Ифа тест система корь

Обновлено: 18.04.2024

Регистрационное удостоверение № РЗН 2019/8718 от 06 августа 2019 года.

Назначение

Потенциальными потребителями набора реагентов являются специалисты учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (центры гигиены и эпидемиологии в субъектах Российской Федерации, противочумные учреждения, научные организации, санитарно-эпидемиологические службы министерств и ведомств), а также специалисты медицинских учреждений, имеющие специальность врача клинической лабораторной диагностики или биолога согласно требованиям Приказов Минздравсоцразвития №415н от 7.07.2009 г. и №541н от 23.07.2010 г.

Состав набора

Набор рассчитан на исследование 93 образцов сывороток крови в варианте скрининга, включая контроли (табл. № 1).

Таблица № 1. Состав набора.

Наименование реагента	Описание	Количество в наборе
Сыворотка крови, содержащая IgG-антитела к коксиеллам Бернета (К+)	Прозрачная жидкость красного цвета	1,2 мл – 1 пр.
Сыворотка крови, не содержащая IgG-антитела к коксиеллам Бернета (К–)	Прозрачная жидкость зелёного цвета	1,2 мл – 1 пр.
Концентрат моноклональных антител к IgG человека, меченных пероксидазой хрена (концентрат конъюгата)	Прозрачная жидкость синего цвета	0,6 мл – 1 пр.
Фосфатно-солевой буферный раствор с твином (ФСРТ, концентрат)	Прозрачная бесцветная жидкость	20 мл – 1 фл.
Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБП)	Прозрачная бесцветная жидкость	10 мл – 1 фл.
Раствор для разведения конъюгата (РРК)	Прозрачная бесцветная жидкость	11 мл – 1 фл.
Раствор для разведения исследуемых проб (РИП)	Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета	10 мл – 2 фл.
Раствор тетраметилбензидина (ТМБ)	Прозрачная жидкость слегка голубоватого цвета	2,5 мл – 1 фл.
Раствор серной кислоты (Стоп-реагент)	Прозрачная бесцветная жидкость	5 мл – 1 фл.
Иммуносорбент	96-луночный планшет, цельный или разборный с прозрачными лунками, с иммобилизованными антигенами коксиелл Бернета	1 шт.
Хлорид натрия	Кристаллы белого цвета	10 г – 1 уп.

Анализируемые образцы

Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре не выше минус 18 ºС не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при температуре от 16 до 25 ºС и перемешивают встряхиванием. Образцы проб сывороток, содержащие агрегаты и осадок, необходимо осветлять центрифугированием 10 мин. при 6000 об./мин.

Не допускается использование исследуемого материала, прошедшего термообработку, консервированного азидом натрия, с выраженным гемолизом, гиперлипидемией и бактериальным проростом ввиду возможной интерференции гемоглобина, липидов и бактериальных продуктов с коксиеллезными антителами, что может привести к ложноположительным результатам. Обязательным условием является разбавление анализируемой сыворотки перед использованием в 400 раз, что гарантирует нивелирование действия возможных интерферентов, присутствующих в следовых количествах.

Повторное замораживание сыворотки не допускается.

Проведение анализа

Подготовка сывороток

Провести предварительное разведение (1:20), смешав 5 мкл исследуемой сыворотки с 95 мкл РИП (разведение – 1:20). Для этого используют дополнительный 96-луночный планшет. В случае необходимости титрования сывороток разводить их раствором РИП с шагом 2. Разведённые сыворотки хранению не подлежат.

Подготовка раствора ФСРТ

Для получения рабочего раствора ФСРТ содержимое флакона с концентратом ФСРТ перенести в мерную колбу ёмкостью 500 мл и довести объём до метки дистиллированной водой. Перелить содержимое колбы в стакан, добавить содержимое пакета с хлоридом натрия и перемешивать до полного растворения последнего. Полученный раствор следует хранить не более 5 суток при температуре от 16 до 25 ºС и не более 30 суток при температуре от 2 до 8 ºС.

Подготовка раствора конъюгата

Концентрат конъюгата развести на растворе РРК 1:20. Необходимый объём раствора конъюгата определяется числом используемых стрипов (см. табл. № 2). Полученный раствор следует хранить не более 4 ч при температуре 4 — 6 °С.

Подготовка субстратного раствора

В зависимости от количества используемых стрипов готовят необходимый объем субстратного раствора путем смешивания соответствующих объемов реагента ТМБ и ЦБП перед проведением ферментативной реакции. Полученный субстратный раствор должен оставаться бесцветным или слегка голубоватым. Необходимый объём раствора субстрата определяется числом используемых стрипов (табл. № 2). Полученный субстратный раствор хранению не подлежит.

Таблица № 2. Расход компонентов тест-системы.

Количество стрипов	Концентрат конъюгата (мл)	РРК (мл)	ТМБ (мл)	ЦБП (мл)
1	0,05	0,95	0,05	0,95
2	0,10	1,90	0,10	1,90
3	0,13	2,47	0,13	2,47
4	0,17	3,23	0,17	3,23
5	0,21	3,99	0,21	3,99
6	0,25	4,75	0,25	4,75
7	0,29	5,51	0,29	5,51
8	0,33	6,27	0,33	6,27
9	0,37	7,03	0,37	7,03
10	0,44	8,37	0,44	8,37
11	0,46	8,74	0,46	8,74
12	0,50	9,50	0,50	9,50

Проведение иммуноферментного анализа

Регидратация сорбированного Ку-антигена. Перед использованием иммуносорбент промыть раствором ФСРТ: в лунки внести по 250 мкл раствора ФСРТ и выдержать в течение 5 мин. при температуре 20 ± 2 °С. Затем раствор из лунок удалить с помощью автоматического промывателя (вошера) или вытряхнуть.

Одну из лунок (А1) оставить незаполненной в качестве контроля субстрата, другую (В1) оставить незаполненной для контроля конъюгата, в две лунки (А2 и В2) внести по 100 мкл раствора К+, в две другие (А3 и В3) – по 100 мкл раствора К–. В остальные лунки внести по 95 мкл раствора ФСРТ и по 5 мкл предварительно разведённой в РИП в 20 раз исследуемой сыворотки. Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется, в конечном счёте, в 400 раз. Планшет закрыть крышкой и выдержать во влажной камере при температуре 37 ± 1 °С в течение 1 ч. После инкубации содержимое лунок удалить автоматическим отсасывателем в сосуд, заполненный до половины 6 % раствором перекиси водорода, затем лунки промыть, внося в каждую не менее 250 мкл раствора ФСРТ и удаляя раствор автоматическим отсасывателем. Промывать 3 раза. После последней промывки удалить остаточную влагу постукиванием перевернутым планшетом по фильтровальной бумаге.

Связывание конъюгата. Во все лунки, за исключением А1, внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата. Планшет закрыть крышкой или поместить во влажный полиэтиленовый пакет и инкубировать при температуре 37 ± 1 °С в течение 1 ч во влажной камере. Затем содержимое лунок удалить автоматическим отсасывателем и промыть 5 раз.

Проведение ферментативной реакции. Перед проведением ферментативной реакции планшет промыть дистиллированной водой для удаления остатков ФСРТ. Для этого во все лунки внести по 250 мкл дистиллированной воды и выдержать 5 мин. при температуре 20 ± 2 °С, затем воду удалить автоматическим отсасывателем. Во все лунки планшета внести по 100 мкл субстратного раствора. Планшет поместить в защищенное от света место и выдержать 20 ± 2 мин. при 15 – 25 °С.

Остановка ферментативной реакции. Во все лунки внести по 50 мкл Стоп-реагента.

Учет и интерпретация результатов

Оценка результатов производится следующим образом. Если отношение среднего значения ОП (ОП_ср) исследуемой сыворотки к ОП_ср К– ≥ 3, и при этом ОП_ср исследуемой сыворотки имеет значение выше 0,50 о.е., то этот результат следует оценивать как положительный, и сыворотка содержит антитела класса IgG к антигену коксиелл Бернета. Если отношение ОП_ср исследуемой сыворотки к ОП_ср К– меньше 3 или ОП_ср исследуемой сыворотки ≤ 0,50 о.е., то этот результат следует оценивать как отрицательный, и сыворотка не содержит антител класса IgG к антигену коксиелл Бернета.

Положительный результат ИФА, то есть выявление антител к C . burnetii , может свидетельствовать как о текущем заболевании Ку-лихорадкой, так и об инфицированности (или иммунизации) C . burnetii в прошлом.

Для дифференциации положительных результатов ИФА анамнестического характера от текущего заболевания следует сравнить титры сывороточных антител к коксиеллезным антигенам в динамике болезни с интервалом 10 – 12 дней в ранний период её клинических проявлений.

Титром антител считают наибольшее разведение сыворотки, при котором результаты ИФА оцениваются как положительные. Нарастание титров в 4 и более раз подтверждает наличие текущей коксиеллёзной инфекции. В случае отсутствия возможности исследования парных сывороток, обнаружение коксиеллёзных антител при значительных разведениях сыворотки (1:3200 и выше) может свидетельствовать в пользу недавно перенесённой Ку-лихорадки.

Для постановки окончательного диагноза Ку-лихорадки необходим комплекс серологических, клинических и эпидемиологических данных.

Условия хранения и эксплуатации

Хранение

Набор ИФА-анти-Ку-G следует хранить в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 °С в течение всего срока годности. Допускается кратковременное (до 10 суток) хранение и транспортирование набора реагентов при температуре до 25 °С.

В случае дробного использования (независимо от кратности) после вскрытия первичной упаковки компоненты набора необходимо хранить следующим образом:

При необходимости возможно использование компонентов ЦБП, ТМБ, РРК, РИП, Стоп-реагент из других серий набора реагентов.

Срок годности набора реагентов

Гарантийный срок годности составляет 6 месяцев с даты утверждения ОБТК и указан на этикетке набора реагентов. По истечению срока годности набор реагентов использованию не подлежит.

Синонимы: Анализ крови на антитела к кори; IgG антитела к вирусу кори; Антитела класса G к вирусу кори; Иммуноглобулины класса G к Measles Virus; Ат к вирусу кори, IgG.

Вирус кори относится к роду Morbillivirus семейства парамиксовирусов. Корь – высококонтагиозное заболевание. Передача вируса происходит воздушно-капельным путем. Первоначально вирус размножается в слизистой, затем с кровью попадает в лимфоидную ткань, в которой активно репродуцируется, особенно в моноцитах. Происходит широкое распространение вируса, совпадающее с продромальным периодом заболевания (повышение температуры, недомогание). Появляется кашель, насморк, конъюнктивит. В течение последующих 5-6 суток больные наиболее заразны. Во время появления характерной сыпи (примерно на 14-е сутки) репродукция вируса снижается, но в крови обнаруживаются специфические антитела. С возникновением сыпи симптомы достигают максимума, наиболее тяжелое состояние отмечается на 2-4-е сутки, когда сыпь покрывает все тело. Нередко сыпь сопровождается головной болью, рвотой, болями в животе, поносом и болями в мышцах. Выраженное увеличение лимфоузлов и селезенки, появляющееся в первые дни болезни, может сохраняться несколько недель. Самые тяжелые осложнения кори – поражения центральной нервной системы. Корь у беременных (вследствие наличия иммунитета у большинства

взрослого населения) встречается редко, но, возникнув, может вызвать преждевременные роды, мертворождение и самопроизвольный аборт, однако к порокам развития плода не приводит.

Поскольку нейтрализующие IgG-антитела хорошо проникают через плаценту, новорожденные от матерей, имеющих иммунитет к кори, защищены от инфекции до 6-7-месячного возраста, со второго полугодия жизни восприимчивость растет.

В случае затруднений в диагностике по клинической картине заболевания целесообразно использование серологическох тестов: исследование уровня IgM-антител в крови (см. тест № 251) и IgG-антител к вирусу кори (см. тест № 2500). Неспецифическим лабораторным признаком кори является лейкопения со снижением

абсолютного количества нейтрофилов и выраженным снижением числа лимфоцитов в продромальном периоде и в периоде высыпаний (см. тесты №№ 5, 119).

Антитела класса IgG к вирусу кори появляются вслед за антителами класса IgM примерно через две недели после инфицирования. В ходе дальнейшего развития иммунного ответа их концентрация быстро растет. Специфические антитела в крови можно обнаружить практически у всех больных корью уже ко второму дню появления сыпи. Антитела класса IgG сохраняются после перенесенного заболевания обычно пожизненно, обеспечивая стойкий иммунитет. У иммунных лиц, даже если уровень антител в сыворотке был низкий или не определялся, попадание вируса в организм вызывает быстрый иммунный ответ с подъемом концентрации антител в отсутствие каких-либо проявлений инфекции и выделения вируса. IgG к вирусу кори появляются и в результате вакцинации коревой вакциной, которая в Российской Федерации входит в календарь обязательных прививок. Иммунитет после прививки, в зависимости от свойств вакцины, может быть менее стойким, чем после естественно перенесенного заболевания. Исследование IgG в крови применяют для определения наличия специфического иммунитета и оценки эффективности вакцинации. У новорожденных до 6-7-месячного возраста в крови могут выявляться материнские IgG-антитела (легко проникающие через плаценту, в отличие от IgM).

С какой целью выполняют анализ крови для определения Антител класса IgG к вирусу кори и характеристики теста

Количественное определение антител, показатель напряженности иммунного ответа на вирус кори. Указывает на имевшую место в прошлом или текущую инфекцию, или вакцинацию против кори.

Аннотация научной статьи по наукам о здоровье, автор научной работы — Мамаева Тамара Алексеевна, Наумова М. А., Железнова Н. В., Липская Г. Ю., Mulders M.

Оценены чувствительность и оперативные характеристики девяти коммерческих тест-систем (иммуно-ферментный анализ ИФА) для определения уровня специфических igM и igG разного формата: indirect и capture. Материалом исследования стали 72 сыворотки больных типичной среднетяжелой формой кори из очага инфекции (2010), полученные на 5-6-е сутки после появления сыпи. Установлено, что с помощью тестов формата capture (VectoMeasles igM, Vector-Best; Measles igM capture EiA, Microimmune Ltd) igM определялись практически в 100% случаев независимо от возраста и исходного вакцинального статуса больного, тогда как при использовании тестов формата indirect (igEnzygnost® Anti-Measles Virus/igM Siemens, Anti-Measles Viruses ELiSA igM) Euroimmun, Virion-Serion igM GmbH) результат был отрицательным в среднем у 23,6% взрослых, большинство которых имели 1-2 прививки в прошлом. Достоверность анализа показателей OD igM и igG, полученных при исследовании сывороток у больных с первичным и вторичным иммунным ответом разными тестами, высокая и не зависит от формата изученных тест-систем, о чем свидетельствуют значения F-критерия.

Estimation of the commercial elisa test-systems of different formats to detect specific igM and igG in the measles patients sera

Nine commercial kits of "captured" and "indirect" format ELISA assay for the detection of specific IgM and IgG in sera of patients with measles were compared to each other. 72 sera specimens from typical medium-severity cases from a measles outbreak (2010) were collected on the 5-6th day after the rash onset. Igm was detected with "capture" tests (Vecto-measles Igm, Vector Best, measles Igm capture EIA, microimmune ltd) close to 100% of cases, irrespectively to the age and the initial vaccination status of the patients. The Igm result was negative in 23.6% by average while investigating using "indirect" format tests (Enzygnost® anti-measles Virus/igm, siemens; anti-measles Viruses ELIsA (^M), Eurominimum, Virion-serion Igm (GmbH). these cases were in adults, the majority of which had 1-2 vaccinations in the past. the analysis of the presented data shows high correlation connection between the tests used and high confidence level for oD Igm and IgG of the sera of the patients with the primary and secondary immune response.

ходят по специфичности ФИТЦ-конъюгат. Кроме того, специфичность связывания конъюгата DyLight 488 с 5 вирусами бешенства (Барсук, Шувалов (кошка), Собака, Д 1125, Д 474) превосходила или по крайней мере не уступала американскому аналогу. Эти данные свидетельствуют о перспективности конъюгата DyLight 488.

Таким образом, можно заключить, что МКА 2е11 как в НМФА, так и меченные флюорохромом DyLight 488 по специфичности связывания с наиболее распространенными на территории России вирусами бешенства не уступают американскому аналогу (стандарту).

1. Ведерников В.А., Гулюкин М.И., Рождественский И.К.. и др., ред. Обзор эпизоотической ситуации по бешенству в Российской Федерации в 2007 году и I полугодии 2008 г. М.; 2008. [Vedernikov V.A., GuljukinM.I., Rozhdestvensky I.K.. et al., red. Overview of the epizootic situation of rabies in the Russian Federation in 2007, and I half-year 2008. Мoskow; 2008] (in Russian).

2. Грибенча С.В., Львов Д.К. Рабдовирусы. В кн.: Львов Д.К., ред. Медицинская вирусология. М.: МИА; 2008: 586-94. [Gribencha S.V, L’vov D.K. Rhabdoviridae. V kn.: L’vov D.K., red. Medicinskaja virusologija. Moskow: MIA; 2008: 586-94] (in Russian).

3. Лосич М.А., НепоклоноваИ.В., Мухин А.Н., Раев С.А., Селиверстов А.С., Грибенча С.В. и др. Разработка и иммунологические свойства новой антирабической вакцины "Рабифел". Российский ветеринарный журнал. 2012; 2: 10-4. [Losich M.A., Nepok-lonova I.V, Mukhin A.N., Raev S.A., Seliverstov A.S., Gribencha S.V. et al. The development and characterisation of the immunobiological properties of a new anti-rabic vaccine "Rabifel". Rossijskij veteri-narnyj zhurnal. 2012; 2: 10-4] (in Russian).

5. Amante L., Ancona A., Forni L. The conjugation of immunoglobulins with tetramethylrhodamine isothiocyanate. A comparison between the amorphous and the crystalline fluorochrome. J. Immunol. Methods. 1972; 1(3): 289-301.

7. Bourhy H., Kissi B., Tordo N. Molecular diversity of the Lyssavirus genus. Virology. 1993; 194: 70-81.

8. Botvinkin A. D., Poleschuk E. M., Kuzmin I. V, Borisova T.I., Gazaryan S.V, YagerP. et al. Novel lyssaviruses isolated from bats in Russia. Emerg. Infect. Dis. 2003; 9: 1623-5.

9. Dietzschold B., Rupprecht C.E., TollisM., LafonM., Mattei J., Wik-torT. et al. Antigenic diversity of the glycoprotein and nucleocapsid proteins of rabies and rabies-related viruses: implications for epidemiology and control of rabies. Rev. Infect. Dis. 1988; 10(4): S 785-98.

10. Flamand, A., Wiktor T.J., Koprowski H. Use of hybridoma monoclonal antibodies in the detection of antigenic difference between rabies and rabies-related virus proteins. I. The nucleocapsid protein. J. Gen. Virol. 1980; 48: 97-104.

11. Fu Z.F. Genetic comparison of rhabdoviruses from animals and plants. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2005; 292: 1-24.

12. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975; 256: 495-7.

13. Kuzmin I.V, Wu X., Tordo N. Rupprecht C.E. Complete genomes of Aravan, Khujand, Irkut and West Caucasian bat viruses, with special attention to the polymerase gene and non-coding regions. Virus Res. 2008; 136: 81-90.

14. WHO Expert Consultation on Rabies: first report. WHO Technical Report Series. 2004; 931: 18.

15. Yan J., Yonghuang L., Frank M. Characterization of conformation-specific monoclonal antibodies against rabies virus nucleoprotein. Arch. Virol. 2010; 155(8): 1187-92.

В ПОМОЩЬ ВИРУСОЛОГУ

Т.А. Мамаева1, М.А. Наумова1, Н.В. Железнова2, Г.Ю. Липская3, М. Mulders4, D.A. Featherstone4

Оценка коммерческих тест-систем ИФА разного формата для определения уровня специфических IgM и IgG в сыворотках

‘ФБУН "Московский НИИЭМ им. Г.Н. Габричевского", 252212, Москва; 2ФБУН "Санкт-Петербургский НИИЭМ им. Пастера", 197101,Санкт-Петербург; 3НИИФХБ им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, 199899, Москва; 4ВОЗ, Женева, Швейцария

Оценены чувствительность и оперативные характеристики девяти коммерческих тест-систем (иммуноферментный анализ - иФА) для определения уровня специфических igM и igG разного формата: indirect и capture. Материалом исследования стали 72 сыворотки больных типичной среднетяжелой формой кори из очага инфекции (2010), полученные на 5-6-е сутки после появления сыпи. Установлено, что с помощью тестов формата capture (VectoMeasles igM, Vector-Best; Measles igM capture EiA, Microimmune Ltd) igM определялись практически в 100% случаев независимо от возраста и исходного вакцинального статуса больного, тогда как при использовании тестов формата indirect (igEnzygnost® Anti-Measles Virus/igM Siemens, Anti-Measles Viruses ELiSA igM) Euroimmun, Virion-Serion igM GmbH) результат был отрицательным в среднем у 23,6% взрослых, большинство которых имели 1-2 прививки в прошлом. Достоверность анализа показателей OD igM и igG, полученных при исследовании сывороток у больных с первичным и вторичным иммунным ответом разными тестами, высокая и не зависит от формата изученных тест-систем, о чем свидетельствуют значения F-критерия.

Ключевые слова: корь; специфические антитела; иммунитет; тест-системы; ИФА-метод.

Т. А. Mamaeva1, М. А. Naumova1, N. V. Zheleznova2, G. Y. Lipskaya3, М. Mulders4, D. A. Featherstone4

Estimation of the commercial elisa test-systems of different formats to detect specific igM and igG in the measles patients sera

1 Gabrichevsky Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-being Surveillance, Moscow, Russia; 2 Pasteur Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-being Surveillance, St. Petersburg, Russia;

3 Belozersky Institute of Physico-Chemical Biology, Lomonosov State University, Moscow, Russia ; 4 WHO, Geneva,

Key words: measles; specific antibodies; immunity; test-systems; ELISA method.

Несмотря на то что корь является одним из высококонтагиозных заболеваний, по мнению ведущих специалистов, элиминация коревой инфекции возможна, так как корь протекает в основном манифестно, вирус имеет единственный серотип, единственного хозяина - человека. Кроме того, живая коревая вакцина - это наиболее оптимальное и эффективное средство борьбы с корью 5.

С 2000 г. ЕРБ ВОЗ реализует "Стратегическую программу элиминации кори, краснухи и профилактики врожденной крас-нушной инфекции в Европейском регионе к 2015 году". При поддержке ВОЗ на базе Российского национального научнометодического центра (РННМЦ, Москва) по надзору за корью и краснухой в 2003 г. были созданы референс-лаборатория ЕРБ ВОЗ и лабораторная сеть стран СНГ, состоящая из 25 национальных и субнациональных лабораторий. Создание высокопрофессиональной лабораторной сети по кори и краснухе, работающей едиными методами по единому протоколу в единой информационной сети, позволяет получать достоверные результаты и сопоставлять их в рамках общей Европейской программы элиминации кори 6.

В 2003-2011 гг. лабораторно обследованы 56 263 больных с подозрением на корь и больных другими экзантемными заболеваниями. Сыворотки большинства (52,9%) пациентов исследованы в субнациональных лабораториях России.

Для проведения серологических исследований лабораторная сеть использует стандартный метод иммуноферментного анализа (ИФА): с 2003 по 2008 г. тест Enzygnost® AntiMeasles Virus/IgM, Siemens (Германия), а с 2009 г. спектр используемых тестов расширился за счет включения в работу специфических наборов IgM-, IgG-, IgG-avidity фирм-производителей: Vector Best (Россия), Euroimmun (Германия), Virion-Serion (Германия) и др.

Использование диагностических наборов разного формата, вовлечение в эпидемический процесс лиц разного возраста и вакцинального статуса 12 явились основанием оценки коммерческих тестов разного формата для выявления АТ (АТ) классов M и G в сыворотках больных корью.

Материалы и методы

Для выявления IgM, IgG и определения степени авидности АТ класса G к вирусу кори в сыворотках крови методом ИФА использовали коммерческие тесты разного формата: непрямой (indirect) и метод двойного сэндвича (capture):

- indirect - Enzygnost® Anti-Measles Virus/IgM (Siemens, Германия);

- indirect - Anti-Measles Viruses ELISA/IgM (Euroimmun, Германия);

- indirect -Virion-Sеrion IgM (Virion-Sеrion GmbH, Германия);

- capture - VectoMeasles IgM (Vector-Best, Россия);

- capture - Measles IgM EIA (Microimmune Ltd, Англия);

- indirect - Enzygnost® Anti-Measles Virus/IgG (Siemens, Германия);

- indirect - Anti-Measles Viruses ELISA/IgG (Euroimmun, Германия);

- indirect - Virion-Sеrion IgG (Virion-Sеrion GmbH, Германия);

- capture - Measles IgG EIA (Microimmune Ltd, Англия);

- indirect - Avidity: Anti-Measles Viruses ELISA/IgG (Eu-roimmun, Германия).

Исследования проводили на базе референс-лаборатории ЕРБ ВОЗ (г. Москва, Россия) с использованием отдельных аликвот сывороток. Результаты интерпретировали в соответствии с инструкциями на тесты.

Для проведения исследований использовали 72 сыворотки больных типичной среднетяжелой формой кори из очага инфекции, возникшего в результате импортирования инфекции из КНР. Завозной характер инфекции подтвержден эпидемиологическими данными и результатами генотипирова-ния вируса - выявлен генотип Н1, широко циркулирующий на территории КНР в этот период. Взятие крови у больных проводили в острый период заболевания на 5-6-е сутки после появления сыпи. Больные корью были разного возраста: 4-12 мес (п=29); 1,5-4 года (п=4); 11-14 лет (п=6) и 20-42 года (п=33). Сведения о вакцинации получены из карт эпидемиологического расследования случая больного корью: 29 (40,28%) пациентов не привиты по возрасту (дети до 1 года); 12 (16,67%) имели документально подтвержденную вакцинацию; 11 (15,27%) 2 дозы вакцины; вакцинальный статус 20 (27,78%) не известен.

Предварительный анализ результатов исследования сывороток разными тестами (IgM, IgG, авидность IgG) с учетом анамнестических данных позволил разделить пациентов на две группы. В 1-ю группу (п = 41) вошли больные с первичным иммунным

Результаты исследования сывороток у больных на содержание IgM с использованием тестов разного формата (и=72)

Положительные Сомнительные Отрицательные

Тест, формат количество сывороток % количество сывороток % количество сывороток %

Vector-Best, capture 72 100 - - - -

Microimmune Ltd, capture 70 97,2 2 2,8 - -

Virion-Serion, indirect 52 72,2 2 2,8 18 25,0

Siemens, indirect 49 68,1 10 13,9 13 18,0

Euroimmun, indirect 46 63,9 6 8,3 20 27,8

ответом, во 2-ю (п = 31) - со вторичным. Большинство (70,7%) пациентов 1-й группы - это дети до 1 года, не привитые по возрасту. Сведения о вакцинации имели только 4 больных. Средний возраст пациентов 1-й группы составил 6,5 года. Во 2-й группе были больные 11-42 лет (средний возраст 25 лет). Из них 19 (61,29%) имели в прошлом 1 или 2 дозы вакцины. У остальных сведения о вакцинации отсутствовали.

Оценка тест-систем для определения уровня IgM. Маркеры острой инфекции (IgM) определены в 100 и 97,2% сывороток больных с помощью тестов формата capture - Vector-Best и Microimmune Ltd соответственно. При использовании тестов формата indirect количество положительных результатов составило 72,2% (Virion-Serion), 68,1% (Siemens) и 63,9% (Eu-roimmun) (табл. 1).

Наибольшее количество (13,9%) сомнительных результатов получено в тесте Siemens, а отрицательных (27,8%) - в тесте Euroimmun. В сыворотках 44 больных IgM выявлены всеми используемыми наборами.

При постановке ИФА диагностически значимым показателем является оптическая плотность (OD), которая выражается в оптических единицах (опт. ед.). В табл. 2 представлены результаты сравнительного анализа показателей OD, полученных в тестах различного формата.

Данные анализа показали не только высокий уровень корреляционной связи всех сравниваемых тестов, но и высокую значимость полученных результатов. Наиболее высокую корреляционную связь при определении коревых АТ класса M в тестах формата indirect выявили между Virion-Serion и Euroimmun (r = 0,89; p = 0,000 <0,05).

Среди тестов разных форматов наивысшие значения отметили при сопоставлении данных, полученных в Microimmunе capture и Siemens indirect (r = 0,861; р=0,000 <0,05). Графическая интерпретация этой связи представлена на рис. 1 для 1-й группы больных и на рис. 2 для 2-й.

При исследовании сывороток у больных 1-й группы показатели OD IgM, полученные с помощью тестов форматов indirect и capture, были положительными и находились в пределах 0,3-1,3 (0,7±0,03) и 0,7-3,4 (2,5±0,12) соответственно (см. рис. 1).

В сыворотках больных 2-й группы по данным теста capture средний показатель OD АТ класса М оказался в 2,5 раза ниже (1,02±0,16), чем в 1-й группе (2,5±0,12); значения OD были положительными в 93,5%; в 2 случаях результат расценили как сомнительный. Крайне низкие данные 0,029-0,85 (0,17±0,03), полученные при использовании теста формата indirect, были интерпретированы как отрицательные и сомнительные в 80,6% случаях (см. рис. 2).

При анализе показателей OD IgM, полученных при исследовании сывороток у больных двух групп, выявили статистически значимые различия при использовании всех тестов (табл. 3). Средние значения IgM в сыворотках 1-й группы превышали таковые во 2-й группе в 1,9-4,4 раза.

Оценка тест-систем для определения уровня IgG. Исследование 72 сывороток у больных корью на содержание IgG проводили с помощью трех тестов формата indirect: Enzygnost® Anti-Measles Virus/IgG (Siemens), Anti-Measles Viruses ELISA/ IgG (Euroimmun), Virion-Sеrion IgG (GmbH) - и одного теста формата capture - Measles IgG Microimmune Ltd.

При использованиия тестов формата indirect АТ класса G выявили в сыворотках у 69,4-73,6% больных (табл. 4). Количество положительных результатов в тесте формата capture составило 81,9%. Высокий уровень корреляционной связи результатов определения уровня АТ класса G, а также высокая значимость полученных данных демонстрируют возможность использования любого из сравниваемых тестов (табл. 5). Среди наборов разных форматов наивысший показатель обнаружили при сопоставлении OD IgG Microiшmunе Ltd/Virion-Serion (r = 0,931; р=0,000<0,05). При сравнении результатов, полученных

Результаты анализа показателей значимости результатов OD IgG, полученных при исследовании сывороток (табл. 6), показали, что при использовании тестов разных форматов средние значения находятся в пределах 0,34-1,9 опт. ед. (1-я группа) и 1,94-6,6 опт. ед. (2-я группа).

Для оценки количественного содержания IgG использовали данные, полученные с помощью тест-системы Enzygnost® Anti-Measles Virus/IgG (Siemens). В сыворотках у 17 больных

1- й группы IgG не обнаружили. Среднее значение, рассчитанное для 24 сывороток, составило 1,96 ± 0,44 МЕ/мл при стандартном отклонении (а=2,17). В сыворотках у больных

2- й группы АТ класса G определили в высокой концентрации: 27,87±1,59 МЕ/мл (а=8,83), что в 14,2 раза превысило аналогичный показатель в 1-й группе.

Определение степени авидности IgG. Степень авидности IgG определили у 24 больных 1-й и 31 пациента 2-й групп (рис. 3).

Исследование для выявления специфических антител класса G к вирусу кори, которые являются маркером перенесенной либо текущей инфекции.

Синонимы русские

Антитела класса IgG к вирусу кори, иммуноглобулины класса G к Measles Virus.

Синонимы английские

MV Antibodies, IgG, Measles Virus Specific IgG, Anti-Measles Virus IgG.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Единицы измерения

МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Возбудитель кори относится к семейству парамиксовирусов, которые вызывают корь у детей и не болевших ею взрослых.

Корь является чрезвычайно заразным заболеванием и передается воздушно-капельным путем. Вирус поражает главным образом слизистую оболочку дыхательных путей и задней стенки глотки. Вызывает высокую температуру, сухой кашель, покраснение глаз, чувствительность к свету, насморк, боль в горле, появление крошечных белых пятен на слизистой оболочке рта, а также сыпь, которая обычно начинается на лице и распространяется вниз по телу, переходя на туловище и ноги. Большинство людей выздоравливает в течение нескольких недель, но приблизительно у 20 % развиваются осложнения: инфекционные заболевания ушей, бронхит, пневмония, диарея, энцефалит, слепота. У переболевших корью вырабатывается стойкий иммунитет на всю жизнь.

Риск заболеть выше у людей с патологией иммунной системы или с дефицитом витамина А, а также у тех, кто плохо питается.

Для беременных корь опасна выкидышем или преждевременными родами.

В ответ на инфицирование вирусом кори в организме происходит выработка специфических иммуноглобулинов двух видов: IgM и IgG. Первыми производятся IgM. Их уровень в течение нескольких дней увеличивается до максимума, а затем начинает постепенно снижаться в течение следующих недель. Выработка IgG начинается несколько позже, через 2-4 недели после инфицирования, зато их концентрация сохраняется на несколько десятков лет, обеспечивая защиту от повторного заражения. Они обнаруживаются и после вакцинации, так что могут служить показателем иммунитета к вирусу кори. В крови некоторых новорождённых до 6-7-месячного возраста выявляются антитела класса IgG, полученные через плаценту от матери.

Для чего используется исследование?

Для того чтобы убедиться в наличии противокоревого иммунитета, полученного вследствие перенесенного заболевания или вакцинации.
Для подтверждения диагноза активной или перенесенной болезни, особенно если отсутствуют типичные для кори симптомы.
Для того чтобы узнать, чем вызваны такие инфекционные заболевания, как энцефалит, бронхит или пневмония, – бактериальными инфекциями или осложнениями кори.

Когда назначается исследование?

При симптомах, указывающих на текущее или перенесенное заболевание корью. Они развиваются через 7-18 дней после заражения.
При оценке иммунитета к кори людей, перенесших заболевание или вакцинированных от него.

Что означают результаты?

Концентрация: 0 - 0,12 МЕ/мл.

Положительный результат у ранее серонегативного пациента подтверждает текущее или перенесенное заболевание.

Если антитела класса IgG к кори выявлены у пациента, ранее вакцинированного и/или не болевшего на момент сдачи анализа, значит, у него есть стойкий иммунитет, который защищает от инфекции.

Если в крови не определяются антитела класса IgG к кори, иммунитета к вирусу нет. Причиной этого может быть отсутствие контакта с вирусом кори, слишком ранний срок инфицирования, когда IgG не успели выработаться, или нарушения в работе иммунной системы.

Корь относится к управляемым инфекциям. Заболевают корью чаще непривитые дети дошкольного возраста и лица, не имеющие достоверных сведений о прививках. Эта группа лиц остается высоко восприимчивой к кори в течение всей жизни.

Стойкий, практически пожизненный иммунитет к коревой инфекции формируется у людей, переболевших корью, и в результате вакцинации живой коревой вакциной (все дети должны быть привиты против кори дважды: в 1 год и в 6 лет). У вакцинированных невосприимчивость к кори может сохраняться годами. Серологические реакции, используемые для выявления коревых антител, высокоспецифичны. Это обусловлено тем, что у вируса кори единый антигенный вариант.

В Отделе Новых Технологий ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера выпускается коревой эритроцитарный диагностикум (КЭД) для РПГА (Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/06289 от 15.08.2011 г.). Параметры РПГА с диагностикумом отрабатывались таким образом, чтобы она соответствовала чувствительности РТГА.

Специфический компонент диагностикума представляет собой эритроциты барана, стабилизированные акриловым альдегидом, с адсорбированным на них коревым гемагглютинирующим антигеном. Исследования показали, что присутствие у обследуемых лиц даже незначительной концентрации коревых антител (в разведении сыворотки 1:10), выявляемых в РПГА, защищает от заболевания. Это подтверждено ранее при изучении большого количества очагов в период значительного распространения кори (1973 - 1981 гг.).

Коревой эритроцитарный диагностикум (КЭД) для РПГА используется для оценки противокоревого иммунитета и для ретроспективной диагностики кори.

Оценка противокоревого иммунитета с помощью коревого эритроцитарного диагностикума в РПГА в разных возрастных группах свидетельствует о том, что у 93 – 95 % привитых и ревакцинированных выявляются специфические антитела, что говорит о высокой иммунной прослойки к кори у населения.

При ретроспективной диагностике кори исследованию подлежат парные сыворотки обследуемых. Специфика кори такова, что коревые антитела обнаруживаются в первые дни заболевания в момент появления высыпаний на коже. Поэтому первую сыворотку необходимо получать не позднее 1 − 3 дней с момента появления сыпи, а вторую - через 12 - 14 дней. При исследовании парных сывороток реакцию ставят параллельно в двух рядах планшета. Диагноз кори считается подтвержденным у лиц, в сыворотках крови которых регистрируется четырехкратное и более нарастание титра антител.

Коревой эритроцитарный диагностикум обеспечивает высокую чувствительность и специфичность анализа, прост в постановке и удобен в использовании.

Читайте также:

Ифа тест система корь

Назначение

Состав набора

Анализируемые образцы

Проведение анализа

Подготовка сывороток

Подготовка раствора ФСРТ

Подготовка раствора конъюгата

Подготовка субстратного раствора

Проведение иммуноферментного анализа

Учет и интерпретация результатов

Условия хранения и эксплуатации

Хранение

Срок годности набора реагентов

С какой целью выполняют анализ крови для определения Антител класса IgG к вирусу кори и характеристики теста

Аннотация научной статьи по наукам о здоровье, автор научной работы — Мамаева Тамара Алексеевна, Наумова М. А., Железнова Н. В., Липская Г. Ю., Mulders M.

Похожие темы научных работ по наукам о здоровье , автор научной работы — Мамаева Тамара Алексеевна, Наумова М. А., Железнова Н. В., Липская Г. Ю., Mulders M.

Estimation of the commercial elisa test-systems of different formats to detect specific igM and igG in the measles patients sera