Что такое пиф анализ инфекции

Обновлено: 28.03.2024

Ведение. Урогенитальная хламидийная инфекция (УГХИ) вызываемая Chlamydia trachomatis является наиболее частой ИППП и протекает у мужчин обычно в форме уретрита, а у женщин в форме гнойно-серозного цервицита. Диагностика УХИ базируется на методах лабораторного исследования, поскольку клинические проявления носят неспецифический характер, и в значительном числе случаев инфекция протекает скрыто в субклинической форме, манифестируя уже на стадии развития осложнений.

Наиболее эффективными методами диагностики УГХИ в настоящее время во всем мире считаются методы амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), которые обладают высокой чувствительностью, специфичностью и возможностью автоматизации, благодаря чему возрастает объективность оценки результатов исследования и возможность анализа большого количества клинических образцов. В нашей стране среди МАНК наибольшее распространение получил метод ПЦР, на основе которого несколькими производителями выпускаются коммерческие тест-системы. Кроме того, впервые в зарубежной и отечественной практике в ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора была разработана и прошла Государственную регистрацию тест-система на основе реакции транскрипционной амплификации НАСБА с детекцией в реальном времени (Рег. удост. № ФС 012б2006/5664-06 от 28 декабря 2006г). Однако, наряду с МАНК по-прежнему, особенно в Российской Федерации, широко применяется метод прямой иммунофлуоресценции (ПИФ), который относительно прост в исполнении и не требует специального дорогостоящего оборудования. Недостатком метода является невысокая диагностическая чувствительность и специфичность, которые в значительной степени зависят от качества получения клинического материала и опыта лабораторного персонала.

На сегодняшний день вместо регламентированного алгоритма лабораторного обследования при диагностике УГХИ предлагается перечень существующих методов с указанием их диагностических характеристик [Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 2003; Соколовский Е.В., Савичева А.М., 2006; Дерматовенерология 2007 Клинические рекомендации]. В связи с этим некоторые отечественные руководства [Макарова О.В., Алешкина В.А., Савченко Т.Н., 2007] рекомендуют для увеличения достоверности результатов лабораторного исследования на УГХИ использовать одновременно два метода, не учитывая, что методы, различающиеся по аналитическим характеристикам, могут приводить к несовпадающим результатам и только увеличивать трудности окончательного диагноза.

Целью проведенного исследования стало изучение объективности результатов при диагностике УГХИ с использованием методов ПЦР и ПИФ.

Результаты. Положительные результаты выявления C.trachomatis методом ПИФ были получены у 44 пациентов, а методом ПЦР – у 32 пациентов. Однако совпадение результатов ПИФ и ПЦР было только в 8 случаях. Таблица 1.

Хламидийная инфекция вызывается Chlamydia trachomatis – грамотрицательной бактерией, принадлежащей семейству Chlamydiaceae. Вид Chlamydia trachomatis включает различные серовары, которые вызывают отдельные нозологические формы заболеваний. Сероваровы A, B, C вызывают трахому, L1, L2, L3 – венерическую лимфогранулему. Наибольшее распространение в странах Европы, Южной и Северной Америки и в России получили серовары D–K, которые передаются при половых контактах и вызывают урогенитальную хламидийную инфекцию (УХИ). Возможна перинатальная передача с развитием у новорожденных конъюнктивита или пневмонии. C.trachomatis имеет уникальный среди других возбудителей ИППП жизненный цикл. Инфицирование эпителиальных клеток происходит метаболически неактивными формами хламидий – элементарными тельцами (ЭТ). Внутри клеток ЭТ трансформирутся в ретикулярные тельца (РТ) – метаболически активные, делящиеся формы. Накопление внутри эпителиальных клеток новых генераций РТ и их параллельная трансформация обратно в ЭТ истощает ресурсы клеток хозяина, приводя их к гибели, высвобождению ЭТ и новому циклу инфицирования. Неосложненная хламидийная инфекция протекает у мужчин чаще всего в форме уретрита, у женщин – в форме слизисто-гнойного цервицита. Симптомы и проявления УХИ неспецифичны, для постановки диагноза УХИ необходимы лабораторные исследования для выявления возбудителя или его маркеров. Значительная часть случаев УХИ – от 40 до 60% протекает в бессимптомной или малосимптомной форме и проявляется уже на стадии осложнений. Основными осложнениями УХИ являются: эпидидимит, эндометрит, сальпингит, сальпингоофорит, внематочная беременность, трубное бесплодие, болезнь Рейтера.

Показания к назначению лабораторных исследований. У мужчин: наличие симптомов и клинических проявлений уретрита, эпидидимита или эпидидимоорхита; у лиц, практикующих аногенитальные контакты – проктита; при физикальном осмотре – наличие выделений из уретры.

У женщин: наличие симптомов воспалительного процесса в нижних отделах урогенитального тракта и органах малого таза, боли в низу живота, патологические выделения из влагалища; наличие слизистых или слизисто-гнойных выделений из цервикального канала, нарушение менструального цикла, болезненность при половых контактах; подготовка к хирургическому вмешательству на органах малого таза; подготовка к беременности, отягощенный акушерско-гинекологический анамнез, связанный с инфекционной патологией.

У лиц обоего пола без симптомов и признаков воспалительного процесса урогенитального тракта: наличие перечисленных выше симптомов и признаков или установленная УХИ у полового партнера; в возрастной группе до 25 лет – многочисленные половые партнеры или половые контакты с новым половым партнером без барьерной контрацепции.

Дифференциальная диагностика. Гонорея, урогенитальный трихомониаз, инфекция, вызванная M.genitalium.

Этиологическая диагностика включает визуальное обнаружение C.trachomatis, выделение культуры C.trachomatis, выявление АГ, ДНК и РНК C.trachomatis и АТ к микроорганизму.

Материал для исследований

  • Мазки/соскобы со слизистых оболочек цервикального канала и уретры женщин – микроскопические исследования, культуральные исследования, выявление АГ, обнаружение ДНК, РНК;
  • мазки/соскобы со слизистой влагалища, мазки (соскобы) со слизистой прямой кишки – выявление ДНК, РНК;
  • мазки/соскобы с конъюнктивы глаз – культуральные исследования, выявление ДНК;
  • моча (у мужчин) – выявление ДНК;
  • сыворотка крови – выявление АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики. Для визуального выявления C.trachomatis возможно применение световой или люминесцентной микроскопии. При применении световой микроскопии используется фиксированный препарат биологического материала, окрашенный по Романовскому- Гимзе, в котором выявляют измененные клетки цилиндрического эпителия, содержащие ЭТ и РТ C.trachomatis, получившие название телец ГальберштедтераПровачека. Диагностическая чувствительность исследования не превышает 10%. Распространенным приемом выявления хламидий является определение АГ микроорганизма методом ПИФ. С помощью люминесцентной микроскопии в препарате, обработанном флуоресцентно-меченными АТ к хламидиям, по характерному свечению обнаруживаются ЭТ C.trachomatis. Микроскопические исследования, в первую очередь ПИФ, достаточно просты в исполнении и не требует дорогостоящего оборудования, однако весьма требовательны к качеству полученного биологического материала, технике нанесения препарата на стекло и специфичности используемых АТ. Материал для выполнения ПИФ должен содержать достаточное количество клеток цилиндрического эпителия, его получают из цервикального канала (по показаниям – из уретры) и у мужчин из передней уретры. Для интерпретации результата необходимо наличие в препарате не менее 5–10 клеток цилиндрического эпителия (отражает качество получения биоматериала) в поле зрения и не менее 10 флуоресцирующих ЭТ. Диагностическая чувствительность метода ПИФ варьирует в широких пределах – от 10 до 65%. Максимальная чувствительность и специфичность метода отмечена у пациентов с клиническими проявлениями инфекции и высокой бактериальной нагрузкой, минимальная – при бессимптомных или малосимптомных формах.

Для выявления АГ C.trachomatis за рубежом был разработан ряд тестов на основе ИФА. Диагностическая чувствительность выявления АГ C.trachomatis находится в пределах 55–78%. Указанные тесты получили широкое распространение в зарубежной лабораторной практике, однако в РФ не применяются.

Для выявления ДНК C.trachomatis в РФ используют преимущественно ПЦР с различными вариантами детекции продуктов реакции и метод выявления РНК C.trachomatis на основе НАСБА. Диагностическая чувствительность метода ПЦР для диагностики УХИ находится в пределах от 90 до 98%, специфичность достигает 96–98%. Диагностическая чувствительность метода НАСБА достигает 98%, диагностическая специфичность – до 100%.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Микроскопическое исследование препаратов с окраской по Романовскому-Гимзе в настоящее время не используется и не рекомендуется для диагностики УХИ. В то же время, всем пациентам с симптомами и клиническими проявлениями урогенитальной инфекции показано микроскопическое исследование с окраской по Граму для установления лабораторных признаков воспаления (повышенное содержание ПМЯЛ).

Применение метода ПИФ целесообразно в качестве метода быстрой диагностики при наличии у пациентов выраженных проявлений инфекционно-воспалительного процесса в урогенитальном тракте при условии соблюдения всех требований получения биологического материала. Метод не подходит для скрининга, диагностики хронических форм хламидийной инфекции, контроля лечения и исследования образцов мочи и слизистой влагалища, прямой кишки, ротоглотки.

С учетом того, что для проведения культурального исследования необходима технология ведения эукариотических клеточных линий и соответствующие для этого лабораторные условия, то применение метода в рутинной лабораторной практике ограничено. Метод в первую очередь имеет большое значение в научных исследованиях, когда требуется выделить живой возбудитель для его дальнейшего изучения.

Определение АТ к C.trachomatis может быть использовано для эпидемиологических исследований, с целью интегральной оценки доли лиц в популяции, контактировавшей с C.trachomatis. В клинической практике определение АТ показано при ретроспективном анализе возможной хламидийной этиологии при бесплодии, длительных хронических воспалительных процессах урогенитального тракта. Однако и в этом случае положительные результаты обнаружения АТ должны рассматриваться в контексте других клинических, анамнестических и лабораторных данных.

В настоящее время выявление ДНК методом ПЦР считаются основой лабораторной диагностики УХИ. Исследование показано и для контроля результатов лечения. При использовании метода ПЦР с учетом скорости элиминации ДНК C.trachomatis контроль лечения необходимо проводить не ранее 3–4 недель. РНК возбудителя является более ранним маркером ответа на терапию, поэтому с помощью метода НАСБА можно оценивать эффективность лечения через 1–2 недели после окончания курса.

Особенности интерпретация результатов лабораторных исследований. Результаты, полученные методом ПИФ, рекомендуется подтверждать с помощью культурального или молекулярно-биологических методов.

Положительные результаты культурального исследования не требуют дополнительного подтверждения и означают наличие инфекции. Отрицательный результат означает как отсутствие возбудителя, так и может свидетельствовать о неоптимальных условиях для его культивирования.

При обнаружении ДНК C.trachomatis у пациентов с клинической симптоматикой урогенитальной инфекции или наличии факторов, способствующих инфицированию, дополнительного исследования не требуется, диагноз урогенитальной инфекции считается установленным. У пациентов, у которых обнаружена ДНК C.trachomatis, но отсутствуют субъективные и объективные признаки инфекционно- воспалительного заболевания и факторы риска, для подтверждения диагноза рекомендуется провести исследование для выявления РНК C.trachomatis методом НАСБА. Наличие ДНК и РНК патогена является объективным лабораторным признаком инфекции.

При оценке результатов выявления АТ следует учитывать, что их наличие или отсутствие не отражает наличие или отсутствие инфекции в данный момент времени.

Обычно мазок окрашивается 1% метиленовым синим или используется методика окраски по Грамму. Данный метод даёт возможность обнаружить такие половые инфекции как трихомонады, гонококки, гарднереллы, грибки. Однако есть определённые сложности диагностики хронических форм трихомониаза и гонореи этим методом. Чувствительность этого метода не превышает 40% в отношении выявления трихомонад и гонококков. Важность микроскопии заключается в том, что есть возможность по количеству лейкоцитов, обнаруженных в мазках, говорить о наличии обострения воспалительного процесса в половых путях и предполагать наличие инфекции. В то же время при хронических формах половых инфекций в стадии неактивного течения обычные мазки могут быть совершенно нормальными, без повышения лейкоцитов и изменения флоры.

Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ)

Метод основан на окраске мазка моноклональными антителами, которые соединяются с той инфекцией, на которую проводится исследование и в результате флюоресцирующий микроб визуализируется в люминесцентном микроскопе. Данный метод применим для диагностики таких инфекций как хламидии, уреаплазмы, микоплазмы, которые не видны при обычном исследовании в микроскопе. Также этот метод на сегодняшнее время является самым чувствительным по выявлению трихомонадной инфекции. Метод даёт возможность обнаружить нетипичные формы трихомонад, которые не выявляются лаборантами при обычной микроскопии. Чувствительность ПИФ диагностики достаточно высокая — 70–80%.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Метод основан на выявлении ДНК различных инфекций и позволяет с высокой достоверностью выявлять такие инфекции как: вирусы, уреаплазмы, микоплазмы, гарднереллы, грибки. К сожалению, обнаружить трихомонаду или гонококк методом ПЦР получается крайне редко, обычно чувствительность в отношении этих инфекций не более 2–5%.

Культуральный метод исследования

Основан на выращивании микроорганизмов в специальных средах. За счёт сложности и длительности исполнения метод применяется достаточно редко. Не всегда бактериологические лаборатории снабжены средами для выращивания половых инфекций. А так же имеет большое значение качество сред, используемых для анализа. Поэтому чаще всего мы сталкиваемся с низкой чувствительностью этого метода для выявления хронических форм половых инфекций.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Если ПИФ, ПЦР, обычная микроскопия и культуральный методы дают возможность обнаружить непосредственно инфекцию в мазках или моче, метод ИФА даёт возможность обнаружить антитела в крови, которые появляются при наличии инфекции в организме. Антитела — это иммунные белки, которые организм вырабатывает в ответ на внедрение в организм инфекции. Антитела специфичны к каждой инфекции и дают возможность ставить диагноз определённой половой инфекции с высокой долей вероятности. Но и у этого метода есть свои недостатки. Дело в том, что не всегда человеческий организм формирует антитела на инфекцию, обитающую в организме. Чаще всего формирование антител происходит на уреаплазмы, микоплазмы и хламидии, а так же вирусы. К трихомонадам антитела формируются редко, так как трихомонады способны к своей поверхности прикреплять белки организма человека и не обнаруживаются иммунитетом человека. К гонококкам антитела практически не формируются. В то же время, если происходит обнаружение антител к инфекциям методом ИФА, можно говорить о высокой вероятности присутствия инфекции в организме. Длительность выведения антител из организма после лечения инфекции различная для разных инфекций. Для уреаплазм, микоплазм и хламидий мы можем ожидать выведение антител через 2 месяца.

Какой метод диагностики выбрать?

Учитывая, что каждый метод диагностики имеет свои достоинства и недостатки и не является на 100% информативным, рекомендовано проведение диагностики половых инфекций одновременно несколькими методами. Поэтому обычно используют для диагностики метод ИФА, микроскопическое исследование мазка, для обнаружения уреаплазм, микоплазм, хламидий — ПЦР или/и ПИФ метод, для обнаружения трихомонады — метод ПИФ.

Как сдаются анализы?

Мазок для исследования методами микроскопии, ПИФ и ПЦР берётся из мочеиспускательного канала у мужчин и из мочеиспускательного канала, цервикального канала и влагалища у женщин. Перед сдачей мазков нужно не мочиться, чтобы в уретре была слизь, которая понадобится для исследования. Так как хламидии, уреаплазмы и микоплазмы являются внутриклеточными обитателями, то для исследования необходимо получить соскоб эпителия, что выполняется специальной уретральной щёточкой. В зависимости от локализации инфекции материал может браться из конъюнктивальной полости, а также для исследования методом ПЦР может использоваться первая порция мочи и сперма.

Кровь для исследования на антитела методом ИФА сдаётся из вены на голодный желудок.

Как увеличить эффективность диагностики половых инфекций?

Если у пациента половая инфекция находится в неактивной фазе заболевания, то её концентрация на слизистых оболочках небольшая и, следовательно, ни один из методов диагностики может не обнаружить инфекцию.

Поэтому в медицине с давних времён для обнаружения хронических форм половых инфекций, особенно трихомонад и гонококков, использовали провокации. Самыми эффективными являются провокации с использованием внутримышечного введения пирогенала или гоновакцины, а так же местные провокации с использованием нитрата серебра. При провокации инфекция активно выходит на слизистые оболочки и становится обнаружима при исследовании в течение 3 дней. Поэтому через сутки после проведения провокации в течение 3 дней берутся мазки для исследования методами микроскопии и ПИФ. Большое значение имеет увеличение в мазках лейкоцитов при проведении провокации, что может быть косвенным признаком наличия воспалительного процесса.

Расхождение между результатами

По ряду причин результаты методов могут не совпадать.

ПЦР и/или ПИФ положительные, а ИФА отрицательный. Такая картина наблюдается, если у пациента имеется половая инфекция, но организмом не формируется иммунный ответ в виде антител. Чаще такое случается при длительных хронических формах инфекции, когда организм свыкся с инфекцией и перестал формировать достаточное для диагностики количество антител.

ПЦР и/или ПИФ отрицательные, а ИФА положительный. Такая картина может наблюдаться, если процесс неактивный, и количество микробных тел в местах взятия мазков не очень велико, но в то же время идёт формирование антител. Возможность формирования антител и уровень титра зависит от вирулентности возбудителя и от особенности иммунной системы пациента. Так же титр антител может сохраняться в крови после лечения в течение определённого срока для каждой инфекции.

Так как все методы в небольшом количестве случаев имеют вероятность ложноположительных результатов, то диагноз является достоверным, если инфекция подтверждена, например, двумя методами. Но не всегда есть возможность подтвердить инфекцию другим методом в силу особенностей вышеперечисленных методов диагностики. Поэтому перед принятием решения о лечении учитываются такие факторы как: лечение этой же инфекции ранее, наличие инфекции у полового партнёра, наличие воспалительного процесса при обнаружении инфекции

Особенности течения половых инфекций

Необходимо понимать, что медицинские обследования, которые проводятся гинекологами и урологами не включают специальное обследование на половые инфекции. Задача на медицинских осмотрах — выявить по мазкам острые формы гонореи и трихомониаза, опасные в эпидемиологическом плане. Хронические же формы инфекции чаще остаются незамеченными.

Показания для обследования на инфекции, передающиеся половым путём, формируются при наличии воспалительного процесса в половых путях, повышении лейкоцитов в мазках, планировании беременности или беременности.

Часто половые инфекции протекают на фоне совершенно нормальных мазков и их проявление — это развитие хронического простатита, хронического эпидидимита, хронического цистита Либо носители половых инфекций вообще не имеют отклонений со стороны мочеполовых органов.

Как поступить с половым партнёром?

Если у пациента с воспалительными заболеваниями малого таза не выявлена половая инфекция, на обследование для взятия анализов на инфекции приглашают полового партнёра. В ряде случаев обнаружение инфекции у партнёра даёт возможность адекватно пролечить семейную пару от половых инфекций и тем самым значительно улучшить эффективность и сократить сроки лечения.

В отношении инфекций, передающихся половым путём, существуют стандарты лечения полового партнёра, причем независимо выявлена или нет у него данная инфекция. Практика показывает, что отсутствие лечения полового партнёра приводит в дальнейшем к рецидиву заболевания.

Относительно уреаплаз и микоплаз в настоящий момент нет рекомендаций по обязательному лечению. Поэтому решение вопроса принимается врачом индивидуально с учётом активности воспалительного процесса, сопутствующей патологии, детородного периода

Практика, однако, показывает, что совместное лечение уреаплазмоза и микоплазмоза у обоих половых партнёров ведёт к лучшему результату лечения воспалительных процессов малого таза, несмотря на клинические рекомендации.

Обратите внимание на трихомонаду!

Важно отметить, что выявление хламидиоза, уреаплазмоза и микоплазмоза, не является сложной задачей. В то же время выявление трихомониаза, который по статистике встречается в 60–80% случаев при воспалительных заболеваниях малого таза, достаточно сложная задача. Это объясняется тем, что при хронических заболеваниях малого таза мы сталкиваемся с особенным течением трихомониаза: полиморфность простейшей; низкая концентрация микроорганизмов на слизистой уретры и влагалища; недостаточная чувствительность методов существующей диагностики. Трихомонада является резервуаром накопления для хламидий, уреаплазм, микоплазм и гонококков, способствует устойчивости этих внутриклеточных инфекций и увеличивает вероятность их передачи во время полового акта от одного партнёра к другому. Так же трихомонада защищает внутриклеточные инфекции от иммунной системы человека и антибиотиков. Именно с трихомониазом может быть связана неэффективность лечения гонореи, хламидиоза, уреамикоплазмоза, а так же хронизация данных инфекций в организме.

Кроме того, можно столкнуться с первичным выявлением микроорганизмов после лечения трихомониаза, что тоже объясняется накоплением гонококков, хламидий и уреамикоплазм в трихомонадах и высвобождение их после гибели трихомонады.

Как узнать, что инфекция вылечена?

Диагностику излеченности половых инфекций рекомендуется проводить трёхкратно и желательно с провокацией. Таким образом, уменьшается вероятность того, что половая инфекция осталась в организме в скрытой форме.

Обычно первый анализ на излеченность трихомониаза и гонореи берется через 10 дней после лечения, на хламидии, уреаплазмы, микоплазмы через 1–1,5 месяца. Сроки зависят от особенностей элиминации микроорганизмов и специфических антител из организма. Последующие два обследования проводится раз в 3–4 недели.

Учитывая особенности проводимых методов диагностики и особенность трактования результатов, рекомендовано проводить обследование на половые инфекции под контролем врача, а не самостоятельно. В этом случае, врач берёт на себя ответственность за правильно проведённую диагностику и анализ полученных данных. А так же вы сможете получить подробное разъяснение по поводу полученных результатов. Получив нужную информацию относительно вашего заболевания, вы сможете сформировать правильное отношение к заболеванию. Так же немаловажно провести адекватное лечение современными препаратами с учётом ваших особенностей организма и переносимости лечения.


Хотите читать всё самое интересное о красоте и здоровье, подпишитесь на рассылку!

Методы диагностики инфекционных заболеваний делятся на две категории: выявление непосредственно самих возбудителей инфекций (бактерии и вирусы) и выявление антител к ним. К первому типу относятся микробиологические исследования и молекулярная диагностика, ко второму - серологические и иммунохимические исследования.

Бактериоскопический метод (мазок на инфекции)


Мазок (бактериоскопический метод) - самый распространенный метод лабораторной диагностики.

При бактериоскопическом методе анализ выполняется с помощью светового микроскопа. Исследуемый материал вносят в каплю физраствора, тщательно размешивают и распределяют по стеклу. Должно наступить хорошее окрашивание частей клеток и бактерий в разные цвета, чтобы оценить состав выделений из уретры, влагалища и шейки матки.

Анализ соскоба из уретры или влагалища в гинекологии позволяет определить: - количество лейкоцитов (их повышение говорит об инфекции, но у здоровых женщин небольшое число лейкоцитов присутствует во флоре); - количество эритроцитов (основной показатель воспалительного процесса при повышенном количестве); -состав флоры (у женщин он зависит от менструального цикла, но активность клеток говорит о нарушении микрофлоры); - наличие трихомонады, гонококков, грибка – основная цель для выявления возбудителя инфекций; - наличие лактобацилл (их отсутствие говорит о нарушенной микрофлоре). Также мазок определяет степень чистоты влагалища женщины: 1 и 2 степень – характерна для здоровой флоры, а 3 и 4 – выявляет кольпит, воспаление.

Преимущества данного метода состоят в простоте, доступности и быстроте получения результатов (30 - 60 мин и менее). Однако чувствительность данного метода ограничена (около 105 бактерий в 1 мл). Практически не определяются в урогенитальном мазке вирусы, хламидии, микоплазмы и уреаплазмы, и одних только результатов мазка часто бывает недостаточно для постановки диагноза. Для диагностики этих инфекций рекомендуется использовать методы ПЦР-диагностики и ИФА-исследований. Результаты мазка обычно можно использовать как ориентировочные.

Перед сдачей мазка лучше воздержаться от мочеиспускания.

Бактериологический метод (бакпосев)


Бакпосев – метод диагностики ЗППП путем выращивания микробов в благоприятной для этого среде. Он является золотым стандартом в определении инфекций, поскольку выявляет не только вирус, но и его активность. Преимуществом данного метода является возможность не только выявить бактерию, но и возможность получить антибиотикограмму, на основе которой врач назначает точное лечение. Наиболее часто бакпосев используют для диагностики уреаплазмоза, микопламзоза, трихомониаза, хламидиоза, различных форм кандидоза.

Правила сдачи анализа на бакпосев:

  • за сутки не спринцеваться, не пользоваться вагинальными свечами;
  • за сутки до анализа воздержаться от половых контактов;
  • за неделю прекратить прием антибиотиков;
  • не опорожнять мочевой пузырь за 1,5-2 часа.


ПЦР-диагностика, или полимеразная цепная реакция, направлена на определение специфической нуклеотидной последовательности участка ДНК возбудителя инфекции внутри клетки, чего нельзя добиться при мазке или бакпосеве. ПЦР-анализ часто используется для выявления: хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, гениального герпеса, гонореи, трихомониаза. ДНК-диагностика незаменима для выявления вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции. Данный метод способен выявить возбудителя даже на стадии инкубационного периода, однако он не дает представления об активности вируса, как это дает ИФА. Кроме того, ПЦР может не выявить генитальный герпес и цитомегаловирус в соскобе с влагалища, если вирус находится в "спячке" - для выявления данных инфекций рекомендуется использовать метод иммуноферментного анализа. Правила сдачи материала на ПЦР-диагностику такие же, как при бакпосеве.

ПЦР - наиболее точный и современный метод диагностики. Проведенная в нескольких зарубежных исследо­вательских центрах суммированная оценка чувствительности различных методов диагностики показала, что "быстрые" или экспресс-тесты имеют чувствитель­ность 40-60%, ИФА - 50-70%, прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) - 55-75%, культуральное исследова­ние - 60-80%, а ПЦР от 90 до 100%.


ПИФ предусматривает прямое выявление антигенов хламидий.

ПИФ-метод является важнейшим скриниговым методом диагностики урогенитального хламидиоза.

Показания к назначению анализа:

  • Острая фаза заболевания.
  • Хроническая фаза заболевания.
  • Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.
  • Беременность при отягощённом акушерском анамнезе.
  • Бесплодие неясного генеза.

Подготовка к исследованию: У женщин взятие биологического материала лучше всего проводить не ранее чем через 14 дней после менструации. Перед взятием материала пациентам рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.

Материал для исследования: соскоб из уретры или цервикального канала, осадок мочи, секрет предстательной железы.

Недостатком данного метода является частота ложноположительных результатов на хламидиоз. При использовании метода прямой иммунофлюоресценции ложноположительный диагноз урогенитального хламидиоза ставится у 36% пациентов. В зарубежной практике установленный по ПИФ диагноз принято подтверждать с помощью культурального исследования.


Иммуноферментный анализ нацелен на выявление антител в крови. Соответственно, чем больше титр, тем больше антител к тому или иному инфекционному заболеванию. IgG – антитела говорят о перенесенном в прошлом инфекционном заболевании, а IgМ – антитела говорят о наличии острого инфекционного процесса. ИФА позволяет диагностировать:

Метод прямой иммунофлюоресценции представляет собой способ непосредственного выявления антигенов хламидий. Люминесцентная микроскопия определяет хламидийные включения как образования в клетках эпителия с желто-зеленой, либо зеленой флюоресценцией на фоне коричнево-оранжевой цитоплазмы клеток. Включения имеют гомогенную, зернистую, либо смешанную структуру.

Прямая иммунофлюоресценция применяется в случаях: острой фазы заболевания; хронической фазы заболевания; установления этиологии инфекционных хронических процессов урогенитального тракта; беременности, отягощенной акушерским анамнезом; бесплодия неопределенного генеза.


Рис. 1. Прямая иммунофлюоресценция. Прямой метод предполагает использование помеченных флюоресцирующим красителем AT к интересующему Аг; AT взаимодействуют с Аг в местах их локализации, что и позволяет визуализировать метка.

Информативная способность прямой иммунофлюоресценции заключается в выявлении не только корпускулярных, но и растворимых антигенов хламидий. Данный метод работает вне зависимости от вероятных изменений тинкториальных особенностей микроорганизмов при заболевании и при лечении. Метод прямой иммунофлюоресценции является основным скрининговым методом диагностирования урогенитального хламидиоза. Его специфичность и чувствительность составляет 65-90% или 85-90% в случаях применения моноклональных антител. Оценивая результаты, следует иметь в виду, что в качестве положительных итогов теста оценивается исключительно показатель флюоресценции внутриклеточных включений, если использовались поликлональные антихламидийные антитела.

В случае использования моноклональных антител результаты считаются положительными, если в поле зрения присутствуют 10 ЭТ (элементарных телец), либо хотя бы одно внутриклеточное включение. Подготовка соскобных препаратов такая же, как и при цитоскопических исследованиях. Моноклональные антитела можно отличить одно от другого по неизменности обнаруживаемых форм ЭТ, яркости флюоресценции и уровню специфичности. При диагностировании описанным методом хламидий используют люминесцентный микроскоп.

Специалисты сходятся во мнении, что метод прямой иммунофлюоресценции отвечает требованиям высокой специфичности и чувствительности, однако при этом серьезно возрастают критерии компетенции лабораторных работников. Достаточно высокий уровень экспертной оценки методом прямой иммунофлюоресценции доступным бывает далеко не всегда, отчего усредненный показатель его чувствительности недостаточно высок. В случаях определения малого количества ЭТ метод не гарантирует необходимой чувствительности, что приводит иногда к ложноотрицательным результатам.

К непрямому методу иммунофлюоресценции прибегают в случаях, когда отсутствует ФИТЦ-конъюгат антихламидийных антител. В таких ситуациях подготовленный из клинических проб тем же способом, что и для прямой иммунофлюоресценции, препарат сначала обрабатывают антихламидийными антителами, которые получают методом иммунизации хламидиями кроликов, мышей, овец, либо других животных а потом – специфичной для данного, иммунизированного хламидиями, животного второй сывороткой. Антитела последней сыворотки являются конъюгированными с ФИТЦ. Специфичность и показания к использованию описанного метода сопоставимы с методом прямой иммунофлюоресценции.

Говоря о методах иммуноферментного анализа, следует отметить, что основаны они на выявлении растворимого антигена хламидии в предоставленных на исследование пробах. В клинической практике используются, преимущественно, наборы реагентов, образованные методом твердофазных ИФА-анализов для установления антигенов хламидий. Амплификации достигают, используя методы полимерной конъюгации, следствием чего является фиксация, когда для каждого связанного участка антигена определяется полимерная группа с высокомолекулярной составляющей.

Вследствие применения метода фермент-амплификации положительная проба приобретает желто-оранжевую окраску, интенсивность которой пропорциональна численности антигена хламидии. Точные результаты исследования определяются при помощи вычислительной техники.

Читайте также: