Что такое провирусная днк вич
Обновлено: 18.04.2024
Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.
Суть этого метода звучит в самом названии.
Поначалу исторический экскурс.
Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.
Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.
Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.
Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.
Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.
Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.
В случае с ВИЧ это РНК.
И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).
Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).
По прошествии нескольких часов число фрагментов – несколько миллиардов.
Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.
Метод силен своей универсальностью.
Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.
ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).
Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.
У метода очень высокая чувствительность и оперативность.
Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.
Инкубационный период не мешает проведению исследования.
Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.
К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.
Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.
Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.
А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.
Когда делают ПЦР на ВИЧ
От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.
Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.
Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.
Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.
ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.
Праймеры – это специальные реагенты.
Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.
Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.
Его делают не всегда, а в особых случаях.
И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.
Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.
По истечении пяти дней после предполагаемого заражения - 80%.
Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.
Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.
Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.
Важно знать диагноз как можно раньше.
ПЦР анализ на ВИЧ
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич
Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.
Ленкиным Сергеем Геннадьевичем
| Наименование | Срок | Цена |
|---|---|---|
| Прием венеролога | 900.00 руб. | |
| ДНК ВИЧ (кровь) | 5 д. | 3450.00 руб. |
Как делают
Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:
- исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
- исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции
Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.
По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% - 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.
Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.
ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.
То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.
Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.
Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.
Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:
- новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
- наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции
Все остальные условия являются необязательными.
Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.
Берется венозная кровь и проводится анализ.
Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.
Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.
Для этого нужна очень чистая лаборатория.
При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.
Для этого используют референц-лабораторию.
Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.
К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.
Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.
Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.
Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.
Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.
Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.
До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.
Те ли препараты назначают или нужно другие.
Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.
Результаты анализов
Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.
Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.
Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.
Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:
- при резкой потере веса
- при длительной диарее (около 3-х недель)
- при лихорадке невыясненной этиологии
- при росте лимфоузлов в разных местах
- при лимфо- и лейкопении
- при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях
Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.
Какой бы ни был результат - это не повод заниматься лечением самостоятельно.
К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.
Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.
Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.
Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.
Расшифровка результатов:
- РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
- мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
- 20 – 10 6 копий/мл
- более чем 10 6 копий/мл
Самый опасный третий и четвертый результат.
Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный
Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.
Это занимает период от двух до десяти дней.
Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.
Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.
Но даже положительный результат не окончательный.
Пересдача крови на анализ тоже делается.
На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.
Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.
При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.
При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.
Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.
Даже положительный результат остается тайной.
Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.
Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.
В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.
Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.
Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции
ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.
Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.
Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.
Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.
Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.
С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.
Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.
Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.
Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.
Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).
Еще важна и скорость ПЦР анализа.
Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.
Но есть у метода и негативные качества.
Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.
Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.
Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.
Хотя сам метод очень чувствительный.
Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.
А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.
Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.
На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.
Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.
Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.
Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.
Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.
Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.
Научно-диагностический центр лабораторных технологий
Телефоны для справок:
Личный кабинет клиента
В корзине пусто!
ВИЧ– подтверждающий тест (HIVAg+Ab)
Подготовка к исследованию
Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.
Показания к исследованию
Анализ используется для ранней диагностики ВИЧ, что позволяет предотвратить дальнейшую передачу вируса другим людям, а также своевременно начать антиретровирусную терапию и лечение заболеваний, способствующих прогрессированию ВИЧ-инфекции.
Интерпретация
Референсные значения - отрицательно
Причины отрицательного результата:
отсутствие ВИЧ,
период серонегативного окна (ни антиген, ни антитела еще не выработались в достаточном количестве, необходимом для определения тест-системой).
Причины положительного результата:
инфицирование ВИЧ.
На результаты могут влиять
Анализы первого и третьего поколений могли давать ложноположительный результат, если в крови обследуемого присутствовали антитела к вирусу Эпштейна – Барр, ревматоидному фактору, главному комплексу гистосовместимости HLA. Однако вероятность ложноположительного результата при комбинированном тесте практически исключена. В случае положительного результата тестирования проводится подтверждающий анализ с использованием метода иммуноблотинга (тест на антитела к ряду специфических белков вируса).
Назначается в комплексе с
Общий анализ крови развернутый
HIV РНК ПЦР в плазме крови, качественный
HIV РНК ПЦР в плазме крови, количественный
HIV ПЦР провирусная ДНК в мононуклеарах
+(998 71) 256-09-19
c 08:00 до 18:00, Пн-Пт
c 08:00 до 16:00, Сб
Human immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита человека, ВИЧ, HIV) – лентивирус (вирус с медленной репликацией), который вызывает синдром приобретенного иммунодефицита. СПИД – заболевание, при котором иммунная система человека не в состоянии защитить организм от жизненно опасных оппортунистических инфекций и онкологических заболеваний. ВИЧ поражает Т-лимфоциты, встраивая участок вирусной ДНК в геном инфицированного.
Пути передачи инфекции – половой, при переливании крови, от зараженной матери к новорожденному. Вирус присутствует в крови, эякуляте (сперме), преэякуляте, вагинальных выделениях, грудном молоке.
Латентная стадия, при которой HIV не вызывает никаких симптомов, при отсутствии лечения может длиться от трех до 20 лет (в среднем около 8 лет). Без получения антиретровирусной терапии у 50% инфицированных ВИЧ-инфекция переходит в СПИД через 10 лет после заражения. Смерть наступает от оппортунистических (проявляющихся при снижении иммунитета) инфекций или злокачественных заболеваний.
Определение ДНК провируса Human immunodeficiency virus методом ПЦР имеет меньшую чувствительность, чем ИФА метод, исследующий антитела к ВИЧ. Обнаружение ДНК провируса в крови дает возможность диагностировать заболевание в период серологического окна, когда антитела еще не появились в сыворотке.
Кроме того, с помощью этой методики предоставляется единственная возможность ранней диагностики ВИЧ-инфекции у новорожденных от ВИЧ-позитивных матерей. ИФА-диагностика не применяется, потому что в крови младенцев обязательно присутствуют антитела к Human immunodeficiency virus вследствие болезни матери. Элиминация (выведение) иммуноглобулинов происходит только через 6-18 месяцев.
Исследование на наличие ВИЧ-инфекции может проводиться анонимно и конфиденциально. При конфиденциальном обследовании в обязательном порядке необходимо предъявление паспорта.
Не менее 4 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа. Не курить в течение 30 минут до исследования. . Положительные/сомнительные результат ВИЧ отправляются на исследование в СПИД Центр. В этом случае выдача результата задерживается до 7-10 дней.
| Биологический материал | кровь (ЭДТА) |
|---|---|
| Метод исследования | ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR)_x000D_ |
| Срок исполнения без учета времени на доставку до лаборатории, дней | от 2 до 7 календарных дней |
| Формат результата, единицы измерения | качественный |
В норме результат анализа отрицательный, то есть ДНК провируса Human immunodeficiency virus-1 в крови не обнаружена.
В основе метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) лежит уникальное свойство НК (как ДНК, так и РНК) - способность к саморепродукции, которая воспроизводится искусственно in vitro. При этом синтезируются только строго специфические фрагменты НК.
Этиологическим фактором ВИЧ-инфекции являются вирусы HIV-1 и HIV-2 (от англ. Human Immunodeficiency Viruses) из семейства Retroviridae. Патогенез ВИЧ-инфекции заключен в инфицировании вирусом клеток с фенотипом CD-4, присущий Т-лимфоцитам хелперам и некоторым другим клеткам организма человека. Прямое цитопатическое воздействие, оказываемое вирусом иммунодефицита на указанные клетки, в конечном итоге приводит к летальному исходу за счет активации оппортунистических инфекций или развития опухолей.
серологическая диагностика маркеров вируса методами иммуноферментного анализа и иммуноблотинга, заключающаяся в определении в сыворотки крови антигенов и антител против ВИЧ.
исследование иммунного статуса (количественная оценка CD-4 лимфоцитов), которая наиболее адекватно осуществляется методом проточной цитофлюориметрии.
Особо необходимо отметить значение ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции у детей первого года жизни. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции у детей этого возраста в принципе невозможна без применения ПЦР. Это обусловлено тем, что ребёнок, родившийся от ВИЧ-инфицированной матери обязательно имеет антитела к вирусу иммунодефицита. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированного ребёнка данные антитела элиминируются под влиянием собственной иммунной системой к возрасту 6-9 месяцев, хотя в отдельных случаях могут циркулировать до 18 месяцев жизни, но не более этого срока.
Необходимо отметить, что обследование методом ПЦР имеет смысл только при полном отказе от грудного вскармливания ребёнка ВИЧ-позитивной матерью с момента рождения, т.к. риск заражения довольно высок и составляет около 5%.
Таким образом, ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику ВИЧ-статуса у детей раннего возраста. Так, если имеет место положительный результат ПЦР на НК вируса иммунодефицита в первые 48 часов жизни, то ВИЧ-инфицирование произошло in utero. Если имеет место отрицательный результат ПЦР в первые 48 часов, но становится положительным в возрасте 7 – 14 дней жизни, то инфицирование произошло intrapartum.
В настоящее время ПЦР позволяет осуществлять не только диагностику, но и мониторинг лечения ВИЧ-инфекции путем определения концентрации РНК в плазме, а также выявления резистентных к химиотерапии штаммов вируса иммунодефицита. Определение “вирусной нагрузки” в плазме крови является наилучшим прогностическим критерием течения ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.
Теоретическое преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, когда антител еще может не быть. Однако, она пока не всегда может выявлять инфицированных в более позднем периоде инфекции. Это в будущем, возможно, будет иметь значение и при попытке диагностики ВИЧ-инфекции у лиц, получающих противоретровирусную терапию, когда уровень ВИЧ в крови значительно снижается. Совместное использование двух методик, которое могло бы быть выходом из создавшейся ситуации - ИФА и ПЦР, к сожалению, сделает исследования значительно дороже, тем более, если они осуществляются в массовом масштабе.
В период серологического "окна". Хотя следует помнить! что чувствительность ПЦР на провирусную ДНК ВИЧ колеблется от 96 до 99%, в связи с чем, несмотря на высокие показатели чувствительности, ПЦР следует проводить или совместно с ИФА или с последующим подтверждением ИФА;
При обследовании детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей. Использование ПЦР в этом случае позволяет сократить сроки постановки диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев.
Читайте также: