Инструкция по диагностике лечению и профилактике криптоспоридиоза животных

Обновлено: 28.03.2024

Первый случай заболевания криптоспоридиозом у человека описан в 1976 г. [3], а в начале 1980-х годов стало ясно, что представители рода Cryptosporidium достаточно часто вызывают инфекции у человека, что связано не только с улучшением диагностики, но и значительным увеличением количества лиц с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

Таксономия и микробиология

Род Cryptosporidium (от греч. скрытая спора) принадлежит к семейству Cryptosporidiidae, подтипу Apicomplexa (в связи с тем, что спорозоиты имеют апикальные комплексы), классу Sporozoasida, подклассу Coccidiasina.

Криптоспоридии являются облигатными паразитами, инфицирующими микроворсинки слизистых оболочек ЖКТ и дыхательных путей животных и человека. Первоначально считалось, что различные криптоспоридии строго специфичны определенному виду позвоночных или человеку, в связи с чем их классификация была построена на основании инфицируемых ими животных. Однако в дальнейшем опыты по перекрестному инфицированию показали, что различные криптоспоридии гораздо менее специфичны, чем предполагалось ранее.

В связи с этим в 1984 г. ранее существовавшие виды (21 вид) были объединены в 4 вида. В настоящее время род Cryptosporidium официально включает 6 видов: C. nasorum, инфицирующая рыб, C. serpentis, инфицирующая рептилий, C. baileyi и C. meleagrides, инфицирующие птиц, C. muris и C. parvum, инфицирующие млекопитающих. Следует подчеркнуть, что практически все случаи заболевания криптоспоридиозом у людей были вызваны C. parvum.

Цикл развития криптоспоридий является "эксклюзивным", то есть все циклы развития происходят в организме одного и того же хозяина.

Следует отметить, что гиподиагностика данного заболевания связана с несовершенством диагностических техник и необходимостью специальной окраски образцов, что проводится далеко не во всех лабораториях. Результаты серологических исследований свидетельствуют, что, вероятно, криптоспоридиоз встречается значительно чаще, чем диагностируется. Так, антитела к криптоспоридиям были обнаружены у 25–35% лиц в популяциях индустриально развитых стран и у около 65% – в развивающихся [5].

Некоторые авторы отмечают, что для криптоспоридиоза характерна некоторая сезонность с пиком заболеваемости в теплое время года [6]. Инфицирование человека происходит при попадании ооцист, в основном при употреблении воды. Сохраняясь в окружающей среде, ооцисты криптоспоридий способны к инфицированию до 18 мес при температуре 4oС и до 1 нед при минус 10oС. Однако при нагревании (72oС) погибают в течение 1 мин.

Основной механизм передачи инфекции – фекально-оральный. Заражение может происходить при непосредственном контакте с инфицированным человеком или животным, а также с объектами окружающей среды (чаще с водой), контаминированными криптоспоридиями.

Инфицирующая доза криптоспоридий очень мала. Так, в эксперименте было показано, что развитие инфекции у приматов может наступить даже при попадании 10 ооцист. У здоровых добровольцев клиническая картина криптоспоридиоза развилась в 100% случаев при попадании 1000 ооцист и в 20% – при попадании 30 ооцист. При этом математическое моделирование показало, что инфекцию может вызвать попадание в ЖКТ даже одной ооцисты, а 50% инфицирующая доза – приблизительно 132 ооцисты [7].

Водный путь распространения криптоспоридиоза, впервые описанный в 1983 г., является основным путем передачи возбудителя. Наибольшая опасность состоит в том, что большинство современных технологий не позволяет добиться очистки воды от криптоспоридий. Это связано с уникальной резистентностью ооцист к дезинфектантам, особенно к хлорированию, а также с малыми размерами ооцист, позволяющими им проходить через многие фильтры [8].

Наиболее типичная локализация инфекции – дистальные отделы тонкой кишки. Однако у пациентов с выраженными иммунодефицитными состояниями может быть инфицирован весь ЖКТ – от ротоглотки до слизистой оболочки прямой кишки. Гистопатологическая картина при криптоспоридиозе включает в себя неоднородные участки инфицирования слизистой оболочки кишечника с атрофией ворсинок (от незначительной до умеренной степени), гипертрофией крипт и мононуклеарной/полиморфно-ядерной инфильтрацией базальной мембраны. Различные стадии развития криптоспоридий могут быть визуализированы с помощью электронной микроскопии.

Преобладание в клинической картине криптоспоридиоза профузной водянистой диареи заставляет предположить продукцию энтеротоксина. Однако, несмотря на многочисленные исследования, токсин не обнаружен.

Таким образом, точный механизм развития диареи при криптоспоридиозе неизвестен. В то же время некоторые исследователи показали, что криптоспоридии способны нарушать ионный транспорт в стенке тонкой кишки [9, 10]. В работах других авторов продемонстрировано наличие у C. parvum гена, ответственного за продукцию белка, обладающего гемолитической активностью и сходного с таковым у хорошо известного энтеропатогена Escherichia coli O157 H7 [11].

По-видимому, и гуморальный, и клеточный иммунитет необходим для эффективной "защиты" макроорганизма от криптоспоридиоза. Важность клеточного звена иммунитета убедительно демонстрируется тем, что у больных СПИДом криптоспоридиоз протекает тяжелее и часто переходит в хроническую форму, чего фактически никогда не наблюдается у людей со здоровой иммунной системой. В то же время у пациентов с выраженными нарушениями гуморального иммунитета заболевание также протекает в более тяжелой форме.

Однако очевидно, что одного специфического антительного ответа на инфекцию недостаточно, о чем свидетельствует обнаружение высоких титров специфических антител к C. parvum у пациентов со СПИДом, что, однако, не предупреждает развития хронической инфекции, вызванной этим микроорганизмом [12]. Вероятно, важную роль играет t-интерферон. Это косвенно подтверждается тем, что именно у пациентов с низкой продукцией t-интерферона (дети и ВИЧ-инфицированные) криптоспоридиоз развивается чаще и протекает более тяжело [4].

Спектр клинических проявлений криптоспоридиоза достаточно широк. Прежде всего он зависит от иммунологического статуса пациента. Основным и наиболее типичным клиническим проявлением заболевания как у пациентов с нормальной иммунной системой, так и с иммунодефицитными состояниями является профузная водянистая диарея.

У пациентов с нормальной иммунной системой диарея развивается, как правило, остро, продолжается от нескольких дней до 2 нед, после чего всегда проходит самостоятельно. В противоположность у больных СПИДом диарея развивается постепенно, протекает тяжелее (в среднем 3–6 л в сутки, реже – до 20 л в сутки), может продолжаться несколько месяцев и часто приводит к угрожающему жизни пациента обезвоживанию и электролитным нарушениям. Крайне редко при криптоспоридиозе отмечаются субфебрильное повышение температуры тела и гриппоподобный синдром – миалгия, головная боль, слабость, анорексия.

В то время как у пациентов с нормальной иммунной системой симптоматика криптоспоридиоза ограничивается только диареей, то при иммунодефицитных состояниях может наблюдаться как кишечная, так и внекишечная симптоматика, связанная с поражением дыхательных путей, поджелудочной железы и желчевыводящих путей.

Респираторное инфицирование сопровождается кашлем, затруднением дыхания и одышкой, охриплостью голоса. При этом у пациентов не обязательно имеется поражение кишечника. Криптоспоридиоз желчевыводящих путей может проявляться холециститом, значительно реже – гепатитом и склерозирующим холангитом, что клинически проявляется лихорадкой, болью в правом подреберье, желтухой, тошнотой, рвотой и диареей. Могут повышаться уровень билирубина, активность щелочной фосфатазы и трансаминаз. Диагностика билиарного криптоспоридиоза основана на биопсии и обнаружении различных стадий развития криптоспоридий в желчевыводящих путях [4]. Поражение криптоспоридиями поджелудочной железы встречается крайне редко. Описано лишь 8 таких случаев у ВИЧ-инфицированных пациентов [4].

Диагностика криптоспоридиоза в большинстве случаев основана на обнаружении ооцист криптоспоридий в испражнениях и(или) значительно реже – в биоптате слизистой оболочки тонкой кишки при синдроме водянистой диареи. Однако наиболее часто используемые обычные методы окраски в большинстве случаев не позволяют поставить диагноз, так как криптоспоридии либо окрашиваются очень слабо, как, например, при окраске по Граму, либо окрашиваются таким образом, что их невозможно отличить от дрожжеподобных грибов.

В связи с этим большинство авторов считает модифицированную (в качестве деколорайзера вместо спиртоацетоновой смеси используется 1% серная кислота) окраску на кислотоустойчивость оптимальной для визуализации криптоспоридий. При данном методе окраски ооцисты криптоспоридий окрашиваются в красный (или розовый) цвет и хорошо видны на сине-фиолетовом фоне, в который окрашиваются другие микроорганизмы и содержимое кишечника. В настоящее время доступны также моноклональные антитела, меченные флюоресцентной меткой, что также позволяет визуализировать данный микроорганизм с высокой специфичностью и чувствительностью.

При остром криптоспоридиозе количество ооцист в фекалиях велико. Это позволяет использовать прямую микроскопию образца фекалий. Однако в некоторых ситуациях, например при хроническом криптоспоридиозе с легким течением, когда концентрация ооцист в кале мала, необходимо использовать специальные техники для увеличения их концентрации. К ним относятся методы флотации (в растворах сахарозы по Sheaher, сульфата цинка, насыщенном растворе хлорида натрия) и методы концентрации (формалин-этилацетатный и эфирформалиновый) [13].

Разработаны серологические тесты – иммунофлюоресцентный и иммуноферментный анализ. Однако их значение для диагностики активного заболевания крайне ограничено и малоинформативно. В связи с этим данные тесты используются только в эпидемиологических исследованиях [4, 6].

Некоторые авторы рекомендуют использование молекулярных методов исследования, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Однако их значение для рутинной лабораторной диагностики криптоспоридиоза пока не определено [3, 6, 14, 15].

У пациентов с нормальной иммунной системой криптоспоридиоз излечивается самопроизвольно. Поэтому данная группа пациентов в специфической терапии не нуждается [4, 16]. Напротив, пациенты с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь больные СПИДом, несомненно, нуждаются в лечении.

Однако до настоящего времени достаточно эффективной специфической терапии криптоспоридиоза не разработано [6, 17]. В современных руководствах по антимикробной химиотерапии в качестве препарата выбора рекомендуется аминогликозидный антибиотик паромомицин в дозе 500–750 мг 3–4 раза в сутки внутрь (или 1 г 2 раза в сутки) либо комбинация паромомицина (1 г 2 раза в сутки внутрь) с азитромицином (600 мг 1 раз в сутки внутрь) в течение 4 нед. Затем, если необходимо, монотерапия паромомицином до достижения клинического эффекта [16].

Из перспективных препаратов следует отметить нитразоксамид (2 г в сутки) [4, 16]. Следует еще раз подчеркнуть, что терапия указанными препаратами не всегда дает ожидаемый эффект [18]. Поэтому у больных СПИДом исход криптоспоридиоза благоприятен только при активной антиретровирусной терапии, которая позволяет добиться повышения уровня Т4-лимфоцитов и, как следствие, некоторой нормализации функции иммунной системы [19]. При выраженной диарее, приводящей к обезвоживанию и электролитным нарушениям, необходимо проведение регидратационной терапии и терапии, направленной на восстановление электролитного баланса.

Неспецифические противодиарейные препараты, такие, как коалин-пектин, лоперамид, дифеноксилат, субсалицилат висмута, опиоиды, а также новые противодиарейные препараты – аналоги соматостатина (октреотид) и ингибиторы энкефалиназы (роцекадотрил) могут облегчить симптоматику диареи. Однако эти препараты не улучшают исход заболевания, а безопасность их применения при криптоспоридиозе не изучалась [3, 4, 6].

Ооцисты криптоспоридий высокорезистентны к большинству дезинфектантов, используемых в домашних условиях, лечебно-профилактических учреждениях, лабораториях и системах очистки воды, включая 3% раствор гипохлорита натрия, многие препараты йода и хлора и 5% раствор формалина.

Таким образом, достаточно сложно добиться полной эрадикации ооцист криптоспоридий. Принимая во внимание, что пока не разработана достаточно эффективная специфическая терапия криптоспоридиоза, необходимо максимально ограничивать контакт лиц с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь больных СПИДом, а также пациентов, получающих массивную иммуносупрессивную терапию, с возможными резервуарами криптоспоридий, то есть избегать их контакта с животными, в первую очередь с крупным рогатым скотом, плавания в естественных и искусственных водоемах и употребления "сырой" воды.

При использовании медицинского оборудования, подвергающегося возможной контаминации криптоспоридиями, например эндоскопов и бронхоскопов, следует помнить, что добиться их стерилизации от ооцист криптоспоридий с помощью дезинфектантов практически невозможно, поэтому рекомендуется их автоклавирование. Поскольку у лиц с нормальной иммунной системой криптоспоридиоз разрешается самостоятельно, каких-либо специальных мер профилактики не требуется, кроме, возможно, рекомендации не употреблять "сырую" воду.

Так как основным путем распространения криптоспоридий является водный, во многих странах ужесточаются требования к очистке водопроводной воды в основном за счет усовершенствования технологии фильтрации [8].

Основным методом диагностики криптоспоридиоза является микроскопическое выявление возбудителя. Для этого применяют прижизненные и посмертные методы диагностики.

Прижизненная диагностика криптоспоридиоза молодняка сельскохозяйственных животных основана на выявлении этих паразитов в фекальных массах.

Приготовление препаратов из фекалий. На обезжиренное предметное стекло наносят несколько капель жидких фекалий больных животных (лучше с комочками слизи) и делают тонкий мазок. Препарат хорошо высушивают, после чего фиксируют спирт-эфиром или метанолом в течение 10 мин, высушивают и несколько раз проводят над пламенем спиртовки.

Для увеличения количества криптоспоридий в исследуемом материале можно применять различные методы обогащения. Одним из них является комбинированный метод центрифугирования с использованием флотационных растворов. В качестве последних можно применять растворы нитрата аммония с плотностью 1,3 (1500 г вещества на 1 л воды), серно-кислого цинка с плотностью 1,24 (400 г соли на 1 л воды), нитрата натрия с плотностью 1,38—1,40 (1000 г вещества на 1 л воды), сульфата магния с плотностью 1,26 (920 г соли на 1 л воды) и др.

Пробу фекалий массой 3 г помещают в стаканчик и, постоянно помешивая, приливают 50 мл воды. Взвесь фильтруют в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1,5—2 мин со скоростью 3000 об/мин. После этого надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают один из флотационных растворов, стеклянной палочкой размешивают осадок и повторно центрифугируют. Затем проволочной петлей снимают верхний слой жидкости с центрифужной пробирки, переносят капли на хорошо обезжиренное стекло, предварительно покрытое плазмой или альбумином, и делают мазок. Мазки хорошо высушивают, фиксируют и окрашивают.

Окраска препаратов по Циль-Нильсену. Вначале готовят карболовый фуксин. Для этого берут основного фуксина 2 г, этилового спирта (96°) 12 мл, карболовой кислоты 5 г и дистиллированной воды до 100 мл.

Приготовленную краску наносят на препарат и выдерживают без подогревания 25—30 мин. После этого мазок промывают водой, наносят на препарат 8—10%-ный раствор серной кислоты и выдерживают 40—60 с.

Повторно промывают препарат водой и в течение 3— 5 мин окрашивают его 5%-ным раствором малахитового зеленого в 10%-ном этаноле. Препарат промывают водопроводной водой, высушивают и микроскопируют с использованием иммерсионной системы.

В результате окрашивания ооцисты криптоспоридий диаметром 4—5 мкм имеют ярко-красный цвет, а микрофлора мазка окрашивается в зеленый. Приготовленные и окрашенные по этому способу препараты хорошо сохраняются.

Окраска препаратов по Романовскому-Гимза. На фиксированный препарат наносят 10%-ный раствор краски Романовского-Гимза. Через 30 мин ее смывают водой, препарат высушивают и микроскопируют. При этом ооцисты криптоспоридий окрашиваются слабо. Внутри их иногда можно обнаружить удлиненные и изогнутые спорозоиты, располагающиеся по периферии ооцист.

Окраска препаратов по Кестеру. Готовят раствор сафранина. Для этого к 2 частям насыщенного водного раствора сафранина добавляют 5 частей 5,6%-ного раствора калийной щелочи.

На фиксированный мазок наносят приготовленную краску сафранина. Через 5 мин препарат промывают водой и покрывают на 10 с 0,1%-ным раствором серной кислоты. Препарат повторно промывают водой и докрашивают в течение 12 с 5%-ным раствором малахитового зеленого, промывают водой, высушивают и исследуют при помощи микроскопа с иммерсионной системой.

Метод Вильсона. В центрифужную пробирку набирают 1 мл фекалий, добавляют 2 мл 2,5%-ного раствора бихромата калия и 5 мл раствора сахарозы (1,26 г на 1 мл) в дистиллированной воде. Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 800 об/мин. Из верхнего мениска содержимого пробирки петлей снимают несколько капель раствора и переносят их на предметное стекло, покрывают их стеклом и микроскопируют при увеличении X 400. В поле зрения микроскопа—ооцисты крип-тоспоридий светлые на темном фоне остальных структур.

Выявление криптоспоридий с помощью флуоресцентного микроскопа. Мазки фекалий обрабатывают раствором аурамина с карболовой кислотой. После этого их промывают водой и окрашивают в течение 8—10 мин раствором карболового фуксина. Повторно препарат промывают водой, высушивают и исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа с иммерсионной системой. При этом обнаруживают ооцисты криптоспоридий в виде ярко флуоресцирующих дисков на темно-красном фоне.

Для посмертной диагностики криптоспоридиоза берут содержимое тощей или подвздошной кишки или делают соскобы со слизистых оболочек их. Материал наносят на обезжиренное стекло, делают мазок, высушивают его, фиксируют и красят по описанным выше методам. Можно также взять 1 г содержимого подвздошной или тощей кишки и исследовать его по описанному выше методу Вильсона.

Диагностика токсоплазмоза

Токсоплазмоз диагностируют с помощью различных методов исследований, включающих эпизоотологические, клинические и лабораторные. Эпизоотологическими исследованиями обнаруживают животных с неясной этиологией заболевания: появление мертворожденных плодов, абортов, всевозможных уродств и т. д. Токсоплазмоз клинически может проявляться в виде параличей, парезов, конъюнктивитов, пневмоний, лихорадки, расстройства работы сердечно-сосудистой системы и органов желудочно-кишечного тракта.

Лабораторные исследования включают в себя микроскопию мазков или гистологических срезов различных органов и тканей: головного мозга, печени, почек, селезенки, легких, лимфатических узлов, сердца. Токсоплазмоз можно обнаружить также в ликворе, плодовых водах, моче, фекалиях.

Для диагностики токсоплазмоза ставят также биопробу на лабораторных животных, проводят иммуносерологическпе и копроскопические исследования фекалий кошек с целью обнаружения ооцист.

Наиболее типичной формой внеклеточных токсоплазм является дугообразная или полулунная форма паразита, у которого один конец удлиненный и острый, второй — широкий и округлый. Тканевые токсоплазмы обычно округлой или овальной формы, реже они имеют форму полумесяца. Размеры их достигают 4-7х2-4 мкм.

Из экссудатов, плодовых вод, ликвора и других жидкостей путем центрифугирования (2000 об/мин, 20 мин) можно выделить живых токсоплазм. Их берут из осадка центрифужной пробирки и исследуют в висячей или раздавленной капле под обычным увеличением микроскопа или при помощи иммерсионной системы. Живые токсоплазмы видны при затемненном поле зрения микроскопа, они совершают колебательные, волнообразные или скользящие движения, для чего необходимо поддерживать температуру 37-40 °С.

Затем с поверхностного слоя жидкости центрифужной пробирки металлической петлей снимают 5—6 капель, наносят их на обезжиренное предметное стекло и микроскопируют.

Биопроба также является одним из основных методов диагностики токсоплазмоза. Для ее проведения берут навеску в 1 г кусочков головного мозга, печени, селезенки, лимфатических узлов или органов абортированного плода, помещают в стерильную фарфоровую ступку, добавляют туда 3 мл физиологического раствора и тщательно растирают. Полученную суспензию вводят внут-рибрюшинно по 0,5 мл 4—5 белым мышам. При наличии токсоплазм в исходном материале у них через 5—7 дней после введения суспензии появляется тяжелая форма болезни. При этом в брюшной полости мышей образуется до 3 мл транссудата, содержащего большое количество эндозоитов. Для обнаружения токсоплазм берут транссудат из брюшной полости, готовят мазки, из головного мозга делают мазки-отпечатки. Приготовленные препараты фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимза, затем просушивают и микроскопируют на наличие эндозоитов с использованием иммерсионной системы, на наличие цист препараты просматривают при увеличении микроскопа 7х20.

Иммуносерологическую диагностику токсоплазмоза проводят с применением токсоплазменного антигена.

Диагностика саркоцистозов

Она проводится на основании эпизоотологических, клинических, серологических и микроскопических исследований, по данным патоморфологических вскрытий.

Компрессорный метод выявления саркоцист. Для этой цели берут пробы мышц различных органов — пищевода, диафрагмы, сердца, скелетных мышц и из каждой пробы по ходу мышечных волокон вырезают по 4 среза величиной с овсяное зерно (И. И. Вершинин, 1982). Срезы помещают на стекло компрессориума, накрывают вторым стеклом и сдавливают с помощью винтов. После этого микроскопируют при увеличении 7х8.

Препараты можно подкрашивать с помощью раствора краски Романовского-Гимза (2 капли краски на 1 мл дистиллированной воды) в течение 1 ч. После этого препараты обесцвечивают нашатырным спиртом.

Окрашивать препараты можно и по другой методике. Для этого вначале готовят краску: к 30 мл 10%-ного раствора метиленовой сини добавляют 30 мл 0,01%-ного раствора калийной щелочи и полученную смесь разбавляют поровну дистиллированной водой. Полученной краской можно окрашивать препараты в течение 10 мин с последующим обесцвечиванием 25%-ным раствором аммиака (Г. В. Кононенко, 1968).

Метод А. Г. Какурина (1976, 1978) окраски мышечных срезов состоит в том, что автор на препарат предлагает наносить в течение 10 мин 2-3 капли смеси краски, которую готовят из равных частей 0,5%-ного водного раствора метиленовой сини и ледяной уксусной кислоты. После окраски проводят обесцвечивание срезов 25%-ным раствором нашатырного спирта. Препарат промывают водой и микроскопируют. В препарате саркоцисты выглядят в виде темно-синих образований на голубом фоне мышечной ткани. Существуют и другие методы окрашивания срезов для диагностики саркоцист.

Иногда бывает необходимо провести дифференциацию различных видов у одного и того же промежуточного хозяина. Для этого можно применить метод выделения саркоцист по М. Еrbег (1977). Суть его состоит в том, что берут пробу мышц массой 10 г, тщательно измельчают (до 2—3 мм длины), после чего ее помещают в колбу Эрленмейера и приливают туда 50 мл физиологического раствора. Туда же добавляют 8—10 стеклянных бусинок и взбалтывают. Потом суспензию фильтруют через сито с отверстиями диаметром 600—700 мкм в пробирку и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, а осадок пробирки наносят на предметное стекло и микроскопируют при увеличениях Х160 или Х640.

Для обнаружения мерозоитов наиболее удобным является метод М. Коzаr (1971). Берут 2—5 г мышечной ткани, помещают в фарфоровую ступку, добавляют 1— 2 мл физиологического раствора и тщательно растирают. Затем берут каплю полученной суспензии, помещают ее на обезжиренное предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют при затемненном поле. Мерозои-ты видны в виде банановидных образований.

Для прижизненной диагностики саркоцистоза плотоядных применяют методы центрифугирования с использованием флотационных растворов.

Для этого берут пробу фекалий массой 3 г, помещают ее в фарфоровую ступку, доливают в нее 25—30 мл воды и пестиком растирают содержимое. Затем полученную взвесь фильтруют в центрифужную пробирку, центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 3—4 мин. После этого осадок сливают, а к осадку добавляют флотационный раствор (с плотностью более 1,2) и повторно центрифугируют при тех же параметрах. Бактериологической петлей с верхней поверхности жидкости в пробирке снимают 5—6 капель, наносят их на обезжиренное предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют при увеличении Х280 и Х630. При этом в препаратах можно обнаружить спорулирован-

Диагноз ставят на основании обнаружения ооцист криптоспоридий в фекалиях (методом нативного мазка и флотационные методы). Ооцисты выявляют в мазках после окрашивания из по Циль-Нильсену с докрашиванием 1%-ным бриллиантовым зеленым на 10 0 спирте, по Циль-Габбету, по Козлову.

Обследуют поросят с 3-4-дневного возраста, у павших поросят берут соскобы слизистой оболочки нижней части подвздошной кишки.

Для лечения криптоспоридиоза применяют перорально сульфадимезин в дозе 0,05 г/кг два раза в день и фумаровую кислоту в дозе 0,1 г/кг однократно в течение 5 дней, сульфадимезин в дозе 0,05 г/кг и ампролиум в дозе 0,2 г/кг два раза в день в течение 5 дней.

Приложение 6

Методические указания

По эпизоотологическому обследованию

Животноводческих предприятий

(Утверждены ГУВ МСХП РБ 10 марта 2005 г.)

В основу профилактики болезней крупного рогатого скота, вызванных высо- и низкопатогенными инфекционными агентами, особенно при их ассоциированном течении, следует положить регулярное плановое эпизоотологическое обследование всего поголовья фермы или комплекса.

Эпизоотологическое обследование – одна из самых важных сторон работы любого ветврача; его проводят как в научных, так и в практических целях. Эпизоотологическое обследование направлено на изучение эпизоотического состояния конкретного хозяйства, выяснение условий, благоприятствующих или препятствующих распространению определенных вирусных, бактериальных и паразитарных болезней крупного рогатого скота в данной местности. Анализ результатов обследования позволяет проводить соответствующие противоэпизоотические мероприятия с максимальной эффективностью.

Эпизоотологическое обследование слагается из пяти этапов:

-анализа эпизоотической обстановки на ферме или комплексе за последние 4-5 лет;

-анализа ныне существующей эпизоотической обстановки на животноводческой ферме или комплексе;

-характеристики эпизоотической ситуации в хозяйстве;

-проведения противоэпизоотических и профилактических мероприятий;

-оценки полученных данных и разработки рекомендаций.

На первом этапе проводится анализ за последние годы (4-5 лет) по основным хозяйственным показателям состояния животноводства, делается анализ лабораторных исследований по выяснению роли вирусов и бактерий в возникновении заболеваний.

На втором этапе эпизоотологического обследования дается общая характеристика животноводческого хозяйства. Выясняют условия содержания, кормления и хозяйственного использования животных, их продуктивность, ветеринарно-санитарное состояние фермы или комплекса, уровень ветеринарного обслуживания, сроки и качество дезинфекции животноводческих помещений, результаты исследования кормов и питьевой воды. Также проводят анализ хозяйственных и транспортных связей, движения скота внутри хозяйства. На этом этапе выявляют потенциальный источник возбудителя инфекции, механизм его передачи, выясняют возможные пути заноса и дальнейшего распространения болезни, определяют границы эпизоотического очага и угрожаемой зоны, уточняют количество восприимчивых животных.

На третьем этапе оценивают эпизоотическую обстановку в животноводческом хозяйстве. В этих целях используют анамнестические данные, проводят клинические и патологоанатомические исследования. При этом учитывают эпизоотическое состояние данного хозяйства в прошлые годы, выясняют благополучие соседних населенных пунктов, хозяйств и комплексов, с которыми поддерживаются производственные связи. Уточняют характер проявления и течения болезни, последовательность и степень ее распространения, заболеваемость животных, их смертность, восприимчивость животных различных возрастов, сроки и качество проведения обработок коров и телят (вакцинация, диагностические исследования и др.)

На четвертом этапе ведут наблюдение за эпизоотическим очагом – выявляют эффективность принятых мер, условия содержания, кормления, лечебных и профилактических обработок больных животных, степень биозащиты от распространения возбудителя во внешнюю среду.

На пятом этапе обобщают и оценивают данные, полученные в процессе эпизоотологического обследования, и разрабатывают систему рациональных и эффективных профилактических и противоэпизоотических мероприятий.

Таким образом, эпизоотологическое обследование включает опрос людей и изучение документов, т.е. сбор эпизоотологического анамнеза, обследование неблагополучной территории, осмотр и клинико-эпизоотологическое обследование скота, взятие материала для исследования, наблюдение за очагом инфекции, оценку полученных данных и разработку способов ликвидации эпизоотического очага.

Итоги работы отражают в таблицах, планах, картах, схемах, графиках и справках. Материалы эпизоотологического обследования животноводческих ферм и комплексов подписываются ветеринарными специалистами, проводившими обследование, и должностными лицами сельскохозяйственного предприятия, которые принимали непосредственное участие в обследовании (указывается должность, фамилия, имя, отчество).

Анализ эпизоотической ситуации и схема эпизоотологического обследования сельскохозяйственного предприятия приведена в Приложениях

Криптоспоридиоз - протозойное заболевание человека, обычно протекающее в гастроинтестинальной форм ее диареей осмотического гипоферментативного типа и принимающее тяжелые формы у лиц с иммунодефицитом.

Первый случай заболевания криптоспоридиозом у человека описан в 1976 г., а в начале 1980-х годов стало ясно, что представители рода Cryptosporidium достаточно часто вызывают инфекции у человека, что связано не только с улучшением диагностики, но и значительным увеличением количества лиц с иммунодефицитными состояниями, в первую очередь с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

Что провоцирует / Причины Криптоспоридиоза:

Род Cryptosporidium (от греч. скрытая спора) принадлежит к семейству Cryptosporidiidae, подтипу Apicomplexa (в связи с тем, что спорозоиты имеют апикальные комплексы), классу Sporozoasida, подклассу Coccidiasina.

Криптоспоридии являются облигатными паразитами, инфицирующими микроворсинки слизистых оболочек ЖКТ и дыхательных путей животных и человека. Первоначально считалось, что различные криптоспоридии строго специфичны определенному виду позвоночных или человеку, в связи с чем их классификация была построена на основании инфицируемых ими животных. Однако в дальнейшем опыты по перекрестному инфицированию показали, что различные криптоспоридии гораздо менее специфичны, чем предполагалось ранее.

В связи с этим в 1984 г. ранее существовавшие виды (21 вид) были объединены в 4 вида. В настоящее время род Cryptosporidium официально включает 6 видов: C. nasorum, инфицирующая рыб, C. serpentis, инфицирующая рептилий, C. baileyi и C. meleagrides, инфицирующие птиц, C. muris и C. parvum, инфицирующие млекопитающих. Следует подчеркнуть, что практически все случаи заболевания криптоспоридиозом у людей были вызваны C. parvum.

Цикл развития криптоспоридий является "эксклюзивным", то есть все циклы развития происходят в организме одного и того же хозяина.

Следует отметить, что гиподиагностика данного заболевания связана с несовершенством диагностических техник и необходимостью специальной окраски образцов, что проводится далеко не во всех лабораториях. Результаты серологических исследований свидетельствуют, что, вероятно, криптоспоридиоз встречается значительно чаще, чем диагностируется. Так, антитела к криптоспоридиям были обнаружены у 25–35% лиц в популяциях индустриально развитых стран и у около 65% – в развивающихся.

Некоторые авторы отмечают, что для криптоспоридиоза характерна некоторая сезонность с пиком заболеваемости в теплое время года. Инфицирование человека происходит при попадании ооцист, в основном при употреблении воды. Сохраняясь в окружающей среде, ооцисты криптоспоридий способны к инфицированию до 18 мес при температуре 4°С и до 1 нед при минус 10°С. Однако при нагревании (72°С) погибают в течение 1 мин.

Основной механизм передачи инфекции – фекально-оральный. Заражение может происходить при непосредственном контакте с инфицированным человеком или животным, а также с объектами окружающей среды (чаще с водой), контаминированными криптоспоридиями.

Инфицирующая доза криптоспоридий очень мала. Так, в эксперименте было показано, что развитие инфекции у приматов может наступить даже при попадании 10 ооцист. У здоровых добровольцев клиническая картина криптоспоридиоза развилась в 100% случаев при попадании 1000 ооцист и в 20% – при попадании 30 ооцист. При этом математическое моделирование показало, что инфекцию может вызвать попадание в ЖКТ даже одной ооцисты, а 50% инфицирующая доза – приблизительно 132 ооцисты.

Водный путь распространения криптоспоридиоза, впервые описанный в 1983 г., является основным путем передачи возбудителя. Наибольшая опасность состоит в том, что большинство современных технологий не позволяет добиться очистки воды от криптоспоридий. Это связано с уникальной резистентностью ооцист к дезинфектантам, особенно к хлорированию, а также с малыми размерами ооцист, позволяющими им проходить через многие фильтры.

Период заразительности источника - весь период заболевания и спустя несколько недель после исчезновения клинических симптомов.

Патогенез (что происходит?) во время Криптоспоридиоза:

После эксцистирования ооцист, попавших в желудок и двенадцатиперстную кишку, высвободившиеся из них спорозоиты достигают микроворсинок энтероцитов, где и происходит дальнейшее развитие образовавшихся из них трофозоитов. Паразит инвагинирует апикальную мембрану в основании микроворсинок, которые, вытягиваясь и слипаясь над ним, образуют паразитофорную вакуоль. При дальнейшем размножении криптоспоридии активно контаминируют слизистую оболочку тонкой кишки и повреждают ее микроворсинчатую кайму. Следствием этого являются нарушения мембранного пищеварения и всасывания - мальдигестия и мальабсорбция. Избыточно большое количество дисахаридов, пептонов и других не ферментированных окончательно веществ, находящихся в просвете тонкой кишки, способствует развитию осмотической гипоферментативной диареи. При этом диарейный синдром поддерживается и еще более усиливается возникающей бродильной диспепсией. Последняя развивается вследствие поступления в слепую кишку большого количества неферментированных дисахаридов.

Присоединение рвоты увеличивает потерю жидкости и электролитов. В ряде случаев болезнь может протекать без диареи, что объясняется повреждением криптоспоридиями слизистой оболочки желудка.

При криптоспоридиозе могут поражаться эпителий глотки, гортани, пищевода, желудка, но наиболее часто повреждается эпителий тонкой кишки. На фоне иммунодефицита возникают тяжелые формы болезни, помимо пищеварительной системы в патологический процесс вовлекаются другие органы и ткани.

Симптомы Криптоспоридиоза:

Инкубационный период продолжается от 4 до 14 дней.

Спектр клинических проявлений криптоспоридиоза достаточно широк. Прежде всего он зависит от иммунологического статуса пациента. Основным и наиболее типичным клиническим проявлением заболевания как у пациентов с нормальной иммунной системой, так и с иммунодефицитными состояниями является профузная водянистая диарея.

У пациентов с нормальной иммунной системой диарея развивается, как правило, остро, продолжается от нескольких дней до 2 нед, после чего всегда проходит самостоятельно. В противоположность у больных СПИДом диарея развивается постепенно, протекает тяжелее (в среднем 3–6 л в сутки, реже – до 20 л в сутки), может продолжаться несколько месяцев и часто приводит к угрожающему жизни пациента обезвоживанию и электролитным нарушениям. Крайне редко при криптоспоридиозе отмечаются субфебрильное повышение температуры тела и гриппоподобный синдром – миалгия, головная боль, слабость, анорексия.

В то время как у пациентов с нормальной иммунной системой симптоматика криптоспоридиоза ограничивается только диареей, то при иммунодефицитных состояниях может наблюдаться как кишечная, так и внекишечная симптоматика, связанная с поражением дыхательных путей, поджелудочной железы и желчевыводящих путей.

Респираторное инфицирование сопровождается кашлем, затруднением дыхания и одышкой, охриплостью голоса. При этом у пациентов не обязательно имеется поражение кишечника.

Криптоспоридиоз желчевыводящих путей может проявляться холециститом, значительно реже – гепатитом и склерозирующим холангитом, что клинически проявляется лихорадкой, болью в правом подреберье, желтухой, тошнотой, рвотой и диареей. Могут повышаться уровень билирубина, активность щелочной фосфатазы и трансаминаз. Диагностика билиарного криптоспоридиоза основана на биопсии и обнаружении различных стадий развития криптоспоридий в желчевыводящих путях. Поражение криптоспоридиями поджелудочной железы встречается крайне редко. Описано лишь 8 таких случаев у ВИЧ-инфицированных пациентов.

Бронхолегочный (респираторный) криптоспоридиоз характеризуется лихорадкой, лимфаденопатией, длительным кашлем со скудной слизистой, реже слизисто-гнойной мокротой, одышкой, цианозом. В мокроте можно обнаружить ооцисты криптоспоридий. При биопсии выявляется метаплазия поверхностных эпителиальных клеток бронхов. У больных СПИДом описана и двусторонняя интерстициальная пневмония, обусловленная криптоспоридиями. Ооцисты при этом выявляют в альвеолярных макрофагах. Респираторный криптоспоридиоз завершается смертью больных, несмотря на массивную химиотерапию.

Диагностика Криптоспоридиоза:

Диагностика криптоспоридиоза в большинстве случаев основана на обнаружении ооцист криптоспоридий в испражнениях и (или) значительно реже – в биоптате слизистой оболочки тонкой кишки при синдроме водянистой диареи. Однако наиболее часто используемые обычные методы окраски в большинстве случаев не позволяют поставить диагноз, так как криптоспоридии либо окрашиваются очень слабо, как, например, при окраске по Граму, либо окрашиваются таким образом, что их невозможно отличить от дрожжеподобных грибов.

В связи с этим большинство авторов считает модифицированную (в качестве деколорайзера вместо спиртоацетоновой смеси используется 1% серная кислота) окраску на кислотоустойчивость оптимальной для визуализации криптоспоридий. При данном методе окраски ооцисты криптоспоридий окрашиваются в красный (или розовый) цвет и хорошо видны на сине-фиолетовом фоне, в который окрашиваются другие микроорганизмы и содержимое кишечника. В настоящее время доступны также моноклональные антитела, меченные флюоресцентной меткой, что также позволяет визуализировать данный микроорганизм с высокой специфичностью и чувствительностью.

При остром криптоспоридиозе количество ооцист в фекалиях велико. Это позволяет использовать прямую микроскопию образца фекалий. Однако в некоторых ситуациях, например при хроническом криптоспоридиозе с легким течением, когда концентрация ооцист в кале мала, необходимо использовать специальные техники для увеличения их концентрации. К ним относятся методы флотации (в растворах сахарозы по Sheaher, сульфата цинка, насыщенном растворе хлорида натрия) и методы концентрации (формалин-этилацетатный и эфирформалиновый).

Разработаны серологические тесты – иммунофлюоресцентный и иммуноферментный анализ. Однако их значение для диагностики активного заболевания крайне ограничено и малоинформативно. В связи с этим данные тесты используются только в эпидемиологических исследованиях.

Некоторые авторы рекомендуют использование молекулярных методов исследования, в частности полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Однако их значение для рутинной лабораторной диагностики криптоспоридиоза пока не определено.

Лечение Криптоспоридиоза:

Криптоспоридиоз не подлежит лечению. Однако антиретровирусные препараты могут уменьшить или прекратить симптомы данного заболевания.

Несколько препаратов, предназначенных для других целей, проходят тестирование для лечения криптоспоридиоза. К ним относят паромомицин (Хуматин), азитромицин (Зитромакс), латразурил и атовакон (Мепрон).

Но самым многообещающим препаратом в этой сфере является нитазоксадин. Он помог половине всех пациентов, которые принимали участие в научных исследованиях этого препарата. К сожалению, разработка нитазоксадина была остановлена в связи с решением Управления по контролю за продуктами и лекарствами США. Однако в 2002 году препарат был одобрен для лечения детей.

От крипто-инфекции избавиться невозможно. Зато существует возможность контролировать диарею, вызванную этой инфекцией. Для этого можно использовать Имодиум, Каопектат и другие подобные препараты. В серьезных случаях диарею также иногда лечат с помощью Сандостатина.

Еще один препарат для борьбы с диареей, вызванной криптоспоридиозом, Споридин-G, сейчас находится на стадии тестирования.

Если у тебя диарея, обрати внимание на то, что тебе следует пить много жидкости, чтобы избежать обезвоживания организма.

Назначается тщательно подобранная (с отсутствием дисахаров) диета, ферменты, мукопротекторы. В этиотропной терапии иммунокомпетентных лиц используют макролиды, котримоксазол, дараприм, метронидазол, фуразолидон. Проводится регидратационная терапия.

Эффективных методов этиотропной терапии иммунокомпрометированных лиц и, тем более, больных ВИЧ/СПИДом пока не разработано. Влечении используют макролиды, клиндамицин, фуразолидон и другие препараты. Однако основное значение имеет патогенетическая терапия и более эффективное лечение основного заболевания - ВИЧ-инфекции. Тем не менее, у лиц с иммунодефицитами любой природы рекомендуется применение спирамицина (ровамицина) до 3-9 г в сутки.

Профилактика Криптоспоридиоза:

Лекарств для предотвращения криптоспоридиоза не существует.

Лучшая защита – это чистота. Избегай контакта с экскрементами людей или животных. Обязательно мой руки после использования туалета, работы в саду, контакта с грязным бельем или животными, или ухода за ребенком (смены подгузников). Криптоспоридиоз может передаваться через слюну или сексуальный контакт. Не глотай воду во время плавания, так как она может содержать бактерии криптоспоридиоза. Сырые устрицы также могут содержать эти бактерии.

К каким докторам следует обращаться если у Вас Криптоспоридиоз:

Вас что-то беспокоит? Вы хотите узнать более детальную информацию о Криптоспоридиоза, ее причинах, симптомах, методах лечения и профилактики, ходе течения болезни и соблюдении диеты после нее? Или же Вам необходим осмотр? Вы можете записаться на прием к доктору .

Читайте также: