Экспресс тест на криптоспоридиоз

Обновлено: 27.03.2024

Для данного исследования лаборатория принимает следующий биоматериал:

Подготовка к исследованию

Условия подготовки определяются лечащим врачом.

Нельзя собирать кал из памперсов, после клизмы, после введения ректальных свечей или приема медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника, с примесями мочи или выделений из половых органов.

Кал собирается после естественной дефекации на чистый лист бумаги или в чистую ёмкость (ёмкость предварительно вымыть с мылом, обдать кипятком, и высушить). Нельзя отбирать пробу из унитаза. Испражнения собираются специальной лопаточкой из разных мест, вмонтированной в крышку контейнера, в объёме примерно с грецкий орех.

Для исследований предпочтительно использовать утреннюю порцию фекалий. Следует избегать попадания кусочков непереваренной пищи и мочи. Крышку контейнера плотно закрутить.

Доставка в лабораторию в день взятия биоматериала.

Метод исследования

Cryptosporidium parvum – представитель типа споровиков, относится к классу кокцидий (Coccidea), вызывает протозойное заболевание криптоспоридиоз, протекающее с поражением эпителия пищеварительного тракта, наблюдается преимущественно у детей и лиц с иммунодефицитом. Тяжесть клинических проявлений, риск развития осложнений зависят от состояния иммунной системы. Заболевание протекает в острой форме, клинически проявляется водянистой диареей до 10 и более раз в сутки, схваткообразными болями в животе, стул становится зловонным без примеси крови и слизи. За сутки потеря жидкости может достигать 15-17 литров. Помимо частого жидкого стула пациентов беспокоят: лихорадка, до 38 °С, снижение аппетита, отсутствие сил, головные боли. У больных с хорошей иммунореактивностью заболевание обычно длится 5-7 дней, и заканчивается самопроизвольным выздоровлением. Более тяжелые симптомы и последствия наблюдаются у пациентов с иммунодефицитом; в этом случае диарея может продолжаться долго, протекать очень тяжело, и приводить к угрожающему жизни обезвоживанию организма.

Источник инвазии – человек. Заразиться можно от животных (котят, щенят, телят, поросят, ягнят и т.д.), при контакте с больным животным. Инфекция может передаваться через воду и грязные руки, фекально-оральным путем, контактным от больного человека здоровому. Изредка происходит передача аэрозольным и половым путем (у гомосексуалистов).

Чувствительность и специфичность.

  • Чувствительность >99%
  • Специфичность >99%

Показания к исследованию

  • первичная диагностика инфекции, особенно среди детей с наличием диарейного синдрома;
  • скрининговое исследование в местах вспышек ОКИ;
  • обследование взрослых с диарейным синдромом.

Пример результата (вариант нормы):

Параметр Референсные значения
Криптоспоридии парвум (Cryptosporidium parvum), качественное определение антигена (иммунохроматографический экспресс-метод) Не обнаружено

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений.

При единовременном заказе нескольких услуг, услуга по сбору биоматериала оплачивается только один раз.

Краткая информация

Криптоспоридиоз – это кишечное заболевание, вызываемое одноклеточными простейшими Cryptosporidium parvum. Криптоспоридиоз передается фекально-оральным путем. Основные симптомы криптоспоридиоза – водянистая диарея, острые желудочные боли, потеря веса, тошнота, иногда жар. Симптомы обычно появляются в течение первой недели после инфицирования.

Принцип метода

Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый образец жидкого биологического материала абсорбируется поглощающим участком тест-полоски. При наличии в образце клеток Cryptosporidium parvum они вступают в реакцию с нанесенными на стартовую зону специфическими моноклональными антителами против Cryptosporidium parvum, меченными окрашенными частицами, и продолжают движение с током жидкости. В аналитической зоне тест-полоски происходит взаимодействие со специфическими моноклональными антителами, иммобилизованными на поверхности мембраны, с образованием окрашенного иммунного комплекса.

В контрольной зоне тест-полоски специфический окрашенный иммунный комплекс образуется независимо от наличия в тестируемом биологическом материале клеток Cryptosporidium.

В том случае, если в анализируемом образце присутствуют клетки Cryptosporidium, на тест-полоске образуются две параллельные линии (красная аналитическая, обозначенная буквой Т, и зеленая контрольная, обозначенная буквой С), что указывает на положительный результат анализа. В случае отсутствия в анализируемом образце клеток Cryptosporidium на тест-полоске образуется одна зеленая контрольная линия (С), что указывает на отрицательный результат анализа.

Состав

Кассеты с тест-полосками упакованы в индивидуальные вакуумные упаковки из фольги алюминиевой, содержащие пакетики с силикагелем.

Необходимые оборудование и материалы, не входящие в состав набора

  • контейнеры для сбора образцов кала;
  • одноразовые резиновые или пластиковые перчатки;
  • часы или таймер.

Аналитические характеристики

Меры предосторожности

При проведении определения следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. исследуемые образцы биологического материала следует рассматривать как потенциально инфицированные.

Использованные тесты и остатки биологического материала должны быть помещены в специальный контейнер для санитарных отходов.

Анализируемые образцы

Свежесобранный биологический материал (кал), не содержащий консерванты.

Образцы кала должны быть собраны в чистый контейнер. Следует отбирать образцы кала для анализа в течение первой недели после появления симптомов заболевания, т.к. спустя неделю после инфицирования количество клеток Cryptosporidium значительно уменьшается.

Образцы кала до определения можно хранить при температуре 2–4°С не более 2 сут., при необходимости более длительного (до 1 года) хранения – при температуре –20°С и ниже.

Перед анализом образцы кала должны быть полностью разморожены и доведены до комнатной температуры.

Повторное замораживание и оттаивание образцов недопустимо.

Подготовка образцов

1. Снять крышку-капельницу с пробирки и с помощью стержня на крышке взять небольшое количество анализируемого образца. Для этого ввести стержень в 3 разные зоны образца, собрав примерно 150 мг кала (рис. 1-1). Если образец жидкий, отобрать 150 мкл с помощью пипетки. Ввести стержень с образцом в пробирку с буфером для растворения образца и плотно завинтить крышку-капельницу (рис. 1-2).

2. Несколько раз встряхнуть пробирку, чтобы облегчить растворение образца (рис. 2-1).


Проведение анализа

3. Встряхнуть пробирку с раствором образца. Отрезать или отломить кончик крышки-капельницы (рис. 2-1).


6. Через 10 мин визуально оценить результат реакции.

Интерпретация результатов

Выявление в тестовом окошке кассеты одной зеленой контрольной линии (С) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. указывает на отсутствие в анализируемом образце кала клеток Cryptosporidium (рис. 3-1).


Выявление в тестовом окошке кассеты двух параллельных окрашенных линий (С и Т) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. указывает на наличие в анализируемом образце кала клеток Cryptosporidium (рис. 3-2). Интенсивность красной аналитической линии (Т) в тестовом окошке кассеты может меняться в зависимости от концентрации клеток Cryptosporidium в образце.

Условия хранения и эксплуатации

© Все права защищены. ООО "Биомир-Центр".
Использование материалов сайта запрещено.

Криптоспоридиоз — зоонозная протозойная болезнь с фекально-оральным механизмом передачи. Характеризуется преимущественным поражением пищеварительного тракта с обезвоживанием организма. Относится к оппортунистическим инфекциям, т.к. представляет значительную угрозу для жизни людей с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь, больных СПИДом.

Возбудители криптоспоридиоза — кокцидии рода Cryptosporidium — облигатные паразиты, инфицирующие микроворсинки слизистых оболочек ЖКТ и дыхательных путей животных и человека. Практически все случаи заболевания у людей связаны с C. рarvum, однако у больных СПИДом были выделены и C. baileyi.

При изучении водных вспышек крипстоспоридиоза ооцисты были выделены из водопроводной и речной воды и из сточных вод на полях орошения, воды из колодцев, куда попадала дождевая вода, а также из льда, полученного с поверхности открытых водоисточников.

Естественный источник инвазии для человека — различные млекопитающие, в основном, сельскохозяйственные (телята, ягнята), а также другие животные, связанные с местами проживания людей (грызуны и др.). В качестве фактора передачи инвазии играют роль многие продукты (сырые овощи, зелень, молоко, морепродукты и др.), но главным фактором является вода. Криптоспоридиоз может передаваться от человека к человеку (случаи заражения детей в детских учреждениях, внутрибольничные вспышки и случайные заражения лабораторного персонала). Существует вероятность передачи криптоспоридий половым путем у мужчин-гомосексуалистов.

Криптоспоридиоз распространен практически повсеместно, на всех континентах, за исключением Антарктиды. В настоящее время считают, что водный путь выступает основным путем передачи инфекции. В мире ежегодно регистрируется большое количество водных вспышек болезни, охватывающих большое число заболевших на различных территориях, в которые были вовлечены и больные ВИЧ-инфекцией, у последних криптоспоридизоз протекал тяжело с большой потерей массы тела, что многих из них привело к гибели.

Естественная восприимчивость людей невысокая. Заболеванию больше подвержены дети до 2 лет, а также лица с различными иммунодефицитными состояниями (больные опухолями, получающие химиопрепараты, сахарным диабетом, реципиенты костного мозга и органов и особенно больные ВИЧ-инфекцией на поздних стадиях болезни). К группам риска относят также ветеринаров, животноводов, работников предприятий по убою скота.

Среди больных ВИЧ-инфекцией, заболевших криптоспоридиозом, в результате длительной (хронической) инвазии умирает более 50%.

Патогенез заболевания изучен недостаточно. Преобладание в клинической картине болезни профузной водянистой диареи, подобной холерной, предполагает продукцию энтеротоксина, однако несмотря на многочисленные поиски, токсин у криптоспоридий обнаружен не был. Некоторые исследования показали наличие у криптоспоридий гена, ответственного за продукцию белка, который обладает гемолитической активностью и сходен с таковым у E. coli — o157 H7.

Наиболее типичная локализация процесса — дистальные отделы тонкой кишки. При размножении паразита в кишечнике поражается большое число энтероцитов, что приводит к атрофии ворсинок. При этом наблюдается гипертрофия крипт, мононуклеарная и полиморфно-ядерная инфильтрация базальной мембраны и кратерообразные углубления на поверхности эпителия. Массивное поражение микроворсинок приводит к значительному нарушению всасывания воды и электролитов. Повышается их секреция через кишечную стенку, что проявляется в виде водянистой диареи. Нарушается ферментативная деятельность кишечника. Возникают вторичные мальабсорбция и стеаторея. У больных на поздних стадиях ВИЧ-инфекции возможно поражение не только всего ЖКТ, но и гепатобилиарной системы и дыхательных путей.

Важнейший фактор, определяющий восприимчивость к этой инвазии и тяжесть ее течения у человека, — состояние иммунитета. Доказана роль гуморального иммунитета, но главное значение имеет нарушение функции Т-лимфоцитов.

В основе клинических проявлений при криптоспоридиозе лежит острый диарейный синдром, развивающийся через 2–14 дней после заражения и протекающий по типу острого энтерита или гастроэнтерита. Выраженность симптомов в значительной мере зависит от состояния иммунной системы больного. У больных без иммунодефицита обильный водянистый (холероподобный) стул с очень неприятным запахом с частотой до 20 раз в сутки отмечается, в среднем, на протяжении 7–10 дней (2–26 дней). Больной теряет при этом от 1 до 15–17 л жидкости в сутки. Профузный понос может сопровождаться умеренными спастическими болями в животе, тошнотой и рвотой (у 50%), небольшим повышением температуры тела, отсутствием аппетита, головной болью. Обычно наступает выздоровление, но у ослабленных детей болезнь может продолжаться более 3 нед и закончиться фатально. Очень редко заболевание может приобретать характер колита с появлением крови и слизи в кале.

Показания к обследованию:

  • длительная диарея у пациентов с нарушениями иммунной системы;
  • наличие гастроэнтеритов неуточненной этиологии у детей младшего возраста.

Материал для исследований: Образцы фекалий.

Этиологическая лабораторная диагностика включает визуальное выявление криптоспоридий при использовании микроскопии, обнаружение АГ и ДНК криптоспоридий, выявление специфических АТ к АГ микроорганизма.

Дифференциальная диагностика – другие диарейные заболевания, протекающие с обезвоживанием:

  • у больных ВИЧ-инфекцией — ЦМВ-колит, микроспоридиоз, изоспороз, заболевания желчевыводящей системы.

Сравнительная характеристика методов лабораторных исследований

Наиболее распространенный метод диагностики криптоспоридиоза – выявление ооцист при микроскопическом исследовании окрашенного препарата фекалий. В связи с особенностями строения ооцист для их окрашивания применяются специальные методы, позволяющие выявлять кислотоустойчивые микроорганизмы. У пациентов без иммунодефицитa криптоспоридиоз протекает как ОКИ с высокой концентрацией криптоспоридий в фекалиях, что позволяет эффективно использовать микроскопические исследования для диагностики. Для обнаружения АГ криптоспоридий используют метод РИФ, детекцию результатов выполняют с использованием люминесцентной микроскопии. Обнаружение ДНК методом ПЦР в сравнении с микроскопическим исследованием обладает более высокой чувствительностью для детекции криптоспоридий. Применение ПЦР-исследования для обнаружения ДНК возбудителя или микроскопии в комбинации с предварительным обогащением образцов предпочтительно для пациентов с ВИЧ-инфекцией, течение заболевания у которых носит затяжной характер и может сопровождаться низким содержанием ооцист криптоспоридий в фекалиях.

Криптоспоридиоз - протозойная инфекция, вызываемая криптоспоридиями и протекающая с преимущественным поражением пищеварительного тракта. Типичные клинические проявления криптоспоридиоза включают профузную водянистую диарею, тошноту, рвоту, спастические боли в животе. У лиц с иммунодефицитом, наряду с тяжелой гастроинтестинальной формой, может развиваться криптоспоридиоз желчевыводящих путей и респираторного тракта. Криптоспоридиоз диагностируется путем выявления ооцист криптоспоридий в пробах испражнений; реже с помощью ИФА, РИФ, ПЦР. Лечение криптоспоридиоза включает диету, регидратацию, ферменты; по показаниям – антибиотики.

МКБ-10

Криптоспоридиоз

Общие сведения

Криптоспоридиоз – паразитарная кишечная инвазия, характеризующаяся гастроэнтеритом с диарейным синдромом. Наряду с сальмонеллезом, шигеллезами, кампилобактериозом, ротавирусной инфекцией, лямблиозом, криптоспоридиоз является одной из наиболее частых кишечных инфекций человека. Распространенность криптоспоридиоза в индустриально развитых странах составляет 1-3%; в развивающихся странах с низким уровнем санитарной культуры – 5-10%. Риск заболеваемости криптоспоридиозом выше среди детей и иммунокомпрометированных пациентов (т. ч. ВИЧ-инфицированных), у которых инфекция может приобретать тяжелое течение. Возможны внутрибольничные вспышки криптоспоридиоза, случаи группового заражения в детских садах, школах, семьях.

Криптоспоридиоз

Причины криптоспоридиоза

Возбудители протозойной инфекции - внутриклеточные паразиты криптоспоридии (Cryptosporidium), принадлежат к классу споровиков (Sporozoasida), подклассу кокцидий (Coccidiasina). Для человека патогенны криптоспоридии вида C. parvum. Весь жизненный цикл паразита протекает в организме единственного хозяина (животного или человека), который выделяет инвазионные ооцисты с испражнениями. Ооцисты криптоспоридий могут долго сохранять свои патогенные свойства во внешней среде.

Заражение криптоспоридиозом происходит по фекально-оральному механизму (при употреблении контаминированной возбудителями воды, молока, пищи), реже – при контакте с инфицированными животными или человеком, гомосексуальном половом контакте. Кроме этого, спорозоиты из ооцист могут высвобождаться непосредственно в кишечнике, не покидая организма хозяина, что обусловливает механизм аутоинфекции при криптоспоридиозе.

Широкое распространение криптоспоридиоза в популяции отчасти объясняется малой инфицирующей дозой криптоспоридий: заболевание может вызвать даже попадание в ЖКТ 1-10 ооцист; средняя инфицирующая доза составляет около 132 ооцист. Уникальной особенностью ооцист криптоспоридий является их резистентность к дезинфицирующим средствам (в частности, к хлору), а также малый размер (4-7 мкм), что позволяет им свободно проникать через многие фильтры. Большая часть современных технологий очистки воды не позволяет добиться 100%-ной задержки ооцист криптоспоридий, поэтому водный путь заражения криптоспоридиозом рассматривается на сегодняшний день как ведущий. Повышенный риск заражения криптоспоридиозом имеют дети до 10 лет, животноводы, ветеринары, лаборанты, медицинский персонал инфекционных отделений.

В пищеварительном тракте человека оболочки ооцисты разрушаются, и из нее высвобождаются спорозоиты, которые проникают в энтероциты, отграничиваясь от цитоплазмы клетки двойной оболочкой. В эпителиальных клетках кишечника спорозоиты превращаются в трофозоиты, а затем, в результате множественного деления – в шизонты и мерозоиты I типа. Последние способны прикрепляться к другим эпителиальным клеткам, увеличивая численность паразитов. Кроме этого, после нескольких циклов бесполого размножения мерозоиты I типа трансформируются в мерозоиты II типа, образующие мужские и женские гаметы. После слияния половых клеток образуется зигота, которая затем развивается в ооцисту.

Примерно 80% ооцист криптоспоридий имеют толстую клеточную стенку и выделяются во внешнюю среду с фекалиями или глоточной слизью. Остальные ооцисты являются тонкостенными; их них в просвет кишечника высвобождаются спорозоиты, запускающие новый цикл развития паразита в результате эндогенной инвазии. Весь цикл развития паразитов в организме одного хозяина (от проникновения до выделения во внешнюю среду) занимает 4-7 дней.

Паразитируя в эпителии кишечника, возбудители криптоспоридиоза вызывают дегенеративные изменения энтероцитов. Это сопровождается развитием синдрома мальабсорбции, замедлением всасывания воды и электролитов, угнетением ферментативной деятельности кишечника, что находит клиническое выражение в возникновении профузного водянистого поноса. При криптоспоридиозе также возможно поражение эпителия глотки, гортани, пищевода, желудка, толстой кишки, а при аспирации рвотных масс – трахеи и бронхов.

При тяжелом течении криптоспоридиоза отмечается гематогенное распространение криптоспоридий в различные внутренние органы. При нормально функционирующих защитных механизмах циклическое развитие криптоспоридий в организме быстро подавляется и проявления криптоспоридиоза купируются. У иммунокомпрометированных лиц персистирование инфекции в организме может происходить неопределенно долго, что обусловливает хроническое течение криптоспоридиоза при отсутствии повторного заражения.

Симптомы криптоспоридиоза

Длительность инкубационного периода при криптоспоридиозе в среднем составляет 4-14 дней. Характер клинических проявлений и тяжесть течения инфекции зависит от исходного иммунного статуса пациента. У лиц с нормальным иммунитетом обычно развивается гастроинтестинальная форма криптоспоридиоза; у пациентов с иммунодефицитом нередко возникает бронхолегочная (респираторная) форма инфекции, а также диссеминация в другие органы.

Течение криптоспоридиоза у больных с иммунодефицитами (врожденной гипогаммаглобулинемией, получающих иммуносупрессивную терапию, перенесших трансплантацию органов, больных ВИЧ/СПИДом и т. п.) более тяжелое и длительное. При гастроинтестинальной форме криптоспоридиоза токсико-инфекционный и диарейный синдромы, признаки дегидратации выражены значительнее. Примерно у 60% пациентов кишечная инфекция длится 4 и более месяцев.

Из внекишечных форм криптоспоридиоза обычно встречается поражение респираторного тракта, желчевыводящих путей, редко - поджелудочной железы. Респираторный (бронхолегочный) криптоспоридиоз сопровождается одышкой, кашлем со скудной мокротой слизистого характера, дыхательной недостаточностью, лихорадкой, лимфаденитом. У больных СПИДом часто возникает криптоспоридиозная пневмония, приводящая к летальному исходу. При поражении желчных путей развивается холецистит, склерозирующий холангит или гепатит. Больных беспокоит лихорадка, тошнота, боль в правом подреберье, желтуха, диарея.

Диагностика и лечение криптоспоридиоза

Дифференциальная диагностика острых кишечных инфекций и подтверждение криптоспоридиоза основано на обнаружении ооцист возбудителя в испражнениях. С этой целью применяются методы окрашивания мазков фекалий по Цилю-Нильсену, Романовскому-Гимзе, Кестеру. Возможно обнаружение антигена криптоспоридий в кале методами ИФА, РЛА, ПЦР, а также в крови с помощью иммунофлюоресцентного или иммуноферментного анализа.

При бронхолегочной форме криптоспоридиоза проводится бронхоскопия. Эндоскопически обнаруживаются признаки трахеита и бронхита; в полученном материале (мокроте, аспирате трахеи и бронхов, биоптате бронхов) выявляются ооцисты криптоспоридий. Рентгенологическое исследование легких позволяет увидеть картину двухсторонней интерстициальной пневмонии. Для подтверждения криптоспоридиоза желчных путей прибегают к чрескожной пункции желчного пузыря и внутрипеченочных желчных протоков.

Большинство инфекционистов считает, что лица с нормальной иммунной системой, легким или среднетяжелым течением инфекции не нуждаются в специальном лечении криптоспоридиоза. Для купирования клинических проявлений достаточно назначения диеты, оральной регидратации, ферментов, антидиарейных средств. В тяжелых случаях, в т. ч. иммунокомпрометированным лицам, необходимо назначение антибактериальных препаратов группы макролидов, фуразолидона, метронидазола, пириметамина, спирамицина и др.; проведение коррекции водно-электролитного состояния с помощью инфузий водно-солевых растворов.

Прогноз и профилактика криптоспоридиоза

У иммунокомпетентных лиц криптоспоридиоз протекает в легкой или среднетяжелой форме и обычно заканчивается самопроизвольным выздоровлением. Наибольшую опасность криптоспоридиоз представляет для детей до 2-х лет, пациентов с иммунодефицитными состояниями и получающих длительную иммуносупрессивную терапию. Предотвратить или минимизировать риск заражения криптоспоридиозом позволит обеззараживание сточных вод, кипячение водопроводной воды, установка дополнительных фильтров для очистки воды, санитарное просвещение, соблюдение противоэпидемического режима в детских и лечебных учреждениях, а также мер личной гигиены.

Читайте также: