Диагностика бруцеллеза у крупно рогатого скота

Обновлено: 22.04.2024

Бруцеллез относят к наиболее опасным инфекционным заболеваниям хронического характера как для животных, так и для человека. Больше всего ему подвержены коровы и овцы. Хозяйства и предприятия, где зафиксирована вспышка данного заболевания, подлежат закрытию на карантин.

Что вызывает бруцеллез у животных

Возбудитель — грамотрицательные бактерии Brucella. Их насчитывается 6 видов, однако принципиальных отличий между ними нет. Все они устойчивы к низким температурам — способны сохраняться в замороженном состоянии более года. В кипятке моментально погибают.

Бактерии могут обитать в почве, воде, кормах, навозе, откуда попадают в пищеварительный тракт животных и оседают на слизистых. Заражение происходит и через дыхательные пути, слизистые. Возможно даже поражение кожи при контакте с инфицированным навозом, мочой. Носителями выступают кровососущие насекомые, грызуны и дикие животные.

Наиболее частым источником заражения становятся коровы с бруцеллезом. Бактерии попадают во внешнюю среду при родах вместе с водами, плодом, последом, а затем — с мочой, молоком. Зачастую бруцеллез начинается с использования в корме КРС обрата от зараженного животного, который не подвергли дезинфекции.

Как развивается бруцеллез коров, овец

После попадания в организм бактерии размножаются в лимфоузлах и распространяются по внутренним органам. Этот период длится 3–5 недель. Затем болезнь может перейти в хроническую форму без ярких симптомов. Особь длительное время может быть носителем бруцелл.

Провоцирующим фактором чаще всего становится беременность самки — в этот период бактерии особенно активно размножаются в полости матки. Однако воспаление охватывает не только мочеполовую систему, но и суставы, кожные покровы. Так, для быков характерны артриты, абсцессы.

Симптомы

Явное проявление бруцеллеза — аборты во второй половине беременности (у коров — на 5–8 месяце, у овец — на 4–5-м). Причина в проникновении бруцелл в матку, что сопровождается воспалительным процессом, пролиферативными и дегенеративно-некротическими изменениями и приводит к гибели и изгнанию плода. Часто наблюдается задержание последа, что становится причиной эндометритов, яловости, маститов.

Диагностика

Серологическое исследование.
Бактериологическое исследование плода.
Аллергические пробы.

Возможно ли лечение бруцеллеза

В санитарных (СП 3.1.085-96) и ветеринарных (ВП 13.3.1302-96) правилах Россельхознадзора однозначно сказано, что поголовье в зараженном бруцеллезом хозяйстве подлежит полной ликвидации. Таким образом, болезнь не лечится, и все меры должны быть направлены на недопущение распространения бруцеллеза.

Профилактические мероприятия осуществляют в строгом соответствии с ВП 13.3.1302-96 и СП 3.1.085-96. Ниже указаны основные из них:

При покупке животных их помещают в 30-дневный карантин и исследуют на бруцеллез.
Необходимо соблюдать чистоту, проводить дезинфекцию, дезинсекцию, дератизацию.
Все поголовье обследуют на бруцеллез 1–2 раза в год.

Какое дезинфицирующее средство использовать

Компания NITA-FARM разработала и выпускает дезинфицирующее средство, доказавшее эффективность в профилактике бруцеллеза.

Для заказа обращайтесь к дистрибьюторам NITA-FARM, для консультаций звоните: 8 (800) 700 02 20.

УКАЗАНИЯ
ПО ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30 декабря 1982 г. N 115-6a

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.

Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (козье-овечий), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), овис (бараний), канис (собачий) и неотома (кустарниковых крыс).

Микроорганизмы первых трех видов вызывают бруцеллез; бруцеллы вида овис - заболевание, называемое инфекционным эпидидимитом баранов (ИЭ).

От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных.

1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:

различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида, однако бруцеллы видов мелитензис и абортус могут мигрировать и на животных других видов;

клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее частое клиническое проявление болезни у маточного поголовья - аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов. При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез нередко сопровождается поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок - эндометрит, вагинит, у самцов - орхит, эпидидимит);

патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно (так называемый "миллиарный бруцеллез матки").

1.2.2. У баранов, больных инфекционным эпидидимитом, в семенниках и придатках обнаруживают воспалительно-некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенника.

1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое и серологическое) исследования материала и аллергические исследования животных в хозяйствах.

Плановые серологические и аллергические исследования являются основными методами выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.

1.4. При отборе проб крови, молока и патологического материала, а также при проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями по данному вопросу.

2. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА ОТ ЖИВОТНЫХ И ПЕРЕСЫЛКА ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.

2.2. На бактериологическое исследование на бруцеллез в лабораторию направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее 3 плодов) или желудок плода с содержимым (желудок перевязывают со стороны пищевода и со стороны двенадцатиперстной кишки), а также кусочки печени и селезенки.

При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70-градусным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10-15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1-процентного спиртово-водного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.1. Для исследования на инфекционный эпидидимит в лабораторию направляют: от баранов - семенники с придатками; от овцематок - абортированные плоды с плодовыми оболочками, выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта.

2.2.2. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в тот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь на серологическое исследование на бруцеллез.

Если в течение 24-30 часов взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30-процентным водным раствором химически чистого глицерина.

Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4-5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.

2.3. На серологическое исследование в лабораторию направляют кровь (или сыворотку крови) и молоко.

2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней - из ушной или хвостовой, у лисиц и песцов - из бедренной вены, у норок - путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста) в стерильные пробирки по 5-7 мл (от пушных зверей по 1-2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30-60 мин при 20-30 °С, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4-10 °С. Через 20-24 часа отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки (лучше в пробирки Флоринского) и направляют на исследование в лабораторию в свежем или консервированном виде.

Консервирование сывороток проводят:

добавлением 0,05 мл (1 капля) 5-процентного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при постоянном перемешивании;

сухой борной кислотой (2-4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка кристаллов;

путем однократного замораживания.

Неконсервированная сыворотка пригодна для исследования в течение 6 дней со дня взятия крови с сохранением ее при 4-8 °С.

Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 дней; замороженные сыворотки - в течение 3 дней после однократного оттаивания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.

2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу (10-15 мл) цельного свежего молока берут из одного удоя от коровы (буйволицы) в стерильную пробирку. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

При направлении молока на исследование в лабораторию каждую пробу консервируют добавлением одной капли 10-процентного раствора формалина на 5-10 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2-3 суток. Перед исследованием его необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.

При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции следует проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.

Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), страдающих маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые 2 недели после родов.

2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.

3. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА

3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание.

3.2. Бруцеллы обнаруживают тремя методами: бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.

3.3. Бактериоскопическое исследование.

Из доставленного на исследование патологического материала делают по 2 мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.

Мазки, фиксированные на пламени, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шин (см. Приложение N 1, п.1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно кокко-бактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шин в красный цвет.

3.4. Бактериологическое исследование.

3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночно-глюкозно-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар или сывороточно-декстрозный агар (см. Приложение N 1, п.2).

Культивирование возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) проводят на плотных или полужидких печеночно-сывороточном или печеночно-аминопептидном агарах, а также на сывороточно-декстрозном агаре (см. Приложение N 1, п.2).

3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5-процентным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка - в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.

Из печенки и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0х1,5х2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1-0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой непосредственно из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.

Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.

При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей каждого плода отдельно.

Из плодовой оболочки, плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений). Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3-процентным раствором гидроокиси калия на 30 минут. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5-процентного спиртового раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 0,125 мг на 1 мл среды.

Содержимое бурс, гигром высевают на 3-4 чашки с плотной питательной средой, содержащей бактериостатические препараты.

Пробы молока центрифугируют 30 минут при 3000 оборотов в минуту. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1-0,2 мл вносят на 3-4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом, высевают на среды без бактериостатических веществ.

3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37-38 °С.

При исследовании материала от крупного рогатого скота половину засеянных пробирок и чашек инкубируют в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10-15%), другую - в обычных атмосферных условиях.

Для выделения возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) все посевы инкубируют в атмосфере, содержащей 10-15% углекислого газа.

Для создания атмосферы с повышенным содержанием углекислого газа засеянные пробирки заливают парафином или помещают в эксикатор (микроанаэростат).

Перед парафинированием пробирки закрывают горящими ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5-1 см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.

Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:

заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;

внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25-процентного раствора серной кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л объема);

сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать не более половины объема эксикатора.

Для определения концентрации углекислого газа в эксикаторе можно использовать химический метод (см. Приложение N 1, п.3).

В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3-4 дня визуально, при необходимости через лупу или при малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста часть поверхности агара орошают конденсационной жидкостью.

При значительном росте посторонней микрофлоры (80% и более засеянных пробирок) бактериологическое исследование прекращают.

При просмотре посевов обращают внимание на характер роста микробов. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем - сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона, а в дальнейшем небольшой осадок на дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.

При обнаружении роста на жидких средах и отсутствии характерного роста на агаре из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из специальных методов и делают пересев на чашку с плотной средой для выделения чистой культуры. Пересевы на чашках культивируют так же, как и высевы из патологического материала.

Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным (окраска мазков по Граму и одним из специальных методов), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой.

НАСТАВЛЕНИЕ ПО ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Руководитель Департамента ветеринарии Е.А.Непоклонов 29 сентября 2003 г. N 13-5-02/0850

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.

Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (овец и коз), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), канис (собак), овис (баранов и овец) и неотома (кустарниковых крыс).

Микроорганизмы первых четырех видов вызывают бруцеллез животных, а пятого вида - инфекционный эпидидимит баранов (ИЭ).

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом санитарными и ветеринарными правилами по профилактике и борьбе с заразными болезнями, общими для человека и животных.

1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:

- различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида. Бруцеллы видов мелитензис, абортус и суис могут мигрировать на животных других видов;

- клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее часто клиническое проявление болезни у маточного поголовья - аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов.

При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез сопровождается нередко поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок - эндометрит, вагинит, у самцов - орхит, эпидидимит);

- патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно, так называемый "милиарный бруцеллез матки";

- у баранов, больных бруцеллезом, в семенниках и придатках обнаруживают некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенников.

1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое, серологическое и молекулярно-генетическое) исследования материала и аллергическое исследование свиней в хозяйствах.

Плановые серологические исследования являются основным методом выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.

Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.

1.4. При взятии проб крови, молока и патологического материала, а также проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями.

2. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА ОТ ЖИВОТНЫХ И ПЕРЕСЫЛКА ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.

2.2. Для бактериологического исследования на бруцеллез направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее трех плодов) или селезенку, печень, желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, и околоплодную жидкость.

Для прижизненной диагностики бруцеллеза от животных берут кровь, молоко, содержимое гигром (бурситов) и абсцессов. При диагностическом убое - дополнительно селезенку, печень, подчелюстные, заглоточные, предлопаточные, надколенные, подколенные, надвыменные, парааортальные, тазовые лимфатические узлы и половые органы. Жидкий материал берут в стерильную посуду (пробирки, банки).

При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70%-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10-15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70%-ным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1%-го спиртоводного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.1. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в этот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь (сыворотку крови) для серологического исследования на бруцеллез. Если в течение 24-30 ч взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4-5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.

2.3. Для серологического исследования в лабораторию направляют кровь (сыворотку крови) и молоко.

2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней - из яремной, ушной или хвостовой; у собак - головной предплечья или латеральной подколенной голени; у лисиц и песцов - из бедренной вены; у норок путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста в стерильные пробирки по 5-7 мл (от пушных зверей по 1-2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Консервирование сывороток проводят:

- добавлением 0,05 мл (1 капля) 5%-го раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при тщательном перемешивании;

- сухой борной кислотой (2-4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка;

- путем однократного замораживания.

Неконсервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 6 сут со дня взятия крови при условии хранения их при 4-8 °С.

Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 сут; замороженные сыворотки - в течение 3 сут после однократного оттаивания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.

2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу цельного свежего молока от коровы (буйволицы) берут сборную из каждой доли вымени одного удоя в одну стерильную пробирку в количестве 10-15 мл. При этом, если молоко берут перед дойкой, то первые порции молока сдаивают. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Молоко исследуют свежее (охлажденное до 4-10 °С или неохлажденное) или консервированное добавлением в каждую пробу одной капли 10%-го раствора формалина на 5 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2-3 сут. Перед исследованием молоко необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.

При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции можно проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.

Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), больных маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые две недели после родов. Молоко, имеющее повышенную кислотность (30° по Тернеру и выше), исследованию не подлежит, т.к. антиген обесцвечивается.

2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.

3. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА

3.1 Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание.

3.2 Бруцеллы обнаруживают бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.

3.3 Бактериоскопическое исследование

Из доставленного на исследование патологического материала делают по два мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.

Мазки, фиксированные над пламенем горелки, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шину (см. Прил. N 1, п.1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно коккобактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину в красный цвет.

3.4. Бактериологическое исследование

3.4.1 Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночный глюкозо-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночный глюкозо-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар, сывороточно-декстрозный агар, печеночно-сывороточный агар и печеночно-аминопептидный агар, (см. Прил. N 1, п.2) и другие питательные среды, предназначенные для этой цели.

3.4.2 Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5%-ным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка - в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.

Из печени и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0х1,5х2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1-0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.

Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.

Из плодовых оболочек и плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений).

Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3%-ным раствором гидроокиси калия на 30 мин. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5%-го спиртоводного раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 12,5 мг на 100 мл среды и др.

Пробы молока центрифугируют 30 мин при 3000 об./мин. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1-0,2 мл вносят на 3-4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом или другими консервантами, высевают на среды без бактериостатических веществ.

3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37-38 °С.

При исследовании материала от крупного рогатого скота половину засеянных пробирок и чашек культивируют в обычных условиях, другую - в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10-15%) в -инкубаторе или эксикаторе (микроанаэростате). Аналогичные условия можно создать в пробирках, закрытых резиновыми пробками или залитых парафином.

Перед парафинированием пробирки закрывают ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5-1,0 см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.

Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:

- заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;

- внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25%-го раствора кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л объема);

- сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать не более половины объема эксикатора. Для определения концентрации углекислого газа в эксикаторе можно использовать химический метод (см. Прил. N 1, п.3).

3.4.4. Посевы выдерживают в термостате при 37-38 °С в течение 30 сут. Первичный осмотр посевов проводят через 24-48 ч. Пробирки с агаром и бульоном, заросшие посторонней микрофлорой, обезвреживают путем автоклавирования при 1,5 атм. в течение 1 ч.

В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3-4 сут визуально, при необходимости через лупу или малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста часть поверхности агара орошают посевным материалом.

При просмотре посевов обращают внимание на характер роста микробов. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем свете - сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

При обнаружении роста на жидких средах и отсутствии характерного роста на агаре из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из специальных методов, и делают пересев на чашки с плотной средой для выделения чистой культуры. Пересевы на чашках культивируют так же, как и высевы из патологического материала.

Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным (окраска мазков по Граму и одним из специальных методов - по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шину), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с использованием набора компонентов для серологической дифференциации бруцелл.

Для постановки пластинчатой реакции агглютинации на стекле необходимы следующие компоненты: испытуемая культура, набор для серологической дифференциации бруцелл (выпускается биопредприятием), 0,5%-ный фенолизированный физиологический раствор рН 7,0-7,2.

Разведение крупного рогатого скота (КРС) – выгодный и прибыльный вид деятельности, благодаря которому можно получить свежее молоко и мясо. К сожалению, содержание коров и быков может принести немало проблем. У этих животных могут развиться различные инфекционные заболевания, одно из которых – бруцеллез КРС. Ему подвержены не только коровы и быки, но и другие представители фауны, в том числе и человек.

Бруцеллез у КРС: что это?

Бруцеллез КРС: что это такое?

Первое упоминание заболевания появилось около 2 тысяч лет назад, сделано оно было знаменитым древнегреческим целителем Гиппократом. В 19 веке бруцеллез был научно описан английским врачом, а вскоре ученые нашли микроорганизм, который вызывал недуг. В то время заболевание называлось средиземноморской или мальтийской лихорадкой. На протяжении долгого времени постоянные аборты у скота считались отдельным заболеванием, но в итоге была найдена связь недуга и биологических признаков возбудителей.

Бруцеллез у крупного рогатого скота – серьезное бактериальное заболевание, которое вызывается микроорганизмами рода Бруцелла (Brucella). Характеризуется патологиями в половой структуре у КРС, а также поражениями нервной системы, сердца, сосудов, костей и суставов. Проникая в организм коровы, инфекция перемещается в молочные железы, селезенку, печень и матку, в итоге стимулируя аборт. Выделяют несколько форм недуга, описанных в таблице ниже.

Форма	Длительность
Острая	Сопровождается симптомами на протяжении 1-2 месяцев
Подострая	Недуг развивается в течение 3 месяцев
Хроническая	Крупный рогатый скот страдает от недуга больше 3 месяцев

Бактерия Бруцелла, вызывающая бруцеллез

Бактерия очень устойчива к внешней среде. Она отлично выживает в условиях отрицательной температуры. До пяти месяцев Бруцелла живет в водных условиях, в земле – три месяца и больше. В молоке она присутствует до 46 дней, в брынзе – до двух месяцев. Остальные молочные продукты содержат бактерию на протяжении всего срока их пищевой ценности. Бактерия погибает, если прокипятить молоко и произвести его пастеризацию. Препараты же дезинфекции способны избавиться от Бруцеллы за несколько минут.

Пути передачи бруцеллеза среди КРС

Заражение может осуществляться разными способами, но чаще всего инфекция проникает в организм животных фекально-оральным методом. Распространяется инфекция очень быстро, передаваясь от зараженных коров к здоровым особям. Также бактерии могут попасть бытовым способом, когда на пораженную слизистую животного попадает возбудитель недуга.

Самые частые случаи заражения – через корм, воду, предметы ухода, подстилку и другие вещи, с которыми чаще всего контактирует скот.

Микробы так же могут попасть в организм через трещины на коже, органы пищеварения и дыхательные пути.

Чаще всего бруцеллез развивается у скота, который проживает на частных фермерских и приусадебных предприятиях. Происходит это преимущественно в пастбищный период, во время контакта с другими животными. Многие фермеры не понимают, насколько опасна болезнь (не только для животных, но и для человека). Вспышки заболевания могут наблюдаться после завоза новых особей на ферму, а также при несоблюдении правил карантина и отсутствии правильных лабораторных мероприятий и вакцинации.

КРС на пастбище

Видео — Россельхознадзор: осторожно – бруцеллез!

Симптомы болезни: как распознать бруцеллез КРС

Главный признак бруцеллеза у КРС – это выкидыш или появление на свет нежизнеспособной особи. Развитие тех или иных симптомов зависит от индивидуальных особенностей каждого отдельно взятого животного. Если есть подозрение на заболевание, следует обратить внимание и на другие симптомы болезни.

Пошаговая инструкция по осмотру и выявлению бруцеллеза у КРС.

Шаг 1. Проверьте, появились ли на задних конечностях коровы/быка/теленка абсцессы (нарывы, гнойники, которые появляются из-за воспалительного процесса) или гугромы (кисты, образующиеся в тканях). Часто у животного развивается бурсит – воспаление суставов на передних конечностях;

Шаг 2. Понаблюдайте за тем, как питается животное. Если скот болен, то аппетит у него упадет, он станет малоподвижным и слабо активным. Корова/бык/теленок становятся угнетенными, их походка может быть неуверенной. Вес начнет снижаться. Иногда может наблюдаться повышенная температура тела;

Шаг 3. Проверьте, нет ли у животного слизистых выделений из половых органов. Они бурого или коричневого цвета, совсем не имеют запаха;

Шаг 4. Участвуйте в родах скота. У коров, которые пережили выкидыш, может наблюдаться задержка последа (плаценты). Иногда развивается эндометрит, вызванный воспалительными процессами, он сопровождается обильным выделением гноя;

Шаг 5. Внимательно следите за количеством молока. Удой коровы снижается, если она больна бруцеллезом. Ее вымя может отекать, воспаляются молочные железы.

Симптомы бруцеллеза у КРС: поражение конечностей

У быков также можно диагностировать болезнь. У них наблюдаются признаки воспаления препуции (крайней плоти), а также орхит (воспаление тканей яичек). Помните о том, что некоторые симптомы могут оказаться двоякими: например, выкидыши могут происходить из-за туберкулезного заболевания. Если даже корова получила заражение через открытую ранку, в ее области не наблюдается никаких признаков недуга.Симптоматика бруцеллеза слабовыраженная, и реальный диагноз может определить только специалист.

Ветеринария КРС: диагностика бруцеллеза

Установить диагноз самостоятельно очень сложно. Если вы не являетесь опытным фермером и не можете самостоятельно диагностировать заболевание, обратитесь к специалисту (ветеринару). Он осмотрит животное, получит от вас всю необходимую информацию. Если у врача появится подозрение на заражение, он назначает исследование в лаборатории. В зависимости от формы диагностики используется абортированный плод, а также проводится анализ молока или крови коровы. Лабораторные методы диагностики бруцеллеза:

Реакция аллергии. Самке вводится абортин, ответ будет получен примерно через сутки (но не позднее 72 часов). По величине опухоли можно судить о наличии заболевания. Следует насторожиться, если образование достигло величины фасоли. Есть отрицательная сторона у этого метода: перенесшие бруцеллез, но полностью здоровые животные также дают положительную реакцию;
Реакция агглютинации Райта. Иногда невозможно найти причину заражения в крови животного. Чаще всего в диагностике болезни используется анализ на реакцию агглютинации, специалисты оценивают ее и исследуют. Это самый надежный метод определения возбудителя. Для его применения необходимо приготовить антиген, затем оценить и исследовать реакцию. У заболевших животных она положительная.

Диагностика бруцеллеза: реакция агглютинации Райта

Инструкция по забору крови для анализа у коровы

Шаг 1. Привяжите корову, зафиксируйте ее голову за рога или недоузок;

Шаг 2. У самого начала шеи наложите жгут из резины или плотный ремешок, затяните его. Если вы все сделали правильно, яремная вена должна налиться кровью. Попробуйте ее прощупать;

Шаг 3. Возьмите острую иглу (предварительно прокипяченную), вколите ее в яремную венку, двигаясь снизу вверх (глубина – около 4 сантиметров). Каждой корове – своя, индивидуальная иголка;

Шаг 4. Кровь должна вытечь из иглы, поэтому предварительно подставьте чистую пробирку. Если жидкость не идет, поверните иглу вокруг оси и подвигайте ее то вперед, то назад;

Шаг 5. Когда пробирка наполнится на 2/3 от объема, ослабьте ремешок, зажмите венку пальцами и резко выньте иглу;

Шаг 6. Закройте пробирку специальной пробкой, кожу в месте укола смажьте настойкой йода.

Правильная фиксация коровы для взятия анализа

Необходимо четко следовать инструкции и учитывать все меры безопасности при заборе крови. Чтобы не заразиться бруцеллезом, рекомендуется проводить забор крови и прочих жидкостей в специально оборудованных лабораториях.

Протекание бруцеллеза у КРС

Болезнь может иметь острое, хроническое или бессимптомное течение. Больше всего предрасположены к болезни взрослые особи. Когда возбудитель проникает в организм, он начинает размножаться у ворот инфекции, после чего воспаление доставляется в кровеносные и лимфатические пути и проникает в весь организм. Инфекция заполняет тело животного, местом дислокации выбирая определенные органы и системы.

Основные органы поражения – печень, молочные железы, селезенка и матка.

Локализируясь в плаценте, инфекция вызывает нарушения в развитии эмбриона, оно останавливается, происходит аборт. Это может случиться на четвертом или пятом месяце беременности. Телята, которые родились своевременно, могут оказаться нежизнеспособными. Обычно такие особи умирают в первые несколько дней жизни. Инкубационный период заболевания – от 2 до 4 недель.

Если в стаде нет беременных особей, определить недуг поможет только лабораторное исследование.

То, как проходит бруцеллез в стае, зависит от количества беременных самок. В некоторых стадах выкидыш происходит у половины самок и более. Как правило, аборт случается один раз, гораздо реже – два раза. Если инфекция была занесена в здоровое стадо, выкидыш может произойти у 60% самок. От бруцеллеза взрослые особи не умирают. При вскрытии могут быть найдены поражения в половой структуре, некрозы в суставах, воспаления в печени, почках и селезенке.

Протекание бруцеллеза: выкидыш у коровы

Основные методы лечения бруцеллеза КРС

Метод лечения выбирается исходя из тяжести бруцеллеза. На первой стадии эффективны антибиотики, которые избавляют организм от возбудителя недуга: рифампицин, левомицетин, стрептомицин, тетрациклин. Время лечения и необходимую дозу назначает ветеринар. При хроническом течении болезни антибиотики бесполезны – в этом случае назначается вакцинация, снимающая симптомы и останавливающая дальнейшее развитие бактерий.

В некоторых случаях при лечении болезни используют комплексную терапию. К антибиотикам добавляются иммуностимулирующие медикаменты либо противовоспалительные средства. Если у животного появляются боли, ему назначают болеутоляющие препараты. Назначенные врачом уколы можно производить самостоятельно.

Инструкция по правильному введению лекарства.

Шаг	Действие
1.	Ограничьте движения коровы, поместив ее в узкий загон. Голова коровы должна придерживаться специальным фиксатором.
2.	Выберите область для укола. Обычно ей является шея, часто – место между основанием хвоста и костью бедра. Конкретные указания можно получить у специалиста.
3.	Введите медикамент в соответствии с указаниями. Продолжайте до тех пор, пока не будет введено нужное количество лекарства.
4.	Выньте иглу из места инъекции, отпустите корову.

Методы лечения бруцеллеза КРС: укол корове

Профилактика бруцеллеза КРС

В группу риска заражения бруцеллезом попадают люди, которые работают с животными. Чтобы не допустить развитие у крупного рогатого скота заражения, необходимо придерживаться четких правил ухода, содержания и разведения КРС:

Памятка по профилактике бруцеллеза КРС

Содержание крупного рогатого скота в плохих, некомфортных условиях значительно снижает их иммунитет, увеличивая риск заражения инфекциями, в частности, ею может оказаться бруцеллез КРС.

Соблюдайте все профилактические меры по предотвращению заболевания, ухаживайте за скотом, тщательно обрабатывайте молочную и мясную пищу, при появлении первых признаков болезни животного обратитесь к ветеринару. Эти несложные правила помогут вам сохранить здоровье и благополучие всего поголовья крупного рогатого скота и будущего молодняка.

Риски употребления мяса и молочных продуктов от больных животных

Человек может заразиться бруцеллезом при потреблении молока, которое было получено от зараженных животных (в том числе продуктов молочного происхождения). Если плохо обрабатывать мясо, также есть шанс получить заболевание. Часто заражение происходит на производстве, связанном с обработкой шерсти и кожи. Заболеть можно любым путем, даже во время контакта с больной коровой. Бывали случаи, когда человек заражался бруцеллезом во время уборки навоза. Скрытый период протекания болезни может продолжаться от недели до нескольких месяцев.

Внимательно следите за своим здоровьем, если ваша работа заключается в уходе за крупным рогатым скотом.

Симптомы бруцеллеза у человека разнообразны:

общее недомогание;
нервозность, стрессы;
боль в голове, неприятные ощущения в мышцах и суставах;
медлительность, слабая подвижность;
сниженный аппетит;
повышение температуры (до 37 градусов и больше);
озноб.

Симптомы могут не проявлять себя вообще, и не обязательно, что они будут присутствовать одновременно. Во время болезни поражаются сосуды, нервные клетки и костно-суставный аппарат. Нередко появление расстройств в психике. Заболевание длится примерно 3 месяца, но может затянуться и на 2-3 года. Остаточные явления, которыми сопровождается заболевание, могут стать причиной развития инвалидности. У беременных женщин может случиться выкидыш.

Чтобы избежать появления болезни, не используйте в пищу сырое молоко, невыдержанные сыры и брынзу, а также не ешьте мясо, которое не прошло необходимую обработку.

Употребление молока от больного животного

Видео — Бруцеллез: симптомы и признаки болезни у человека

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ ГБУ "БАШКИРСКАЯ НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ ЛАБОРАТОРИЯ"

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Возбудителем бруцеллеза крупного рогатого скота является микроорганизм Brucellaabortus.

Бруцеллез распространен в регионах с развитым животноводством. В России бруцеллез встречается в Краснодарском и Ставропольском краях, на Южном Урале и в других областях. Республика Башкортостан считается благополучной по данному заболеванию.

Диагноз на бруцеллез крупного рогатого скота устанавливают комплексно на основании анализа эпизоотологических данных, клинических признаков, лабораторных исследований.

Бактериологическая диагностика бруцеллеза предусматривает бактериоскопию мазков из патологического материала и при необходимости постановку биопробы на морских свинках. Бактериоскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Граму и специальными методами (по Козловскому, Шуляку—Шину), имеет ориентировочное значение. Выделение культуры бруцелл при посеве биоматериала на специальные питательные среды и положительная биопроба на морских свинках имеют решающее значение при постановке бактериологического диагноза на бруцеллез.

Для массовых профилактических и диагностических прижизненных исследований скота на бруцеллез широко используют реакцию агглютинации в пробирках (РА), реакцию связывания комплемента (РСК) или реакцию длительного связывания комплемента (РДСК), пластинчатую реакцию агглютинации – роз-бенгал проба (РБП), кольцевую реакцию с молоком (КР), реакцию иммунодиффузии с О-ПС антигеном (РИД).

В период учебной практики я проводила исследование сыворотки крови крупного рогатого скота на бруцеллез под руководством ведущего ветеринарного врача серологического отдела БашНПВЛ. Применяли следующие серологические реакции: РБП, РА и РСК.

Роз-бенгал проба. Реакцию проводили на чистых сухих эмалированных диагностических пластинах с лунками. На бортиках пластинки против каждой лунки записывали номер исследуемой сыворотки. Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 мл вносили на дно лунки при помощи микропипетки. В каждую лунку рядом с сывороткой при помощи микропипетки вносили 0,03 мл (две капли) антигена. Затем антиген в каждой лунке тщательно смешивали с сывороткой.

В начале работы поставили контроль антигена с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в тех же дозах.

Учет результатов реакции проводили визуально в течение 4 минут после смешивания сывороток с антигеном при слегка наклонном положении пластинки.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, выделяющихся на белом фоне лунки. Реакцию считают отрицательной при отсутствии агглютинации (смесь гомогенна, равномерно окрашена). При нечетко выраженной агглютинации проводят повторное исследование данной сыворотки и по его результатам дают окончательную оценку реакции (положительная или отрицательная).

Во всех опытных лунках агглютинация отсутствовала, следовательно, все исследуемые пробы сыворотки крови крупного рогатого скота дали отрицательный результат.

Реакция агглютинации. Реакцию агглютинации проводят в серологических пробирках в объеме 1 мл в четырех разведениях: 1:50, 1:100, 1:200 и 1:400. При массовых исследованиях допускается постановка реакции в первых двух разведениях.

Сыворотки крупного рогатого скота разливали групповыми дозаторами Флоринского в две пробирки в дозах 0,02 и 0,01 мл. Затем в каждую пробирку добавляли по 1,0 мл антигена, разведенного соответствующим раствором хлорида натрия 1:20. При этом разведения сывороток стали, соответственно, 1:50 и 1:100. Одновременно с испытуемыми сыворотками ставили контроли с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в таких же разведениях. После добавления к испытуемым и контрольным сывороткам антигена штативы с пробирками встряхивали для смешивания компонентов и поместили в термостат при 37°С на 16 - 20 ч, затем выдерживали при комнатной температуре в течение 1 ч.

Результаты реакции учитывают визуально, определяя степень просветления жидкости, внешний вид агглютината (при его наличии) или антигена на дне пробирки до и затем, после легкого встряхивания, оценивают в крестах.

Реакция связывания комплемента. Реакцию проводили в одной пробирке в разведении сыворотки 1:5 с антигеном. Необходимые разведения сывороток готовили следующим образом: к 0,05 мл испытуемой сыворотки добавляли 0,2 мл физиологического раствора (разведение 1:5). Сыворотку, физиологический раствор и другие компоненты реакции вносили при помощи аппарата Флоренского.

Реакцию связывания комплемента учитывают визуально. При постановке реакции в одной пробирке (при массовом исследовании) учет проводят один раз - сразу после извлечения штативов из водяной бани. Результаты реакции оценивают в крестах.

Во всех пробирках осадок отсутствовал, жидкость была интенсивно окрашена. Следовательно, все исследуемые пробы сыворотки крови крупного рогатого скота дали отрицательный результат.

Проведенные плановые серологические исследования позволяют своевременно выявить больных бруцеллезом животных и являются главным профилактическим мероприятием против бруцеллеза.

Читайте также: