечно, все они второстепенные, вспомогательные. Основное значение в диагностике хронической алкозависимости отводится сбору анамнеза, учёту сведений родственников. Теоретическая наркология постоянно разрабатывает новые, более совершенные и точные диагностические методы. Они важны и для подбора вариантов терапии алкогольной зависимости.

О.И.Тарасова, Н.В.Мазурчик, П.П.Огурцов, В.С.Моисеев
Постановка диагноза и назначение адекватной терапии как синдрома алкогольной зависимости, так и соматической патологии алкогольного генеза нередко зависит от своевременного установления факта злоупотребления алкоголем, поскольку большинство пациентов либо отрицают употребление алкоголя, либо значительно занижают его количество. Алкогольную этиологию заболевания устанавливают на основании анамнеза, использования разного рода анкет и опросников, клинической картины и ее изменений в условиях воздержания от алкоголя. Лабораторные тесты позволяют объективизировать клинические данные. Биологические маркеры помогают получить дополнительную информацию, необходимую для подтверждения эпизода недавнего употребления алкоголя, хронической алкогольной интоксикации, рецидива алкоголизма. Требованиями к таким маркерам является высокая специфичность и чувствительность. Идеальный маркер не должен изменяться при неалкогольных поражениях органов. Для установления рецидива алкоголизма тест должен обладать высокой чувствительностью и выявлять факт употребления алкоголя в любых, даже в очень небольших количествах. Лабораторное подтверждение однократного или систематического употребления алкоголя часто бывает необходимым при проведении судебно-медицинской экспертизы, профессионального отбора, диспансеризации лиц “опасных профессий”, а также для контроля качества ремиссии больных алкоголизмом.

Для выявления острой алкогольной интоксикации или установления факта употребления алкоголя определяют содержание алкоголя в крови, моче и выдыхаемом воздухе. При отсутствии диагностически значимых концентраций алкоголя в крови, можно считать, что пациент не употреблял алкоголь в течение 6-8 часов [1]. Быстрое окисление алкоголя определяет необходимость измерения уровней его метаболитов. Повышенное содержание в крови ацетальдегида, молочной, яблочной и Р-оксимаслянной кислот свидетельствует о приеме спиртных напитков в течение прошедших 24 часов [1,2]. Эти тесты нашли применение только при проведении криминалистической экспертизы и не имеют клинического значения. Наиболее перспективным тестом для контроля за абстиненцией является определение этилглюкоронида. Этилглюкоронид, являясь прямым метаболитом алкоголя, определяется в моче уже через несколько часов после алкогольного эксцесса и сохраняется на протяжении 5 дней [3]. Чувствительность жидкостной хроматографии с двойной масс-спектрометрией приближается к 100% [4]. Аналогичную сверхчувствительность показывает и иммунологическое исследование (ELISA), которое не требует использования дорогостоящего оборудования [5]. Высокочувствительными методами являются также определение в крови нескольких неокисленных прямых метаболитов этанола - этиловых эфиров жирных кислот, которые выявляют в течение 24 часов после алкоголизации, и фосфатидил-этанола, который определяется в течение 2 недель после длительной алкоголизации (7-14 дней) [6].

Кроме этилглюкуронида, в моче определяют и другие метаболиты алкоголя, такие как глюкоронид-5-гидро-кситриптофол и 5-гидрокситриптофол/5-гидрокситрип-тофол-3-ацетатную кислоту [1]. Эти методы пока не получили широкого применения, однако они имеют все шансы занять достойное место в практике тех специалистов, для которых важен четкий ответ на вопрос: принимал пациент алкоголь в течение последних 1-2 недель или нет? Большой потенциал этих методов связан не только с их высокой чувствительностью и специфичностью, но и с созданием простых в применении тест-систем для индикации метаболитов алкоголя в моче.

Для врача-нарколога важен не только контроль за абстиненцией, но и возможность дифференциации состояний бытового (синоним - социального) пьянства и алкоголизма, а в идеале - и стадий алкоголизма. В настоящее время не существует четких лабораторных критериев, позволяющих разграничить эти состояния. Это связано как с размытостью самих определений "пьянства" и "алкоголизма", базирующихся на психиатрических терминах, так и с отсутствием достоверной корреляции между какими-либо лабораторными критериями и ключевыми синдромами алкоголизма. Лабораторные тесты могут подтвердить единственный базисный синдром алкоголизма - повышенную толерантность к алкоголю. Тест на толерантность считается положительным при обнаружении алкоголя в биологических средах организма (кровь, слюна) в концентрации >1 г/л при отсутствии внешних признаков опьянения [7]. Это единственный патогномоничный лабораторный признак типичного для больных алкоголизмом длительного злоупотребления алкоголем, к сожалению мало помогающий в рутинной практике нарколога. Косвенно о толерантности можно судить по принятой накануне дозе алкоголя и состоянию пациента. Если известна концентрация алкоголя или его метаболитов в средах организма и время его приема, можно рассчитать дозу принятого накануне алкоголя в этанольном эквиваленте. Хотя общепринятых стандартов для доз алкоголя, однозначно свидетельствующих о повышенной толерантности, не существует, можно принять во внимание, что у 70% людей алкогольная кома наступает при концентрации алкоголя в крови 3 г/л. Поскольку алкоголь быстро и равномерно распределяется по всем средам организма, достижение этой концентрации возможно при употреблении этанола в дозе более 3 г/кг за относительно короткий промежуток времени (1-2 ч), т.е. о росте толерантности свидетельствует способность выпить этиловый спирт в дозе, превышающей 4 г на кг массы тела (около 800 мл водки).

Для врача-интерниста принципиальным является установление факта систематического употребления относительно небольших количеств алкоголя, что может приводить к поражению органов-мишеней. Спектр соматической патологии при хронической алкогольной интоксикации крайне широк, а пациенты интерниста, в отличие от пациентов нарколога, не склонны к добровольным признаниям о дозах и режиме приема алкоголя. Поэтому потребность в лабораторной диагностике высока именно в клинике внутренних болезней.

Специфичность и чувствительность доступных в настоящее время тестов варьируются в широких пределах в зависимости от пола, возраста и сопутствующей патологии, поэтому при изолированном применении эти тесты не отвечают критериям "идеального маркера". В клинической практике наиболее часто используется активность у-глютамилтранспептидазы - ГГТ (син. у-глю-тамилтрансфераза, что правильнее, так как. по биохимическому действию она относится к классу трансферраз). Определение уровня ГГТ является довольно дешевым и хорошо известным методом [8]. В наибольших количествах этот фермент содержится в эпителии желчных канальцев, поэтому повышение уровня ГГТ в крови традиционно связывают с холестатическими заболеваниями печени и билиарной системы. В этих случаях увеличение активности ГГТ, как правило, сопровождается повышением уровня щелочной фосфатазы. Тем не менее, ГГТ не является строго специфичным маркером повреждения гепатобилиарной системы. Многие неалкогольные болезни печени, прием лекарственных и токсических веществ также вызывают повышение активности ГГТ. Этот фермент в значительных количествах присутствует в почках, в небольших количествах - в поджелудочной железе, тонкой кишке, клетках крови. Активность его может незначительно повышаться при сахарном диабете, почечной и сердечной недостаточности.

Таким образом, активность ГГТ не повышается у лиц с эпизодическим употреблением алкоголя (кутежный тип), если оно не сопровождается сопутствующим заболеванием печени. По данным литературы, увеличение уровня ГГТ определяется при длительном ежедневном употреблении спиртных напитков в количестве, эквивалентном 40 г чистого этанола, у 20% мужчин и 15% женщин, а при употреблении 60 г в спиртовом эквиваленте - у 50% и 30% соответственно [11]. Следовательно, активность ГГТ является маркером систематического употребления умеренного в бытовом понимании, но, на самом деле, большого количества алкоголя, а изолированное повышение уровня этого фермента служит маркером хронической алкогольной интоксикации. Период полураспада ГГТ составляет 14-26 дней, нормализация ее активность происходит через 4-5 недель строгой абстиненции. Снижение уровня ГГТ во время пребывания в стационаре (контролируемая абстиненция!) является одним из наиболее специфичных маркеров алкогольной этиологии болезни. При однократном же определении чувствительность и специфичность метода для выявления злоупотребления алкоголем варьируется от 40 до 80% [1,12-14].

Остальные рутинные методы диагностики хронической алкогольной интоксикации, такие как средний корпускулярный объем эритроцита (СКОЭ), мочевая кислота, кетокислоты, ACT, AJIT, лактатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза, триглицериды, липопротеиды высокой плотности, обладают меньшей информативностью. Так, чувствительность СКОЭ при злоупотреблении алкоголем составляет 40-50%, но у лиц с диагностированным алкоголизмом она достигает 80-90% [1,15]. Увеличение СКОЭ отмечают при употреблении более 60 г этанола в течение месяца. Нормализация СКОЭ происходит в течение нескольких месяцев после полного отказа от алкоголя, что не позволяет использовать этот критерий для диагностики абстиненции во время терапии алкогольной зависимости [15]. Известно, что ряд состояний влияет на размер эритроцита, в частности В12-дефицитная анемия, дефицит фолиевой кислоты, гипотиреоз, гемобластозы, что снижает специфичность этого маркера.

Наиболее часто используемыми ферментами в диагностике заболеваний печени являются ACT и АЛТ. Поскольку ACT находится в клетках печени, скелетных мышц, сердца, уровень этого фермента может повышаться при повреждении мышц, инфаркте миокарда. В отличие от ACT, АЛТ в большом количестве содержится в печени и в незначительном - в остальных органах. Следовательно, повышение активности АЛТ с большей достоверностью подтверждает повреждение гепатоцитов. Чувствительность аминотрансферазного метода при установлении факта злоупотребления алкоголем составляет 35% [15]. Для дифференцированной диагностики алкогольного и неалкогольного генеза заболевания печени хорошо зарекомендовало определение соотношения АСТ/АЛТ - коэффициент ДеРитиса [16]. Если он превышает 1,4, то вероятность алкогольной этиологии заболевания составляет 70-78% [17].

Умеренное употребление алкоголя (40 мл ежедневно) вызывает увеличение содержания липопротеидов высокой плотности (ЛВП) [15]. Это является ответом гепатоцитов на воздействие алкоголя, в результате которого усиливается этерификация жирных кислот. Однако при циррозе печени содержание ЛВП в сыворотке снижается в результате уменьшения их синтеза в печени. Уровень ЛВП зависит от пола, диеты, физических упражнений, приема некоторых лекарственных препаратов. Чувствительность составляет около 30% [15].

Ведутся работы по изучению новых биологических маркеров - ацетальдегидаддуктов и антител к ним. Известно, что разнообразные белки (гемоглобин, коллаген, гаммаглобулин) могут использоваться для получения информации о наличии состояния хронической алкогольной интоксикации. Поэтому антитела против ацетальдегидсодержащих эпитопов модифицированных белков в перспективе могут стать новым маркером для идентификации алкогольной зависимости, а также для дифференциальной диагностики болезней внутренних органов алкогольной и неалкогольной этиологии [14]. Однако они пока не стали рутинными анализами и для массового скрининга систематического злоупотребления алкоголем не используются.

Широко обсуждается диагностическая ценность отдельных десиалоформ. Можно предположить, что чем тяжелее была алкогольная интоксикация, тем дальше прошла десталинизация в сторону образования асиало-форм. Следовательно, методика выявления изолированного асиалотрансферина (0-форма) должна быть максимально специфичной, но малочувствительной. И наоборот, определение суммарного пула а-, моно-, ди-и трисиалотрансферина (0-3 формы) может быть более чувствительным, но менее специфичным. Действительно, F.Legros и соавт. показали, что определение одного асиалотрансферина более специфично, чем определение суммы а- и моно-сиалоформ [27]. Однако исходная концепция о росте специфичности ценой потери чувствительности при определении более сильно десиалинизированных форм не подтвердилась на практике. В большинстве работ обратная связь между чувствительностью и специфичностью отсутствует [25,28]. Определение 0-2 сиалоформ демонстрирует высокую специфичность, не уступая таковой для асиалоформ, но и не дает ожидаемого прироста в чувствительности [27]. Сомнительным остается целесообразность учета трисиалоформ. Некоторые исследователи полагают, что повышение уровня трисиалотрансферрина не имеет ценности в диагностике употребления алкоголя [29].

В течение двух последних десятилетий разработано несколько методов определения УДТ, рекомендованных для клинической практики. Они различаются особенностями выделения десиалоформ из общего пула трансферрина и способами их последующей детекции. CDTect позволяет измерить абсолютное количество углеводдефицитного трансферрина. Определяют 0-1 сиалоформы и небольшое количество дисиалотрансферина путем радиоиммунологического анализа после микроколоночного расщепления. Для данного метода пределами нормы является 0-20 Ед/л для мужчин и 0-26 Ед/л для женщин [23,24]. %СБТ-турбидимитрический иммунологический анализ, проводимый после ионообменной хроматографии, определяет процент 0-2 сиалоформ от общего количества трансферрина. Диагностически высоким считается уровень 2,6% [23,24]. Метод %CDT-TIA позволяет определять процентное содержание УДТ с учетом некоторого процента (до 50%) трисиалотрансферрина. При проведении последнего исследования на первом этапе происходит насыщение ионами Fe3+ сывороточного трансферрина, после чего трансферрин с низким содержанием сиаловой кислоты сепарируется с помощью ионно-обменной хроматографии. УДТ определяют с помощью турбодиметрического метода с использованием антител к трансферрину [24]. При исследовании %CDT RIA (%CDTriTIA) УДТ измеряют радиоиммунологическим методом. При этом учитывают 0-2 сиалоформы. Верхняя граница нормы - 2,5% [24].

Существует несколько коммерческих тест-систем исследования УДТ. BioRad %CDT, Pharmacia CDTect test, Axis-Shield %CDT основаны на оценке изоформ трансферрина методом изоэлектрофокусировки/иммуноблотинга после жидкостной хроматографии высокого разрешения. Для последних двух методов диагностический уровень является 6% [19,23]. P.Anttila и соавт. [23] проанализировали наиболее часто используемые методов определения УДТ - CDTest, %CDT и %CDT-TIA. В исследуемую группу входили алкоголики с поражением печени и без признаков поражения печени. Контрольную группу составили здоровые добровольцы. Наибольшую чувствительность показали методы CDTest и %CDT - 65% и 63% у мужчин и 36% и 46% у женщин соответственно. Метод %CDT-TIA характеризовался самой низкой чувствительностью - 32% у мужчин и 25% у женщин. Специфичность методов оказалась выше: %CDT - 100% у мужчин и 91% у женщин, CDTest - 96% и 87% соответственно. H.Koch и соавт. изучали 26 работ, в которых УДТ определяли методами CDTest и %CDT-TIA. Чувствительность CDTest составляла 20-85%, специфичность -77-95%, %CDT-TIA - 10-67% и 90-100% [25]. Самой низкой чувствительность была в исследованиях, в которые включали только женщин, самой высокой - в исследовании, в которых определяли лишь асиалотрансферрин [29].

Самыми многообещающими являются методы, основанные на использовании жидкостной хроматографии (хроматофокусировка, жидкостная хроматография высокого разрешения, быстрая белковая жидкостная хроматография) и изоэлектрофокусировке. Разработаны методы по анализу изоформ - капиллярный электрофорез и капиллярный зонный электрофорез, которые в настоящее время являются наиболее чувствительными и позволяют оценить процентное соотношение изоформ. Специфичность и чувствительность этих методов, по данным разных исследователей, приближается к 100% [12,22]. Однако их широкое применение имеет ряд технических и экономических ограничений. Коммерческие тесты калибруют с помощью данных методов, что значительно повышает их чувствительность. Результаты анионообменных методов определения УДТ, учитывающих 0-3 сиалоформы, несколько хуже по сравнению с таковыми изоэлектрофокусировки с иммунофиксацией.

Точность данных методов определения УДТ в целом ниже у людей, употребляющих малые дозы алкоголя, молодых людей и женщин [2]. К сожалению, у молодых пациентов не только УДТ-тесты, но и другие маркеры хронической алкогольной интоксикации имеют пониженную чувствительность [30,31]. Трансферрин является гормонозависимым белком, поэтому его содержание у здоровых женщин выше, чем у мужчин. Возможно, гормональный фон может влиять и на уровень сиализации трансферрина. Так, у женщин содержание УДТ в третьем триместре беременности значительно выше, чем в первом и втором. В менопаузу оно снижается. На уровень УДТ влияет прием контрацептивов. Ложноположительные результаты встречаются в редких случаях при наличии генетически обусловленной D-формы трансферрина либо при врожденном нарушении метаболизма гликопротеинов - синдроме углеводдефицитного гликопротеина. Данный синдром является крайне редким аутосомно-рецессивным заболеванием и характеризуется повышением уровня углеводдефицитного трансферрина в отсутствии алкогольной интоксикации. Ложноположительные результаты могут наблюдаться при применении некоторых методов исследования, использующих антитела к трансферрину, а не к УДТ [5].

Таким образом, в практике клинициста относительно недавно появился новый лабораторный показатель, претендующий на роль "идеального маркера" хронической алкогольной интоксикации. К сожалению, существующие коммерческие тест-системы наиболее близки к идеалу только по специфичности. Чувствительность этих систем оставляет желать лучшего, уступая широко доступному определению ГГТ, особенно в старших возрастных группах. Разрабатываемые пути повышения чувствительности ведут к существенному удорожанию и техническому усложнению методов, которые по стоимости и затратам времени и так на порядок превышают известные "классические" методы. Можно прогнозировать, что УДТ-тесты по экономическим соображениям не будут использоваться с целью широкого первичного скрининга хронической алкогольной интоксикации, по крайней мере, в ближайшем будущем. Однако как в практике медицинской экспертизы, так и в практике клинициста существует ряд ситуаций, когда высокая специфичность маркера длительного злоупотребления алкоголем может быть востребована. Для интерниста это, в первую очередь, ситуации, когда пациент отрицает злоупотребление алкоголем, а другие лабораторные маркеры не информативны из-за сопутствующей патологии. Не отрицая важность сбора анамнеза, комплексного анализа клинической картины и ее динамики, ценности прочих лабораторных маркеров, УДТ-тест может занять свое место в практике клинициста.

Итак, на современном этапе "идеального" маркера нет. Это означает, что главным направлением остается комплексный подход к диагностике. Сочетание высокой специфичности УДТ и хорошей чувствительности ГГТ может существенно расширить возможности лабораторной диагностики. Так, G.Mundle и соавт. [32] проанализировали результаты совместного использования ГГТ, УДТ и СКОЭ. Чувствительность и специфичность одновременного определения трех маркеров составили 85%. Оценка нескольких биологических маркеров превышает 80% уровень чувствительности у мужчин и женщин, а уровень специфичности - 90%.

Поиск новых биологических маркеров острой и хронической алкогольной интоксикации продолжается. Изучается диагностическая ценность комбинации нескольких маркеров. Медицинская и социальная значимость лабораторной диагностики, безусловно, велика. Тщательный скрининг алкогольной зависимости с помощью биологических тестов позволяет избежать тяжелых социальных и юридических проблем и помогает в диагностике и лечении алкогольной болезни.

Список литературы

Распространение хронического злоупотребления алкоголем и заболевания алкоголизмом в России актуализирует задачу по разработке комплекса мер, направленных на реализацию новой государственной антиалкогольной политики. Современные методики обследования позволяют с высокой степенью достоверности определять лиц, склонных к хроническому злоупотреблению алкоголем, не способных выполнять свои служебные обязанности в стрессовых ситуациях, а также при их последствиях, связанных со специфическими условиями профессиональной деятельности. Среди них важное место занимают методы диагностического обследования населения различных социальных и возрастных групп, позволяющие своевременно, на ранней стадии выявлять лиц с хронической алкогольной нагрузкой.

1. НЕМЦОВ А.В., ТЕРЕХИН А.Т. РАЗМЕРЫ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ СОСТАВ АЛКОГОЛЬНОЙ СМЕРТНОСТИ В РОССИИ // НАРКОЛОГИЯ. – 2007. – № 12. – С. 72–80.

2. ОГУРЦОВ П.П., ПОКРОВСКИЙ А.Б., УСПЕНСКИЙ А.Е. АЛКОГОЛЬ И ЗДОРОВЬЕ НАСЕЛЕНИЯ РОССИИ 1900–2000 // МАТЕРИАЛЫ ВСЕРОС. ФОРУМА. – М., 1998. – С. 167–73.

3. JENKINS M.A. CLINICAL APPLICATIONS OF CAPILLARY ELECTROPHORESIS // MOLECULAR BIOTECHNOLOGY. 2000. – № 15. – Р.201–209.

4. RAO R. ENDOTOXEMIA AND GUT BARRIER DYSFUNCTION IN ALCOHOLIC LIVER DISEASE// HEPATOLOGY. 2009. – VOL. 50, № 2. – Р.638–44.

5. ROGAEV E.I. SMALL RNAS IN HUMAN BRAIN DEVELOPMENT AND DISORDERS // BIOCHEMISTRY (MOSC). 2005. – VOL. 70, № 12. – Р. 1404-7.

6. ПЕТРОВ Д.В. ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА РАССТРОЙСТВ, ВЫЗВАННЫХ УПОТРЕБЛЕНИЕМ АЛКОГОЛЯ – ЯРОСЛАВЛЬ: ЯГМА, 2003. – С. 86–87.

7. JUNG M.H., PARK B.L., LEE B.C., ASSOCIATION OF CHRM2 POLYMORPHISMS WITH SEVERITY OF ALCOHOL DEPENDENCE // GENES BRAIN BEHAV. – 2011. – VOL. 10, № 2. – Р. 253-6.

9. HACK L.M., KALSI G., ALIEV F. LIMITED ASSOCIATIONS OF DOPAMINE SYSTEM GENES WITH ALCOHOL DEPENDENCE AND RELATED TRAITS IN THE IRISH AFFECTED SIB PAIR STUDY OF ALCOHOL DEPENDENCE (IASPSAD) // ALCOHOL CLIN. EXP. RES. 2011. – VOL. 35, № 2. – Р. 376–85.

Мировой опыт свидетельствует, что краткое анкетирование и элементарный врачебный осмотр являются качественным диагностическим инструментарием. Необходимо дополнительное использование тестов, которые повышают вероятность распознавания хронической алкогольной интоксикации (ХАИ). В первую очередь к ним относятся биохимические анализы, определяющие повышение активности гамма-глутамилтранспептидазы (GGT), аминотрансферазы [7]. В последние годы для объективной лабораторной диагностики хронической алкогольной интоксикации применяют качественное и количественное определение маркера карбогидрат-дефицитного трансферрина (CDT) в сыворотке крови больного [8].

Среди маркеров потребления алкоголя наиболее специфичным является карбондефицитный траснферрин. Трансферрин-белок, переносящий в клетки всех тканей тела ионы железа при их абсорбции в кишечнике или высвобождении из эритроцитов. Различие изоформ трасферрина определяется гликозилированием. Основная фракция трансферрина представлена изоформной с 4 остатками сиаловой кислоты. При потреблении значительных количеств алкоголя (40-60 г в день на протяжении нескольких дней, или больших разовых доз) возрастает доля карбонгидрат-дефицитного трансферрина (CDT) –изоформ с двумя, одним остатком или полностью десиализированный трансферрин (0-форма). В норме фракция CDT не превышает 1.3 % – 1.7 %, тогда как при потреблении указанных количеств алкоголя уровень CDT превышает эти границы и может возрастать до 10-15 раз. Выбор данного маркера основан на его диагностической возможности отражать как раннее и скрытое злоупотребление алкоголем, так и обеспечивать мониторинг эффективности проводимой терапии посредством объективного отражения ремиссии или возникновения рецидива.

Цель работы заключалась в установлении диагностической значимости сравнительного определения маркеров хронического употребления алкоголя, методами капиллярного электрофореза и биохимического анализа при обследовании различных групп больных алкоголизмом.

Материалы и методы исследования

Исследование проведено на базе Московского научно-практического центре наркологии ДЗ города Москвы в группе мужчин, которое исключает влияние гендерных различий.

Клиническое исследование выполняли в группе больных состоящей из 250 пациентов в возрасте от 23 до 72 лет с установленным диагнозом хронический алкоголизм. Анализ сыворотки крови на содержание маркера карбогидрат-дефицитного трансферрина проводили в динамике, осуществляя забор венозной крови на 1-ый, 7, 14 и 21-ый день лечения. Контрольную группу составили 1000 здоровых доноров. Комплексная оценка больных хроническим алкоголизмом включали данные, о возраст, поле и длительности заболевания. Анализируемые группы пациентов были однородны по всем перечисленным выше характеристикам.

Для установления диагностической значимости маркеров хронического употребления алкоголем проводили определение в сыворотке крови пациентов изоформ гликозилированного трансферрина (CDT) и биохимические показатели содержания печеночных ферментов аланинаминотрансфераза (ALT), аспартатаминотрансфераза (АST), глутаминаминотранспептидазой (GGТ).

Результаты исследования и их обсуждение

При хроническом злоупотреблении алкоголя гликозилирование трансферрина нарушается, что приводит к изменению процентного соотношения его изоформ в сторону повышения уровня низкосиалированных вариантов, называемых также карбогидрат-дефицитными, или CDT. Патомеханизм повышения уровня CDT в ответ на хроническое злоупотребление алкоголем заключается, главным образом, в том, что этанол и/ или его метаболит – ацетальдегид влияют на синтез цепей N-гликанов в аппарате Гольджи, ингибируя активность галактозилтрансферазы и N-ацетилглюкозаминилтрансферазы и одновременно с этим повышая активность сиалидазы в плазматических мембранах печени. Этанол также вызывает дестабилизацию и снижение концентрации м-РНК ?-2,6-сиалилтрансферазы и снижение синтеза ?-2,6-сиалилтрансферазы, обусловленное снижением активности сиалилтрансферазы, и, как следствие, уменьшение сиалирования молекул трансферрина [3,8,9]. Нами были выполнены исследования, направленные на определение диагностической значимости результатов, полученные двумя независимыми методами при обследовании группы лиц с хронической алкогольной зависимостью. Определения маркера CDTпроводили в образцах крови в 1-й, 7, 14 и 21-й дни лечения. Для анализа на биохимические маркеры ALT, AST и GGT использовали образцы 1-й и 21-й дни. При анализе полученных усредненных результатов были выявлены зависимости, представленные на рис. 1, 2.

Как видно из рис. 1, концентрации CDT составляет в среднем 4,31 % при поступлении пациента, на 7 день лечения она уменьшается до 2,27 %. К 14 дню составляла 1,48 %, к 21 дню лечения 1,14 %. Полученные данные свидетельствуют о том, что при полном отказе от алкоголя у пациента происходит снижение концентрации белка и значение CDT приходит в норму за 2-3 недели.

Рис. 1. Зависимость значений CDT от времени

Рис. 2. Зависимость биохимических показателей от времени

На рис. 2 представлена динамика изменения биохимических маркеров. Концентрация ферментов с течением времени так же уменьшается. Однако, даже через 2-3 недели эти значения не нормализуются и остаются высокими. Полученные данные и их значения не позволяют в эти сроки подтвердить полный отказ пациента от алкоголя. Таким образом, сравнивая в динамике уменьшение числового ряда значений CDT и биохимических показателей, характеризующих содержание ферментов, можно заметить, что данные CDT являются более информативными по сравнению с такими маркерами, как ALT,AST и GGT. В отличие от содержания ферментов повышение гликозилированного трансферрина в наименьшей степени ассоциировано с органическим поражением печени или других органов (как алкогольного, так и неалкогольного генеза) или повышенным синтезом микросомальных ферментов. В отличие от других гликопротеинов, недостаток сиалирования изоформ трансферрина никак не связан с клиренсом печени или почек.

Заключение

Проведены сравнительные исследования маркеров хронического злоупотребления алкоголем характеризующих изменения в содержании ферментов и гликозилированного трансферрина. При этом использовали методы биохимического анализа и капиллярного электрофореза. Установлено, что наиболее важными для диагностики ранних состояний алкоголизма являются данные определения CDT.

Таким образом, маркер CDT является универсальным диагностическим инструментом для реализации профилактической и медико-реабилитационной стратегии при заболеваниях зависимости от алкоголь-содержащих веществ. Ключевой составляющей при использовании маркера CDT является объективизация факта злоупотребления алкоголя методами лабораторной диагностики. Представленный маркер CDT на сегодняшний день является единственным маркером оценки хронической алкогольной нагрузки, имеющий опыт практического использования.

Результаты, полученные на основе анализа данных о пациентах с алкоголизмом, послужат основой для разработки стратегий мониторинга рисков, оптимальных терапевтических и профилактических стратегий, а также поиска новых фармакологических мишеней с применением новых методов диагностики такого социально значимого заболевания, как алкоголизм.

Читайте также: