Диагностические агглютинирующие дизентерийные сыворотки
Обновлено: 27.03.2024
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.
• Микробиологическая диагностика эшерихиозов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.
Бактериологическое исследование(схема 13.1.1). Является ведущим в диагностике эшерихиозов. Фекалии засевают на чашки со средой Эндо для получения изолированных колоний. Патогенные E.coli по основным биологическим свойствам (морфологии, культуральным и биохимическим признакам) не отличаются от непатогенных эшерихий — представителей нормальной микрофлоры кишечника. Для отбора подозрительных колоний применяют метод серотипирования. Материал из лак-тозоположительных колоний используют для постановки реакции агглютинации на стекле со смесью ОВ-сывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных сероваров патогенных эшерихий (табл. 13.1.1).
Таблица 13.1.1. E.coli— возбудители эшерихиозов
Энтеротоксиген-ные E.coli |
Энтеропато генные E.coli |
Энтероинвазив-ные E.col |
Энтерогеморраги-ческие E.coli
Класс I: 055, 0111, 0119, 0125-0128, Класс И: 018, 044, 0112, |
0157:Н7, 0126:Н11, 0111:Н- |
028ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167 |
Об, 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0115, 0128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0168
Обычно проверяют на агглютинабельность не менее 10 колоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию с моноспецифическими сыворотками: 026:В6, 055:В5, 0111:В4, 0124:В17 и др., после чего делают предварительное заключение. Затем пересевают несколько агтлютинабельных колоний на скошенный питательный агар для получения чистых культур. На 3-й день проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции на стекле с ОВ-сыворотками. При положительном результате ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей ОВ-сывороткой.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования:молекуляр-но-биологические исследования. Исследуемый материал,
|
|
полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
• Микробиологическая диагностика дизентерии
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, ректальные мазки, соскобы со слизистой оболочки.
Бактериологическое исследование(схема 13.1.2). Фекалии больного засевают на дифференциально-диагностические среды (агар Эндо, Плоскирева и др.). При наличии в исследуемых испражнениях гнойных или слизисто-кровянистых комочков их выбирают петлей, промывают в изотоническом растворе хлорида натрия и наносят на поверхность питательной среды, после чего растирают шпателем. На 2-й день лактозоотрицательные (прозрачные бесцветные) колонии пересевают на среду Ресселя или на короткий "пестрый ряд" с лактозой и глюкозой.
Среда Ресселя: питательный агар, 1 % раствор лактозы, 0,1 % раствор глюкозы и индикатор бромтимоловый синий. Среду готовят таким образом, чтобы внизу она была в виде столбика, а верхняя часть имела скошенную поверхность. Исследуемую культуру засевают уколом в столбик и на поверхность среды. При ферментации углеводов происходит изменение цвета среды (желтая окраска); разрывы столбика свидетельствуют о газообразовании. Изменение цвета во всем объеме среды наблюдается при ферментации лактозы, только столбика — при ферментации глюкозы, так как содержание ее в среде в 10 раз меньше, чем лактозы. Вместо среды Ресселя можно использовать трехсахарную среду (в ее состав входят глюкоза, лактоза, сахароза, мочевина, некоторые соли и индикатор феноловый красный) или другие дифференциально-диагностические среды, позволяющие различать бактерии по способности ферментировать лактозу и глюкозу.
Оставшуюся часть колоний используют для постановки ориентировочной реакции агглютинации на стекле со смесью дизентерийных сывороток и смесью сывороток против сальмонелл (для исключения брюшного тифа или сальмонеллеза). Окончательное заключение дают на 4-й день по результатам ферментативных тестов (табл. 13.1.2) и реакции агглютинации. Выделенную чистую культуру используют для определения чувствительности возбудителя кантимикробным препаратам.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Таблица 13.1.2. Биохимические признаки бактерий рода Shigella
Группа | Ферментация | Образование индола | Декар-бокси-лирова-ние ор-нитина | |
глюкозы с газообразованием | лактозы | ман-нита | дуль-цита | ксилозы |
S.dysenteriae _____ в —
S.flexneri — — + — — в —
S.boydii — — + — в в —
S.sonnei — [+] + [+] в — +
Условные обозначения: (+) —положительная реакция; (^ — отрицательная реакция; [+] — поздняя реакция; в — вариабельная реакция.
Серодиагностика. Применяют для ретроспективного обоснования диагноза дизентерии при стертых и хронических формах. Ставят развернутую реакцию агглютинации по типу реакции Видаля и РИГА с эритроцитарными диагностикумами Флекс-нера и Зонне. Диагностическим титром при дизентерии, вызванной шигеллами Флекснера, считают разведение 1:200, а шигеллами Зонне — 1:100.
• Микробиологическая диагностика геликобактериоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптат из пораженного участка слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки.
Бактериологическое исследование. Обнаружение возбудителя в гистологических препаратах, окрашенных по методу Романовского—Гимзы, Грама, гематоксилин-эозином и др., а также с помощью фазово-контрастной и электронной микроскопии. Helicobacter pylori — мелкие грамотрицательные изогнутые, S-образные или спиралевидные (2—3 завитка) бактерии. H.pylori имеют 4—6 жгутиков, расположенных на одном из полюсов — лофотрихи.
Бактериологическое исследование. Посев на богатые питательные среды ("шоколадный агар" и др.), содержащие гемоли-зированную кровь, сердечно-мозговой настой, дрожжевой экстракт и антимикробные препараты (ванкомицин, налидиксо-вую кислоту и амфотерицин В) для подавления роста сопутствующей микрофлоры. Инкубация посевов осуществляется при 37 °С в микроаэрофильных условиях (в атмосфере, содержащей не более 5 % 02 и 10 % С02) при повышенной влажности в течение 7 сут. Рост колоний обычно наблюдается на 3—4-е сутки. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии, подвижности, культуральных, биохими-
ческих признаков, чувствительности к антимикробным препаратам.
Типирование штаммов возбудителей для эпидемиологического анализа проводят методом рестрикционного анализа ДНК.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования: биохимические исследования. Выявление бактериального фермента уреазы.
♦ Определение уреазной активности в биоптате. Биоптат
помещают в бульон, содержащий мочевину и индикатор.
В положительных случаях происходит изменение цвета
индикатора в результате защелачивания среды при гид
ролизе мочевины с образованием аммиака.
♦ Дыхательный тест на уреазу. После перорального приема
мочевины, меченной радиоактивным изотопом 14 С, оп
ределяют присутствие меченой двуокиси углерода 14 С02
в выдыхаемом воздухе. Появление 14 С02 свидетельствует
об активности уреазы (результат гидролиза меченой мо
чевины), что является косвенным признаком присутст
вия в желудке или двенадцатиперстной кишке H.pylori.
Тест используют преимущественно для предварительной
диагностики и контроля результатов лечения.
Молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Диагностическое значение имеет обнаружение антител к поверхностным антигенам возбудителя и уреа-зе. Используют методы: ИФА, РИА и РИГА.
• Микробиологическая диагностика кампилобактериозов
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: испражнения, ректальные мазки, при генерализованной форме инфекции — кровь, спинномозговая жидкость. При необходимости хранения материал помещают в транспортную среду (буферный солевой раствор с добавлением нейтрального угля и метиленово-го синего или тиогликолевый бульон) при температуре 4 "С, что позволяет микробам сохранять жизнеспособность до 4 сут.
Бактериологическая диагностика. Производят посев на специальные плотные среды, обогащенные аминокислотами с добавлением гемолизированной крови или нейтрального угля (для удаления токсичных метаболитов кислорода) и 3—5 антибиотиков для подавления роста сопутствующей микрофлоры (обычно используют ванкомицин, полимиксин, триметоприм,
амфотерицин В и др.). Инкубация посевов осуществляется при 42 "С в микроаэрофильных условиях — в атмосфере, содержащей не более 5 % 02 и 10 % С02. Рост колоний наблюдается через 48—72 ч. Идентификация чистой культуры осуществляется на основании морфологии: мелкие грамотрицательные S-образно или спиралевидно (2—3 завитка) изогнутые микроорганизмы, моно- или амфитрихи; используют темнопольный и фазово-контрастный методы исследования для выявления характерной подвижности — штопорообразные движения, куль-туральных, биохимических признаков, чувствительности к антимикробным препаратам. Разработаны также биохимические (хемоидентификация) и молекулярно-биологические методы идентификации (см. главу 3).
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно'поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика. Применяют преимущественно для ретроспективной диагностики — антитела определяют в парных сыворотках в реакциях РСК, РИГА и др.
• Диагностические, профилактические и лечебные препараты
Агглютинирующие ОВ-сыворотки против патогенных кишечных палочек: ОВ-коли-сыворотка 026:В6, ОВ-коли-сыворотка 0111: В4, ОВ-коли-сыворотка 055:В5 и др. Получают путем иммунизации кроликов взвесью эшерихий соответствующего серовара и применяют в реакции агглютинации для идентификации патогенных эшерихий.
Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл. Различают групповые и моновалентные сыворотки. Получают путем иммунизации кроликов определенными видами и сероварами S.dysenteriae, S.flexnery, S.sonnei и S.boydi с последующей адсорбцией межгрупповых и других лишних антител.
Поливалентный дизентерийный бактериофаг. Содержит фаги, лизирующие шигеллы Флекснера и Зонне. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики и лечения.
Дизентерийная вакцина спиртовая, сухая. Содержит шигеллы Флекснера и Зонне. Применяют для лечения хронических форм дизентерии.
Препараты эубиотиков — коли-бактерин, бифидумбактерин, бификол, лактобактерин. Применяют с лечебно-профилактическими целями (см. тему 13.2).
Антибиотики: полусинтетические пенициллины, цефалоспо-рины 2—4-го поколений, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолины, сульфаниламиды, полимиксин и др.
Тема 13.2. ВОЗБУДИТЕЛИ БРЮШНОГО ТИФА, ПАРАТИФОВ И ИЕРСИНИОЗОВ. ДИСБАКТЕРИОЗ
Современная классификация бактерий рода Salmonella. Род
Salmonella включает 2 вида: S.enterica (2307 сероваров) и S.bon-gori (17 сероваров). Вид S.enterica включает 5 подвидов: enterica (I), salamae (II), arizonae (Ilia), diarisonae (Illb), houtenae (IV), indica (V), которые выделены на основании молекулярно-гене-тических признаков (гибридизационного анализа ДНК) и фе-нотипически различаются по биохимическим свойствам. Внутри подвидов сальмонеллы подразделяются на серовары по О-и Н-антигенам согласно классификации Кауфмана—Уайта. Необходимо помнить, что представители разных подвидов могут иметь общие или идентичные антигены. Абсолютное большинство сероваров (1367) относятся к подвиду enterica. Согласно ранее существовавшей классификации, сальмонеллы — представители различных сероваров — рассматривались как самостоятельные виды и имели собственные видовые названия. В настоящее время старые видовые названия используют для обозначения биоваров (сероваров), например S.enterica подвида enterica серовара typhimurium соответствует S.typhimurium, серовара typhi — S.typhi, серовара paratyphi A — S.paratyphi Л и т.д. Природным резервуаром бактерий S.enterica подвида enterica являются теплокровные животные, для остальных — холоднокровные животные и окружающая среда. Возбудители заболеваний человека относятся к подвиду enterica.
С эпидемиологической точки зрения сальмонеллы, вызывающие заболевания человека, относят к трем основным группам. Первая группа включает 3 биовара: typhi, paratyphi А и С, которые являются возбудителями строгих антропонозов (инфицируют только человека и передаются от человека к человеку прямо или опосредованно — через пищу, воду). Вторая группа включает серовары, которые адаптировались к определенному виду животных. Некоторые из этих сероваров патогенны для человека (dublin, gallinarum, schottmulleri и др.). К третьей группе относятся большинство сероваров, не имеющих специфических хозяев и способных инфицировать как человека, так и животных. По клинической классификации сальмонеллы подразделяют на возбудителей брюшного тифа (биовар typhi) и паратифов (биовары paratyphi А, С и schottmulleri) и возбудителей сальмонеллезов, включающих все остальные биовары сальмонелл, патогенных для человека. Большинство возбудителей сальмонеллезов относится к третьей группе по эпидемиологической классификации.
а План
▲ Программа
1. Биологические свойства возбудителей брюшного тифа, паратифов и иерсиниозов. Их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний. Дисбактериоз.
1.Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (о).
1)S.enteritidis 1.9.12(Ag O) g m(Ag H) засеваем на скошенный агар,затем ставим на вод.баню 60гр.Удаляем AgH,остается AgO
2)Гипериммунизация кроликов полученной бактериальной культурой, забор крови (тотальная кровопотеря)выделение из сыворотки y-глобулинов = получаем АТ.
3)Истощение(удаление)по Кастеллани лишних АТ.
Выращиваем S.moscow 9.12 (Ag O) g q (Ag H)затем нагреваем,тем самым удаляя Ag H.
(Сыворотка1.9.12 +нагретая S.moscow 9.12) центрифугируем = сыворотка с АТ к Ag 1.
Наборы сывороток сальмонеллезных монорецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для идентификации сальмонелл 33 групп в РА на стекле.
2.Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (н)
1)выращиваем S.paratyphi A 1.2.12(Ag O) а(Ag H),затем обрабатываем формалином, тем самым убиваем AgО, остается AgН.
2)Гипериммунизация кроликов полученной бактериальной культурой, забор крови (тотальная кровопотеря)выделение из сыворотки y-глобулинов = получаем АТ.
3) Истощение(удаление)по Кастеллани лишних АТ.
Выращиваем и получаем сыворотку к AgН а.
Наборы сывороток сальмонеллезных монорецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для идентификации сальмонелл 33 групп в РА на стекле.
3.Сухая агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к шигеллам.
Представляет собой лиофилизированную адсорбированную сывороткиу кроликов, содержащая монорецепторные антитела к 38 наименованиям антигенов. К восьми группам антигенов выпускаются поливалентные сыворотки.
Полученна путем иммунизацией кроликов опред.видами и сероварами шигелл дизентерии Флекснера, Бойда и Зонне с последующей адсорбцией лишних антител. Препараты предназначены для идентификации бактерий рода Shigella в РА.
4. Сибиреязвенная сыворотка лошадиная, меченная ФИТЦ. АТ, диагностич, получение: гипериммунизация лошадей возб-лем сиб язвыю, забор крови, выделение из плазмы глобулиновой фракции, добавление ФИТЦ. Применяют в прямой реакции РИФ
5. Кроличий античеловеческий глобулин, меченный ФИТЦ. Используют для диагностики(непрямой метод)
1.Получают Аg(из Ig человека
2.вводим кролику (выр.Ат)берем кровь центрифугируем
5.розлив в банке
6. Гриппозные диагностические сыворотки.
Н0N, H1N1, H2N2, H3N2, B И С.
Применяются для серотипирования вирусов гриппа в РТГА и РСК.
7. Туляремийный диагностикум.
Взвесь убитых бактерий туляремии.
Назначение: серодиагностика(РА) туляремии и определение специфических антител у вакцинированных против туляремии или переболевших туляремией.
8. Бруцеллезный диагностикум.
Предназначен для:1) выявления в РНГА антител в сыворотках крови животных и людей больных, переболевших и вакцинированных против бруцеллеза.
2) идентификации возбудителя бруцеллеза в бактериальных культурах, обнаружения бруцеллезного антигена в биологическом материале и объектах внешней среды в РНАт.
3)РА Райта и Хеддлсона
Диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный жидкий представляет собой 5 % взвесь формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных водорастворимым антигеном бруцеллезного микроба. 9. Парагриппозный диагностикум. АГ, диагн, поредставляет собой взвесь (если жидкий) частиц с сорбированными Аг вируса парагриппа, применяют для серодиагностики парагриппа РТГА 10. Эритроцитарный туберкулезный диагностикум для РНГА.
Аг, диагн, получение: выращивают культуру возбудителя туберкулеза, получают Аг, адсорбируют его на формалинизированных эритроцитах барана; применение: РНГА – для определения титра АТ к данному Аг в сыворотке крови обследуемого
11. Гонококковый антиген.
Взвесь убитой культуры гонококка.Применяется для постановски РСК.
12. Препараты для серологической диагностики сифилиса - кардиолипиновый антиген, ультраозвученный трепонемный антиген, кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации (микрореакции).
Кардиолипиновый Аг – неспецифический Аг, применяется для серодиагностики сифилиса, в реакции Вассермана. Представляет собой экстракт бычьего сердца с лецитином и холестерином
Ультраозвученный трепонемный Аг - специфический Аг, применяется для серодиагностики сифилиса, в реакции Вассермана. Представляет собой разрушенные ультразвуком трепонемы
13. Холерный монофаг Эль-Тор.
б/фаг; диагн; получение: фильтарат фаголизата (выращивают культуру возбудителя в жидкой питательной среде, добавляют бактериофаг ЭльТор, фильтруют); применение: фаготипирования для дифференциальной диагностики биоваров классик и эль тор Антигены
14. Тулярин, бруцеллин.
15. Туберкулин очищенный (PPD)
Туберкулинадиагн. применяется для отбора контингентов, подлежащих прививкам против Туберкулеза, а также перед первичной вакцинацией детей,старше 2ух мес. Используют внутрикожную туберкулин. пробу Манту с 2туберк.единицами очищенного туберкулина-аллергена туберкулезно очищ.жидкого в станд.разведении для внутрикожн. примен. Результат пробы оценивается ч\з 72ч миллиметров линейкой и регистрируют поперечный по отн.к оси руки размер инфильт. в миллиметрах. Индурация отмечается, измеряется, документируется и оценивается.
10 мм указывает на возможное заражение туберкулезом в группах риска и при контакте с пациентами с открытыми формами туберкулеза
при индурации 15 мм или язвенной реакции кожи (образование гнойников) очень вероятно заражение туберкулезом.
Иммунные диагностические сыворотки получают из крови животных (в основном кроликов), иммунизированных соответствующими бактериями или антигенами.
Ι. Агглютинирующие сыворотки
Агглютинирующую сыворотку получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий. В сыворотке определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение ее, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом. Агглютинирующие неадсорбированные сыворотки применяются при идентификации бактерий сначала в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.
1. Агглютинирующая неадсорбированная брюшнотифозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S.enterica var. typhi. Применяется для серологической идентификации возбудителя брюшного тифа в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.
2. Агглютинирующая неадсорбированная паратифозная В (паратифозная А) сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S. enterica var.paratyphi B (var.paratyphi A). Применяется для серологической идентификации возбудителя паратифа В (паратифа А) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.
3. Агглютинирующая неадсорбированная сальмонелезная сыворотка Бреслау получается путем гипериммунизации животных взвесью S. typhimurium Breslau. Применяется для серологической идентификации сальмонелл Бреслау в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезов.
4. Агглютинирующая неадсорбированная дизентерийная сыворотка Флекснера (Зонне) получается путем гипериммунизации животных взвесью шигелл Флекснера (Зонне). Применяется для серологической идентификации шигелл Флекснера (Зонне) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бактериальной дизентерии.
5. Агглютинирующая неадсорбированная поливалентная эшнрихиозная ОКВ сыворотка представляет собой смесь типовых эшерихиозных ОК сывороток О111:К58, О55:К59, О26:К60, О20:К84. Применяется в бактериологическом методе диагностики колиэнтерита в ориентировочной реакции агглютинации на стекле при отборе окрашенных колоний, выросших на средах Эндо или Левина, подозрительных на энтеропатогенные серовары.
6. Агглютинирующие неадсорбированные типовые эшерихиозные ОК сыворотки (О111, О55 и др.) получают путем гипериммунизации животных взвесью энтеропатогенных эшерихий соответствующего серовара. Применяются для серологической идентификации энтеропатогенных эшерихий в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации с живой культурой для определения термолабильного К- антигена и с кипяченой культурой для определения термостабильного О-антигена. Используются в бактериологическом методе диагностики колиэнтеритов.
7. Агглютинирующая неадсорбированная холерная О1 сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых возбудителей холеры. Применяется для серологической идентификации холерных вибрионов в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики холеры.
8. Агглютинирующая неадсорбированная бруцеллезная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью бруцелл. Применяется для серологической идентификации бруцелл в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бруцеллеза.
9. Агглютинирующая неадсорбированная туляремийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью туляремийных бактерий. Применяется для серологической идентификации возбудителя туляремии в реакции агглютинации. Используется в биобактериологическом методе диагностики туляремии.
10. Агглютинирующая неадсорбированная противодифтерийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей дифтерии. Применяется для серологической идентификации коринебактерий дифтерии в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики дифтерии.
11. Агглютинирующая неадсорбированная коклюшная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей коклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей коклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики коклюша.
12. Агглютинирующая неадсорбированная паракоклюшная сыворотка паракоклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей паракоклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики паракоклюша.
13. Агглютинирующая неадсорбированная лептоспирозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью лептоспир. Применяется для серологической идентификации лептоспир в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики лептоспироза.
В настоящее время многие агглютинирующие сыворотки выпускаются адсорбированными монорецепторными, содержащими только специфические антитела-рецепторы, которые соответствуют определенному виду микроорганизма. Эти сыворотки используются только в реакции агглютинации на стекле и не требуют последующего разведения, т.е постановки развернутой реакции агглютинации.
Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни – метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция только групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки – сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену.
1. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 9 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы D (например, S. enterica var. typhi). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 9, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе D в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифо-паратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.
2. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 4 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы В (например S. enterica var.paratyphi B). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 4, 5, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 5, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе В в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.
3. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор d получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S. enterica var. typhi . Полученная сыворотка содержит О рецепторы 1, 9, 12, Vi и H рецептор d. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 9, 12, Vi по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. enterica var. typhi в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний.
4. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор i получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S.typhimurium Breslau. Полученная сыворотка содержит рецепторы О 1, 4, 5, 12 и H рецепторы i, 1, 2. Далее проводят адсорбцию групповых О рецепторов 1, 4, 5, 12 и Н рецепторов 1, 2 по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. typhimurium Breslau в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезной инфекции.
В диагностике инфекционных болезней широко применяются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки, которые в зависимости от содержания соответствующих антител называются агглютинирующие, преципитирующие, гемолитические, противовирусные.
Агглютинирующие сыворотки. Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией Кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7—8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом.
Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.
Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки обладают высоким титром — до 1 : 12 800 — 1 : 25 600.
Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, так как они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода.
Поэтому в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированиими, монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению.
Для получения таких сывороток нрименяют метод Кастелляни — метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция группоных антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки — сыворотки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену или адсорбированные, поливалентные, дающие реакции агглютинации с двумя — тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция.
Адсорбированные сыворотки применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод).
Агглютинирующие сыворотки наиболее широко применяются при диагностике заболеваний, вызываемых бактериями семейства Enferobacferiaceae. Так, при идентификации эшерихий используются поливалентные и типовые ОК-сыворотки; при дифференциации сальмонелл — набор сывороток: агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллезная О-сыворотка (групп А, В, С, Д, Е) — для определения принадлежности к роду Salmonella, при положительном результате — определяют отдельно с каждой сывороткой (входящей в смесь) серологическую группу и в заключение определяется серологический тип выделенного возбудителя с моно-рецепторными Н-сыворотками сальмонелл, входящих в данную группу.
Читайте также: