Инвитро дисбактериоз с чувствительностью к антибиотикам и бактериофагам

Обновлено: 19.04.2024

Прилетели как-то на Землю инопланетяне. Посмотрели: ледники тают, озоновые дыры растут, панды не размножаются. Стали думать, отчего это все. Спустились в московский район Бирюлево. Взяли сотню человек, раздели, пощупали, допросили. Сделали вывод: озоновые дыры — из-за брюнетов (много их попалось), панды не размножаются из-за мужиков — их на летающей тарелке оказалось больше половины. Ну, а глобальное потепление — из-за рубля: у всех жителей Бирюлево в карманах оказалась эта валюта. Улетели инопланетяне к себе домой и по результатам исследования напечатали своими зелеными щупальцами десять кандидатских диссертаций.

Что не так с этим исследованием? Его же так часто назначают врачи!

В питательной среде появились колонии бактерий. К счастью для нас, действительно опасная Сальмонелла растет в питательной среде. Большая часть кишечных бактерий, увы, нет.

Конечно, есть. Например, псевдомембранозный колит — тяжелое воспаление толстой кишки после антибиотика — самый настоящий дисбактериоз: погибли конкуренты, и поэтому размножается Clostridium difficile. Только для того, чтобы это лечить, совершенно не нужно констатировать очевидное — состав бактерий в кишке изменился. Достаточно подтвердить инфекцию (выявить токсины C.difficile) и назначить лечение.

Стоп. То есть делать посев стула вообще нет смысла?

Я этого не говорил. Мы обязательно выполняем посев стула, если хотим выявить рост по-настоящему вредных бактерий. Например, у человека с кровавой диареей мы пытаемся найти Сальмонеллу или Шигеллу, Кампилобактерию или особую разновидность кишечной палочки. Здесь посев кала жизненно необходим, ведь так мы сможем назначить лечение антибиотиком — убить конкретного возбудителя.

пока у нас НЕТ способа, избирательно менять состав кишечных бактерий.

Предположим, мы однозначно установили, что у человека имеется дефицит какой-то конкретной микроорганизмы (например, лактобактерий). Мы можем:

Колики у новорожденного

Атопический дерматит у ребенка

Вздутие и спазмы в животе у взрослого

Нет. Никогда. Ни при каких обстоятельствах. Мы не лечим вздутие живота, изучая линии на ладони. Мы не лечим сыпь, глядя в хрустальный шар. Мы не делаем бессмысленный анализ на дисбактериоз, чтобы назначить лечение.

Мы ждем, когда доказательная медицина предложит нам эффективные препараты и практические способы понять, что не так с нашими бактериями.

Дисбактериоз (в англоязычной литературе используют термин Intestinal bacterial overgrowth, реже, disbios) острое или хроническое нарушение нормальной микрофлоры кишечника.

В содержимом тощей кишки здоровых людей может находиться до 10 5 бактерий в 1 мл кишечного содержимого. Основными являются молочно-кислые палочки, стафилококки и стрептококки, другие грамположительные аэробные бактерии и грибы. В дистальном отделе подвздошной кишки количество микробов увеличивается до 10 8 , в первую очередь за счёт энтерококков, кишечной палочки, бактероидов и анаэробных бактерий. В толстой кишке преобладают анаэробы (бактероиды, клостридии, лактобациллы). Этот симбиоз бактерий у здорового человека (и у млекопитающих!) выполняет многие полезные функции: противодействует чужеродным патогенным микробам и вирусам, помогает пищеварению, синтезирует витамины группы В.

Соотношение количества различных микроорганизмов достаточно постоянно. Но вследствии ослабления иммунитета, нерациональной терапии антибиотиками, лучевой и химиотерапии, врождённых дефектов ферментов баланс нарушается. Могут исчезнуть некоторые представители нормальной микрофлоры (бифидобактерии, молочнокислые и кишечные палочки) и появиться грибки рода кандида, стафилококки, протей, синегнойная палочка. Возникает клинический синдром, для которого характерны понос, стеаторея, снижение веса и анемия. При резком ослаблении защитных сил, иммунитета может развиться генерализованная форма эндогенной инфекции вплоть до сепсиса.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители: полезные бактерии кишечника — лактобактерии, бифидобактерии, кишечные палочки с типичными свойствами, а также со сниженными ферментативными и гемолитическими признаками; условно-патогенные бактерии — энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, энтерококки, анаэробные бактерии (клостридии, без идентификации до вида), грибы; патогенные — сальмонеллы, шигеллы.

Литература

Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ, 1998, т. 6, №18.
Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome JAMA. 2004, v.292, pp. 2213 - 2214.

Кал должен быть свежесобранным.
Кал собирается в одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (его получают в любом медицинском офисе под залог) в количестве не более 1/3 объема контейнера.
На контейнере необходимо указать вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком.
В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность. При стандартном выполнении анализа чувствительность к антибиотикам не проводится.
Материал после окончания исследования в лаборатории не хранится.

Литература

Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ, 1998, т. 6, №18.
Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome JAMA. 2004, v.292, pp. 2213 - 2214.

Согласно отраслевому стандарту ОСТ 91500.11.0004-2003, утвержденному МЗ России, рекомендовано обследовать на дисбактериоз лиц, перечисленных ниже, относящихся к группам риска по развитию дисбиоза кишечника:

новорождённые, у которых нарушению нормофлоры кишечника способствуют следующие факторы: бактериальный вагиноз и мастит у матери, низкая оценка по шкале Апгар и наличие реанимационных мероприятий у новорождённого, позднее прикладывание к груди, длительное пребывание в родильном доме и возможность заселения кишечника агрессивными штаммами микроорганизмов окружающей среды, физиологическая незрелость моторной функции кишечника, наличие малых гнойных инфекций, непереносимость грудного молока, синдром малабсорбции, первичный иммунодефицит;
дети грудного и раннего возраста в случаях неблагоприятного течения периода новорожденности (в анамнезе), раннего искусственного вскармливания, диспептических нарушений, частых острых респираторно-вирусных инфекций, рахита, анемии, гипотрофии, изменений в психоневрологическом статусе ребёнка, аллергического дерматита;
дети дошкольного и школьного возраста, находящиеся в замкнутых коллективах, болеющие частыми острыми респираторно-вирусными инфекциями, с аллергическими реакциями;
в юношеском возрасте имеют значение частые острые респираторно-вирусные инфекции, аллергические реакции, наркомания;
у взрослых независимо от возраста имеют значение: профессиональные вредности; стрессы; несбалансированное питание; кишечные инфекции; лечение антибактериальными препаратами; длительная гормонотерапия, лечение нестероидными противовоспалительными препаратами; проведение химио- и лучевой терапии у онкологических больных; иммунодефицитные состояния.
у людей пожилого возраста помимо указанных выше, имеют значение: возрастные изменения свойств микрофлоры (уменьшение канцеролитических свойств кишечной палочки, увеличение числа штаммов, синтезирующих холестерин, увеличение количества гемолитической флоры).

Литература

Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ, 1998, т. 6, №18.
Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome JAMA. 2004, v.292, pp. 2213 - 2214.

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Дается количественная оценка всех выделенных представителей. Указывается логарифм степени (например, 10*6 кое/грамм в ответе выглядит как цифра 6, 10*3 как цифра 3 и т. д.). Оценить нормальное, сниженное или повышенное содержание микробов можно при сравнении с указанными в бланке ответа референсными значениями. Определяется чувствительность к бактериофагам. Выбор бактериофагов определяется видом микроорганизмов, со списками можно ознакомиться здесь>>

Определение чувствительности возможно только в случае выявления микробов, к которым налажен промышленный выпуск бактериофагов.

Проводится лечащим доктором с учётом предрасполагающих факторов, клинических проявлений и анамнеза заболевания. Согласно отраслевому стандарту ОСТ 91500.11.0004-2003 с микробиологической точки зрения принято выделять 3 степени дисбиотического процесса в толстой кишке:

Специальной подготовки не требуется, но есть ограничения (см. ниже) или подготовку определяет лечащий врач.

Ограничения. Кал не исследуется во время приема антимикробных препаратов, использования ректальных свечей, во время проведения R-исследований с барием. Не принимается кал без транспортной среды, а также после замораживания.

Литература

Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome. JAMA. 2004, v.292,p.2213 - 2214.
Отраслевой стандарт 91500.110004-2003 МЗ России.
Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ., 1998, т. 6, №18.

Недоношенные новорожденные, которым проводились реанимационные мероприятия при рождении; длительно находившиеся в родильном доме; при позднем прикладывании к груди; от матерей, имевших во время беременности гнойно-воспалительные заболевания; с признаками первичного иммунодефицита.
Дети грудного и раннего возраста в случаях неблагоприятного течения периода новорожденности, раннего искусственного вскармливания, с признаками диспепсических расстройств, частых ОРЗ, гипотрофии, анемии, рахита, аллергических реакций.
Дети других возрастов при наличии аллергических реакций, частых ОРЗ, сниженном иммунитете.
Взрослые, находящиеся на длительной гормональной терапии или лечении антимикробными препаратами; лица, имеющие несбалансированное питание, профессиональные вредности, страдающие длительно текущими кишечными инфекциями.

Литература

Henry C. Small Intestinal Bacterial Overgrowth and Irritable Bowel Syndrome. JAMA. 2004, v.292,p.2213 - 2214.
Отраслевой стандарт 91500.110004-2003 МЗ России.
Парфенов А. И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз РМЖ., 1998, т. 6, №18.

Исследование количественное. Результат выдается в виде таблицы, в которой указываются log степени выявленных представителей кишечной микрофлоры в сравнении с референсными значениями. По полученному результату предоставляется заключение.

У здоровых людей количество выявленных бактерий находится в рамках диапазона референсных значений. Сальмонеллы, шигеллы отсутствуют. Отсутствие роста любых бактерий может косвенно свидетельствовать в пользу кишечной инфекции, вызванной патогенными бактериями. Снижение или повышение уровня различных представителей кишечной флоры указывает на дисбиоз кишечника при различных гастроэнтерологических заболеваниях. Дисбактериоз кишечника не является диагнозом.

Микробиологическое исследование, которое позволяет оценить состав микрофлоры кишечника – концентрацию и соотношение "полезных", условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале, определить специфическую активность основных пробиотиков в отношении выявленных микроорганизмов и их чувствительность к бактериофагам и антибиотикам. К нормальной микрофлоре кишечника ("полезные" бактерии) относятся лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечные палочки (типичные), анаэробная флора (бактероиды). Условно-патогенная флора – это энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, анаэробные бактерии (клостридии), грибы. Патогенными микроорганизмами являются сальмонеллы, шигеллы, патогенные эшерихии. При выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов будет определена их чувствительность к антимикробным препаратам (антибиотикам и бактериофагам) и пробиотикам. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.

Синонимы русские

Дисбиоз кишечника, определение пробиотиков-антагонистов.

Синонимы английские

Intestinal dysbiosis, antagonistic activity of probiotics and bacteriophage sensitivity test, Intestinal dysbacteriosis.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – это нарушение состава и количественного соотношения бактериальных и грибковых микроорганизмов желудочно-кишечного тракта. В норме слизистая оболочка ЖКТ является средой обитания так называемых комменсальных микроорганизмов, обеспечивающих целый ряд защитных функций в обмен на микронутриенты, используемые человеком. Большинство кишечных комменсалов относятся к родам Lactobacillus, Bifidobacterium и Bacteroides (облигатные бактерии), хотя состав и количество микроорганизмов сильно варьируются в зависимости от отдела ЖКТ. Так, желудок характеризуется наименьшей плотностью бактерий, среди которых преобладают Lactobacillus, Streptococcus и Helicobacter pylori. В тонкой кишке обнаруживается до 10 3 -10 6 КОЕ/мл бактерий, преимущественно Streptococcus и Lactobacillus. Наибольшая плотность комменсальных микроорганизмов наблюдается в толстой кишке (10 8 -10 9 КОЕ/мл), где преобладают Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium и Bifidobacterium. Комменсальные микроорганизмы находятся в динамическом взаимодействии с кишечным эпителием и, таким образом, являются механическим препятствием для инвазии патогенов. Кроме того, они секретируют ряд противомикробных соединений (например, дефензины). Бактерии-комменсалы способны регулировать иммунный ответ слизистых оболочек кишечника и в некоторых случаях подавлять воспалительные, в том числе аллергические, реакции. Нарушение баланса микробиоты возникает в результате длительного или бесконтрольного лечения антибактериальными препаратами, при нарушении моторики ЖКТ (послеоперационный период, прием слабительных препаратов), мальабсорбции (хронический алкоголизм, хронический панкреатит) и при некоторых других состояниях. Дисбактериоз может приводить к развитию заболеваний ЖКТ и других органов. Так, в настоящее время получены данные о его роли в патогенезе болезни Крона, неспецифического язвенного колита и целиакии, а также синдрома хронической усталости и атопического дерматита.

Основным способом диагностики дисбактериоза является микробиологический метод, при котором производят качественную и количественную оценку облигатных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале. На основании результатов исследования делают вывод о дефиците облигатных микроорганизмов или об избыточном росте условно-патогенных или патогенных бактерий. Микробиологическое исследование – это один из наиболее специфических и чувствительных методов исследования, применяемых при диагностике дисбактериоза. Следует, однако, помнить, что бактериологический состав кала (он используется в качестве биоматериала) несколько отличается от бактериологического состава слизистой оболочки кишки. Кроме того, результат теста может зависеть от многих других факторов, таких как недавнее употребление антибактериальных препаратов, продуктов, богатых пробиотиками, или слабительных средств.

С учетом растущей устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам все большую роль в терапии дисбактериоза играют альтернативные методы лечения с помощью пробиотиков. Пробиотики – это группа препаратов, содержащих бактерии-комменсалы, или дрожжевые грибы. Считается, что они защищают организм от избыточной условно-патогенной и патогенной микробиоты. Совокупность защитных свойств пробиотиков в отношении какого-либо микроорганизма называется антагонистической активностью и может быть определена с помощью микробиологического исследования. В ходе анализа оценивается антагонистическая активность основных используемых в гастроэнтерологической практике пробиотиков. Определение антагонистической активности пробиотиков проводят перед назначением указанных препаратов для лечения дисбактериоза. Оно может быть дополнено анализом на чувствительность выявленных микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам.

Результат анализа оценивают с учетом дополнительным лабораторных и инструментальных данных.

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Материал (кал) на кишечный дисбактериоз собирается до начала лечения антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами. Для исследования собирают свежевыделенный кал.

За 3 - 4 дня до исследования отменить приём слабительных препаратов, касторового и вазелинового масла и прекратить введение ректальных свечей. Кал, полученный после клизмы, а также после приёма бария (при рентгеновском обследовании) для исследования непригоден.

До сбора анализа помочитесь в унитаз, далее путём естественной дефекации в подкладное судно соберите испражнения (следить, чтобы не попала моча). Подкладное судно предварительно обрабатывается любым дезинфицирующим средством, тщательно промывается проточной водой несколько раз и ополаскивается кипятком.

Кал собирается в чистый, одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (его можно получить в любом медицинском офисе ИНВИТРО) в количестве не более 1/3 объёма контейнера.

Материал доставляется в лабораторию в течение 3 часов с момента сбора анализа. Желательно в течение указанного времени материал хранить в холоде (для этого можно использовать хладопакет или обложить контейнер кубиками льда, приготовленными заранее).

На контейнере необходимо указать вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком. В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность.

По возможности сбор материала на исследование должен осуществляться до назначения антибиотиков (если невозможно, то не ранее, чем через 12 часов после отмены препарата).

не допускается замораживание;
не допускается длительное хранение (более 5 - 6 часов);
не пригодны никакие транспортные среды, кроме указанной;
не допускается неплотно закрытый контейнер;
не подлежит исследованию биоматериал, собранный накануне.

ВАЖНО!

Читайте также: