Что такое трепонема спирохета

Обновлено: 19.04.2024

Синонимы: Анализ крови на сифилис (суммарные антитела); Суммарные антитела к возбудителю сифилиса (бледной трепонеме); Антитела к антигенам Treponema pallidum IgG/IgM. Syphilis IgM, IgG; Treponema pallidum Antibodies, Total; Antibodies to T. pallidum, IgM/IgG; Anti-Treponema pallidum IgG/IgM..

Краткое описание исследования суммарных антител классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы

Суммарное определение антител классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы – специфический трепонемный тест, используемый для скрининга и комплексной диагностики сифилиса.

В соответствии с приказом МЗ РФ, постановка специфического трепонемного теста обязательно должна входить в комплекс серологических реакций на сифилис. Исследование специфических антител к Treponema pallidum может быть использовано и как трепонемный подтверждающий тест на сифилис (если для первичного скрининга был использован нетрепонемный тест № 69 ), и как эффективный первичный скрининговый тест (с последующим применением нетрепонемного теста RPR для подтверждения активной инфекции). Результаты исследования, выявляющего суммарные (IgM и IgG) антитела к антигенам Treponema pallidum, позволяют подтвердить диагноз сифилиса уже при первых клинических проявлениях. Специфические антитела появляются на 1-2 неделе появления шанкра − первичный серопозитивный период сифилиса. Метод демонстрирует высокую чувствительность на ранних стадиях заболевания вследствие реактивности к IgM-антителам.

Антитела класса IgG к Treponema pallidum сохраняются после перенесенной инфекции обычно пожизненно (в том числе и после лечения), поэтому исследование высокочувствительно и на поздних стадиях инфекции, а также позволяет выявлять леченый сифилис. Ситуации расхождения результатов скрининговых тестов, когда результат определения IgG к Treponema pallidum положительный, а результат RPR (см. тест № 69 ) отрицательный, в случае сомнений дополняют проведением альтернативных трепонемных тестов (см. тест № 1205 ). Определение количества (титра) anti-Treponema pallidum антител не является значимым, тест не применяют для оценки активности инфекции и контроля лечения.

С какой целью определяют уровень антител классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы в сыворотке крови

Специфический диагностический трепонемный тест, определяют антитела к антигенам Treponema pallidum (бледная трепонема) – возбудителя сифилиса.

Специфика методов выполнения исследования на антитела классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы и дополнительные исследования

Автоматизированные методы иммуноферментного или хемилюминесцентного анализа хорошо стандартизированы и исключают ошибки, связанные с индивидуальными вариациями визуальной оценки и ручным вводом результатов. Положительный результат трепонемного теста следует дополнять нетрепонемным кардиолипиновым тестом RPR ( №69 ), что позволяет отличить активную текущую инфекцию от инфекции в прошлом. Комбинированное использование RPR-теста ( №69 ) и исследование по определению суммарных антител к антигенам Treponema pallidum ( №70 ) – наиболее эффективный вариант серологического исследования для обнаружения или исключения сифилиса.

Результаты лабораторных тестов подлежат клинической интерпретации только в комплексе с клинико-анамнестическими данными.

Что может повлиять на результат исследования суммарных антител классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы

Результат исследования может быть ложноположительным при наличии следующих болезней: ВИЧ, клещевой боррелиоз, малярия, системная красная волчанка, а также при наркомании и беременности.

Правила подготовки к исследованию на антитела классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В каких случаях проводят анализ на антитела классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы:

Подготовка к беременности.
Диагностика врожденного сифилиса.
Незащищенные сексуальные контакты.
Подготовка к оперативному вмешательству.
В комплексе обследования при плановой госпитализации;
Донорство (заготовка и переливание крови и ее компонентов).
В комплексе лабораторного подтверждения диагноза сифилиса.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Трактовка результатов исследования на антитела классов IgM и IgG к антигенам бледной трепонемы

Отсутствие инфицирования.
Ранний первичный сифилис.

Сомнительный результат исследования антител к Treponema pallidum, IgG + IgM означает, что наличие антител к возбудителю сифилиса под вопросом. При сомнительном результате может быть полезным повторное исследование через 10-14 дней. Результат интерпретируют в комплексе с клинической ситуацией, анамнезом и результатами других исследований (в том числе кардиолипинового теста № 69 и иных вариантов трепонемных тестов).

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Сифилис: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Определение

Сифилис — это системное инфекционное венерическое заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся преимущественно половым путем. Сифилис может вызвать серьезные проблемы со здоровьем при отсутствии лечения. Инфекция поражает кожу, слизистые оболочки, нервную систему, внутренние органы и опорно-двигательный аппарат.

Бледная трепонема представляет собой микроорганизм спиралевидной формы. Вне организма Treponema pallidum гибнет при нагревании, высушивании, под влиянием большинства антисептиков, кислот и щелочей. Сохраняется при низких температурах и во влажной среде.

Причины появления сифилиса

Чаще всего источником инфекции являются больные ранними формами сифилиса (в первые два года после заражения) с мокнущими высыпаниями на коже и слизистых оболочках.

половой путь (наиболее частый и типичный путь инфицирования; заражение происходит через поврежденную кожу либо слизистые оболочки);
трансплацентарный путь (передача инфекции происходит от больной матери плоду через плаценту и ведет к развитию врожденного сифилиса);
трансфузионный путь (при переливании крови от донора, больного сифилисом в любой стадии);
контактно-бытовой путь (является редким; регистрируется преимущественно у детей в результате бытового контакта с родителями, имеющими сифилитические высыпания на коже и/или слизистых оболочках);
профессиональный путь (инфицирование персонала лабораторий, работающего с зараженными экспериментальными животными, а также акушеров-гинекологов, хирургов, стоматологов, патологоанатомов, судмедэкспертов при выполнении профессиональных обязанностей).

По данным официальной государственной статистики, наблюдается постепенное снижение заболеваемости сифилисом в целом по России. В 2018 году показатель составил 16,7 случая на 100 тыс. населения. На фоне снижения общей заболеваемости сифилисом отмечается рост числа больных нейросифилисом с преобладанием его поздних форм. Более 70% случаев приходится на молодежь в возрасте от 18 до 30 лет.

Классификация заболевания

По Международной классификации болезней 10-го пересмотра:

А50 Врожденный сифилис.
А51 Ранний сифилис.
А52 Поздний сифилис.
А53 Скрытый сифилис, неуточненный как ранний или поздний.

Симптомы сифилиса

Инкубационный период начинается с момента внедрения в организм возбудителя сифилиса и заканчивается появлением первичных симптомов. В среднем продолжительность инкубационного периода составляет от 2 недель до 2 месяцев.

Болезнь по мере развития проходит 3 последовательные стадии.

1-я стадия. В месте контакта с инфицированной средой появляется язва (шанкр) округлых очертаний с плотными ровными краями и темно-красным дном. При трении из язвы может выделяться жидкость, содержащая живые трепонемы. Через 1–2 недели после появления первых признаков сифилиса начинают воспаляться лимфоузлы. К этому моменту трепонемы уже активно распространяются по организму и размножаются на слизистых внутренних органов. Первичные язвы обычно безболезненные, сохраняются от 3 до 6 недель и заживают самостоятельно. Однако отсутствие внешних проявлений не является поводом для отказа от лечения. Возбудитель болезни с током крови и лимфы распространяется по тканям и органам.

2-я стадия обычно начинается с появления сыпи на одном или нескольких участках тела. Сыпь может появляться через несколько недель после того, как заживает язва. Образуются шершавые красные или красно-коричневые пятна в области груди, шеи, на верхней части спины (ожерелье Венеры), которые не беспокоят и причиняют только эстетический дискомфорт. Сыпь может появиться на различных частях тела, в том числе, на ладонях рук и подошвах ног. Другие симптомы включают лихорадку, увеличение лимфатических узлов, боль в горле, очаговое выпадение волос, головную и мышечную боль, потерю веса, усталость. Возможны остаточные явления первичного сифилиса, поражения внутренних органов, опорно-двигательного аппарата и нервной системы. У каждого десятого пациента обнаруживают сопутствующие патологии костей, суставов, нервной системы. При ранних формах сифилиса чаще всего развиваются только функциональные расстройства пораженных внутренних органов и опорно-двигательного аппарата. Симптомы вторичного сифилиса могут проходить самостоятельно без лечения. На какое-то время больной чувствует облегчение, но болезнь прогрессирует или приобретает хроническое течение.

Без правильного лечения инфекционное заболевание переходит в латентную бессимптомную форму. Она может продолжаться многие годы.

3-я стадия. Третичный сифилис очень опасен и может начаться спустя несколько лет при бессимптомном течении инфекции. Хотя при отсутствии лечения третичный сифилис развивается не всегда. В группе риска - люди с иммунодефицитом и ослабленным здоровьем. На этой стадии высыпания бледнеют и чаще появляются на участках кожи, подверженных трению. Возможно развитие серьезных патологий сердца, желудочно-кишечного тракта, дыхательных путей, головного мозга. Заболевание поражает внутренние органы и может привести к летальному исходу.

Без лечения сифилис имеет тенденцию распространения на мозг и нервную систему (нейросифилис) или на глаза (сифилис глаза). Причем это может произойти на любой из стадий заболевания.

Симптомы нейросифилиса:

сильная головная боль;
нарушение координации движений;
частичный или полный паралич;
онемение конечностей;
психические отклонения (слуховые и зрительные галлюцинация, деменция и т. д.).

Диагностика сифилиса

Основу диагностики сифилиса составляет выявление возбудителя заболевания или его генетического материала.

Синонимы: Анализ крови на сифилис; Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW). Nontreponemal test; Rapid plasma reagin test; Syphilis screening test; STS. Краткое описание исследования RPR тест RPR тест – чувствительный нетрепонемный тес.

Сифилис — это одно из наиболее серьезных венерических заболеваний человека, которое затрагивает все органы и ткани. Для сифилиса характерно поражение всех слизистых оболочек, кожных покровов, внутренних органов, костей и нервной системы.

Кроме этого, опасность этого заболевания состоит в том, что оно может себя никак не проявлять (скрытая форма сифилиса), при которой страдают все внутренние органы и системы.

Сифилис характеризуется хроническим волнообразным течением и разнообразием проявлений. Болезнь имеет несколько стадий, причем каждая из них отличается своими особенностями и этапами. Серьезное поражение многих органов на поздних стадиях делает это заболевание довольно тяжелым.

Однако, современные тест-системы позволяют точно выявить заболевание, а методы комбинированного лечения сифилиса со 100% гарантией его вылечить.

Инкубационный(скрытый) период сифилиса составляет в среднем 3-4 недели, но может сокращаться до 10 – 15 дней или увеличиваться до 108–190 дней ( редко). Заражение начинается с внедрения через поврежденную кожу или слизистую оболочку возбудителя сифилиса (бледную трепонему) и заканчивается появлением первых клинических симптомов болезни (твердый шанкр).

Возбудитель сифилиса — бледная трепонема

Возбудителем сифилиса является бактерия спиралевидной формы (спирохета) — бледная трепонема (Treponema pallidum). Трепонемы обычно размножаются поперечным делением на два или большее количество сегментов, каждый из которых вырастает затем во взрослую особь. Деление трепонем происходит каждые 30 - 33 часа, рост занимает в среднем 1 - 1,5 часа.

Вне человеческого организма этот паразит очень неустойчив и подвержен быстрой гибели. Находясь во влажной среде, спирохета может выживать несколько часов. Бледную трепонему способно убить повышение температуры до 50-ти градусов, в следствие чего её жизнедеятельность прекращается в течение 20-25 минут. Однако, в организме человека паразит может отлично размножаться. В организм спирохета попадает через нарушение целостности кожных покровов и слизистой оболочки (небольшие трещинки, расположенные на коже и слизистых оболочках), при половых контактах, при травмах, через переливание крови и инъекции, посещение стоматолога, маникюрного кабинета и т. д.

Постановка диагноза

Клинический диагноз сифилиса устанавливается на основании данных анамнеза, клинического осмотра и обязательных лабораторных исследований, при необходимости используются данные обследования половых партнеров больного.

При сборе анамнеза врач выясняет наличие в прошлом высыпаний (эрозий, язв) в области половых органов, на коже и слизистых оболочках и давность их появления. Врач венеролог проводит пальпацию периферических лимфатических узлов для выяснения наличия или отсутствия увеличенных лимфатических узлов.

Выясняет, был ли обследован половой партнер венерологом, и подтвержден ли у него диагноз сифилиса. Была ли случайная половая связь без барьерного предохранения в период, соответствующий инкубационному периоду. Проводится осмотр кожных покровов, слизистой рта, гениталий, ануса. Производится пальпация очагов поражения и соскоб с элементов (при их наличии).

Несмотря на существование характерных признаков сифилиса, среди которых — первичная сифилома (твердый шанкр) и регионарный лимфаденит (воспаление паховых и других лимфоузлов), клинический диагноз "сифилис" никогда не ставится без лабораторного подтверждения. Иногда, клинических проявлений на момент обследования может не быть ( скрытая форма ) или может наблюдаться измененная клиническая картина в результате атипичного течения заболевания. Кроме того, возможность обследовать половых партнеров имеется не всегда, поэтому лабораторная диагностика особенно важна.

Иногда требуется применение гистологического и других дополнительных методов лабораторной диагностики, а также обследование больного различными специалистами (терапевтом, невропатологом, окулистом и др.). При подозрении на нейросифилис проводится ликворологическая диагностика.

В нашем Медицинском центре " на Ленинском " вы сможете быстро и анонимно диагностировать наличие заболевания и получить качественную консультацию и комплексное лечение.

Прямые методы диагностики служат для выявления бледной трепонемы (Т. pallidum) или генетического материала этого возбудителя в образцах, взятых из очагов поражения. Прямое выявление возбудителя сифилиса является абсолютным доказательством наличия заболевания. Найденный генетический материал (ДНК/РНК) может свидетельствовать как об активном, так и о ранее леченном сифилисе.

На ранней стадии болезни, возбудитель сифилиса активно размножается в очаге инфицирования, при этом антитела к антигенам бледной трепонемы (Treponema pallidum) начинают появляться только со второй недели после инфицирования. Бледная трепонема располагается в тканевых щелях, между волокнами соединительной ткани, вокруг лимфатических и кровеносных сосудов, в стенках и даже просветах лимфатических капилляров.

При медицинском обследовании, у пациентов с подозрением на сифилис, все высыпания на коже или слизистых оболочках следует считать сифилитическими. Исследованию на бледную трепонему подлежат все эрозивные и язвенные шанкры, мокнущие и эрозивные папулы, широкие кондиломы на коже и слизистых оболочках рта, половых органов и анальной области.

Материалом, который необходим для бактериологического исследования на бледную трепонему, является тканевая жидкость (серум). Если нет возможности исследовать высыпания (например, в случаях раннего сифилиса), то рекомендуется проводить пункцию увеличенного регионарного лимфатического узла с соблюдением всех правил асептики, то есть стерильными инструментами и соблюдая правила, направленные на предотвращение распространения микроорганизмов. Кроме того, образцы могут быть получены путем взятия спинномозговой жидкости (ликвора) или плодной жидкости.

Важным условием для обнаружения бледной трепонемы в пат. материалах является правильное взятие проб из сифилитических элементов. Затем содержимое полученных проб изучают в лаборатории.

Обнаружение бледной трепонемы методом темнопольной микроскопии (ТПМ).

В России в качестве рутинного метода прямой визуализации T. pallidum традиционно используется метод темнопольной микроскопии (ТПМ, dark field microscopy, DFM).

1. Конденсор темного поля

Исследование на бледную трепонему в темном поле зрения проводится с помощью стандартного микроскопа, снабженного конденсором темного поля.

Конденсор представляет собой двояковыпуклую линзу, прикрепляемую снизу предметного столика с таким расчетом, чтобы линза конденсора располагалась под отверстием предметного столика. Конденсор служит для собирания (конденсации) пучка световых лучей, что обеспечивает наибольшее освещение исследуемого предмета.

Неокрашенные живые бледные трепонемы не видны в световой микроскоп при обычном освещении препарата. Необходимые условия создаются путем замены обычного конденсора микроскопа особым конденсором, в котором центральная часть затемнена и проникновение лучей света происходит через узкую щель.

Вследствие получающегося при этом бокового освещения достигается отраженное свечение всех твердых частиц на темном поле (это называется "эффектом Тиндаля"), в том числе бледной трепонемы. Для получения темного поля необходим сильный источник света.

2. Бледная трепонема, характерные особенности при темнопольной микроскопии

Исследование в темном поле микроскопа позволяет изучать бледную трепонему (БТ) в живом виде, а также достоверно отличать её от других трепонем как по морфологическим признакам, так и по характерным особенностям движения.

Чтобы отличать бледную трепонему от морфологически сходных типов сапрофитных трепонем, бледные трепонемы при исследовании должны быть живыми. Темнопольное исследование взятого материала должно быть проведено немедленно, сразу после получения образца, поэтому оборудование должно быть подготовлено заранее.

В затемненном поле зрения бледная трепонема выглядит, как движущаяся тонкая спираль или тонкий нежный пунктир с серебристым оттенком, слабо преломляющие свет. Помимо этих бактерий, в препарате все поле зрения усеяно массой мельчайших светящихся точек, находящихся в хаотичном броуновском движении.

Бледные трепонемы движутся характерным образом: вращаются вокруг своей продольной оси, перемещаются в одном направлении, качаются наподобие маятника или совершают волнообразные, сократительные или сгибательные движения ("шагающая трепонема"). Бледная трепонема движется плавно, что является важной особенностью этого микроогранизма.

T. phagedenis, электронная микроскопия

В полости рта и на половых органах встречаются сапрофитные трепонемы: T . refringens и T. phagedenis (reiteri) в урогенитальном тракте и T. denticola в полости рта.

Непатогенные трепонемы морфологически сходны с T. pallidum. От них бледную трепонему отличает толщина, характер движения и форма завитков.

T.refringens колонизирует наружные половые органы. Эта бактерия движется быстро и неравномерно, отличается большей толщиной, отсутствием сгибательных движений, и более пологими и широкими завитками. T.denticola является представителем нормальной микрофлоры полости рта, ее завитки короче и направлены под более острым углом. В нормальной флоре наружных половых органов человека встречается также T. phagedenis.

Наличие непатогенных трепонем затрудняет исследования материала, взятого из поражений в полости рта или прямой кишке. При дифференциации трепонем может ошибиться даже опытный исследователь, поэтому присутствие этих микроорганизмов делает малодостоверным проведение исследования с данным материалом. Если необходимо провести тестирование материала, полученного из одного из указанных выше мест, то предпочтительнее выполнить DFA или NAAT (лучше отдать предпочтение методу ПИФ или молекулярно-биологическим методам).

Методом темнопольной микроскопии невозможно отличить бледную трепонему от патогенных возбудителей других трепонематозов — T. pallidum carateum (пинта), T. pallidum pertenue (фрамбезия), T. pallidum endemicum (беджель).

3. Применение темнопольной микроскопии для диагностики сифилиса

Микроскопию в темном поле можно применять для диагностики первичных и вторичных поражений кожи при сифилисе в результате заражения половым путем. В редких случаях этот метод можно использовать при третичном сифилисе (в последнем случае — если материал взят из глубины инфильтрата или со дна язвы).

Также с помощью этого метода исследуют поражения при раннем врожденном сифилисе, когда заражение плода бледной трепонемой произошло в утробе матери. Чтобы подтвердить диагноз "врожденный сифилис", для приготовления препарата для микроскопии можно использовать ткань пуповины, органы плода, выжатый сок плаценты, амниотическую (плодную) жидкость, отделяемое слизистой оболочки носа, содержимое пузырей (при ладонно-подошвенной сифилитической пузырчатке), тканевой жидкости (серума) с раздраженных папул.

Метод темнопольной микроскопии, используемый для диагностики сифилиса, отличается простотой, дешевизной, быстротой и достаточно высокой чувствительностью. Однако у него есть известные недостатки – невозможность диагностики скрытых и поздних форм сифилиса и непригодность для контроля излеченности. Даже многократный отрицательный результат микроскопического исследования на бледную трепонему не может исключить сифилис.

Кроме того, для проведения исследования методом ТПМ микроорганизмы T. pallidum должны быть подвижными. В условиях применения пациентами различных антибактериальных препаратов, в том числе для лечения других заболеваний, диагностическая чувствительность ТПМ снижается. В подобных случаях необходимо исследование методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) или проведение серологического обследования на сифилис.

Для повышения информативности лабораторной диагностики разрабатываются более чувствительные и специфичные прямые тесты на основе молекулярно-биологических технологий, например различные модификации метода ПЦР.

Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ)

При необходимости микроскопия возбудителя в темном поле может быть дополнена прямой реакцией иммунофлюоресценции (ПИФ, direct fluorescent antibody test, DFA).

Прямой метод иммунофлюоресценции (по Кунсу) основан на взаимодействии антител, меченых флюорохромом, с антигеном, который находится на клетке, в клетке или в тканях. В качестве флюорохрома используют флюоресцеинизотиоционат (ФИТЦ).

Метод прямой иммунофлюоресценции предусматривает прямое выявление T. pallidum в образце при обработке материала специфическими моноклональными антителами. При этом на запарафинированные мазки или биопсийный материал накладываются противотрепонемные антитела, меченные флюоресцирующим красителем. Затем, образующиеся комплексы антиген—антитело исследуют под люминесцентным микроскопом.

В результате взаимодействия анти- T.pallidum антител, меченных ФИТЦ, и бледной трепонемы при люминесцентной микроскопии наблюдается специфическое ярко-зеленое свечение: бледная трепонема флюоресцирует ярко-зеленым цветом, сохраняя все морфологические признаки спирохеты.

Забор образцов производится таким же образом, как и для темнопольной микроскопии, при этом сам метод ПИФ является более точным, чувствительным и специфичным, чем ТПМ.

Метод ПИФ имеет преимущества перед темнопольной микроскопией для выявления бледной трепонемы. Флюоресцирующие микроорганизмы проще детектировать, вероятность спутать их с другими видами трепонем снижена. При этом возможна дифференцировка патогенных трепонем от непатогенных при исследовании материала со слизистых полости рта и прямой кишки, фиксация препаратов перед транспортировкой в лабораторию. Для исследования может быть использован материал, полученный при биопсии или аутопсии.

Кроме того, применение ПИФ ограничено из-за отсутствия промышленного производства и сертификации соответствующих ингредиентов в ряде стран, в частности, ФИТЦ-меченых моноклональных антител к патогенной бледной трепонеме.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Для диагностики сифилиса применяется прямой метод определения ДНК бледной трепонемы — метод ПЦР; это один из методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК, nucleic acid amplification test, NAAT).

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет исследовать различные образцы (отделяемое сифилидов, биопсийный материал, биологические жидкости) в свежем, замороженном, фиксированном и парафинированном виде. В качестве объекта исследования методом ПЦР могут быть использованы соскобы шанкров и других высыпаний (папул, широких кондилом и т.д.), спинномозговая, амниотическая жидкость, сыворотка крови.

ПЦР–тесты для выявления ДНК бледной трепонемы были разработаны в 1991 году одновременно в нескольких лабораториях. Этот метод позволяет выявить и идентифицировать единственную молекулу ДНК бледной трепонемы среди сотен тысяч других молекул, что делает потенциально возможной диагностику нейросифилиса, третичного, врожденного сифилиса при наличии единичных трепонем в исследуемом материале.

Метод ПЦР высокоспецифичен, чувствителен и воспроизводим при правильном проведении и подготовке образцов. Однако, применительно к диагностике сифилиса, методы МАНК пока используется в исследовательских целях.

PCR в режиме реального времени (PCR-RT). Учет полученных результатов происходит автоматически в режиме реального времени по уровню свечения флюорохромных меток;
методика PCR-анализа с помощью обратной транскриптазы (PCR-ОТ);
мультиплексная PCR (PCR-М, М-ПЦР), которая позволяет в биологической пробе одновременно определять наличие возбудителей нескольких заболеваний.

Основными достоинствами метода ПЦР и его модификаций является универсальность (возможность обнаружить любые нуклеиновые кислоты), весьма высокая чувствительность (80 – 94,7 %) и высокая специфичность (до 100 %). Результат получается быстро, для анализа необходима проба малого объема (несколько микролитров). Современные методы ПЦР позволяют одновременно исследовать нескольких возбудителей заболеваний, а также получать документальный ответ в виде фотографий и вносить результаты диагностики на компьютерные информационные носители. К недостаткам метода ПЦР-анализа следует отнести высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест–наборов и регламенту исследования.

Метод ПЦР является дополнительным и может быть рекомендован, главным образом, для исследования отделяемого эрозивных и язвенных высыпаний при подозрении на первичный сифилис, особенно при их локализации на слизистой оболочке рта; при применении пациентами местных и системных антибактериальных средств накануне обращения к врачу; при отрицательных результатах серологических тестов в начале первичного периода, когда ошибка метода ТПМ особенно значима.

Развитие высокочувствительного метода ПЦР и разработка его модификаций, оценивается как весьма перспективное. Особую важность этот метод приобретает при диагностике первичного серонегативного сифилиса (при котором серологические исследования дают отрицательный результат), раннего скрытого, врожденного сифилиса и нейросифилиса.

Препятствием к широкому внедрению метода ПЦР для диагностики сифилиса является отсутствие в массовой доступности тест-систем, разрешенных к медицинскому применению. В США применение ПЦР рекомендовано лабораториям, располагающим соответствующими тест-системами (в том числе созданными в самих лабораториях, in house). В России и странах Восточной Европы широкое использование метода лимитируется небольшим количеством наборов реагентов, прошедших валидацию и разрешенных к медицинскому применению на территории соответствующих государст

NASBA

NASBA - Nucleic Acid Sequence-Based Amplification, амплификация, основанная на последовательности нуклеиновых кислот (другие переводы - реакция амплификации на основе нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот, реакция транскрипционной амплификации). Методика NASBA основана на выделении РНК микроорганизма (в отличие от полимеразной цепной реакции, где используется ДНК). Этот метод тестирования считается одним из самых перспективных и многообещающих направлений молекулярной диагностики.

Использование в качестве мишени для NASBA видоспецифических участков рибосомальной РНК обеспечивает методу высокую специфичность. Так как РНК — менее стабильный по сравнению с ДНК тип генетического материала, который быстрее деградирует при разрушении клеток, то на основании результатов выявления РНК можно судить о наличии в образце жизнеспособных микроорганизмов, например, после проведенного лечения. С практической точки зрения важно, что для проведения NASBA в лабораторных условиях используется то же оборудование, что и для проведения ПЦР в реальном времени (PCR-RT). Кроме того, исходный биоматериал после ПЦР может исследоваться методом NASBA. В результате этого существует возможность интегрирования указанного метода в протокол лабораторного обследования, что позволит верифицировать возбудителя

Отдельные исследовательские коллективы уже получают достаточно перспективные результаты при изучении сифилитической инфекции методом NASBA и NASBA-RT, используя в качестве качестве мишени фрагмент гена 16s рРНК бледной трепонемы. Полученные данные позволяют отнести метод NASBA к диагностически перспективным в изучении сифилитической инфекции наряду с имеющимися методами диагностики.

Заражение сифилисом лабораторных животных

Задолго до открытия бледной трепонемы многие ученые стали проводить эксперименты по заражению сифилисом разнообразных животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют, но возможно искусственное заражение некоторых их видов. Первые успешные опыты были проведены на шимпанзе в начале 20-го века. Дальнейшие опыты на обезьянах привели к ряду блестящих научных открытий, но ввиду трудностей содержания и дороговизны обезьян, основными лабораторными животными стали кролики. Опыты с другими животными (холоднокровными, птицами, различными млекопитающими) давали отрицательный или недостаточный для практического применения результат. Некоторое значение имели только данные, полученные на морских свинках и мышах.

Заражение сифилисом кроликов является старейшим методом прямого выявления бледной трепонемы, т.к. кролик является наиболее чувствительным и удобным лабораторным животным для привития сифилиса. Заражение кроликов производят инокуляцией (введением микроорганизмов в ткани, от латинского inoculatio - "прививка") инфекционного материала в яичко. Чувствительность кроликов к инфекции Treponema pallidum практически 100%, если во взятом для прививки материале содержится достаточное количество бледных трепонем.

Читайте также: