Диагностические агглютинирующие дизентерийные сыворотки

Обновлено: 27.03.2024

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

Бактериологическое исследование(схема 13.1.1). Является ве­дущим в диагностике эшерихиозов. Фекалии засевают на чашки со средой Эндо для получения изолированных коло­ний. Патогенные E.coli по основным биологическим свойствам (морфологии, культуральным и биохимическим признакам) не отличаются от непатогенных эшерихий — представителей нор­мальной микрофлоры кишечника. Для отбора подозрительных колоний применяют метод серотипирования. Материал из лак-тозоположительных колоний используют для постановки реак­ции агглютинации на стекле со смесью ОВ-сывороток, содер­жащих антитела против наиболее распространенных сероваров патогенных эшерихий (табл. 13.1.1).

Таблица 13.1.1. E.coli— возбудители эшерихиозов

Энтеротоксиген-ные E.coli
Энтеропато ген­ные E.coli
Энтероинвазив-ные E.col

Энтерогеморраги-ческие E.coli

Класс I: 055, 0111, 0119, 0125-0128, Класс И: 018, 044, 0112,
0157:Н7, 0126:Н11, 0111:Н-
028ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167

Об, 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0115, 0128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0168

Обычно проверяют на агглютинабельность не менее 10 ко­лоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию с моноспецифическими сыворотками: 026:В6, 055:В5, 0111:В4, 0124:В17 и др., после чего делают предварительное заключение. Затем пересевают несколько агтлютинабельных коло­ний на скошенный питательный агар для получения чистых куль­тур. На 3-й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции на стекле с ОВ-сыворотками. При положительном ре­зультате ставят развернутую реакцию агглютинации с соответс­твующей ОВ-сывороткой.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования:молекуляр-но-биологические исследования. Исследуемый материал,




полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

• Микробиологическая диагностика дизентерии

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.

Бактериологическое исследование(схема 13.1.2). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические сре­ды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хло­рида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.

Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уко­лом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы стол­бика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столби­ка — при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использо­вать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахаро­за, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие раз­личать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу.

Оставшуюся часть колоний используют для постановки ори­ентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью ди­зентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмо­нелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 13.1.2) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чув­ствительности возбудителя кантимикробным препаратам.




Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследова­ния. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.


Таблица 13.1.2. Биохимические признаки бактерий рода Shigella

Группа Ферментация Образо­вание индола Декар-бокси-лирова-ние ор-нитина
глюкозы с газооб­разова­нием лакто­зы ман-нита дуль-цита кси­лозы

S.dysenteriae _____ в —

S.flexneri + — — в —

S.boydii — — + — в в —

S.sonnei[+] + [+] в — +

Условные обозначения: (+) —положительная реакция; (^ — от­рицательная реакция; [+] — поздняя реакция; в — вариабельная реакция.

Серодиагностика. Применяют для ретроспективного обосно­вания диагноза дизентерии при стертых и хронических формах. Ставят развернутую реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РИГА с эритроцитарными диагностикумами Флекс-нера и Зонне. Диагностическим титром при дизентерии, вы­званной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне — 1:100.

Микробиологическая диагностика геликобактериоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из поражен­ного участка слизистой оболочки желудка или двенадцати­перстной кишки.

Бактериологическое исследование. Обнаружение возбудителя в гистологических препаратах, окрашенных по методу Рома­новского—Гимзы, Грама, гематоксилин-эозином и др., а также с помощью фазово-контрастной и электронной микро­скопии. Helicobacter pylori — мелкие грамотрицательные изо­гнутые, S-образные или спиралевидные (2—3 завитка) бакте­рии. H.pylori имеют 4—6 жгутиков, расположенных на одном из полюсов — лофотрихи.

Бактериологическое исследование. Посев на богатые пита­тельные среды ("шоколадный агар" и др.), содержащие гемоли-зированную кровь, сердечно-мозговой настой, дрожжевой экстракт и антимикробные препараты (ванкомицин, налидиксо-вую кислоту и амфотерицин В) для подавления роста сопутст­вующей микрофлоры. Инкубация посевов осуществляется при 37 °С в микроаэрофильных условиях (в атмосфере, содержащей не более 5 % 02 и 10 % С02) при повышенной влажности в течение 7 сут. Рост колоний обычно наблюдается на 3—4-е сутки. Идентификация чистой культуры осуществляется на ос­новании морфологии, подвижности, культуральных, биохими-

ческих признаков, чувствительности к антимикробным пре­паратам.

Типирование штаммов возбудителей для эпидемиологическо­го анализа проводят методом рестрикционного анализа ДНК.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования: биохими­ческие исследования. Выявление бактериального фермен­та уреазы.

Определение уреазной активности в биоптате. Биоптат
помещают в бульон, содержащий мочевину и индикатор.
В положительных случаях происходит изменение цвета
индикатора в результате защелачивания среды при гид­
ролизе мочевины с образованием аммиака.

Дыхательный тест на уреазу. После перорального приема
мочевины, меченной радиоактивным изотопом 14 С, оп­
ределяют присутствие меченой двуокиси углерода 14 С02
в выдыхаемом воздухе. Появление 14 С02 свидетельствует
об активности уреазы (результат гидролиза меченой мо­
чевины), что является косвенным признаком присутст­
вия в желудке или двенадцатиперстной кишке H.pylori.
Тест используют преимущественно для предварительной
диагностики и контроля результатов лечения.

Молекулярно-биологические исследования. Ис­следуемый материал, полученный из очага инфекции, исполь­зуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнару­жение антител к поверхностным антигенам возбудителя и уреа-зе. Используют методы: ИФА, РИА и РИГА.

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, рек­тальные мазки, при генерализованной форме инфекции — кровь, спинномозговая жидкость. При необходимости хране­ния материал помещают в транспортную среду (буферный со­левой раствор с добавлением нейтрального угля и метиленово-го синего или тиогликолевый бульон) при температуре 4 "С, что позволяет микробам сохранять жизнеспособность до 4 сут.

Бактериологическая диагностика. Производят посев на спе­циальные плотные среды, обогащенные аминокислотами с до­бавлением гемолизированной крови или нейтрального угля (для удаления токсичных метаболитов кислорода) и 3—5 анти­биотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры (обычно используют ванкомицин, полимиксин, триметоприм,

амфотерицин В и др.). Инкубация посевов осуществляется при 42 "С в микроаэрофильных условиях — в атмосфере, содержа­щей не более 5 % 02 и 10 % С02. Рост колоний наблюдается через 48—72 ч. Идентификация чистой культуры осуществля­ется на основании морфологии: мелкие грамотрицательные S-образно или спиралевидно (2—3 завитка) изогнутые микро­организмы, моно- или амфитрихи; используют темнопольный и фазово-контрастный методы исследования для выявления характерной подвижности — штопорообразные движения, куль-туральных, биохимических признаков, чувствительности к антимикробным препаратам. Разработаны также биохимичес­кие (хемоидентификация) и молекулярно-биологические мето­ды идентификации (см. главу 3).

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, ис­пользуют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно'поста­вить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Применяют преимущественно для ретро­спективной диагностики — антитела определяют в парных сы­воротках в реакциях РСК, РИГА и др.

Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишеч­ных палочек: ОВ-коли-сыворотка 026:В6, ОВ-коли-сыворотка 0111: В4, ОВ-коли-сыворотка 055:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентифи­кации патогенных эшерихий.

Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентифи­кации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыво­ротки. Получают путем иммунизации кроликов определенны­ми видами и сероварами S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonnei и S.boydi с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.

Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.

Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.

Препараты эубиотиков — коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилакти­ческими целями (см. тему 13.2).

Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспо-рины 2—4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.

Тема 13.2. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И ИЕРСИНИОЗОВ. ДИСБАКТЕРИОЗ

Современная классификация бактерий рода Salmonella. Род

Salmonella включает 2 вида: S.enterica (2307 сероваров) и S.bon-gori (17 сероваров). Вид S.enterica включает 5 подвидов: enterica (I), salamae (II), arizonae (Ilia), diarisonae (Illb), houtenae (IV), indica (V), которые выделены на основании молекулярно-гене-тических признаков (гибридизационного анализа ДНК) и фе-нотипически различаются по биохимическим свойствам. Внут­ри подвидов сальмонеллы подразделяются на серовары по О-и Н-антигенам согласно классификации Кауфмана—Уайта. Не­обходимо помнить, что представители разных подвидов могут иметь общие или идентичные антигены. Абсолютное большин­ство сероваров (1367) относятся к подвиду enterica. Согласно ранее существовавшей классификации, сальмонеллы — предста­вители различных сероваров — рассматривались как самостоя­тельные виды и имели собственные видовые названия. В на­стоящее время старые видовые названия используют для обо­значения биоваров (сероваров), например S.enterica подвида enterica серовара typhimurium соответствует S.typhimurium, серо­вара typhiS.typhi, серовара paratyphi A — S.paratyphi Л и т.д. Природным резервуаром бактерий S.enterica подвида enterica являются теплокровные животные, для остальных — холодно­кровные животные и окружающая среда. Возбудители заболе­ваний человека относятся к подвиду enterica.

С эпидемиологической точки зрения сальмонеллы, вызы­вающие заболевания человека, относят к трем основным груп­пам. Первая группа включает 3 биовара: typhi, paratyphi А и С, которые являются возбудителями строгих антропонозов (ин­фицируют только человека и передаются от человека к чело­веку прямо или опосредованно — через пищу, воду). Вторая группа включает серовары, которые адаптировались к опреде­ленному виду животных. Некоторые из этих сероваров пато­генны для человека (dublin, gallinarum, schottmulleri и др.). К третьей группе относятся большинство сероваров, не имею­щих специфических хозяев и способных инфицировать как человека, так и животных. По клинической классификации сальмонеллы подразделяют на возбудителей брюшного тифа (биовар typhi) и паратифов (биовары paratyphi А, С и schottmul­leri) и возбудителей сальмонеллезов, включающих все осталь­ные биовары сальмонелл, патогенных для человека. Большин­ство возбудителей сальмонеллезов относится к третьей группе по эпидемиологической классификации.

а План

▲ Программа

1. Биологические свойства возбудителей брюшного ти­фа, паратифов и иерсиниозов. Их патогенность, эко­логия, особенности инфекции и эпидемиология вы­зываемых заболеваний. Дисбактериоз.

1.Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (о).

1)S.enteritidis 1.9.12(Ag O) g m(Ag H) засеваем на скошенный агар,затем ставим на вод.баню 60гр.Удаляем AgH,остается AgO

2)Гипериммунизация кроликов полученной бактериальной культурой, забор крови (тотальная кровопотеря)выделение из сыворотки y-глобулинов = получаем АТ.

3)Истощение(удаление)по Кастеллани лишних АТ.

Выращиваем S.moscow 9.12 (Ag O) g q (Ag H)затем нагреваем,тем самым удаляя Ag H.

(Сыворотка1.9.12 +нагретая S.moscow 9.12) центрифугируем = сыворотка с АТ к Ag 1.

Наборы сывороток сальмонеллезных монорецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для идентификации сальмонелл 33 групп в РА на стекле.

2.Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (н)

1)выращиваем S.paratyphi A 1.2.12(Ag O) а(Ag H),затем обрабатываем формалином, тем самым убиваем AgО, остается AgН.

2)Гипериммунизация кроликов полученной бактериальной культурой, забор крови (тотальная кровопотеря)выделение из сыворотки y-глобулинов = получаем АТ.

3) Истощение(удаление)по Кастеллани лишних АТ.

Выращиваем и получаем сыворотку к AgН а.

Наборы сывороток сальмонеллезных монорецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для идентификации сальмонелл 33 групп в РА на стекле.

3.Сухая агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к шигеллам.

Представляет собой лиофилизированную адсорбированную сывороткиу кроликов, содержащая монорецепторные антитела к 38 наименованиям антигенов. К восьми группам антигенов выпускаются поливалентные сыворотки.

Полученна путем иммунизацией кроликов опред.видами и сероварами шигелл дизентерии Флекснера, Бойда и Зонне с последующей адсорбцией лишних антител. Препараты предназначены для идентификации бактерий рода Shigella в РА.

4. Сибиреязвенная сыворотка лошадиная, меченная ФИТЦ. АТ, диагностич, получение: гипериммунизация лошадей возб-лем сиб язвыю, забор крови, выделение из плазмы глобулиновой фракции, добавление ФИТЦ. Применяют в прямой реакции РИФ

5. Кроличий античеловеческий глобулин, меченный ФИТЦ. Используют для диагностики(непрямой метод)

1.Получают Аg(из Ig человека

2.вводим кролику (выр.Ат)берем кровь центрифугируем

5.розлив в банке

6. Гриппозные диагностические сыворотки.

Н0N, H1N1, H2N2, H3N2, B И С.

Применяются для серотипирования вирусов гриппа в РТГА и РСК.

7. Туляремийный диагностикум.

Взвесь убитых бактерий туляремии.

Назначение: серодиагностика(РА) туляремии и определение специфических антител у вакцинированных против туляремии или переболевших туляремией.

8. Бруцеллезный диагностикум.

Предназначен для:1) выявления в РНГА антител в сыворотках крови животных и людей больных, переболевших и вакцинированных против бруцеллеза.

2) идентификации возбудителя бруцеллеза в бактериальных культурах, обнаружения бруцеллезного антигена в биологическом материале и объектах внешней среды в РНАт.

3)РА Райта и Хеддлсона

Диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный жидкий представляет собой 5 % взвесь формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных водорастворимым антигеном бруцеллезного микроба. 9. Парагриппозный диагностикум. АГ, диагн, поредставляет собой взвесь (если жидкий) частиц с сорбированными Аг вируса парагриппа, применяют для серодиагностики парагриппа РТГА 10. Эритроцитарный туберкулезный диагностикум для РНГА.

Аг, диагн, получение: выращивают культуру возбудителя туберкулеза, получают Аг, адсорбируют его на формалинизированных эритроцитах барана; применение: РНГА – для определения титра АТ к данному Аг в сыворотке крови обследуемого

11. Гонококковый антиген.

Взвесь убитой культуры гонококка.Применяется для постановски РСК.

12. Препараты для серологической диагностики сифилиса - кардиолипиновый антиген, ультраозвученный трепонемный антиген, кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации (микрореакции).

Кардиолипиновый Аг – неспецифический Аг, применяется для серодиагностики сифилиса, в реакции Вассермана. Представляет собой экстракт бычьего сердца с лецитином и холестерином

Ультраозвученный трепонемный Аг - специфический Аг, применяется для серодиагностики сифилиса, в реакции Вассермана. Представляет собой разрушенные ультразвуком трепонемы

13. Холерный монофаг Эль-Тор.

б/фаг; диагн; получение: фильтарат фаголизата (выращивают культуру возбудителя в жидкой питательной среде, добавляют бактериофаг ЭльТор, фильтруют); применение: фаготипирования для дифференциальной диагностики биоваров классик и эль тор Антигены

14. Тулярин, бруцеллин.

15. Туберкулин очищенный (PPD)

Туберкулинадиагн. применяется для отбора контингентов, подлежащих прививкам против Туберкулеза, а также перед первичной вакцинацией детей,старше 2ух мес. Используют внутрикожную туберкулин. пробу Манту с 2туберк.единицами очищенного туберкулина-аллергена туберкулезно очищ.жидкого в станд.разведении для внутрикожн. примен. Результат пробы оценивается ч\з 72ч миллиметров линейкой и регистрируют поперечный по отн.к оси руки размер инфильт. в миллиметрах. Индурация отмечается, измеряется, документируется и оценивается.

10 мм указывает на возможное заражение туберкулезом в группах риска и при контакте с пациентами с открытыми формами туберкулеза

при индурации 15 мм или язвенной реакции кожи (образование гнойников) очень вероятно заражение туберкулезом.

Иммунные диагностические сыворотки получают из крови животных (в основном кроликов), иммунизированных соот­ветствующими бактериями или антигенами.

Ι. Агглютинирующие сыворотки

Агглютинирующую сыворотку получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий. В сыворотке определяют титр антител. Титром агглютини­рующей сыворотки называется то макси­мальное разведение ее, при котором происходит агглютинация с соответствую­щим микроорганизмом. Агглютинирующие неадсорбированные сыворотки применяются при идентифи­кации бактерий сначала в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

1. Агглютинирующая неадсорбированная брюшнотифозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S.enterica var. typhi. Применяется для серологической идентификации возбудителя брюшного тифа в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

2. Агглютинирующая неадсорбированная паратифозная В (паратифозная А) сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S. enterica var.paratyphi B (var.paratyphi A). Применяется для серологической идентификации возбудителя паратифа В (паратифа А) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

3. Агглютинирующая неадсорбированная сальмонелезная сыворотка Бреслау получается путем гипериммунизации животных взвесью S. typhimurium Breslau. Применяется для серологической идентификации сальмонелл Бреслау в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезов.

4. Агглютинирующая неадсорбированная дизентерийная сыворотка Флекснера (Зонне) получается путем гипериммунизации животных взвесью шигелл Флекснера (Зонне). Применяется для серологической идентификации шигелл Флекснера (Зонне) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бактериальной дизентерии.

5. Агглютинирующая неадсорбированная поливалентная эшнрихиозная ОКВ сыворотка представляет собой смесь типовых эшерихиозных ОК сывороток О111:К58, О55:К59, О26:К60, О20:К84. Применяется в бактериологическом методе диагностики колиэнтерита в ориентировочной реакции агглютинации на стекле при отборе окрашенных колоний, выросших на средах Эндо или Левина, подозрительных на энтеропатогенные серовары.

6. Агглютинирующие неадсорбированные типовые эшерихиозные ОК сыворотки (О111, О55 и др.) получают путем гипериммунизации животных взвесью энтеропатогенных эшерихий соответствующего серовара. Применяются для серологической идентификации энтеропатогенных эшерихий в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации с живой культурой для определения термолабильного К- антигена и с кипяченой культурой для определения термостабильного О-антигена. Используются в бактериологическом методе диагностики колиэнтеритов.

7. Агглютинирующая неадсорбированная холерная О1 сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых возбудителей холеры. Применяется для серологической идентификации холерных вибрионов в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики холеры.

8. Агглютинирующая неадсорбированная бруцеллезная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью бруцелл. Применяется для серологической идентификации бруцелл в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бруцеллеза.

9. Агглютинирующая неадсорбированная туляремийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью туляремийных бактерий. Применяется для серологической идентификации возбудителя туляремии в реакции агглютинации. Используется в биобактериологическом методе диагностики туляремии.

10. Агглютинирующая неадсорбированная противодифтерийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей дифтерии. Применяется для серологической идентификации коринебактерий дифтерии в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики дифтерии.

11. Агглютинирующая неадсорбированная коклюшная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей коклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей коклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики коклюша.

12. Агглютинирующая неадсорбированная паракоклюшная сыворотка паракоклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей паракоклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики паракоклюша.

13. Агглютинирующая неадсорбированная лептоспирозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью лептоспир. Применяется для серологической идентификации лептоспир в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики лептоспироза.

В настоящее время многие агглютинирую­щие сыворотки выпускаются адсорбированными монорецепторными, содер­жащими только специфические антитела-рецепторы, которые соответст­вуют определенному виду микроорганизма. Эти сыворотки используются только в реакции агглютинации на стекле и не требуют последующего разведения, т.е постановки развернутой реакции агглютинации.

Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни – метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственны­ми гетерогенными бактериями происходит адсорбция только группо­вых антител, а специфические антитела остаются в сыворот­ке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки – сыво­ротки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену.

1. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 9 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы D (например, S. enterica var. typhi). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 9, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе D в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифо-паратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

2. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 4 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы В (например S. enterica var.paratyphi B). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 4, 5, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 5, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе В в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

3. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор d получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S. enterica var. typhi . Полученная сыворотка содержит О рецепторы 1, 9, 12, Vi и H рецептор d. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 9, 12, Vi по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. enterica var. typhi в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний.

4. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор i получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S.typhimurium Breslau. Полученная сыворотка содержит рецепторы О 1, 4, 5, 12 и H рецепторы i, 1, 2. Далее проводят адсорбцию групповых О рецепторов 1, 4, 5, 12 и Н рецепторов 1, 2 по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. typhimurium Breslau в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезной инфекции.

В диагностике инфекционных болезней широко применя­ются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки, которые в зависи­мости от содержания соответствующих антител называются агглютинирующие, преципитирующие, гемо­литические, противовирусные.

Агглютинирующие сыворотки. Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией Кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7—8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютини­рующей сыворотки называется то макси­мальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствую­щим микроорганизмом.

Агглютинирующие сыворотки применяются при идентифи­кации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки облада­ют высоким титром — до 1 : 12 800 — 1 : 25 600.

Недостатком таких сывороток является то, что они способ­ны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.

Поэтому в настоящее время большинство агглютинирую­щих сывороток выпускаются адсорбированиими, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содер­жащими только типовые или видовые антитела и соответст­вующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.

Для получения таких сывороток нрименяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственны­ми гетерогенными бактериями происходит адсорбция группоных антител, а специфические антитела остаются в сыворот­ке. В зависимости от полноты истощения групповых агглюти­нинов можно получить монорецепторные сыворотки — сыво­ротки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглю­тинации с двумя — тремя родственными бактериями, имею­щими общий антиген, в отношении которого проводилась ад­сорбция.

Адсорбированные сыворотки применяют при идентифика­ции выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод).

Агглютинирующие сыворотки наиболее широко применя­ются при диагностике заболеваний, вызываемых бактериями семейства Enferobacferiaceae. Так, при идентификации эшерихий используются поливалентные и типовые ОК-сыворотки; при дифференциации сальмонелл — набор сывороток: агглю­тинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллезная О-сыворотка (групп А, В, С, Д, Е) — для определения принадлежности к роду Salmonella, при положительном ре­зультате — определяют отдельно с каждой сывороткой (входя­щей в смесь) серологическую группу и в заключение опреде­ляется серологический тип выделенного возбудителя с моно-рецепторными Н-сыворотками сальмонелл, входящих в данную группу.

Читайте также: