Что такое молекулярно генетическое исследование на коклюш

Обновлено: 19.04.2024

Тест предназначен для раздельного определения ДНК возбудителей коклюша (Bordetella pertussis), паракоклюша (Bordetella parapertussis) и бронхисептикоза (Bordetella bronchiseptica) в мазке слизистой носоглотки или ротоглотки.

Бактерия Bordetella pertussis является возбудителем коклюша – острого антропонозного инфекционного заболевания с воздушно-капельным механизмом передачи. Заболевание характеризуется специфичным спазматическим кашлем, поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем.

Инкубационный период инфекции обычно составляет 5-10 суток (иногда до трех недель), пациент заразен с 1-го до 25-го дня болезни. Коклюш – длительное заболевание, в котором выделяют три периода: катаральный, неотличимый по симптоматике от обычной простуды (3-14 суток), период спазматического кашля (от 2-3 недель до 6-8 недель и более) и период выздоровления, который в свою очередь разделен на период обратного развития, или ранней реконвалесценции (2-8 недель) и период поздней реконвалесценции (2-6 месяцев). В результате этой болезни возможно развитие острых и хронических осложнений, как инфекционных, так и неинфекционных. Большинство из них возникает в периоде спазматического кашля, когда заразность снижается, но некоторые больные продолжают выделять возбудителя в течение трех недель от начала кашля.

В типичных случаях диагноз ставят по клинической картине, у людей, не имеющих иммунитета, классические проявления коклюша трудно перепутать с другим заболеванием. У иммунных лиц симптомы не столь типичны.

Несмотря на то, что коклюш до сих пор считается детской инфекцией, в возрастной структуре заболевших в последние годы преобладают подростки и взрослые с атипичной формой заболевания. Данные популяционные группы в настоящее время являются главным источником вспышек заболевания и заражения невакцинированных лиц. Это особенно опасно в семьях с грудными детьми, у которых коклюш протекает очень тяжело и представляет прямую угрозу для жизни.

Bordetella pertussis относится к роду Bordetella, который включает в себя и другие виды микроорганизмов, имеющих клиническую значимость для человека: Bordetella parapertussis и Bordetella bronchiseptica.

Все представители рода Bordetella являются респираторными патогенами за счет своей тропности к эпителиальным реснитчатым клеткам.

Bordetella parapertussis вызывает паракоклюш. Заболевание по клиническим проявлениям напоминает коклюш, но характеризуется более легким течением.

Bordetella bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез) и является для человека оппортунистическим патогеном при респираторных (бронхит, пневмония) и других инфекциях (бактериемия, инфекции ран, эндокардит, менингит, перитонит). Бронхисептикоз может развиваться после контакта с инфицированными животными.

Для лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша применяют микробиологический метод – посев отделяемого носоглотки (см. тест № 470 Посев на бордетеллы коклюша/паракоклюша ) в первые 2-3 недели болезни. В более поздние сроки ценность исследования снижается.

Серологическая диагностика позволяет определить специфические иммуноглобулины классов IgA, IgM, IgG (см. тесты №№ 245 , 246 и 247 ). Обнаружение IgA и IgM-антител свидетельствует о недавней инфекции и используется для дифференциальной диагностики. IgG-антитела начинают определяться у больных на 2-3-й неделе от начала болезни, а также могут выявляться у вакцинированных и ранее переболевших лиц.

В настоящее время быстрым высокочувствительным и специфичным методом обнаружения бактерий рода Bordetella является метод ПЦР. Чувствительность и специфичность метода достигает 100%. Метод диагностики ПЦР можно применять на фоне приема антибактериальных препаратов, у лиц, вакцинированных или переболевших, для определения возможного бактерионосительства.

Исследование позволяет дифференцировать коклюш от паракоклюша и бронхисептикоза, что имеет важное значение в ведении больных и тактики лечения.

Взятие биоматериала производят натощак или не ранее 2-3 часов с момента приема пищи, полосканий или других видов лечения. За один час до взятия биоматериала нельзя курить, чистить зубы. Перед взятием мазка из ротоглотки необходимо прополоскать рот кипяченой водой, из носоглотки – очистить нос от отделяемого.

для лабораторного подтверждения заболевания коклюшем, паракоклюшем и бронхисептикозом;
при приступообразном кашле продолжительностью более 5-7 дней у детей;
при контакте с больными в детских учреждениях, в домашних условиях;
при подозрении на коклюш и коклюшеподобные заболевания у сотрудников детских учреждений;  по эпидемиологическим показаниям.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Выявление возбудителя коклюша (Bordetella pertussis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в биоматериале.

Синонимы русские

Палочка коклюша, бактерия Борде – Жангу [полимеразная цепная реакция].

Синонимы английские

Whooping cough, B. pertussis, DNA [Polymerase chain reaction].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Bordetella pertussis (B. pertussis) – это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Риск заболеть наиболее высок у не вакцинированных АКДС детей и беременных женщин. Следует отметить, что прививка АКДС не обеспечивает стопроцентную защиту от заражения, так как иммунный ответ постепенно угасает в течение 1-3 лет после вакцинации. В этой связи подростки и взрослые, вакцинированные более чем 3 года назад и находившиеся в тесном контакте с больным коклюшом или носителем B. pertussis, также подвергаются риску заражения.

В клинической практике применяют несколько лабораторных тестов для диагностики коклюша: посев на питательную среду, метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в носоглоточном аспирате) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции и наиболее точно и быстро диагностировать коклюш.

Специфичность ПЦР достигает 100 %, что обусловлено использованием в реакции специфичной именно для B. pertussis пары праймеров. Положительный результат у пациента с признаками поражения респираторного тракта позволяет подтвердить диагноз "коклюш" и исключить наличие других бактериальных (в том числе паракоклюша) и вирусных заболеваний.

Исследование с помощью ПЦР характеризуется высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность бактериологического метода, ПИФ и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Следует, однако, заметить, что она зависит от клинической стадии заболевания, в которую был взят биоматериал, от возраста пациента и предшествующего лечения.

В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. ПЦР является предпочтительным методом идентификации возбудителя при подозрении на коклюш в катаральную и раннюю пароксизмальную стадию (около 4 недель после появления первых симптомов). В этот период чувствительность ПЦР максимальна и превосходит чувствительность бактериологического метода. По прошествии более 3-4 недель чувствительность ПЦР несколько снижается. Это имеет особое значение при диагностике заболевания у взрослых пациентов, которые, как правило, игнорируют первые симптомы болезни, характерные для катаральной стадии, и обращаются за помощью в более поздние сроки, в пароксизмальную стадию. При диагностике коклюша в позднюю пароксизмальную стадию и при выздоровлении наиболее точные результаты будут получены при комбинации серологических исследований (например, РНГА) и исследования с помощью ПЦР.

Также ПЦР оптимальна для диагностики коклюша у младенцев, хотя у детей старшего возраста, а также подростков и взрослых она характеризуется большим числом ложноотрицательных результатов. Так, ее чувствительность при взятии биоматериала в первые 10 дней болезни в возрастных группах до 1 года, 1-4 года и старше 5 лет составила 70, 50 и 10 % (для сравнения: чувствительность "золотого стандарта" диагностики коклюша - посева на питательную среду - в этот период не превышает 60 %). В качестве биоматериала для диагностики коклюша у младенцев предпочтителен носоглоточный аспират. У детей старшего возраста, подростков и взрослых берут мазки из носоглотки и зева. Использование тампона из кальция альгината в этом случае не рекомендуется.

В отличие от других лабораторных методов, точность ПЦР в меньшей степени зависит от приема антибактериальных препаратов. Так, чувствительность метода при взятии биоматериала на 4-й день лечения эритромицином составила 89 % (бактериологического посева – 56 %), на 7-й день – 56 % (посева – 0). Поэтому ПЦР чаще выбирают для выявления B. pertussis у пациентов в катаральной стадии заболевания, если биоматериал сдается на фоне начатого лечения. Результаты теста при сдаче биоматериала на фоне лечения в пароксизмальную стадию во многих случаях ложноотрицательные.

Исследование с помощью ПЦР с успехом применяется у вакцинированных АКДС пациентов. При этом идентификация B. pertussis в мазках этой группы может означать транзиторное носительство, но не активную инфекцию, поэтому результаты ПЦР рекомендуется оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде - Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

1. anti-Bordetella pertussis

Титр: 1:80 – условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Титр: Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

коклюш;
паракоклюш;
транзиторное носительство;
иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

отсутствие коклюша/паракоклюша;
неэффективная вакцинация против коклюша;
снижение иммунологического ответа после вакцинации;
ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
предшествующая вакцинация.

Важные замечания

При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Общая информация об исследовании

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Коклюш: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Определение

Коклюш – острое инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Bordetella, характеризующееся длительным приступообразным судорожным спазматическим кашлем, поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем.

Источником инфекции являются больные с типичными или атипичными формами заболевания. Больные с атипичными формами коклюша представляют особую опасность при тесном и длительном контакте (например, матери и ребенка). Путь передачи возбудителя — воздушно-капельный. Риск инфицирования для окружающих особенно велик в предсудорожном периоде заболевания и в начале периода судорожного (спазматического) кашля. К 25-му дню от начала коклюша больной, как правило, становится не заразен.

При отсутствии антибактериальной терапии риск передачи инфекции непривитому ребенку, находящемуся в тесном контакте, сохраняется до 7-й недели периода судорожного кашля.

Восприимчивость к коклюшу высока и составляет до 70,0–100,0% у непривитых детей первого года жизни. Особенно подвержены риску новорожденные и недоношенные дети.

Причины появления коклюша

Возбудитель коклюша – грамотрицательная гемолитическая палочка, неподвижная, необразующая капсул и спор, неустойчивая во внешней среде. Коклюшная палочка образует экзотоксин, имеющий основное значение в патогенезе заболевания и обладающий системным воздействием (гематологическим и иммуносупрессивным).

Коклюшные микробы через слизистую верхних дыхательных путей достигают бронхиол и альвеол. Бактериемия (наличие бактерий в крови) для больных коклюшем не характерна.

Классификация коклюша

Для клинической классификации коклюша используют единый принцип классификации инфекционных болезней у детей по типу, тяжести и течению.

По типу

Типичные.
Атипичные (наблюдаются, как правило, у взрослых и/или привитых пациентов):

абортивная;
стертая;
бессимптомная;
транзиторное бактерионосительство.

Легкая форма (приступы кашля 10-15 раз в сутки).
Среднетяжелая форма (приступы кашля (20-25 раз в сутки).
Тяжелая форма (приступы кашля до 50 и более раз в сутки).

выраженность симптомов кислородной недостаточности;
частота и характер приступов судорожного кашля;
состояние больного в межприступном периоде;
выраженность отечного синдрома;
наличие специфических и неспецифических осложнений;
выраженность гематологических изменений.

Гладкое.
Негладкое:

с осложнениями;
с наслоением вторичной инфекции;
с обострением хронических заболеваний.

коклюш, вызванный Bordetella pertussis;
коклюш, вызванный Bordetella parapertussis;
коклюш, вызванный другим возбудителем вида Bordetella;
коклюш неуточненный.

Клиническая картина заболевания начинает проявляться после двух недель с момента заражения. Выделяют несколько периодов развития.

Катаральный период проявляется частым сухим кашлем, усиливающимся в ночное время. Может наблюдаться повышение температуры тела до 37-37,5оС.

У маленьких детей катаральные явления выражены сильнее, так что начало заболевания может напоминать ОРВИ с обильными выделениями из носа.

Спазматический период коклюша характеризуется усилением и быстрым прогрессированием симптомов: непроизвольным приступообразным кашлем, свистящим шумным вдохом после окончания приступа, что свидетельствует о спазме голосовой щели во время приступа кашля; отеком и покраснением лица. После окончания приступа кашля в большинстве случаев начинается рвота или сплевывание вязкой слизи.

Дети старшего возраста говорят о наличии предвестников приступа: першении в горле, ощущении давления в груди, чувстве страха.

Диагностика коклюша

При сборе анамнеза следует целенаправленно выявить жалобу на кашель длительностью более 7-14 дней, с уточнением его характера, наличия контактов с больным коклюшем или длительно кашляющим (более 3-4 недель) человеком.

Всем пациентам с подозрением на коклюш рекомендован общий (клинический) анализ крови с исследованием лейкоцитарной формулы. При наличии лейкоцитоза клинический анализ крови необходимо выполнять в динамике.

Синонимы: Общий анализ крови, ОАК. Full blood count, FBC, Complete blood count (CBC) with differential white blood cell count (CBC with diff), Hemogram. Краткое описание исследования Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоформула, СОЭ См. также: Общий анализ – см. тест № 5, Лейкоцит.

Читайте также: