Иммунокомб вич 12 биспот
Обновлено: 17.04.2024
У большинства больных антитела к ВИЧ выявляются через 6–12 недель после заражения с использованием тест-систем первых поколений и через 3–4 недели с использованием тест-систем третьего поколения, работающих по принципу сэндвич-ИФА с двумя антигенами. Однако ВИЧ-инфекция выявляется уже спустя 2 недели после заражения путем анализа на антиген p24 и уже через 1 неделю - путем анализа на вирусную РНК. Другими словами, период окна можно сократить до 2 недель и более с помощью комплексного диагностического подхода. Капсидный антиген p24 появляется в крови при бурной репликации вируса в острой лихорадочной фазе ВИЧ-инфекции и в этот период легко обнаруживается с помощью простого и сравнительно дешевого ИФА.
Если стоит задача выявить всех ВИЧ-инфицированных, в том числе лиц с ранними стадиями инфекции, то необходимо использовать весь арсенал анализов: на антитела, на антигены и на РНК. Однако тестирование на вирусную РНК дорого стоит, требует больших трудозатрат и недоступно для большинства лабораторий. И все же те лаборатории, в которых есть оборудование для ИФА, способны выявлять большинство случаев ВИЧ-инфекции при условии тестирования проб как на антитела к ВИЧ, так и на антиген p24.
В конце 1990-х гг. появились тест-системы для параллельного ИФА на антитела к ВИЧ и антиген p24, снявшие необходимость проведения раздельных анализов. Разработано и внедряется новое поколение комбинированных тест-систем для одновременного выявления антител к ВИЧ и антигенов ВИЧ.
Преимущество комбинированных анализов заключается в том, что они занимают меньше времени, требуют меньших трудозатрат и экономически более выгодны, чем раздельные анализы. Комбинированные тест-системы обладают высокой аналитической чувствительностью как за счет применения сэндвич-ИФА с двумя антигенами для выявления антител к ВИЧ, так и за счет одновременного выявления антигена p24.
В настоящее время на рынке имеется 8 комбинированных тест-систем четвертого поколения, прошедших клинические испытания: VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux; Марси-л’Этуаль, Франция); Enzymun-Test-HIV-Combi (Boehringer; Мангейм, Германия); Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika; Бокстел, Нидерланды); AxSYM-HIV Ag/AB (Abbott Laboratories; Эбботт-Парк, Иллинойс, США); Enzygnost HIV Integral (Dade Behring; Марбург, Германия); Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad), and COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics; Мангейм, Германия); Elecsys-HIV Combi (Boehringer; Мангейм, Германия). В последней тест-системе применен электрохемилюминесцентный сэндвич-метод с двумя антигенами; анализ занимает 18 минут; специфичность по данным испытаний на госпитализированных больных составляет 99,8%. Эта тест-система позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию на 5 дней раньше, чем самые чувствительные тест-системы на антитела к ВИЧ. Существует еще одна комбинированная тест-система без торговой марки для ИФА на антитела и антиген p24 с чувствительностью всего 99,5% и специфичностью 94,8%.
Комбинированный анализ на антитела и антиген для выявления недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции оправдан не только при тестировании доноров крови, но и во многих клинических ситуациях. Ранний диагноз ВИЧ-инфекции путем выявления антигена p24 позволяет безотлагательно начать лечение, провести консультирование больного и принять меры для снижения риска передачи инфекции. Благодаря способности выявлять антиген p24 тест-системы четвертого поколения позволяют диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях. Эти тест-системы весьма полезны для диагностики недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции в больничных и независимых клинических лабораториях и диагностических центрах (как бюджетных, так и коммерческих). В подобные учреждения нередко обращаются пациенты, риск ВИЧ-инфекции у которых значительно выше, чем у доноров крови. Для раннего выявления ВИЧ-инфекции у таких пациентов требуются тест-системы с высокой аналитической чувствительностью.
Важно отметить, что высокая аналитическая и эпидемиологическая чувствительность большинства тест-систем четвертого поколения, доказанная в испытаниях на больных из разных популяций, больных с сероконверсией и больных с разными подтипами ВИЧ, делает эти тест-системы незаменимыми для диагноза как недавней, так и длительно существующей ВИЧ-инфекции в самых разных ситуациях. Так, например, в клинических лабораториях бюджетных учреждений здравоохранения тестирование крови на антигены ВИЧ обычно не проводится (это прерогатива станций переливания крови), и поэтому при стандартном тестировании на антитела к ВИЧ случаи недавней инфекции могут быть пропущены. Было показано, что выявление инфекции на ранних стадиях дает основание вовремя начать антиретровирусную терапию, что повышает ее эффективность. Кроме того, появляется возможность своевременно проконсультировать пациента, правильно организовать его ведение и предотвратить передачу ВИЧ-инфекции.
Экспресс-тесты: Это класс тест-систем, дающих результат быстрее, чем через 30 минут. Экспресс-тесты для выявления специфических антител к ВИЧ появились в конце 1980-х гг., а в начале 1990-х гг. приобрели популярность. Благодаря усовершенствованию технологии производства экспресс-тесты стали не менее точными, чем ИФА (при условии, что анализ проводится аккуратно, квалифицированным сотрудником). Однако из-за мнимой простоты экспресс-тестов персонал часто допускает ошибки. Например, при внесении реагентов пипетки не всегда держат вертикально (как указано в инструкции), что нарушает соотношение объемов реагентов. Еще один источник ошибок - стремление многих лаборантов одновременно провести анализ нескольких проб. Из-за этого не выдерживается время этапов анализа.
При правильном выполнении экспресс-тесты на антитела к ВИЧ дают надежные результаты и могут использоваться в самых разных медицинских учреждениях и клинических ситуациях. В частности, их применяют в приемных отделениях, кабинетах врачей, амбулаториях, патологоанатомических отделениях, моргах, пунктах переливания крови, а также везде, где требуется срочное тестирование на ВИЧ (например, после контакта медицинского работника с возможным источником инфекции).
Экспресс-тесты на ВИЧ незаменимы для тестирования рожениц, за которыми не проводилось дородовое наблюдение (т. е. рожениц с невыясненным ВИЧ-статусом). Показано, что антиретровирусная терапия (в частности, зидовудином) эффективно снижает риск вертикальной передачи ВИЧ и что такое лечение в максимально ранние сроки необходимо матери, а затем и новорожденному. Экспресс-тестирование беременной на ВИЧ в предродовом периоде позволяет в случае выявления антител начать лечение до родов.
Артикул: 60432002
Производитель: Orgenics LTD, Израиль.
Бесприборная ИФА тест-система для дифференцированного выявления антител к ВИЧ1, включая группу O и ВИЧ2. Выявляет ранние сероконверсионные сыворотки. Разрешена для обследования доноров. Рассчитана на 36 определений.
Масштаб применения: лечебно профилактические учреждения стационарного и амбулаторного-поликлинического типа (первичное звено здравоохранения), выездные кабинеты. Дифференцированное выявление антител к ВИЧ 1 (в т.ч. подтип О) и ВИЧ 2 в сыворотке, плазме и цельной крови методом ИФА.
ИФА тест-система ИммуноКомб ВИЧ 1+2 БиСпот выявляет антитела к ВИЧ 1 на 8.5 дней раньше, чем Иммуноблот и ELISA.
Рекомендуется Минздравсоцразвития для скрининга, обследования доноров крови, органов и тканей человека, в том числе для экспресс-диагностики (приказы № 292 от 30.07.2001, № 336 от 07.09.2000).
В 2007, 2008 годах поставлялись в рамках Приоритетного национального проекта в сфере здравоохранения для экспресс-диагностики ВИЧ.
Время постановки 36 Чувствительность 100% Специфичность 99.4% Количество образца 50 мкл Тип Качественный
Отдельно ВИЧ 1 и 2 Количество тестов 36 Индивидуальный анализ Есть
Наборы реагентов ИммуноКомб (ImmunoComb, Израиль) не имеют прямых аналогов, производящихся на территории Российской Федерации и стран ТС. Таким образом, предложение других иммуноферментных наборов реагентов, в случае если они не обладают необходимыми для работы свойствами наборов ИммуноКомб может быть отклонено, и действие Постановления Правительства РФ №102 от 05.02.2015 г. "Об установлении ограничения допуска отдельных видов медицинских изделий, происходящих из иностранных государств, для целей осуществления закупок для обеспечения государственных и муниципальных нужд" на этот случай не распространяется.
Диагностика ВИЧ-инфекции, обычно, базируется на выявлении антител к ВИЧ. Классические серологические тесты для выявления антител к ВИЧ делятся на тест-системы для скрининга антител (первичная диагностика) и тест-системы для подтверждения, т.е. идентификации ВИЧ – позитивных образцов сывороток крови человека.
Проведение обследования единичных тестов на ВИЧ необходимо в регионах с низким показателем распространения ВИЧ-инфекции. При этом требуется использовать высокоспецифичные, одноразовые тесты для индивидуального обследования единичных сывороток крови человека.
Это особенно важно в тех регионах, где отсутствуют условия функционирования диагностической лаборатории – отсутствует специальное оборудование, электричество, нет персонала, обученного постановке иммуноферментного анализа или иммунного блоттинга. Кроме того, могут отсутствовать условия для забора на анализ и обработки крови из локтевой вены для получения образцов сывороток или плазмы крови.
Для проведения оперативных мероприятий по дальнейшему предотвращению распространения ВИЧ-инфекции, анализ должен быть проведен максимально быстро. В последние годы для этого разработаны и приобретают всё большее значение простые/быстрые тесты исследования, когда время анализа одного образца – до 15 минут или максимально – до 40 минут.
Технология производства одноразовых, простых/быстрых тестов (П/Б) настолько усовершенствована в последние годы, как свидетельствуют многочисленные испытания, проведенные в различных странах мира, что по качеству и результатам П/Б – тесты вполне могут быть приравнены к классическим тест-системам. ВОЗ рекомендует лабораториям, для которых приобретение тест-систем для иммунного блоттинга является сложным из-за высокой стоимости этих наборов, использовать комбинации ИФА – тест-систем и П\Б-тестов. Поэтому понятно, насколько важно качество П/Б-тестов, особенно при использовании их для первичного анализа – ложноотрицательный результат такого анализа и отсутствие возможности проведения анализа классическим методом ИФА может иметь неблагоприятные последствия. Такая же ситуация может сложиться и при применении П/Б-тестов при ургентных ситуациях – родовспоможении, травмах и т.д.
П/Б-тесты должны быть устроены таким образом, чтобы максимально минимизировать риск заражения для оператора, производящего как забор пробы на анализ, так и непосредственно анализ. П\Б-тесты должны сохранять свои свойства при хранении и транспортировании при различных температурных условиях окружающей среды, т.е. при температуре от 2 o C до 30 o C, а иногда до 45 o C.
Индивидуальный одноразовый П/Б-тест должен содержать все необходимые реагенты, готовые к употреблению, включать обязательно внутренний контроль и быть предельно простым в применении, чтобы максимально сократить возможность технических ошибок.
Начиная с 1988 года, когда появились первые разработки П/Б-тестов, ВОЗ была предложена Программа объективного изучения операционных характеристик этих тестов: чувствительность, специфичность, температура инкубации при проведении анализа, срок годности, температура хранения и транспортирования, простота постановки теста, использование для анализа не только образцов сыворотки или плазмы крови, но и цельной крови человека.
Для производства П/Б-тестов применяются различные технологии – метод иммунохроматографии, метод иммунофильтрации, метод латекс-агглютинации, модифицированный метод ИФА – иммуно-дот.
Анализ проведенных исследований в институте Тропической медицины (Бельгия) показывает, что большая часть применяемых в настоящее время быстрых тестов пригодна для исследования как сыворотки и плазмы, так и цельной крови человека. По чувствительности и специфичности эти тесты не уступают классическому ИФА, и при этом имеют преимущества по простоте и быстроте проводимого исследования индивидуальных проб сывороток.
Три из пяти представленных тестов являются тестами, в основе которых лежит принцип иммунохроматографии.
На мембране иммобилизованы рекомбинантные и пептидные антигены ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Каждый из 3-х тестов имеет свои принципиальные особенности технологии и проведения анализа, однако, главная цель – быстро (15-30 мин) провести анализ пробы сыворотки (плазмы) крови человека без применения специального оборудования и особых лабораторных условий.
Тест представляет собой набор реагентов для качественного и дифференцированного выявления антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке (плазме) крови человека.
Все реагенты, необходимые для постановки теста, в готовом виде размещены в ячейках проявочной ванны (6 рядов по 12 ячеек).
В ячейки проявочной ванны опускаются зубцы пластикового гребня. На поверхности каждого зубца этого гребня нанесены в разных точках пептидные антигены ВИЧ-1, рекомбинантный антиген ВИЧ-2 и внутренний контроль реакции – антитела к человеческому IgG.
В ячейках разных рядов проявочной ванны, в которые опускаются зубцы пластикового гребня, находятся необходимые для проведения ИФА-реакции реагенты: разбавитель образца сыворотки, конъюгат, промывочный раствор (в 3 рядах) и раствор хромогенного субстрата.
Препарат представляет собой оригинальную разработку, которая позволяет проводить иммуноферментный анализ без применения специального оборудования и с минимальным участием оператора.
Оператор должен только через определенные промежутки времени извлекать зубцы гребня из ячеек одного ряда и помещать их в ячейки следующего ряда. С помощью одного гребня могут быть исследованы одновременно 10 сывороток и 2 контроля (К+ и К-). Постановка анализа на 1 гребне занимает не более 40 мин.
По окончании анализа и выявлении в исследованной сыворотке антител к ВИЧ-1 и/или к ВИЧ-2 на зубцах гребня в определенных местах должны проявиться 2 или 3 пятна, при отрицательном результате – одно пятно.
Во всех анализах были получены результаты, соответствующие исходным характеристикам сывороток, входящих в данную панель (табл. 20)
| №пп | ВИЧ-экспресс | Иммунокомб Биспот ВИЧ1,2 | Multispot HIV1/HIV2 | Genie II | Determine HIV1/2 | ||
| С.23 | С.24 | С.25 | С.010216010220 | MS 350 | С.010121 | 70218U100 | |
| 1 | - | - | - | - | - | - | - |
| 2 | - | - | - | - | - | - | - |
| 3 | - | - | - | - | - | - | - |
| 4 | - | - | - | +сл. | - | - | - |
| 5 | + | + | + | + | + | + | + |
| 6 | + | + | + | + | + | + | + |
| 7 | + | + | + | + | + | + | + |
| 8 | + | + | + | + | + | + | + |
| 9 | + | + | + | + | + | + | + |
| 10 | + | + | + | + | + | + | + |
| 11 | + | + | + | + | + | + | + |
| 12 | + | + | + | + | + | + | + |
| 13 | + | + | + | + | + | + | + |
| 14 | + | + | + | + | + | + | + |
| 15 | + | + | + | + | + | + | + |
| 16 | + | + | + | + | + | + | + |
| 17 | + | + | + | + | + | + | + |
| 18 | + | + | + | + | + | + | + |
| 19 | + | + | + | + | + | + | + |
| 20 | + | + | + | + | + | + | + |
| 21 | + | + | + | + | + | + | + |
| 22 | + | + | + | + | + | + | + |
| 23 | + | + | + | + | + | + | + |
| 24 | + | + | + | + | + | + | + |
Быстрый подтверждающий тест – иммуноблот ИммуноКомб ВИЧ 1+2 КомбФирм по результатам этих же Госиспытаний рекомендован для постановки окончательного диагноза и подтверждений наличия антител к ВИЧ (приказ 292 от 30.07.2001).
В 2003 году согласно Указанию Зам. Министра здравоохранения РФ – Г.Г.Онищенко были проведены Государственные испытания препаратов, предназначенных для серодиагностики ВИЧ-инфекции.
Для изучения были предоставлены следующие П/Б-тесты:
Для изучения пяти П/Б-тестов, представленных на Госиспытания 2003 г. были использованы следующие материалы:
Результаты испытания П/Б-тестов представлены в табл.21
Таблица 21. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тесты)на стандартных панелях ГИСК им.Л.А.Тарасевича.
| П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Determine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/HIV2 | Retrocheck HIV WB | |
| Стандартные панели | ВИЧ 1+ ОСО 422821202П 16 сывороток | 16/16 | 16/16 | 16/16 | 15/16 | - |
| ВИЧ 2+ ОСО 422821602П 8 сывороток | 8/8 | 8/8 | 8/8 | 8/8 | - | |
| ВИЧ - ОСО 422821402П 20 сывороток | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | |
| Референс-сыворотка ВИЧ-2 1 сыворотка | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | - | |
| Референс-панель ОСО 422832704 24 сыворотки | - | - | - | 0/4 20/20 | ||
Пять вышеуказанных П/Б-тестов были изучены на клиническом материале, специально отобранном для этих исследований и аттестованном предварительно методом ИФА и в иммуноблоте.
В панели клинического материала были представлены:
Характеристика сывороток и результаты испытаний пяти П/Б-тестов представлены в таблицах 22,23,24.
Таблица 22. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на клиническом ВИЧ-позитивном материале.
| П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Deter-mine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/ HIV2 | Retro- check HIV WB | ||||
| Характеристика сывороток в ИФА и ИБ | шифр | ИФА (О.П.) | иммуно-блот*** | ||||||
| анти-тела* | анти-ген** | ||||||||
| 1г | >3,0 | 0,391 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 2г | >3,0 | 0,198 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 3г | >3,0 | 0,231 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 5г | 1,24 | 2,008 | неопред | + | + | + | - | + | |
| 6г | >3,0 | 0,026 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 7г | >3,0 | 0,229 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 8г | >3,0 | 0,364 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 9г | >3,0 | 0,360 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 10г | >3,0 | 0,157 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 11г | >3,0 | 0,252 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 12г | >3,0 | 1,196 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 1т | 0,312 | 0,056 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 2т | 1,08 | 0,049 | отрицат | + | - | - | - | - | |
| 3т | 1,02 | 0,183 | отрицат | + | - | - | - | - | |
| 4т | >3,0 | 0,135 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 5т | >3,0 | 0,325 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 6т | >3,0 | 0,151 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 7т | 1,83 | 0,053 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 8т | >3,0 | 0,849 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | - | |
| 9т | >3,0 | 0,034 | ВИЧ-1 | + | + | + | + | + | |
| 10т | >3,0 | 0,024 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 11т | 2,39 | 0,022 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 12т | 1,97 | 0,126 | неопред | + | + | - | - | - | |
| 13т | >3,0 | 0,036 | ВИЧ-1 | + | + | + | - | + | |
| 14т | >3,0 | 0,048 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 15т | 0,167 | 0,032 | отрицат | - | - | - | - | - | |
* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,172)
** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,101)
*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"
Таблица 23. Изучение 5 простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на сероконверсионной панели BBI № 9017
| П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Deter-mine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1 /HIV2 | Retro-check HIV WB | ||||
| Сыворотки панели | шифр | ИФА (О.П.) | иммуно-блот*** | ||||||
| анти-тела* | анти- ген** | ||||||||
| 1 | 0,032 | 0,041 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 2 | 0,022 | 0,046 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 3 | 0,041 | 0,034 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 4 | 0,70 | 0,035 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 5 | 0,113 | 0,033 | отрицат | - | - | - | - | - | |
| 6 | 0,248 | 0,036 | отрицат | - | - | + | - | - | |
| 7 | 0,822 | 0,053 | отрицат | - | - | + | - | - | |
| 8 | 2,142 | 0,110 | отрицат | - | - | + | - | + | |
| 9 | 1,824 | 0,195 | неопред | + | - | + | - | + | |
| 10 | 2,878 | 0,176 | неопред | + | + | + | + | + | |
| 11 | >3,0 | 0,085 | неопред | + | + | + | + | + | |
* - тест-система "Genscreen Plus HIV Ag/Ab" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,106)
** - тест-система "Genetic Systems HIV-1 Ag" производства фирмы "Bio-Rad" (ОП крит. 0,108)
*** - тест-система "New Lav Blot I" производства фирмы "Bio-Rad"
При исследовании сывороток беременных (18 образцов), сывороток крови пациентов с диагнозом гепатит В и С (25 образцов), сывороток крови доноров (34 образца) , ни в одном случае не было выявлено ложно-положительных результатов, т.е. специфичность – 100% (табл.24).
Таблица 24. Специфичность простых/быстрых тестов (П/Б тестов) на серонегативных сыворотках
| П/Б тесты | Serodia HIV 1/2 | Determine HIV1/2 | Иммунокомб II ВИЧ1+2 Биспот | Genie II HIV1/HIV2 | Retrocheck HIV WB | |
| сыворотки | доноры | 0/34 | 0/34 | 0/34 | 0/34 | 0/34 |
| беременные | 0/18 | 0/18 | 0/18 | 0/18 | 0/18 | |
| гепатит С | 0/8 | 0/8 | 0/8 | 0/8 | 0/8 | |
| гепатит В+С | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | 0/5 | |
| гепатит В | 1±/12 | 0/12 | 0/12 | 0/12 | 0/12 | |
Таким образом, результаты испытаний П/Б-тестов показали, что все исследованные препараты обладают выраженной специфичностью, что особенно важно при проведении быстрого тестирования неизвестного сывороточного материала.
Можно сказать, что П/Б-тесты гарантированы, при правильной постановке и хорошем качестве сывороток, от ложно-положительных реакций.
Большинство исследованных П/Б-тестов имеют достаточную чувствительность при выявлении антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не уступающую чувствительность тест-систем для классического иммуноферментного анализа.
Это подтверждает предлагаемую ВОЗ стратегию, по которой в определенных случаях простые/ быстрые тесты (П/Б-тесты) могут с успехом заменять классический иммуноферментный анализ. При этом постановка серологического диагноза ВИЧ-инфекции ускоряется и значительно упрощается.
Весь клинический материал аттестован в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича.
По-видимому, будущее серодиагностики ВИЧ-инфекции за простыми/ быстрыми тестами при условии их высокого качества, развитых и стандартизованных технологий и выраженной стабильности.
Бесприборная ИФА тест-система для дифференцированного выявления антител к ВИЧ 1 (в т.ч. подтип О) и ВИЧ 2 в сыворотке, плазме и цельной крови . Выявляет ранние сероконверсионные сыворотки. Разрешена для обследования доноров.
Время анализа 36 мин.
Количество образца 50 мкл
Отдельно ВИЧ 1 и 2
Количество тестов 36
Индивидуальное тестирование Есть
Состав набора:
• В набор входят 3 пластиковых Гребня.
Каждый Гребень имеет 12 зубцов, по 1 зубцу на каждый тест.
Каждый зубец сенсибилизирован в трёх чувствительных областях:
верхняя точка (1) - козьи антитела к иммуноглобулину человека (Внутренний контроль), средняя точка (2) - синтетические пептиды ВИЧ-2 (производная гликопротеинов оболочки вируса gp36), нижняя точка (3) - синтетические пептиды ВИЧ-1 (производная гликопротеинов оболочки вируса gp41 и gp120).
Гребни поставляются в алюминиевых упаковках, содержащих влагопоглотитель.
• В набор входят 3 Проявочные ванны.
Каждая из них содержит все необходимые для проведения анализа реагенты.
Проявочная ванна состоит из 6 рядов (A-F) по 12 лунок в каждом.
Содержимое каждого ряда следующее:
Ряд A: растворитель образца
Ряд B: промывочный раствор
Ряд C: козьи антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой (AP-конъюгат)
Ряд D: промывочный раствор
Ряд E: промывочный раствор
Ряд F: раствор хромогенного субстрата (окрашивающего вещества), содержащий 5-бромо-4-хлоро-3-индолилфосфат (BCIP) и нитротетразол синий (NBT).
• Положительный контроль 1 флакон (красная крышка), 1 мл
инактивированной нагреванием разведённой плазмы крови человека, содержащей антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
• Отрицательный контроль 1 флакон (зеленая крышка), 1 мл
инактивированной нагреванием разведённой плазмы крови человека, не содержащей антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
• Перфоратор - пластиковый стержень для прокалывания фольги, покрывающей лунки Проявочной ванны - 1 шт.
Срок годности, условия хранения и транспортировки
• Срок годности - 12 месяцев.
• Хранить в сухом, защищенном от света месте при температуре 2-8°С.
Не допускать замораживания.
• Возможна транспортировка в течение 3-5 суток при температуре не превышающей 26°С.
Внутренний контроль тест-системы подтверждает сохранность реагентов при транспортировке.
• После вскрытия набора хранить составляющие его компоненты при температуре 2-8ºС.
Иммунный блоттинг (иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот) - сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску (стрип) антигенов вируса.
Иммуноблот включает в себя несколько стадий:
Подготовка стрипа. Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на "промокашку" избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.
Исследование пробы. На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется - делается видимым.
В настоящее время иммунный блоттинг (иммуноблот) является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. В некоторых случаях ВИЧ-инфекции, до развития сероконверсии, специфические антитела более эффективно выявляются методом иммунного блоттинга, чем ИФА. При исследовании методом иммунного блоттинга обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41, причем обнаружение р24 у лиц, обследуемых с профилактической целью, требует дополнительных исследований на наличие у них ВИЧ-инфекции. Тест-системы для иммунного блоттинга на основе рекомбинантных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.
Сыворотки лиц, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим основным белкам и гликопротеидам - структурным белкам оболочки (env) - gp160, gp120, gp41; ядра (gag) - p17, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) - p31, p51, p66. Для ВИЧ-2 типичны антитела к env - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - p68.
Среди лабораторных методов, необходимых для установления специфичности реакции, наибольшее признание имеет обнаружение антител к белкам оболочки ВИЧ-1- gp41, gp120, gp160, и ВИЧ-2 - gp36, gp105, gp140.
ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (гп 160, гп 120, гп 41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, используя набор другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 месяцев (исследования через 3 месяца).
Наличие положительной реакции с антигеном p24 может указывать на период сероконверсии, так как антитела именно к этому белку иногда появляются первыми. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятым как минимум через 2 недели, и это является как раз тем случаем, когда при ВИЧ-инфекции необходимо исследование парных сывороток.
Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также может указывать на ВИЧ-2 инфекцию или на неспецифическую реакцию. Лиц с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 повторно исследуют через 3 месяца (в течение 6 месяцев).
Читайте также: