Иммуногистохимическое исследование лямблии

Обновлено: 25.04.2024

Авторы: Бельмер С.В. 1 , Новикова В.П. 2, 3
1 ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, Москва, Россия
2 ФГБОУ ВО СПбГПМУ Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
3 ФГБОУ ВО ПСПбГМУ им. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Для цитирования: Бельмер С.В., Новикова В.П. Лямблиоз у детей: принципы базисной терапии (на основании Рабочего протокола диагностики и лечения лямблиоза у детей 2013 г.). РМЖ. 2013;24:1201.

Giardia lamblia впервые была описана в 1681 г. Антони ван Левенгуком, который обнаружил паразита в собственном стуле, однако особое внимание к лямблиозу как патологическому состоянию было привлечено в начале 1970-х гг. G. lamblia вызывает кишечные расстройства у людей, употребляющих зараженную воду [1], будучи распространенной по всему миру, но в наибольшей степени – в тропиках и субтропиках [2].

Литература
1. Barbour A.G. Nichols C.R., Fukёashima T. An outbreak of giardiasis in a group of campers // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1976. Vol. 25. P. 384–389.
2. Jones J.E. Giardiasis. Laboratory diagnosis of infectious diseases. Balows A., Hausler W.J., Ohashi M., Turano A. (ed.). New York: Springer-Verlag, 1988. Vol. 1. P. 872–882.
3. Saha T.K., Ghosh T.K. Invasion of small intestinal mucosa by Giardia lamblia in man // Gastroenterol. 1977. Vol. 72. P. 402–405.
4. Wolfe M.S. Current concepts in parasitology: giardiasis // N. Engl. J. Med. 1978. Vol. 298. P. 319–321.
5. Gradus M.S. Water quality and waterborne protozoa // Clin. Microbiol. News. 1989. Vol. 11. P. 121–125.
6. Hotez P.J., Gurwith M. Europe's neglected infections of poverty // Int. J. Infect. Dis. 2011. Vol. 15(9). P. e611–619.
7. Muhsen K., Levine M.M. A systematic review and meta-analysis of the association between Giardia lamblia and endemic pediatric diarrhea in developing countries // Clin. Infect. Dis. 2012. Vol. 55 (Suppl. 4). P. S271–93.
8. Craun G.. Waterborne giardiasis in the United States 1965-1984 // Lancet. 1986. P.ii:513–514.
9. Petersen L.R., Cartter M.L., Hadler. J.L. A food-borne outbreak of Giardia lamblia // J. Infect. Dis. 1988. Vol. 157. P. 846–848.
10. Rendtorff R.C. The experimental transmission of human intestinal protozoan parasites. II. Giardia lamblia cysts given in capsules // Am. J. Hyg. 1954. Vol. 60. P. 327–338.
11. Davies R.B., Hibler C.P. Animal reservoirs and cross-species transmission of Giardia. In W.Jakubowski, J.C. Hoff (ed.), Waterborne transmission of giardiasis // Environm. Protection Agency Cincinnati. 1979. P. 104–126.
12. Healy G..R. Giardiasis in perspective: the evidence of animals as a source of human Giardia infections / E. A. Meyer (ed.), Giardiasis. Elsevier Science Publishing. New York, 1990. P. 305–313.
13. Morris D., Inman R.D. Reactive arthritis: developments and challenges in diagnosis and treatment // Curr. Rheumatol. Rep. 2012. Vol. 14(5). P. 390–394.
14. Кучеря Т.В. Клинико-эпидемиологические аспекты лямблиоза у детей. Автореф… дисс. к.м.н. М., 2008. 25 с.
15. Конаныхина С.Ю., Сердюк О.А. Эффективность и перспективы применения нифуратела в терапии лямблиоза у детей // Вопр. соврем. пед. 2005. № 4 (5). С. 2–4.
16. Торопова Н.П., Сафронова Н.А., Прохорова О.Г. Паразитарные болезни у детей. Особенности клинического течения и тактики лечения дерматозов при их сочетании с лямблиозом // Вопр. соврем. пед. 2005. № 4 (4). С. 20–25.

Исследование клеток ткани, которое проводится с помощью специальных реактивов.

Синонимы русские

ИГХ, иммуногистохимия, иммуногистохимический анализ.

Синонимы английские

Immunohistochemistry, IHС, immunohistochemical analysis.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани / образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Иммуногистохимическое исследование клинического материала проводится в целях выявления в нем искомых веществ. Готовые гистологические препараты обрабатываются специальными реактивами, содержащими меченые специфические антитела к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Если искомое вещество находится в исследуемом материале, то антитело связывается с его определенными участками. В результате этого между ними образуется комплекс и происходит окрашивание ткани.

Данный метод используется в диагностике различных патологических состояний, особенно велика его роль в области онкологии. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование помогает не только диагностировать опухоль, определить ее нозологический вариант, выявить первичный опухолевый очаг и обнаружить раковое перерождение клеток, но также спрогнозировать варианты течения заболевания и успешность лечения. К факторам, влияющим на прогноз, относятся рецепторы к эстрогенам и к прогестерону, Ki-67 (маркер активности опухоли), her-2 neu (эпидермальный фактор роста, определяет чувствительность опухоли к химиопрепарату трастузумабу/герцептину), VEGF (сосудистый фактор роста), Bcl-2, р53 и др. В отличие от иммуногистохимического анализа, их невозможно определить при обычном гистологическом исследовании.

Также этот метод нашел применение в диагностике системных заболеваний соединительной ткани и болезней почек, позволяет выявлять бактерии и вирусы в изучаемых тканях, например вирус Эпштейна - Барр, папиллома-вирус, Helicobacter Pylori (у больных хроническим гастритом), микобактерии при диагностике туберкулеза и др.

На основе ИГХ-анализа врач получает заключение с положительными и отрицательными маркерами, и это помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Рак шейки матки относится к наиболее распространенным видам рака у женщин. Эпидемиологические и лабораторные данные подтверждают роль человеческого папиллома-вируса (ВПЧ, HPV) в качестве запускающего агента для подавляющего большинства предраковых и злокачественных поражений эпителия слизистой оболочки шейки матки. При этом ДНК ВПЧ могут быть обнаружены в 95-100% всех случаев.

Вирус папилломы человека представляет собой небольшие циркулярные двухцепочечные вирусы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), принадлежащие к семейству Papillomaviridae. Известно более 130 типов ВПЧ. Они классифицируются по степени риска, основанного на их связи с цервикальной карциномой. ВПЧ 16 и 18 являются наиболее часто встречающимися типами высокого риска. Внедряясь в эпителиальные клетки, вирус вызывает в них дефекты генов, тем самым способствуя развитию опухоли. При помощи ИХГ легко обнаружить в клетках, пораженных HPV, экспрессию белков p16 и p18, и их позитивность сильно коррелирует с позитивностью HPV. Это помогает различить неопухолевую дисплазию (как результат воспаления) и опухолевую (вызванную вирусом папилломы и способную переродиться в рак), а также позволяет провести дифференциальную диагностику дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II/III) и начальных форм рака шейки матки, выявление поражений, склонных к прогрессированию и развитию инвазивной карциномы. В дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80-100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки определяется усиленная экспрессия белка p16, и она усиливается по мере нарастания тяжести поражения.

У женщин с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести очаговая и диффузная экспрессия свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 в поражениях высокой степени может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса.

Применяется иммуногистохимическое исследование и при дифференциальной диагностике целиакии.

Целиакия – это системное заболевание, обусловленное генетической непереносимостью глютена или соответствующих проламинов, которые содержатся в семенах злаков. Характеризуется данная патология повреждением слизистой оболочки тонкой кишки (развитием атрофической энтеропатии), появлением в сыворотке крови специфических антител и широким спектром глютензависимых клинических проявлений. Заболевание встречается в два раза чаще среди женщин, чем среди мужчин, может впервые проявиться как в детстве, так и у взрослых. Целиакия может протекать с ярко выраженной или со стертой клинической картиной, а также без гастроэнтерологической симптоматики. Чаще всего встречается стертый вариант течения заболевания, поэтому диагностика глютеновой энтеропатии (ГЭ) затруднена.
На первичном лабораторном этапе проводится серологическое исследование, определяющее в крови специфические биомаркеры. Лицам с положительными результатами показана эндоскопия тонкой кишки с биопсией и последующим гистологическим и ИГХ анализом взятого материала.

Известно, что целиакия сопровождается повышением числа лимфоцитов внутри эпителиальных клеток тонкой кишки. При этом отличительной особенностью является то, что большинство интраэпитиальных лимфоцитов (ИЭЛ) несут на своей поверхности специфический Т-клеточный рецептор (CD3 γ и CD3δ-положительные клетки). Чем активнее протекает заболевание, тем больше ИЭЛ. Эта особенность используется при проведении иммуногистохимического исследования, позволяющего определить преобладающий тип лимфоцитов. Особенно важен этот анализ, когда существует расхождение между данными серологического исследования и гистологической оценкой на стандартных участках.

Для чего используется исследование?

Для определения вида и подвида опухоли, степени ее злокачественности и распространенности онкологического процесса;
для дифференциальной диагностики пролиферативных заболеваний;
для определения этиологического фактора, вызвавшего изменения в клетках;
для подбора эффективной терапии;
для оценки пролиферативной активности клеток опухоли;
для оценки эффективности лечения;
для диагностики рецепторного статуса при онкологическом заболевании (например, раке молочной железы, предстательной железы);
для определения первичного очага опухоли;
для выявления злокачественного потенциала пораженных клеток;
для первичного отбора пациентов для диспансерного учета и дальнейшего обследования;

Когда назначается исследование?

При дифференциальной диагностике дисплазии (высокой и умеренной степени) и начальной стадии рака шейки матки;
при раке молочной железы, желудка, предстательной железы в целях определения чувствительности к различным видам терапии;
при определении степени злокачественности и оценки прогноза заболевания;
при оценке эффективности терапии;
при поиске источника метастазов;
при диагностике гастроинтестинальных стромальных опухолей (GIST) с помощью расширенной панели антител, включающей DOG1;
при диагностике нейроэндокринных опухолей;
при дифференциальной диагностике целиакии, сопровождающейся неясной гистологической картиной;
при расхождении результатов серологического исследования и гистологической оценки.

Что означают результаты?

Диапазон значений индивидуален для каждого заболевания, зависит от используемых антител.

Расшифровка результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом.

Проводится морфологическая оценка препарата (опухоли классифицируются согласно ВОЗ), дается описательный ответ с указанием оценки экспрессии антитела. ИХГ всегда следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.

Что может влиять на результат?

При некоторых заболеваниях есть факторы, которые могут влиять на результат. Так, при диагностике целиакии назначение безглютеновой диеты до исследования может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Иммуноглобулины класса М к возбудителю лямблиоза (кишечной лямблии) – специфические белковые молекулы (антитела), вырабатываемые клетками иммунной системы человека в первую-вторую неделю заболевания в ответ на встречу с чужеродными белками (антигенами) на поверхности мембран лямблий. Данные антитела связываются с антигенами лямблий и запускают одну из важнейших иммунных реакций, направленную на их уничтожение.

Синонимы русские

Антитела класса М (IgM) к кишечной лямблии (Giardia lamblia) в сыворотке.

Синонимы английские

Anti-Giardia lamblia IgM, anti-Giardia intestinalis IgM, anti-Giardia duodenalis IgM, G. lamblia Antibodies, IgM.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Это иммуноферментный анализ сыворотки крови человека на наличие в ней антител класса М к возбудителю лямблиоза Giardia intestinalis.

Иммуноглобулины класса М к возбудителю лямблиоза (кишечной лямблии) – специфические белковые молекулы (антитела), вырабатываемые клетками иммунной системы человека в ответ на чужеродные белки мембран кишечной лямблии (антигенами) в первую-вторую неделю заболевания. Данные антитела связываются с антигенами лямблий и запускают каскад иммунного ответа, направленного на их уничтожение.

Обнаружение этих антител в крови пациента позволяет с большой уверенностью утверждать, что у него протекает острая фаза лямблиоза. Однако и отсутствие антител не исключает заболевания.

Следует отметить, что исследование лишь выявляет наличие или отсутствие иммуноглобулинов класса М к возбудителю лямблиоза в крови пациента – количественное определение не производится.

Для чего используется исследование?

Тест используется в качестве вспомогательного метода диагностики лямблиоза при сомнительных или отрицательных результатах исследований кала, но при наличии клинических проявлений заболевания. Позволяет определить острую фазу лямблиоза.

Когда назначается исследование?

При диагностике лямблиоза – в качестве дополнительного метода исследования, для определения текущей острой фазы заболевания, при сложностях в постановке диагноза.
При отрицательных результатах исследований кала, но наличии клинической картины лямблиоза.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности): 0 - 0,84.

Текущая инфекция Lamblia intestinalis.
Ложноположительные результаты вследствие перекрестных реакций (редко).

Отсутствие инфицирования.
Серонегативный период заболевания.

Низкий уровень антител (слабовыраженный иммунный ответ).
Неспецифические сывороточные интерференции.

* – околопороговая концентрация антител.

Важные замечания

Анализ может быть назначен специалистом двукратно с интервалом во взятии крови в несколько дней.

Для цитирования: Агафонова Е.В., Тюрин Ю.А., Долбин Д.А., Куликов С.Н. Современные аспекты диагностики лямблиоза у человека. РМЖ. 2008;17:1120.

Актуальность проблемы Лямблиоз – достаточно распространенное заболевание в мире [1], в Российской Федерации регистрируется более 130 тысяч случаев лямблиоза в год. Из них 70% составляют дети в возрасте до 14 лет [2]. Эта цифра может колебаться в большую или меньшую сторону в зависимости от санитарно–бытовых условий, возможностей диагностики и настороженности врачей по поводу данной паразитарной инвазии [3]. Актуальность лямблиоза определяется также и тем, что его клинические проявления часто маскируются различными вариантами гастроэнтерологической патологии, синдромами избыточного роста кишечной флоры, мальабсорбции, поливитаминной недостаточности, а также развитием аллергических заболеваний – рецидивирующей крапивницей, атопическим дерматитом, гастроинтестинальной формой пищевой аллергии, которые без адекватной противолямблиозной терапии приобретают рецидивирующее течение [3,4]. Данное заболевание может отягощать сопутствующие заболевания желудочно–кишечного тракта, приводя к развитию синдрома мальабсорбции и длительной диареи [1,5]. Наиболее подвержены заболеванию дети. В России у детей в возрасте до 2 лет в организованных коллективах пораженность лямблиозом составляет 34,5%, а в 3–4 года – до 70%, в среднем у детей младшего возраста в организованных коллективах лямблиоз выявляют в 9,3% случаев и в 0,9% – у воспитываемых в домашних условиях [6]. Наиболее эндемичным регионом по лямблиозу в мире является Экваториальная Африка [7]. В этих регионах у детей инфицированность лямблиями впервые регистрируется после 3–4 месяцев по появлению в крови специфических IgМ–антител, а в возрасте 8 месяцев примерно у 80% детей выявляются диагностические титры специфических противолямблиозных IgM–антител [8]. Передача инфекции чаще реализуется водным путем, реже – через продукты питания. Диагностика лямблиоза является трудной задачей: у некоторых больных с длительнотекущим лямблиозом антитела в сыворотке крови могут отсутствовать, что свидетельствует о неэффективности механизмов гуморальной защиты [9]. Антитела часто отсутствуют у страдающих лямблиозом детей с лимфатическим типом конституции; распространение практики постановки диагноза лямблиоза без проведения копрологического исследования нельзя считать оправданным.

Читайте также: