Инфекционный скрининг при беременности расшифровка

Обновлено: 27.03.2024

Группа ToRCH-инфекций объединяет заболевания, заражение которыми в период беременности представляет серьёзную угрозу для плода издоровья будущего ребёнка.

Аббревиатура ToRCH составлена из первых букв названий болезней:

  • токсоплазмоз (Toxoplasmosis);
  • краснуха (Rubella);
  • цитомегаловирус (Cytomegalovirus);
  • герпес (Herpes).

Все ToRCH-инфекции широко распространены. Перечисленными заболеваниями можно заболеть независимо от пола и возраста. Это совершенно разные болезни. Выделение их в отдельную группу обусловлено лишь одним: первичное заражение любой из ToRCH-инфекций во время беременности способно привести к смерти плода или сделать будущего ребенка инвалидом. Поэтому гинекологи обращают на них особое внимание, и женщине, планирующей беременность, обязательно надо выяснить, инфицирована она возбудителями этих заболеваний или нет - от этого будут зависеть ее дальнейшие действия.

Для этого необходимо пройти скрининг на ToRCH-инфекции, то есть сдать анализы, позволяющие выявить возбудителей данных заболеваний.

Токсоплазмоз (To в аббревиатуре ToRCH-инфекции)

Токсоплазмоз — заболевание, которое вызывается внутриклеточным паразитом — токсоплазмой.

Изображение 1: ТoRCH-инфекции - клиника Семейный доктор

Токсоплазма живет и размножается в организме домашней кошки. Вместе с кошачьими испражнениями она попадает во внешнюю среду, где может сохраняться месяцами. Это приводит к заражению токсоплазмой других видов животных и птицы. Токсоплазма попадает в их мышечные ткани и таким образом оказывается в мясе, которое потребляет человек. Надлежащая термическая обработка убивает токсоплазму, но если мясо плохо прожарено или недоварено, токсоплазма сохраняется.

Другой путь заражения токсоплазмой — через грязные руки. Поэтому с токсоплазмозом обычно сталкиваются ещё в детстве.

Если с иммунитетом всё в порядке, токсоплазмозом можно переболеть, и даже не знать об этом. Обычно именно так это и происходит: первичное заражение протекает без явных симптомов. Считается, что в России в скрытой форме токсоплазмоз встречается у 30% населения. От человека к человеку токсоплазмоз не передается.

Токсоплазмоз представляет опасность, в основном, для плода. Если первичное инфицирование происходит во время беременности, плод может погибнуть, или ребенок рождается больным – с поражением печени, селезенки, лимфатических узлов и центральной нервной системы.

Краснуха (R в аббревиатуре ToRCH-инфекции)

Изображение 2: ТoRCH-инфекции - клиника Семейный доктор

Краснуха передается от человека к человеку, как правило, воздушно-капельным путем. Основными проявлениями краснухи являются мелкая розовая сыпь по всему телу и повышение температуры до 38° C (наблюдается чаще у взрослых).

Краснуха опасна для плода, особенно в первом триместре беременности. Она поражает нервную ткань, ткани глаза, сердце ребенка и может привести к его смерти. На поздних сроках беременности опасность гораздо меньше.

Краснуха по-своему коварна. У человека, заболевшего краснухой, еще может не быть никаких симптомов (внешних проявлений) заболевания, а он уже заразен. Поэтому нельзя гарантировать, что вам удастся уберечься от краснухи, лишь избегая контактов с теми, кто уже очевидно болен этой болезнью.

Цитомегаловирус (C в аббревиатуре ToRCH-инфекции)

Изображение 3: ТoRCH-инфекции - клиника Семейный доктор

Цитомегаловирус был обнаружен только в XX веке. Инфекция передается половым путем, с кровью, через слюну (например, при поцелуях), а также от матери к ребенку во время грудного вскармливания. В настоящее время считается, что около 80% женщин детородного возраста являются носителем этой инфекции.

Для плода наибольшую опасность представляет первичное заражение цитамегаловирусом. Особенно опасно заразиться в первом триместре. Это может привести к недоразвитию или водянке головного мозга ребенка, желтухе, увеличению печени и селезенки, развитию пороков сердца и врожденных уродств.

Герпес (H в аббревиатуре ToRCH-инфекции)

Изображение 4: ТoRCH-инфекции - клиника Семейный доктор

Герпес передается различными путями, в том числе бытовым (при непосредственном контакте), воздушно-капельным и др. Однако типично заражение герпесом половым путем.

Первичное заражение герпесом во время беременности для плода очень опасно: на ранних сроках инфекция может привести к выкидышу, во второй половине беременности может стать причиной появления врожденных аномалий, таких как микроцефалия, патология сетчатки, пороки сердца.

ToRCH-инфекции и беременность: как обрести уверенность и безопасность?

Заботиться о защите своего будущего ребенка от ToRCH-инфекций надо начинать еще на этапе планирования беременности. Прежде всего, следует пройти диагностику ToRCH-инфекций и выяснить, подверглись ли вы уже инфицированию или нет.

Если в Вашей крови будут выявлены антитела к какой-либо ToRCH-инфекции, это значит, что Ваш организм уже боролся с данной болезнью и выработал к ней специфический иммунитет.

Если вы уже переболели токсоплазмозом или краснухой (в организме присутствуют антитела к возбудителям этих болезней), повторное заболевание вам не грозит.

Если антител к токсоплазме не обнаружится, от вас потребуется повышенная бдительность: надо будет тщательно соблюдать правила гигиены, следить за тем, чтобы мясо, которое вы собираетесь есть, прошло должную термическую обработку, держаться от кошек подальше.

При отсутствии антител к краснухе вам могут порекомендовать сделать прививку. Прививка от краснухи обеспечивает иммунитет на длительный срок (до 20 лет). Однако, если вы уже забеременели, прививку делать нельзя.

Отсутствие антител к цитомегаловирусу и вирусу герпеса означает, что во время беременности возможно первичное заражение, а значит, в этот период надо особенно внимательно относиться к своему здоровью и контактам с окружающими людьми.

Методы диагностики ToRCH-инфекций

Тесты на авидность позволят определить, как давно в организме присутствует та или иная инфекция.

Серологический анализ позволяет выявить антитела к возбудителю конкретного заболевания. Для того, чтобы убедиться в отсутствии ToRCH-инфекций, необходимо провести анализы на антитела к каждому из четырёх заболеваний, входящих в данную группу.

Наиболее опасно заражение ToRCH-инфекциями непосредственно в период беременности. ToRCH-инфекции широко распространены, поэтому, если присутствие соответствующих антител в крови обнаружено, это ещё не означает, что заражение произошло уже во время беременности. Для того, чтобы узнать, не было ли инфицирования именно в этот период, проводится определение авидности (оценки прочности связи между антителом и антигеном). В начале заболевания связь эта довольно слабая. Со временем иммунная система вырабатывает антитела с более высокой авидностью. Поэтому обнаружение низкоавидных антител может свидетельствовать о сравнительно недавнем инфицировании.

Анализ крови RW – это серологический анализ на выявление антител к бледной трепонеме. Методика проведения этого исследования была предложена Августом фон Вассерманом еще в начале XX века, с тех пор анализ носит его имя – реакция Вассермана (RW).

Бледная трепонема является возбудителем сифилиса.

Сифилис относится к классическим венерическим заболеваниям. Передается преимущественно половым путем. Заразиться также можно через кровь. Есть вероятность заражения бытовым путем, поскольку бледная трепонема может содержаться в невысохшей слюне и других выделениях организма.

В течении болезни выделяют первичный, вторичный и третичный сифилис.

Первичный сифилис характеризуется появлением специфической язвы (твердый шанкр) в месте проникновения инфекции (это могут быть половые органы, слизистая рта или прямой кишки). Чуть позже увеличиваются ближайшие лимфатические узлы – паховые при поражении половых органов или подчелюстные при поражении слизистой рта. Язва заживает самостоятельно через 3-6 недель после возникновения.

Симптомы вторичного сифилиса наблюдаются через 4-10 недель после возникновения язвы. Это – бледная сыпь по всему телу (включая ладони и подошвы), головная боль, общее недомогание и повышение температуры тела (похоже на грипп). Увеличиваются лимфатические узлы по всему телу. Потом симптомы исчезают, возвращаясь время от времени.

Третичный сифилис характеризуется поражением нервной системы, костей и внутренних органов. Он возникает через много лет после заражения при отсутствии должного лечения заболевания.

Таким образом, у человека, больного сифилисом, могут быть длительные периоды, в течение которых какие бы то ни было симптомы отсутствуют. Многое зависит от состояния иммунной системы организма. Иногда при контакте с инфекцией болезнь не развивается, но человек становится носителем инфекции (так называемое бессимптомное носительство).

В этих ситуациях анализ крови RW оказывается единственным способом обнаружить присутствие возбудителя сифилиса в организме. Анализ также дает возможность установить, как долго продолжается носительство сифилиса.

Когда необходим анализ крови RW?

Анализ крови RW является стандартной процедурой для подтверждения отсутствия возбудителя сифилиса в организме. Он необходим всем, чья профессия предполагает контакты с людьми или продуктами питания – врачам, косметологам, парикмахерам, поварам и т.д. Анализ крови RW также входит в число обязательных процедур при ведении беременности. Он проводится при постановке на учет и в третьем триместре (на 30-й неделе).

Анализ RW может назначаться и при появлении симптомов, заставляющих подозревать возможность заражения сифилисом:

  • сыпи на коже и слизистых оболочках неясного происхождения;
  • увеличении лимфатических узлов (прежде всего, паховых);
  • язвах на слизистой и выделениях из половых органов.

Рекомендуется сдавать анализ RW при случайном половом контакте. Однако надо иметь в виду, что анализ будет показателен только через 5-6 недель после полового контакта. До того анализ может быть отрицательным даже при проникновении инфекции.

Как сдавать кровь на RW?

Анализ крови RW следует сдавать натощак. В течение 12 часов перед анализом нельзя курить, употреблять спиртное, принимать лекарства, пить соки, чай или кофе. Можно пить только воду.

Расшифровка результатов анализа крови RW

Результат анализа крови RW может быть:

Изображение 1: Анализ крови RW – реакция Вассермана - клиника Семейный доктор

Реакция Вассермана

Сомнительная и слабоположительная реакция возможны и при отсутствии заражения сифилисом. Так, у 1,5% беременных выявляется ошибочная слабоположительная реакция. Ложноположительный результат RW может наблюдать после прохождения вакцинации, а также при туберкулезе, сахарном диабете, онкологических заболеваниях, пневмонии, вирусном гепатите.

Если есть вероятность ложноположительного результата, анализ следует сдать повторно.

Что делать при положительном результате RW?

При получении положительного результата RW при повторном анализе присутствие возбудителя сифилиса в организме считается подтвержденным. В этом случае необходимо срочно начинать лечение.

Сифилис хорошо поддается лечению, особенно на ранних стадиях. Сохранение возбудителя в организме грозит переходом заболевания в активную стадию и развитием проявлений вторичного и третичного сифилиса. Наличие бледной трепонемы в организме беременной женщины угрожает не только ее здоровью, но и здоровью ребенка: инфицирование плода, как правило, приводит к серьёзным нарушениям развития. Возможен и летальный исход.

Где сдать анализ RW в Москве?

Не занимайтесь самолечением. Обратитесь к нашим специалистам, которые правильно поставят диагноз и назначат лечение.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.


Лабораторная диагностика токсоплазмоза основана только на определении специфических антител, так как антиген Toxoplasma gondii присутствует в крови очень непродолжительное время. При попадании возбудителя в организм человека в течение 7 - 14 дней начинается первичный иммунный ответ-выработка IgM антител. Максимальный уровень IgM антител достигается к 20-му дню от начала заболевания. Полное их исчезновение в большинстве случаев происходит в течение 3 - 4 месяцев. В этот же период в крови отмечаются максимальные значения IgG антител. После выздоровления происходит постепенное снижение титра IgG антител до определённого уровня, который сохраняется пожизненно и свидетельствует о наличии устойчивого иммунитета.

При определении IgG и IgM антител к токсоплазмозу в сыворотке крови возможны следующие варианты результатов:

  • +IgG, -IgM - свидетельствует о бессимптомном здоровом носительстве (до 30% взрослого населения). Данное сочетание антител в крови беременных женщин не представляет угрозы для плода.
  • -IgG, +IgM либо +IgG, +IgM - первичное инфицирование, острое или субклиническое течение. Во время беременности данная ситуация указывает на возможность внутриутробного инфицирования. В сомнительных случаях необходимо повторить анализ через 7 - 14 дней для подтверждения сероконверсии.
  • -IgG, -IgM - отсутствие инфицирования. Беременные женщины с таким результатом должны быть включены в группу риска и обследоваться каждый триместр.

Вероятность врождённого токсоплазмоза составляет 1 на 1000 - 3500 родившихся детей. Это возможно при свежем случае инфицирования менее чем за 6 месяцев до наступления беременности и во время беременности. По данным НЦ АгиП РАН до 5 - 7% женщин заражаются во время беременности. Риск внутриутробного заражения плода увеличивается от 17% в первом триместре до 80% - в третьем триместре в случае острого токсоплазмоза беременной. Тяжесть поражения плода находится в зависимости от срока инфицирования (стадии внутриутробного развития).

Срок беременности (недели) Риск заражения
(%)
Исход
0 - 8 17 Тяжёлые аномалии развития, в/у гибель плода
8 - 18 25 Поражения ЦНС (гидроцефалия, кальцификаты в ткани мозга),
печени, хориоретинит, судорожный синдром.
18 - 24 65 Нарушения функций различных органов
(гепатоспленомегалия, желтуха, анемия, тромбоцитопения)
24 - 40 80 Субклинические проявления болезни с манифестацией
через несколько лет (глухота, хориоретинит)

Наиболее тяжёлые последствия возникают при заражении до 24 недель. При подтверждении первичного инфицирования матери в первые 8 недель рекомендуется прерывание беременности. В более поздние сроки необходимы дополнительные исследования (УЗИ, забор пуповинной крови плода путём кордоцентеза с целью определения специфических антител IgM класса) для выработки тактики лечения и решения вопроса о возможном прерывании беременности.

Для установления диагноза определяются IgM антитела в сыворотке крови, максимальный титр которых наблюдается через 2 -3 недели от начала заболевания, а полное их исчезновение происходит через 1 - 3 месяца. IgG антитела определяются с 7-го дня заболевания, а максимальный титр - на 21-й день. Затем происходит снижение титра до определённого уровня, свидетельствующего об устойчивом иммунитете.

Возможны следующие сочетания IgG и IgM антител в сыворотке крови:

  • +IgG, -IgM - свидетельствует о перенесённом заболевании и устойчивом иммунитете. Иммунитет вырабатывается в результате перенесённых клинически выраженных и бессимптомных форм. В последнее время появились данные, что иммунитет после перенесённой краснухи не такой прочный как считали ранее, так как взрослые иногда заболевают краснухой (5% случаев), несмотря на то, что болели ею в детстве. В таком случае в сыворотке крови наблюдается прирост вируснейтрализующих антител (IgG).
  • -IgG, +IgM либо +IgG, +IgM - первичное инфицирование, острая форма или бессимптомное течение, которое наблюдается в 30% случаях. В данной ситуации велика опасность внутриутробного инфицирования. При заражении в первом триместре рекомендуется прерывание беременности. В сомнительных случаях анализ необходимо повторить через 7 - 14 дней для подтверждения сероконверсии.
  • -IgG, -IgM - отсутствие иммунитета. По последним данным 10 - 20% женщин детородного возраста не имеют иммунитета к вирусу краснухи. Поэтому необходимо обследовать женщин до беременности и при отсутствии иммунитета рекомендовать вакцинацию. Беременные женщины, не имеющие IgG антител к вирусу краснухи, включаются в группу риска и обследуются каждый триместр.

Для подтверждения диагноза врождённой краснухи можно исследовать кровь плода, полученную с помощью кордоцентеза, на наличие специфических IgM антител. Данные антитела могут определяться в сыворотке крови плода с 23 недели гестации и сохраняются в крови внутриутробно инфицированного ребёнка в течение 6 - 12 месяцев после рождения. Иммунитет после врождённой краснухи менее стоек, так как формирование иммунитета происходит в условиях незрелой иммунной системы плода.

Для профилактики краснушной инфекции рекомендуется проведение вакцинации всех детей до 2-х лет и ревакцинация девочек в 12 - 14 лет для обеспечения иммунитета к вирусу краснухи в детородном возрасте, а также вакцинация женщин детородного возраста не имеющих иммунитета. Оценка эффективности вакцинации осуществляется с помощью определения в сыворотке крови специфических антител к вирусу краснухи IgG класса.

Цитомегаловирусная инфекция

Лабораторная диагностика ЦМВИ основана на определении специфических антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях наряду с различными методами определения антигена и ДНК вируса. Наличие в крови специфических антител IgG и IgM класса зависит от формы и стадии ЦМВИ.

ЦМВ не выводится из организма полностью, поэтому при суперинфицировании нельзя говорить о реинфекции, так как повторное заражение возможно другими штаммами вируса. При первичном инфицировании сначала возрастает титр IgM антител, а затем IgG. Через 3 - 4 месяца IgM антитела исчезают, но при обострении ЦМВИ возможно незначительное и кратковременное увеличение их уровня (до 30% случаев), в то время как рост титра IgG антител во время реактивации инфекции более значительный.

Возможны следующие варианты сочетания IgG и IgM антител при ЦМВИ:

  • -IgG, -IgM - отсутствие инфицирования. Наблюдается у 5 - 10% взрослого населения. Беременные женщины, не имеющие IgG антител к ЦМВ, включаются в группу риска и обследуются каждый триместр.
  • ±IgG, +IgM - первичное инфицирование. Первичная ЦМВИ, возникающая у беременных в 1 - 4% случаях, сопровождается большим риском заражения плода, чем реактивированная.
  • +IgG, ±IgM - персистирующая инфекция, реактивация. Можно рассматривать как косвенный признак вирусемии и обострения инфекции. Риск заражения плода составляет 0,5 - 2,5%. В большинстве случаев ЦМВИ протекает бессимптомно и при этом в анамнезе женщины имеются сведения о неблагоприятных исходах беременностей: выкидыши, мёртворождения, рождения детей с пороками развития.
  • +IgG, -IgM - инфицированность, состояние ремиссии. Установлено, что наличие специфических IgG антител против ЦМВ в крови пациента указывает скорее на его инфицированность, чем на защищённость от инфекции. Данная ситуация не представляет непосредственной опасности для плода, но так как во время беременности развивается состояние физиологического иммунодефицита, в группу риска должны быть включены и серопозитивные и серонегативные женщины.

Герпесвирусная инфекция

Лабораторная диагностика ВПГИ включает в себя определение специфических антител к ВПГ в сыворотке крови наряду с определением антигена ВПГ в клетках крови, осадка мочи, слюне. Так как ВПГ I и ВПГ II имеют общие антигенные детерминанты, раздельное определение антител возможно только с помощью моноклональных антител. Поэтому для скрининговых обследований удобнее определять суммарные IgG к ВПГ I и ВПГ II и суммарные IgM антитела. При постановке диагноза необходимо учитывать лабораторные данные и клинические симптомы.

Возможны следующие варианты при определении специфических антител к ВПГ:

  • -IgG, -IgM - отсутствие инфицирования. Наблюдается у 5 - 10% взрослого населения. Беременные женщины, не имеющие IgG антител к ВПГ, включаются в группу риска и обследуются каждый триместр.
  • ±IgG, +IgM - первичное инфицирование. Клинические симптомы выявляются в 33% случаев. Возможна трансплацентарная передача. Риск заражения ребёнка во время родов - 50 - 70%. ВПГ передаётся через плаценту в 10 раз реже чем цитомегаловирус.
  • +IgG, ±IgM - персистирующая инфекция, реактивация. Как и при ЦМВИ, можно рассматривать как косвенный признак вирусемии и обострения инфекции. В данном случае во время беременности риск заражения плода составляет 5%. В большинстве случаев ВПГИ имеет атипичное течение, и при этом в анамнезе женщины имеются сведения о неблагоприятных исходах беременностей: выкидыши, мёртворождения, рождения детей с пороками развития. Женщины с таким анамнезом подлежат обследованию до беременности.
  • +IgG, -IgM - инфицированность, состояние ремиссии. Установлено, что наличие специфических IgG антител к ВПГ, как и при ЦМВИ, в крови пациента указывает скорее на его инфицированность, чем на защищенность от инфекции. Данная ситуация не представляет непосредственной опасности для плода, но так как во время беременности развивается состояние физиологического иммунодефицита, в группу риска должны быть включены и серопозитивные и серонегативные женщины (возможно и первичное инфицирование и обострение ВПГИ). При необходимости обследуют обоих супругов.


Чаще всего заражение происходит во время родов. Максимальный риск наличия ВПГ в родовых путях - рецидив за 6 - 8 недель и менее перед родами. Инкубационный период составляет 2 - 14 суток. Неонатальный герпес проявляется везикулами на кожных покровах, конъюктивитом, неврологическими симптомами, герпетическим энцефалитом. Летальность при генерализованной ВПГИ - до 75%. Для диагностики используют определение суммарных антител к ВПГ в крови новорождённого в динамике в течение первых 3 - 4 недель жизни. В случае обнаружения IgM антител можно предположить инфицирование.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.


Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.


Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).


В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение


ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).

    Исследование урогенитального тракта методом ПЦР на ИППП ;
    тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;

Для проведения исследования в медицинских офисах необходимо предъявить СНИЛС и документ удостоверяющий личность. Запись на исследование В случае получения положительного или сомнительного результата на COVID-19 и при необходимости проведения подтверждающего тестирования обра.


Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.


Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.


Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.

Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Читайте также: