Иммуноблот на сифилис в инвитро

Обновлено: 24.04.2024

Специфический диагностический трепонемный тест, используемый для скрининга и комплексной диагностики сифилиса.

Исследование специфических антител к Treponema pallidum может быть использовано и как специфичный трепонемный подтверждающий тест на сифилис (если для первичного скрининга был использован нетрепонемный тест №69 RPR ), и как эффективный первичный скрининговый тест (с последующим применением нетрепонемного теста RPR для подтверждения активной инфекции).

Результаты исследования, выявляющего суммарные (IgM и IgG) антитела к антигенам Treponema pallidum, позволяют подтвердить диагноз сифилиса при первых клинических проявлениях. Специфические антитела появляются на 1-2 неделе появления шанкра – первичный серопозитивный период сифилиса. Метод демонстрирует высокую чувствительность теста на ранних стадиях заболевания вследствие реактивности к IgM антителам. Антитела класса IgG к Treponema pallidum сохраняются после перенесенной инфекции длительное время, обычно пожизненно (в том числе и после лечения), поэтому исследование высокочувствительно и на поздних стадиях инфекции, а также позволяет выявить леченый сифилис. Ситуации расхождения результатов скрининговых тестов, когда результат определения IgG к Treponema pallidum положительный, а результат RPR ( см. тест № 69 ) отрицательный, в случае сомнений дополняют проведением альтернативных трепонемных тестов. Определение количества (титра) anti-Treponema pallidum антител не является значимым, тест не применяют для оценки активности инфекции и контроля лечения.

Автоматизированные методы иммуноферментного или хемилюминисцентного анализа хорошо стандартизированы и исключают ошибки, связанные с индивидуальными вариациями визуальной оценки и ручным вводом результатов. Положительный результат трепонемного теста следует дополнять нетрепонемным кардиолипиновым тестом RPR (№69), что позволяет отличить активную текущую инфекцию от инфекции в прошлом. Комбинированное использование RPR-теста (№69) и исследование по определению суммарных антител к антигенам Treponema pallidum (№70) - наиболее эффективный вариант серологического исследования для обнаружения или исключения сифилиса.

Результаты лабораторных тестов подлежат клинической интерпретации только в комплексе с клинико-анамнестическими данными.

Сифилис, подтверждающий тест (иммуноблот) IgM — современный метод диагностики сифилиса, самый достоверный высокочувствительный метод идентификации белков.

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма. Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.

Клиническая картина при сифилисе
Клинические проявления сифилиса очень разнообразны и зависят от стадии заболевания. Выделяют несколько стадий сифилиса. Первичная стадия наступает примерно через 2–3 недели после заражения. На этой стадии проявляются одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Во многих случаях твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4–6 недель.

Вторая стадия заболевания начинается через 2–8 недель после возникновения твердого шанкра. Она характеризуется появлением сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле.

Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может длиться годами.

Без лечения примерно у 15% больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти.

От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее.

При контакте человека с Treponema pallidum, его иммунная система вырабатывает антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG.

Антитела класса IgM при сифилисе
Антитела класса IgM вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются в сыворотке крови в конце второй недели заболевания и исчезают у нелеченых больных примерно через 1–1,5 года, при лечении раннего сифилиса — через 3–6 мес., позднего — через год. Они присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом, поэтому тест на IgM может быть использован для различения давней инфекции от только приобретенной.

Специфических трепонемных антител IgM нет у лечившихся в прошлом пациентов, но их отсутствие само по себе не говорит об эффективности проведенной терапии, поскольку у большинства из тех, кто не лечился, в скрытой стадии сифилиса IgM-антитела тоже отсутствуют.

Исследование IgM антител к антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum методом иммуноблота используют в качестве дополнительного специфического трепонемного теста при необходимости углубленного исследования при неубедительных результатах скрининговых и подтверждающих тестов диагностики сифилиса.

Тест основан на методе Вестерн-блота. В ходе исследования выявляют наличие в сыворотке пациента антител класса IgG к электрофоретически разделенным и перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану избранным антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum.

Используемые антигены в методе Вестерн-блота:

47 кДа мембранный белок (TpN47) — специфичный;
45 кДа (TmpA) — специфичный;
22 кДа (Р 22) — неспецифичный;
17 кДа мембранный белок (TpN17) — специфичный;
15 кДа мембранный белок (TpN15) — специфичный.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Формат выдачи результата исследования — качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов; общее заключение о результате исследования в форме: положительный/отрицательный/неопределенный).

Референсные значения: отрицательный.

При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами):

Отрицательный результат: отсутствуют полосы специфических антигенов;
Неопределенный результат: одна четкая полоса специфического антигена: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа;
Положительный результат: более одной четкой полосы специфических антигенов: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа.

Специфичность исследования 98%, чувствительность 100%. Положительная предсказательная значимость 94%.

Исследование, направленное на диагностику антител к Treponema pallidum класса IgМ методом иммуноблотинга в целях диагностики или подтверждения сифилиса.

Синонимы русские

Антитела класса IgM к возбудителю сифилиса; иммуноглобулины класса M к антигенам Тreponema pallidum.

Синонимы английские

Syphilis IgM; anti-Treponema pallidum, IgM; anti-TP IgM; antibodies to Т. pallidum, IgM; immunoblotting.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающимся преимущественно половым путем при непосредственном контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром). Возможен и вертикальный путь передачи от инфицированной матери к плоду, а также через кровь и реже при контакте с контаминированными предметами. Источником инфекции является больной человек, возбудитель инфекции – Treponema pallidum (T. pallidum), семейство Spirochaetaceae, род Treponema.

Клиническая лабораторная диагностика играет важную роль в диагностике сифилиса в сочетании с эпидемиологической и клинической картинами заболевания. Чаще всего используются серологические методы лабораторной диагностики, основанные на выявлении антител.

Различают нетрепонемные и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к кардиолипину, фосфолипиду, компоненту клеточной и митохондриальной мембран бактерий. Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против антигенов, компонентов бактерий T. pallidum. К ним относятся реакция пассивной гемагглютинации, реакция иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа и метод иммуноблотинга.

Метод иммуноблотинга используется в качестве теста второй линии для подтверждения скрининговых методов исследования или в качестве дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований. Он основан на определении антител классов IgM и IgG к молекулам-антигенам, разделенным с помощью метода электрофореза в соответствии с их молекулярной массой. Диагностическая чувствительность метода составляет 99 %, диагностическая специфичность – 100 %.

Известно несколько липопротеинов-антигенов наружной клеточной мембраны мембраны T. рallidum, которые обладают наибольшей иммуногенностью и играют важную роль в серологической диагностике сифилиса методом иммуноблотинга. К ним относятся следующие специфичные мембранные белки: Tp15 (15 кДа), Tp17 (17 кДа), Tp45 (45 кДа), Tp47 (47 кДа). При первичном контакте с инфекцией в крови больного начинают вырабатываться антитела класса IgM. Они выявляются в конце второй недели заболевания и присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом. По некоторым данным, антитела класса IgMк Tp45-антигену обнаруживаются на ранних стадиях первичного сифилиса, антитела к Tp15-антигену – на более поздних стадиях, при третичном сифилисе. Анти-Tp47-IgMхарактерны для активных форм заболевания и могут быть выявлены у пациентов с врождённым сифилисом.

Уровень антитрепонемных антител класса IgMзначительно снижен или они полностью отсутствуют в сыворотке крови больных после специфической терапии. Следует отметить, что по отсутствию антител данного класса нельзя судить об эффективности проведенного лечения. Для подтверждения недавнего инфицирования T. pallidum необходимо определение антител класса IgG через один-два месяца в свежем образце крови.

Для чего используется исследование?

Для диагностики сифилиса;
для подтверждения скрининговых методов исследования;
для дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum;
для диагностики активных форм сифилиса;
для диагностики первичного и вторичного сифилиса;
для диагностики врождённого сифилиса у новорождённых;
для профилактического обследования беременных женщин.

Когда назначается исследование?

При подозрении на сифилис и при симптомах данного заболевания: наличие твердого шанкра, генитальных язв, лимфоаденопатии, слабости, лихорадки, розеолезно-папулезной сыпи преимущественно на ладонях и стопах, энантемы на слизистых оболочках;
при подтверждении скрининговых методов исследования и при дополнительной диагностике сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
при наличии полового партнера, больного сифилисом;
при подозрении на врождённый сифилис у ребенка, рождённого от инфицированной матери;
при ведении беременности в целях профилактического обследования беременных женщин желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет в женской консультации;
при лечении другого заболевания, передающегося половым путем;
при определении точной причины заболевания, при наличии неспецифических симптомов, схожих с признаками сифилиса;
если пациент был инфицирован, он должен повторить анализы на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца, чтобы убедиться, что лечение прошло успешно.

Что означают результаты?

Причины положительного результата:

сифилис – свежеприобретенное инфицирование;
первичный, вторичный сифилис;
активные формы сифилиса;
врождённый сифилис у новорождённых.

Причины отрицательного результата:

отсутствие сифилиса;
проведение диагностики на раннем сроке, когда не сформировался иммунный ответ и отсутствуют антитела к антигенам T. pallidumкласса IgM;
отсутствие антител класса IgM у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут еще не сформироваться.

Что может влиять на результат?

Возможно получение ложноположительного результата при наличии ВИЧ-инфекции, болезни Лайма, малярии, аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, при атипичной пневмонии, у людей, употребляющих наркотики внутривенно, у пожилых.

Важные замечания

Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, с учетом анамнеза, клинических данных, результатов лабораторного обследования.
Для подтверждения недавнего инфицирования T. pallidum необходимо определение антител класса IgG через один-два месяца на свежем образце крови.
Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает наличие сифилиса.

Также рекомендуется

11 Treponema pallidum, IgG, титр

27 Treponema pallidum, IgM, титр

42 Treponema pallidum, антитела

44 Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр

13 Treponema pallidum, IgG в ликворе

28 Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр
61 anti-Treponema pallidum, IgG (иммуноблот)

Кто назначает исследование?

Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр.

Читайте также: