Ифа тест-система для диагностики коклюша

Обновлено: 18.04.2024

Определение в крови антител к возбудителю коклюша и паракоклюша (Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis), используемое для диагностики этих заболеваний, а также для оценки эффективности вакцинации АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная прививка).

Синонимы русские

Антитела к палочке коклюша и паракоклюша, бактериям Борде – Жангу, иммуноглобулины к возбудителю коклюша и паракоклюша.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis Antibodies, Abs.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Bordetella pertussis – это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Ближайший родственник этого микроорганизма, бактерия Bordetella parapertussis, также способна вызывать схожее по клинической картине, но более мягкое по течению заболевание респираторного тракта, называемое паракоклюшем. Риску заболевания коклюшем и паракоклюшем подвержены все возрастные группы, и прививка АКДС не обеспечивает 100-процентную защиту от инфекции Bordetella.

Антитела к возбудителям коклюша и паракоклюша могут быть обнаружены через 1-2 недели после возникновения первых симптомов заболевания (эти сроки могут быть увеличены у новорождённых детей). Основными антигенами, взаимодействующими с anti-Bordetella pertussis и anti-Bordetella parapertussis, являются филаментозный гемагглютинин, коклюшный токсин, белок пертактин, липоолигосахарид и фимбриальные антигены. В ответ на инфекцию вырабатываются все классы иммуноглобулинов. Титр защитных антител постепенно снижается в течение первых 1-3 лет после заболевания или вакцинации.

Существует несколько лабораторных методов диагностики Bordetella-ассоциированной инфекции. Обнаружение специфических антител к Bordetella составляет основу серологических методов диагностики. Одним из используемых методов является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клиническую стадию заболевания, возраст пациента и наличие вакцинации в прошлом.

В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. Чаще всего пациент обращается за медицинской помощью при явных клинических признаках заболевания (спастическом кашле, рвоте, цианозе), характерных для пароксизмальной стадии. Серологическим методам принадлежит ведущая роль в выявлении коклюша в пароксизмальной стадии. Точность диагностики коклюша с помощью серологии в этой стадии значительно превосходит точность бактериологического метода.

РНГА – реакция непрямой гемагглютинации – это непрямой метод диагностики, результаты которого зависят от особенностей иммунной системы пациента. Она может быть с успехом применена при подозрении на коклюш и паракоклюш у детей и взрослых. РНГА не используется для диагностики коклюша у младенцев – это связано с некоторыми сложностями при интерпретации результатов, возникающими в результате незрелости иммунной системы новорождённых и влияния материнских антител. Также с особой осторожностью следует трактовать результаты РНГА у пожилых пациентов, а также пациентов с иммуносупрессией (ВИЧ-инфекция, прием глюкокортикостероидов).

Следует отметить, что РНГА не может быть использована в качестве диагностического теста в течение года после прививки АКДС, так как не позволяет различить иммунологический ответ, вызванный текущей инфекцией и вакцинацией.

Для доказательства текущей инфекции сравнивают титр антител в парных сыворотках, полученных с промежутком примерно в 1 месяц. В отличие от большинства других методов диагностики, чувствительность РНГА не зависит от назначения антибактериальных препаратов. Диагностически значимым является 50-100-процентное нарастание титра антител в парных сыворотках. Постепенное нарастание концентрации антител наблюдается при инфекции ранее не вакцинированных пациентов, и наоборот, при повторном заражении пациентов, получивших в течение предшествующих 3 лет вакцину АКДС, титр антител нарастает не постепенно, а стремительно. Отсутствие нарастания титра в парных сыворотках также менее характерно для взрослых пациентов. В такой ситуации обнаружение высокого титра антител при однократном исследовании сыворотки в сочетании с клиническими признаками коклюша может оказаться достаточным критерием для постановки диагноза.

РНГА является дополнительным методом диагностики коклюша и паракоклюша. Для получения максимально полной диагностической информации рекомендуется провести некоторые дополнительные лабораторные тесты (ПЦР, посев на среду).

Эффективность стандартного протокола вакцинации ребенка с помощью вакцины АКДС составляет 80-85 %. Титр антител к Bordetella pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки АКДС у детей.

КОКЛЮШ / МЕТОД / ДИАГНОСТИКА / АНТИТЕЛА / ИММУНОГЛОБУЛИНЫ / СРОКИ БОЛЕЗНИ / ВАКЦИНАЛЬНЫЙ СТАТУС / PERTUSSIS / METHOD / DIAGNOSTICS / ANTIBODIES / IMMUNOGLOBULINS / TIMING OF ILLNESS / VACCINATION STATUS

Аннотация научной статьи по наукам о здоровье, автор научной работы — Попова Ольга Петровна, Скирда Т.А., Федорова И.М., Петрова М.С., Борисова О.Ю.

Недостаточная эффективность используемых методов лабораторной диагностики коклюша в практическом здравоохранении диктует необходимость расширения спектра средств верификации этой инфекции. В статье представлен анализ диагностической ценности метода ИФА, который предусматривает выявление антител различных изотипов (IgM, IgG, IgA) к коклюшному токсину и филаментозному гемагглютинину. Всего обследовано 279 детей, среди которых 114 были в возрасте до 1 года, 1 65 старше 1 года. Использование метода ИФА в целом позволило подтвердить диагноз коклюша у 74,3 ± 2,6% больных. При проведении сравнительного анализа его эффективности у детей различного возраста установлено, что в группе больных в возрасте до 1 года выявлен значительный удельный вес серонегативных пациентов, составивших 46,1 ± 6,2%. Анализ частоты выявления антител различных классов у непривитых детей разного возраста выявил отличия в характере динамики продукции антител , превышающих пороговый уровень, в зависимости от сроков болезни и возрастных групп. Для пациентов раннего возраста был характерен низкий удельный вес больных с диагностически значимыми показателями IgM-антител на 2-3-й неделях болезни (например, на 2-й неделе у 6,7 ± 6,5% против 20,0 ± 7,9% и 50,0 ± 15,3 1-3 и 4-6 лет соответственно). Диагноз коклюша у детей до 1 года был подтвержден преимущественно выявлением антител IgG класса, начиная с 4 недели болезни. Сравнительный анализ частоты обнаружения антител различных классов у привитых детей показал значительный удельный вес больных с диагностически значимыми уровнями IgA наряду с высоким уровнем продукции IgG, причем и на поздних сроках болезни , что позволяет принимать это во внимание как важный серологический критерий диагностики коклюша у привитых детей.

Похожие темы научных работ по наукам о здоровье , автор научной работы — Попова Ольга Петровна, Скирда Т.А., Федорова И.М., Петрова М.С., Борисова О.Ю.

The Diagnostic Value of ELISA Method for Pertussis in Children

Because of low effectiveness of laboratory methods for diagnosing pertussis it is important to look for new ways of verification of this infection. The article presents the analysis of the diagnostic value of ELISA method , which involves the identification of antibodies of different isotypes (IgM, IgG, IgA) to pertussis toxoid (PT) and filamentous haemagglutinin (FHA). The study included 279 children: 114 were under 1 year of age, 165 older than 1 year. The pertussis was confirmed in 74.3 ± 2.6% of patients by using ELISA method . A significant proportion of seronegative patients (46.1 ± 6.2 per cent) was revealed in the group of patients under 1 year. The pattern of production of antibodies in unvaccinated children was different. It depended on the age of the children and timing of illness . A low proportion of diagnostically significant indicators of IgM-antibodies at 2-3 weeks of illness was typical for patients under 1 year of age (e.g. 6.7 ± 6.5% as compared to 20.0 ± 7.9% and 50.0 ± 1 5.3 1 -3 and 4-6 years of age). The diagnosis of pertussis in children under 1 year of age was confirmed mainly by the detection of IgG, starting from the 4th week of the disease. In the examination of vaccinated children diagnostically significant levels of IgA and IgG were identified (even in the late stages of the disease). Thus, the results of the analysis show special significance of using ELISA method for the diagnosis of pertussis in vaccinated children.

Диагностическая ценность метода ИФА при коклюше у детей

О. П. Попова, Т. А. Скирда, И. М. Федорова, М. С. Петрова, О. Ю. Борисова, С. Ю. Комбарова, С. В. Бунин, М. В. Пенкина

ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, ГБУЗ ИКБ №1 ДЗ г. Москвы, Россия

Недостаточная эффективность используемых методов лабораторной диагностики коклюша в практическом здравоохранении диктует необходимость расширения спектра средств верификации этой инфекции. В статье представлен анализ диагностической ценности метода ИФА, который предусматривает выявление антител различных изотипов (IgM, IgG, IgA) к коклюшному токсину и филаментозному гемагглютинину. Всего обследовано 279 детей, среди которых 114 были в возрасте до 1 года, 1 65 — старше 1 года. Использование метода ИФА в целом позволило подтвердить диагноз коклюша у 74,3 ± 2,6% больных. При проведении сравнительного анализа его эффективности у детей различного возраста установлено, что в группе больных в возрасте до 1 года выявлен значительный удельный вес серонегативных пациентов, составивших 46,1 ± 6,2%. Анализ частоты выявления антител различных классов у непривитых детей разного возраста выявил отличия в характере динамики продукции антител, превышающих пороговый уровень, в зависимости от сроков болезни и возрастных групп. Для пациентов раннего возраста был характерен низкий удельный вес больных с диагностически значимыми показателями IgM-антител на 2—3-й неделях болезни (например, на 2-й неделе у 6,7 ± 6,5% против 20,0 ± 7,9% и 50,0 ± 15,3 — 1—3 и 4—6 лет соответственно). Диагноз коклюша у детей до 1 года был подтвержден преимущественно выявлением антител IgG класса, начиная с 4 недели болезни. Сравнительный анализ частоты обнаружения антител различных классов у привитых детей показал значительный удельный вес больных с диагностически значимыми уровнями IgA наряду с высоким уровнем продукции IgG, причем и на поздних сроках болезни, что позволяет принимать это во внимание как важный серологический критерий диагностики коклюша у привитых детей. Ключевые слова: коклюш, метод, диагностика, антитела, иммуноглобулины, сроки болезни, вакцинальный статус

The Diagnostic Value of ELISA Method for Pertussis in Children

O. P. Popova, T. A. Skirda, I. M. Fyodorova, M.S. Petrova, O. Yu. Borisova, S. Yu. Kombarova, S. V. Bunin, M.V. Penkina

Moscow Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Infectious Clinical Hospital №1, Moscow, Russia

Because of low effectiveness of laboratory methods for diagnosing pertussis it is important to look for new ways of verification of this infection. The article presents the analysis of the diagnostic value of ELISA method, which involves the identification of antibodies of different isotypes (IgM, IgG, IgA) to pertussis toxoid (PT) and filamentous haemagglutinin (FHA). The study included 279 children: 11 4 were under 1 year of age, 165 — older than 1 year. The pertussis was confirmed in 74.3 ± 2.6% of patients by using ELISA method. A significant proportion of seronegative patients (46.1 ± 6.2 per cent) was revealed in the group of patients under 1 year. The pattern of production of antibodies in unvaccinated children was different. It depended on the age of the children and timing of illness. A low proportion of diagnostically significant indicators of IgM-antibodies at 2—3 weeks of illness was typical for patients under 1 year of age (e.g. 6.7 ± 6.5% as compared to 20.0 ± 7.9% and 50.0 ± 15.3 — 1 —3 and 4—6 years of age). The diagnosis of pertussis in children under 1 year of age was confirmed mainly by the detection of IgG, starting from the 4th week of the disease. In the examination of vaccinated children diagnostically significant levels of IgA and IgG were identified (even in the late stages of the disease). Thus, the results of the analysis show special significance of using ELISA method for the diagnosis of pertussis in vaccinated children. Keywords: pertussis, method, diagnostics, antibodies, immunoglobulins, timing of illness, vaccination status

Верификация коклюша остается одной из острейших проблем детской инфектологии. Использование недостаточно эффективных диагностических тестов, как правило, является причиной гиподиагностики коклюша и распространения инфекции. Актуальность совершенствования лабораторной диагностики коклюшной инфекции диктуется также сложностью клинической диагностики легких и атипичных форм болезни, особенно на фоне активного вовлечения в эпидпроцесс привитых детей старшего возраста. Большие трудности составляет своевременное установление диагноза в случаях сочетанного течения коклюша с различными респираторными заболеваниями, что характерно для этой инфекции, особенно в современных условиях [1—7].

шает 10—20% [8—12]. Это обусловлено особенностями возбудителя, его медленным ростом, контаминацией исследуемого материала, поздним обследованием больных и, зачастую, неправильным забором материала. Значительно снижает эффективность бактериологического обследования и предшествовавшая антибиотикотерапия.

В связи с низким процентом бактериологического подтверждения для верификации коклюша в практическом здравоохранении достаточно часто применяются серологические методы. В России до настоящего времени реакция агглютинации (РА) являлась основным методом в серологической диагностике. При этом выявляются антитела к агглютиногенам коклюшного микроба. В течение длительного времени этод метод использовался для оценки постинфекционного и поствакцинального иммунитета, однако результаты исследований последних лет указывают на низкую чувствительность и нестандартность РА. Титры агглютининов находятся в сильной зависимости от

бактериального штамма, использованного в качестве антигена, а выявляемые антитела не обладают протектив-ной активностью, являются лишь свидетелями формирования иммунного ответа [12]. Вышеизложенное свидетельствует о недостаточной информативности этого серологического метода, в связи с чем за рубежом он признан устаревшим.

Современные серологические методы исследования при коклюшной инфекции основаны на определении уровня специфического иммунного ответа к определенным антигенам или группе антигенов. Широкое использование метода ИФА с применением высокоочищенных антигенов коклюшного микроба началось с середины 1980-х годов за рубежом и несколько позже в России. Многочисленные исследования, проведенные различными авторами, показали, что для серологической диагностики коклюша методом ИФА из всех имеющихся в настоящее время очищенных антигенных препаратов коклюшной бактерии предпочтение должно отдаваться коклюшному токсину и филаментозному гемагглютинину. [13 — 15]. В настоящее время метод ИФА широко используется для верификации коклюша во многих странах, но отсутствие отечественных и высокая цена зарубежных тест-систем ограничивают его применение в России. Наряду с этим его применение для верификации коклюша требует дифференцированного подхода к использованию и интерпретации полученных результатов, что не нашло достаточного отражения в литературе.

В связи с этим целью наших исследований явилось изучение диагностической эффективности метода ИФА при коклюше у детей в зависимости от различных факторов.

Материалы и методы исследования

34.5 ± 3,7% (57 детей). Распределение больных в зависимости от сроков обследования представлено в таблице 1. Дети в возрасте до 1 года и старше были сопоставимы по срокам обследования на 2—4 неделях болезни. Так, на

2-й неделе обследовано 18,4 ± 3,6% и 17,6 ± 3,0%,

3-й — 44,7 ± 4,7% и 35,2 ± 3,7%, 4-й — 28,7 ± 4,2% и 30,0 ± 3,6% детей соответственно. В более поздние сроки в 2 раза чаще были обследованы больные старше 1 года (табл. 1).

При анализе прививочного анамнеза установлено, что среди больных в возрасте до 1 года преобладали дети, непривитые против коклюша, составившие 87,7 ± ±3,1%. В группе детей старше 1 года обращало на себя внимание, что больные 1—3 лет также были преимущественно непривитые (в 59,0 ± 6,3% случаев), а 24,6 ± 5,5% не получили полный курс вакцинации. Лишь 16,4 ± ± 4,7% больных в этой возрастной группе были вакцинированы согласно календарю прививок. Вакцинальный статус детей 4—14 лет характеризовался тем, что в большинстве случаев (в 72,7 ± 3,5%) они были привиты против коклюша.

Результаты и их обсуждение

Нами проведен анализ диагностической ценности метода ИФА у больных коклюшем в зависимости от различных факторов: возраста детей, сроков болезни, вакцинального статуса.

В результате проведенных исследований установлено, что использование метода ИФА в целом позволило подтвердить диагноз коклюша у 74,3 ± 2,6% больных. Причем наши исследования показали, что путем выявления антител 1дМ класса, превышающих пороговый уровень, диагноз коклюша установлен у 5,7 ± 1,8% больных, 1дМ и IgG — 9,7 ± 2,2%, сочетанием 1дМ, IgG и 1дА — у

16.6 ± 2,8%, 1д А и ^ -у 20,5 ± 3,0%, только ^ —

21.7 ± 2,9% (рис. 1). При сравнительном анализе диагностической информативности метода ИФА у детей до и

Таблица 1. Распределение больных в зависимости от возраста и от сроков обследования

Возраст Число больных 2 неделя 3 неделя 4 неделя 5—6 неделя

абс. число % ± m абс. число % ± m абс. число % ± m абс. число % ± m

До 1 года 114 21 18,4 ± 3,6 51 44,7 ± 4,7 32 28,0 ± 4,2 10 9,2 ± 2,7

Старше 1 года 165 29 17,6 ± 3.0 58 35,2 ± 3,7 49 30,0 ± 3,6 29 17,3 ± 2,9

3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

Диагностика коклюша и паракоклюша

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" (Г.Я.Ценева, Н.Н.Курова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Б.Яцышина, Т.С.Селезнева, М.Н.Прадед); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (Ю.В.Лобзин, И.В.Бабаченко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 мая 2013 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

Термины и сокращения

АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ГОСТ - Государственный стандарт

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

КУА - казеиново-угольный агар

ME - международные единицы

МУ - методические указания

ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция

ПСК - период судорожного кашля

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РА - реакция агглютинации

РИФ - реакция иммунофлуоресценции

РНК - рибонуклеиновая кислота

СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СП - санитарно-эпидемиологические правила

ТЕ - буфер Трис-ЭДТА

ТУ - технические условия

ФС - фармакопейная статья

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)

FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)

NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)

PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)

RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом

1. Область применения

В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств В. pertussis, В. parapertussis и В. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.

Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.

2. Введение

В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).

Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2-5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7-14 лет - до 50,0%, дети 3-6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1-2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2-3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65% составляют привитые.

Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.

Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10-20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).

Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.

3. Характеристика рода Bordetella*, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша

* Слово "Bordetella" в наименовании раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: В. ansorpii, В. avium, В. bronchiseptica, В. hinzii, В. holmesii, В. parapertussis, В. pertussis, В. petrii, В. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана В. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. В. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. В. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), В. bronchiseptica вызывала длительный кашель. В. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: В. hinzii и В. holmesii. В. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. В. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена В. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана В. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена В. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).

Морфологические и культуральные свойства

Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2-0,5 мкм0,5-2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением В. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл +35-37 °С (оптимально +35 °С). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130-150 мг %аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения В. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности, казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. В. parapertussis и В. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.

Несмотря на многолетнюю вакцинопрофилактику, коклюш и в настоящее время играет значительную роль в детской инфекционной патологии. Сохраняются основные эпидемиологические закономерности, характерные для этой инфекции.

По-прежнему коклюш является тяжелым заболеванием для детей раннего возраста, среди которых регистрируются летальные исходы.

Протективный иммунологический фон, создаваемый прививками, предохраняет от развития заболевания коклюшем после проведенной иммунизации и облегчает течение болезни. Несмотря на увеличение охвата детей прививками против коклюша сохраняются условия, способствующие распространению заболевания. Остается группа населения, которая отказывается от проведения прививок по религиозным или другим причинам.

Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша проводится в соответствии с :

Возбудитель коклюша В ordetella pertussis, возбудитель паракоклюша В ordetella parapertussis, возбудитель бронхисептикоза В ordetella bronchiseptica,

отличающиеся друг от друга по ряду морфологических, биохимических и антигенных признаков.

Источником инфекции являются больные дети и бактерионосители. Заражение происходит воздушно-капельным путем при непосредственном общении с больным ребенком или носителем.

Исследуемый материал - слизь из верхних дыхательных путей, оседающая при кашле на задней стенке глотки. Материал забирают натощак или через 2-3 часа после еды, а также до применения полоскания или других видов лечения.

Взятие материала осуществляется двумя способами – заднеглоточным тампоном и кашлевыми пластинками. Заднеглоточным тампоном материал забирают как с диагностической целью, так и по эпидпоказаниям. Метод кашлевых пластинок используют при наличии кашля.У детей грудного возраста рекомендуется брать материал заднеглоточным тампоном.

При транспортировании материала следует оберегать его от прямых солнечных лучей, сохраняя в температурных пределах от 4 до 37 °С, для чего рекомендуется помещать его в специальные термоконтейнеры.

Посев должен быть сделан в течение 1-2 ч после забора материала.

Бактериологическая диагностика коклюша

Недостатки бактериологического метода диагностики коклюша:

1. Низкаявысеваемость микроорганизмов рода Bordetella

2. Зависимость выделения возбудителя от сроков обследования больных.

Лишь в ранние сроки болезни удается выделить возбудителя коклюша (1-2 неделя коклюша, реже 3-я неделя).

3. Зависимость выделения возбудителя от качества питательных сред. Поэтому практическим лабораториям, в которых производят бактериологическую диагностику коклюша, необходим постоянный контроль за качеством используемых питательных сред.

4. Зависимость высеваемости B . pertussis от правильности сбора исследуемого материала, который должен производится только обученным персоналом. Имеет значение кратность сбора и условия дальнейшей транспортировки взятого материала.

5.Недостатком бактериологического метода диагностики является медленный рост B . pertussis на питательных средах.

Серологическая диагностика коклюша

Серологические методы диагностики коклюша основаны на определении уровня противококлюшных антител к отдельным антигенам или группе антигенов коклюшного микроба.

Классическим методом серологической диагностики коклюша, применяемым более 50-и лет, является реакция агглютинации (РА). В течение длительного времени она использовалась для оценки постинфекционного и поствакцинального иммунитета. Недостатками РА являются низкая чувствительность и нестандартность, т.к. титры агглютининов зависят от штаммов возбудителя коклюша, используемого в качестве антигена.

С целью повышения чувствительности серологический реакций была создана диагностическая тест-система с использованием формалинизированных эритроцитов животных, сенсибилизированных комплексом антигенов коклюшного микроба – реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

Предварительные результаты были обнадеживающими и дальнейшее совершенствование шло по пути создания новых эритроцитарных диагностикумов. Однако РПГА в клинической практике не прижилась, ее применение ограничивалось отдельными научными исследованиями. Эритроцитарные диагностикумы оказались нестандартными и показывали варьирующие результаты.

С появлением метода иммуноферментного анализа (ИФА) начался новый этап в серологической диагностике коклюша. В настоящее время используются коммерческие тест-системы для ИФА зарубежного производства, которые предназначены для определения антитоксических антител к B . pertussis .

- Серологическая диагностика коклюша является дополнительным методом лабораторной диагностики. Для постановки более точного диагноза необходимо исследовать два последовательно взятых образца сыворотки крови пациента (через 2 недели после первого).

- Обнаружение антител класса IgA позволяет сделать заключение о заболевании коклюшем и свидетельствует о происходящем остром процессе.

- Антитела класса IgM обычно выявляются только на ранней стадии заболевания и обнаруживаются редко, преимущественно у непривитых детей.

- Антитела класса IgG позволяют сделать заключение об инфицировании B . pertussis . У привитых детей диагностически значимым являются показатели IgG , превышающие диагностический уровень в 2 и более раз.

- Целесообразно первое обследование проводить на 3 недели болезни, а при получении недостаточно информативных данных повторный образец крови исследовать на 5 недели коклюша.

- Результаты серологических анализов всегда должны интерпретироваться в совокупности с клинической картиной болезни. Отрицательный результат не исключает инфицирование B . pertussis .

Недостатки серологического метода диагностики коклюша:

1. Серологические методы являются методом ретроспективной диагностики коклюша.

2. Сложность интерпретации диагноза коклюша у привитых детей, т.к. в очагах инфекции у контактных детей не заболевших коклюшем также идет нарастание противококлюшных антител.

3.В связи с особенностями иммуногенеза у детей первого полугодия жизни на 1 - 2 неделях от начала болезни результат серологического обследования могут быть отрицательными и лишь обследование в динамике (на 4 – 5 неделе болезни) дает возможность подтвердить диагноз.

Таким образом, для улучшения диагностики коклюша необходимо внедрение новых современных лабораторных методов исследования, наиболее перспективным из которых является метод ускоренной диагностики – молекулярно-генетический.

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде - Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

  • Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
  • Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
  • Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
  • Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
  • При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
  • При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

1. anti-Bordetella pertussis

Титр: 1:80 – условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Титр: Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

  • коклюш;
  • паракоклюш;
  • транзиторное носительство;
  • иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие коклюша/паракоклюша;
  • неэффективная вакцинация против коклюша;
  • снижение иммунологического ответа после вакцинации;
  • ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

  • Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
  • применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
  • особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
  • предшествующая вакцинация.

Важные замечания

  • При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
  • Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

  • Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
  • Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Читайте также: