Экспресс тесты на инфекции кошек что это такое

Обновлено: 11.05.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;

тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

Для проведения исследования в медицинских офисах необходимо предъявить СНИЛС и документ удостоверяющий личность. Запись на исследование В случае получения положительного или сомнительного результата на COVID-19 и при необходимости проведения подтверждающего тестирования обра.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.

Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.

Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
термостабильная ДНК-полимераза;
дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Панлейкопения становится причиной серьезного поражения быстрорастущих клеток тканей. Наибольшее негативное влияние оказывается на стенки кишечника и клетки костного мозга. Возбудитель легко передается от носителя к здоровому.

Чаще всего панлейкопении подвержены невакцинированные или не полностью вакцинированные кошки. Человек, собака, грызуны и другие не восприимчивы к болезни. В группе риска и те, чьи владельцы не соблюдали сроков прививок или подготовку к ним.

Данные лабораторных обследований указывают на резкое снижение уровня лейкоцитов. У заболевших особей наблюдается гипоальбуминемия, а также снижение содержания натрия, калия и хлора в крови. Как правило, присутствует гипогликемия. Активность печеночных ферментов заметно повышена.

Для диагностики панлейкопении широко используются экспресс-тесты, но они могут давать недостоверные результаты. Самый надежный метод, ПЦР-диагностика, устанавливает фрагменты генов возбудителя. Их обнаруживают в пробах со стен кишечника или в кале.

Ринотрахеит – респираторная вирусная болезнь, при которой заметно поражение глаз, носоглотки, бронхов и легких. Для установки диагноза берут смывы методом (ПЦР) из пораженных органов. Не исключается ложноотрицательный результат.

Калицивироз локализуется на носовых ходах, гортани, носовом зеркале. Визуальный осмотр начинается с ротовой полости. В ней уже в первые дни могут появиться язвенные очаги. Их отсутствие не опровергает калицивироз. Негативному воздействию подвергается и опорно-двигательный аппарат.

Заболевание чаще встречается у непривитых животных. Особенно опасным считается межвакцинальный период при содержании группами. Отсутствие необходимой иммунной реакции при нарушении правил и сроков вакцинации не позволяет выработать антитела.

Картина на начальной стадии калицивироза явно еще не выражена (еще отсутствуют характерные поражения на языке). Образцами для поиска следов инфекции являются смывы. Ветеринарный врач для ПЦР-оценки берет их из носа и рта. Стоит учитывать, что анализ может быть ложноотрицательным, так как существуют более 20 серотипов возбудителя. Если фрагменты не найдены, но присутствуют все признаки калицивироза, то на их основании назначается противовирусное и общетерапевтическое лечение.

Вирусная лейкемия кошачьих (FeLV) оказывает негативное влияние на гемолимфопоэтическую систему. Другие ее названия – лейкоз или лимфосаркома. Вызывается РНК-содержащим вирусом Retroviridae, подсемейства Oncornavirinae, рода онковирусов, типа С.

Для подтверждения потребуется фермент-связанный ИФА-тест и иммунофлуоресценция (МФА). Шансы получения необъективного ответа высоки, поэтому применяют сразу несколько методов, включая ПЦР-тест.

Вирусный перитонит кошачьих поражает практически весь организм. Источником является РНК-вирус FIPV. Он неизлечим.

Для профилактики его распространения ветеринарные специалисты рекомендуют ограничивать в контактах с представителями своего вида больную кошку.

Клиническая картина зависит от вирулентности. Выраженность симптомов объясняется силой иммунного ответа. Слабые животные и молодняк быстро погибают. В практике встречаются два вида:

• с образованием выпотного экссудата в полостях;

Иммунодефицит кошек (FIV) вызывается Feline immunodeficiency virus. Он относится к семейству ретровирусов группы лентивирусов.

Задействуется несколько способами: экспресс-тесты на выявления антител: анализ крови методом (ИФА) на определение антител и ПЦР на выявления гена.

При подозрении на хроническое течение FIP, FIV или FelV желательно несколько раз сдавать анализы на выявления антител и гена для опровержения или подтверждения данного диагноза.

В качестве профилактики ветеринарные специалисты рекомендуют владельцам ежегодно проводить вакцинацию питомцев, избегать контакта с бездомными собаками и кошками и большой скученности в одном помещении.

В настоящее время все также актуальна остается диагностика инфекционных заболеваний животных. При этом врачи и пациенты нуждаются в достоверной диагностике, позволяющей назначить адекватное лечение в минимальные сроки. Идеальный анализ – это экспресс-анализ. Но результат, полученный при экспресс диагностике, по достоверности не должен уступать результатам, полученным персоналом в специализированных условиях. В настоящее время в ветеринарии появились новые технологические возможности эффективного решения указанной проблемы при применение экспресс-тестов нового поколения.

Экспресс-тесты просты в применении, не требуют специальной длительной подготовки проб, реакция проходит в короткие сроки. 12-25 минут. И в тоже время этот метод достаточно надежен - достоверность достигает 92-98%.

Экспресс-тесты фактически являются типовой мини-лабораторией.

Иммунохроматографические диагностические методы являются позднейшей разработкой, отвечающей всем требованиям, и наиболее широко используемыми в мире диагностическими экспресс методами. В принципе требуется только один этап для проведения теста. Что значительно сокращает время проведения диагностики.

Антитела - это белки, которые образуются клетками нашего организма в ответ на внедрение в него антигена.

При образовании комплекса "Антиген-Антитело" происходит реакция, которая проявляется цветовой реакцией, которая позволяет адекватно оценить результат.

В то же время каждый тест содержит зону контроля, отвечающую за достоверность результата и позволяющую минимизировать процент ошибки.

Кроме диагностики инфекционных заболеваний экспресс-тесты позволяют определять наличие беременности собак. Метод основан на определении полипептидного гормона в плазме или сыворотке собак. Релаксин является на сегодняшний день единственным специфичным гормоном беременности у собак и может использоваться как точный и надежный параметр для определения беременности, а также для диагностики патологических изменений в матке и плаценте (резорбция плода, аборт) и в процессе исключения ложной беременности.

Применение экспресс-теста возможно с 21 дня беременности, наилучшие результаты достигаются на 24-26 день после овуляции (99, 9%). Это быстрый и надежный метод диагностики, составляющий альтернативу ультразвуковой диагностике беременности.

QBQVET это линейка экспресс-тестов для животных, также иногда говорят иммунохроматографические тесты (ИХА-тесты).

Экспресс-тесты в настоящее время широко применяются ветеринарами всего мира и помогают в диагностике широко спектра заболеваний животных. Если не принимать в расчет сельскохозяйственных животных, то экспресс-тесты для животных делятся на два типа: экспресс-тесты для собак и экспресс-тесты для кошек.

Для чего нужны ветеринарные экспресс-тесты?

Многие заболевания могут проходить со схожими симптомами, поэтому крайне важно провести первичную дифференцированную диагностику с тем, чтобы выработать правильную стратегию лечения. Если есть подозрение на наличие у животного инфекционного заболевания, экспресс-диагностика просто незаменима.

Преимущества

Экспресс-тесты по сравнению с другими методами диагностики вирусных инфекционных заболеваний животных обладают радом преимуществ:

Простота применения. Экспресс-тесты в применении не требуют специальных навыков и знаний и в работе настолько просты, что разобраться в том, как с ними работать сможет любой человек, даже ребенок. На нашем сайте для каждого типа тестов есть подробная видео-инструкция.
Скорость. Вы получаете результат в течение 10 минут. Ни один другой метод диагностики не работает также быстро. Часто, что спасти жизнь животному, критически важно поставить диагноз максимально быстро. В этой ситуации диагностика экспресс-тестами просто незаменима.
Доступность. Для начала работы не надо покупать и обслуживать дорогое лабораторное оборудования. Все что нужно для проведения исследования уже есть в наборе.
Возможность применения в домашних условиях. Если у вас домашний питомник, то применение экспресс-тестов это отличная альтернатива, которая позволяет не тратиться на поездки с животными в лабораторию или на выезд лаборантов.

Точность результатов

Часто задается вопрос, насколько точным являются результаты анализов, проводимые с использованием экспресс-тестов. Точность диагностики определяется такими параметрами как чувствительность и специфичность. Для экспресс-тестов QBQVET на разные заболевания данные параметры незначительно варьируются в пределах 95-99%, что является достаточно высоким показателем надежности получаемых результатов.

При этом, при интерпретации результатов исследований необходимо учитывать обстоятельства, которые могут влиять на конечный результат анализов. К таким факторам могут относится, например, прием некоторых лекарств, а также прививки и история болезни отдельно взятого животного.

Также для вашего удобства мы предусмотрели много способов оплаты (включая онлайн), среди которых наверняка найдется тот, который подойдет и вам.

Значит, анализ должен быть достоверным, быстрым и простым. Недостижимая мечта для российских реалий? В наше время все возможно, ХХI век на дворе. Гуманная медицина не один десяток лет использует экспресс-методы для первичной диагностики инфекций. С этой целью используется метод иммунной хроматографии (ИХА), он наиболее прост, дешев, при этом обладает высокой достоверностью результата и проводится быстро, не требуя оборудования и особых условий. Теперь российские Васьки и Жучки могут получить помощь по мировым стандартам - диагностические наборы VetExpert (США,) позволяют быстро и достоверно определить наличие инфекционных и паразитарных заболеваний, а значит, уже в течение 15 минут после приема врач сможет назначить и начать именно то лечение, которое необходимо именно Вашему животному.

Причем здесь скорость? Не приносите в дом котенка без проверки, экспресс-диагностика занимает 15 минут. Кстати, Вы знаете, что лямблии у человеческих и звериных детей могут быть общими? На лямблиоз тоже можно провериться быстро и точно: экспресс-тест VetExpert обладает 100% чувствительностью и специфичностью. Экспресс-тесты VetExpert не требуют предварительной подготовки, результат анализа готов в течении 10 минут после внесения материала. Необходимые условия – горизонтальная поверхность и комнатная температура. И, конечно, наличие самого теста.

ДЛЯ ВСЕХ! Во-первых, метод прост в исполнении – не требует ни приборов, ни дополнительных материалов, а главное – сложных специальных знаний и навыков. Простота использования – огромное преимущество. Например, аппарат УЗИ бесполезен без специалиста, значит, дежурный доктор не сможет им воспользоваться и помочь пациенту. Для проведения анализа с помощью экспресс-теста VetExpert доктору достаточно иметь перед глазами инструкцию и уметь читать.

Орехова Екатерина, ветеринарный врач,
служба ветеринарной помощи "Ветдиагноз", 901 370-40-94

Читайте также: