Исследование коров на лейкоз и бруцеллез

Обновлено: 28.03.2024

Напомню владельцам КРС о таком заболевании как лейкоз.

Скоро во многих местах начнется очередная выводка КРС с целью диагностики лейкоза, бруцеллеза и туберкулеза КРС. Отнеситесь к этому со всей серьезностью и ответственностью. Так как количество больных лейкозом и туберкулезом животных колеблется в сторону увеличения. Игнорирование диагностических мероприятий может подвергнуть опасности Вас и Ваших близких.

К сожалению, уровень специальных знаний не всегда позволяет владельцам принимать правильные решения при содержании и эксплуатации животных, поэтому очень важно ознакомить их с основными принципами, которыми руководствуются при профилактике болезней животных, в том числе с таким заболеванием, как лейкоз (еще про него в народе говорят "рак крови") крупного рогатого скота, наносящим животноводству хозяйств, ферм и индивидуальных подворий большой экономический ущерб.

Считается, что для человека и других животных он не опасен. Однако ученые на этот счет осторожны. После опубликования серии работ о близком генетическом и антигеном родстве вируса лейкоза крупного рогатого с вирусом Т-клеточного лейкоза человека диагностика и профилактика лейкоза приобретает особую актуальность. В связи с этим изучение распространения заболевания в хозяйствах всех форм собственности, на частных подворьях и своевременная изоляция инфицированных и больных животных имеет социальное и общебиологическое значение.

Корова с первого взгляда здорова, удой не снижается, телится нормально. И в тоже время в ней уже "поселился" вирус лейкоза крупного рогатого скота. Лейкоз - болезнь неизлечимая. Животное будет носить вирус всю жизнь. В организме он живет в белых кровяных шариках (лейкоцитах) и уничтожить его невозможно. Но он постепенно разрушает организм. Через несколько месяцев болезнь проявляется в виде увеличенных лимфоузлов, исхудания животного, снижения его продуктивности и в конце концов приводит к гибели. Но до такого состояния дело, как правило, не доходит. Животное отправляют на убой раньше появления внешних признаков. И не потому вовсе, что ветеринарные врачи такие кровожадные. Они просто-напросто бессильны что-либо сделать, как-то помочь, так как нет в настоящее время методов лечения и препаратов против большинства вирусных заболеваний.

Как выявить больную корову? Пока есть два метода и оба связаны с лабораторным исследованием крови. Первый - реакция иммунодиффузии (вот он, загадочный РИД). Для этого кровь берут не раньше чем через 15 суток после любой вакцинации или проверки на туберкулез, за 30 суток до и через 30 суток после отела. Проверяют всех животных старше полугода. Через 1-2 месяца после того, как вирус попал в кровь животного, там появляются антитела, которые остаются в организме. Так что если животное однажды дало положительную РИД, то оно является пожизненным носителем вируса лейкоза.

Есть и такой метод диагностики – гематологический - подсчет белых кровяных шариков. Пробы крови берут в пробирки со специальным веществом, чтобы кровь не свернулась. Пробы должны быть исследованы не позднее чем через 36 часов после взятия. Под микроскопом определяют количество лимфоцитов в крови. Животных относят к категории больных лейкозом, даже если исследование показало сомнительный результат. Однако через 1-2 месяца исследуют еще раз. При повторном подтверждении диагноза их считают больными. Иногда при повторном взятии крови количество лимфоцитов бывает сниженным. Но это еще не значит, что произошла ошибка при лабораторном анализе или корова каким-то образом оздоровилась. У больного животного бывают ремиссии, когда количество "белой крови" снижается. Но потом число лимфоцитов снова возрастает.

При выявлении инфицированных или больных животных ЗАПРЕЩАЕТСЯ:

- передержка гематологически больных лейкозом коров, такие животные подлежат убою;

- использование в пищу молоко от больных лейкозом коров;

- выпас в общем стаде животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота;

- перемещение инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных в пределах (и за пределами) населенного пункта без разрешения ветеринарного врача;

- реализация в свободной продаже, молоко и молочных продуктов, полученных от инфицированных коров индивидуального подсобного хозяйства, такое молоко используется внутри хозяйства после пастеризации в обычном технологическом режиме или кипячения;

- подворный убой инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и больных лейкозом животных.

Перечисленные меры обязательны для исполнения фермерами и владельцами личных подсобных хозяйств.

Незнание нормативно-правовых документов по проблеме лейкоза крупного рогатого скота, социальных и экономических аспектов этой проблемы, клинических признаков, мер профилактики и борьбы с этим заболеванием, приводит к несвоевременному обращению владельцев к специалистам ветеринарной службы, и принятию решений.

Лейкоз крупного рогатого скота остается пока фатальным заболеванием, поражающим во все больших масштабах сельскохозяйственных животных.

Вирус лейкоза крупного рогатого скота не вызывает лейкоза человека и не относится к возбудителям зоотропогенозных болезней. Но у гематологически больных животных в крови и молоке появляются различные метаболиты - вещества, обладающие лейкозногенной потенцией. Они накапливаются при прогрессировании лейкозного процесса. Поэтому молоко от гемотологически больных коров в пищу не допускается. Молоко от коров подозрительных на заболевание лейкозом (РИД-положительных) разрешается употреблять в пищу и перерабатывать на молочные продукты после пастеризации в обычном технологическом режиме или кипячения.

УКАЗАНИЯ
ПО ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ

Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30 декабря 1982 г. N 115-6a

1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

1.1. Бруцеллез - инфекционная, хронически протекающая болезнь животных.

Возбудитель - бактерии из рода бруцелла, в который входят шесть самостоятельных видов: мелитензис (козье-овечий), абортус (крупного рогатого скота), суис (свиней), овис (бараний), канис (собачий) и неотома (кустарниковых крыс).

Микроорганизмы первых трех видов вызывают бруцеллез; бруцеллы вида овис - заболевание, называемое инфекционным эпидидимитом баранов (ИЭ).

От животных, больных бруцеллезом, могут заражаться люди, для которых наиболее опасен возбудитель бруцеллеза овец и коз.

1.2. Диагноз на бруцеллез у животных ставят на основании результатов бактериологических, серологических и аллергических исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, руководствуясь при этом Инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза животных.

1.2.1. При установлении диагноза на бруцеллез необходимо учитывать следующее:

различные виды возбудителя являются патогенными, в основном, для животных соответствующего вида, однако бруцеллы видов мелитензис и абортус могут мигрировать и на животных других видов;

клинические признаки бруцеллеза у животных не характерны. Наиболее частое клиническое проявление болезни у маточного поголовья - аборт, у свиноматок наблюдается мумификация плодов. При абортах отмечается утолщение плодовых оболочек, образование на них фибринозных или гнойных хлопьев. Бруцеллез нередко сопровождается поражением суставов (артриты), синовиальной системы (тендовагиниты, бурситы), половой системы (у самок - эндометрит, вагинит, у самцов - орхит, эпидидимит);

патологоанатомическая картина при бруцеллезе не имеет характерных особенностей, позволяющих использовать их для диагностики этой болезни. Только у свиней на слизистой оболочке матки иногда находят желтовато-гнойные или казеозные узелки величиной с просяное зерно (так называемый "миллиарный бруцеллез матки").

1.2.2. У баранов, больных инфекционным эпидидимитом, в семенниках и придатках обнаруживают воспалительно-некротические или гнойные очаги различной величины; отмечают заполнение полости мошонки серозно-гнойным транссудатом, разрастание фиброзной ткани, сращение придатка с семенником и общей влагалищной оболочкой, иногда атрофию семенника.

1.3. Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое и серологическое) исследования материала и аллергические исследования животных в хозяйствах.

Плановые серологические и аллергические исследования являются основными методами выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Бактериологическую диагностику проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание. Одновременно проводят серологическое исследование сывороток крови этих животных.

1.4. При отборе проб крови, молока и патологического материала, а также при проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями по данному вопросу.

2. ВЗЯТИЕ МАТЕРИАЛА ОТ ЖИВОТНЫХ И ПЕРЕСЫЛКА ЕГО ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материал для лабораторных исследований отбирают от каждого животного в отдельности.

2.2. На бактериологическое исследование на бруцеллез в лабораторию направляют абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее 3 плодов) или желудок плода с содержимым (желудок перевязывают со стороны пищевода и со стороны двенадцатиперстной кишки), а также кусочки печени и селезенки.

При взятии содержимого гигром, бурс в области поражения выстригают шерсть, кожный покров дезинфицируют 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Затем стерильным шприцем с иглой большого диаметра делают пункцию, отсасывают содержимое гигромы (бурсы) и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70-градусным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10-15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

У овец и коз пробы молока берут путем пункции цистерны вымени. Для этого животное фиксируют в боковом положении, вымя у основания соска протирают 70-градусным спиртом и смазывают настойкой йода. Стерильным шприцем с иглой делают пункцию у основания соска и после попадания иглы в цистерну (о чем судят по свободному движению конца иглы) набирают в шприц молоко и переносят его в стерильную пробирку с резиновой пробкой.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1-процентного спиртово-водного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

2.2.1. Для исследования на инфекционный эпидидимит в лабораторию направляют: от баранов - семенники с придатками; от овцематок - абортированные плоды с плодовыми оболочками, выделения из половых путей, взятые в первые 5 дней после аборта.

2.2.2. Отобранные для бактериологического исследования пробы упаковывают в целлофан или пергаментную бумагу, помещают в непроницаемую тару (ящик, банка, полиэтиленовый пакет) и в тот же день направляют в лабораторию. От абортировавшего животного одновременно с патологическим материалом направляют кровь на серологическое исследование на бруцеллез.

Если в течение 24-30 часов взятый материал доставить в лабораторию не представляется возможным, его консервируют стерильным 30-процентным водным раствором химически чистого глицерина.

Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, превышающем его объем в 4-5 раз. Крупные плоды направляют в неконсервированном виде.

2.3. На серологическое исследование в лабораторию направляют кровь (или сыворотку крови) и молоко.

2.3.1. Кровь у животных берут из яремной вены (у свиней - из ушной или хвостовой, у лисиц и песцов - из бедренной вены, у норок - путем отсечения подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста) в стерильные пробирки по 5-7 мл (от пушных зверей по 1-2 мл). Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30-60 мин при 20-30 °С, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем пробирки выдерживают при 4-10 °С. Через 20-24 часа отстоявшуюся сыворотку сливают в сухие стерильные пробирки (лучше в пробирки Флоринского) и направляют на исследование в лабораторию в свежем или консервированном виде.

Консервирование сывороток проводят:

добавлением 0,05 мл (1 капля) 5-процентного раствора фенола на каждый миллилитр сыворотки при постоянном перемешивании;

сухой борной кислотой (2-4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка кристаллов;

путем однократного замораживания.

Неконсервированная сыворотка пригодна для исследования в течение 6 дней со дня взятия крови с сохранением ее при 4-8 °С.

Сыворотки, консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 дней; замороженные сыворотки - в течение 3 дней после однократного оттаивания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию на бруцеллез не подлежат.

2.3.2. Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу (10-15 мл) цельного свежего молока берут из одного удоя от коровы (буйволицы) в стерильную пробирку. Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга и проч.) после тщательного его перемешивания. Пробирки нумеруют и составляют опись проб.

При направлении молока на исследование в лабораторию каждую пробу консервируют добавлением одной капли 10-процентного раствора формалина на 5-10 мл молока. Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 2-3 суток. Перед исследованием его необходимо тщательно перемешать для равномерного распределения сливок.

При массовом исследовании молока работу по отбору проб и постановке кольцевой реакции следует проводить непосредственно на ферме в специально отведенном помещении.

Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от коров (буйволиц), страдающих маститом или болезнями, сопровождающимися повышением температуры тела, а также молоко животных в первые 2 недели после родов.

2.4. На направляемый в лабораторию материал заполняют сопроводительный документ установленной формы.

3. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА

3.1. Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и проч.), вызывающих подозрение на данное заболевание.

3.2. Бруцеллы обнаруживают тремя методами: бактериоскопией мазков из патологического материала, выделением культуры бруцелл на питательных средах и, при необходимости, путем постановки биологической пробы на морских свинках.

3.3. Бактериоскопическое исследование.

Из доставленного на исследование патологического материала делают по 2 мазка из каждого объекта. При исследовании абортированных плодов мазки готовят из содержимого желудка, жидкости брюшной и грудной полостей, печени, селезенки, а также котиледонов плодовых оболочек. Из паренхиматозных органов, котиледонов и другого плотного материала делают мазки-отпечатки, жидкий материал наносят на предметные стекла пипеткой.

Мазки, фиксированные на пламени, окрашивают по Граму и одному из следующих специальных методов: по Стампу (модифицированный метод Циль-Нильсена), Козловскому или Шуляку-Шин (см. Приложение N 1, п.1). При микроскопии мазков учитывают, что бруцеллы - мелкие, грамотрицательные, расположенные отдельно, попарно или кучно кокко-бактерии, окрашивающиеся по Стампу, Козловскому или Шуляку-Шин в красный цвет.

3.4. Бактериологическое исследование.

3.4.1. Для культивирования бруцелл используют мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), печеночно-глюкозно-глицериновый бульон (ПГГБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозно-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозно-глицериновый агар (ПГГА), картофельный агар, эритрит-агар или сывороточно-декстрозный агар (см. Приложение N 1, п.2).

Культивирование возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) проводят на плотных или полужидких печеночно-сывороточном или печеночно-аминопептидном агарах, а также на сывороточно-декстрозном агаре (см. Приложение N 1, п.2).

3.4.2. Перед посевом материала кожу абортированного плода с поверхности по белой линии протирают тампонами, смоченными 5-процентным раствором фенола. Стерильными ножницами вскрывают брюшную стенку и грудную клетку плода, содержимое грудной и брюшной полостей набирают пастеровскими пипетками и высевают в 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром, а содержимое желудка - в 2 пробирки с бульоном и не менее 5 пробирок с агаром.

Из печенки и селезенки вырезают кусочки размером не менее 2,0х1,5х2,5 см, увлажняют их спиртом, обжигают с поверхности и растирают в стерильной ступке с песком. Затем в ступку добавляют равное количество стерильного физиологического раствора и вновь растирают. Полученную взвесь пастеровской пипеткой по 0,1-0,2 мл высевают на поверхность предварительно подсушенных плотных сред (в пробирках или чашках). Допускается высев материала пастеровской пипеткой непосредственно из органов (место прокола органа предварительно прижигают раскаленным шпателем). Из каждого органа делают посев на 1 пробирку с бульоном и 2 пробирки с агаром.

Если в лабораторию доставлен только желудок плода, высев проводят не менее чем на 10 пробирок агара.

При поступлении нескольких плодов от одного животного посевы делают из органов и тканей каждого плода отдельно.

Из плодовой оболочки, плаценты вырезают кусочки тканей с утолщенными ворсинками и стенками, наличием на поверхности фибрина или гнойного экссудата (выбирают менее загрязненные участки без некротических изменений). Для уничтожения посторонней микрофлоры кусочки плаценты помещают в чашку Петри и заливают 3-процентным раствором гидроокиси калия на 30 минут. Затем их обмывают стерильным физиологическим раствором, готовят из этого материала суспензию в ступке со стерильным песком и делают посев пастеровской пипеткой на чашки со средой, содержащей бактериостатические препараты: генцианвиолет 1:200000 (0,1 мл 0,5-процентного спиртового раствора на 100 мл среды) или кристаллвиолет 1:100000, генцианвиолет и малахитовую зелень в концентрации каждой краски 1:200000, уксуснокислый натрий из расчета 0,125 мг на 1 мл среды.

Содержимое бурс, гигром высевают на 3-4 чашки с плотной питательной средой, содержащей бактериостатические препараты.

Пробы молока центрифугируют 30 минут при 3000 оборотов в минуту. Верхний слой (сливки) и осадок набирают в пастеровскую пипетку и по 0,1-0,2 мл вносят на 3-4 чашки с агаром, содержащим бактериостатические препараты. Молоко, консервированное генцианвиолетом, высевают на среды без бактериостатических веществ.

3.4.3. Для выращивания культур посевы помещают в термостат при 37-38 °С.

При исследовании материала от крупного рогатого скота половину засеянных пробирок и чашек инкубируют в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа (10-15%), другую - в обычных атмосферных условиях.

Для выделения возбудителя инфекционного эпидидимита баранов (бруцелла овис) все посевы инкубируют в атмосфере, содержащей 10-15% углекислого газа.

Для создания атмосферы с повышенным содержанием углекислого газа засеянные пробирки заливают парафином или помещают в эксикатор (микроанаэростат).

Перед парафинированием пробирки закрывают горящими ватными пробками, пронося последние над пламенем горелки. Затем верхнюю часть пробки обрезают, а оставшуюся часть углубляют на 0,5-1 см внутрь пробирки и заливают расплавленным парафином.

Необходимое содержание углекислого газа в эксикаторе можно получить путем:

заполнения части объема углекислым газом из баллона или аппарата Киппа;

внесения бикарбоната натрия и серной или соляной кислоты (0,48 г бикарбоната натрия и 5 мл 25-процентного раствора серной кислоты или 0,4 г бикарбоната натрия и 0,35 мл концентрированной соляной кислоты на 1 л объема);

сжигания ваты, смоченной спиртом. При этом пробирки и чашки с посевами должны занимать не более половины объема эксикатора.

Для определения концентрации углекислого газа в эксикаторе можно использовать химический метод (см. Приложение N 1, п.3).

В дальнейшем для обнаружения роста бруцелл посевы просматривают каждые 3-4 дня визуально, при необходимости через лупу или при малом увеличении микроскопа. При отсутствии роста часть поверхности агара орошают конденсационной жидкостью.

При значительном росте посторонней микрофлоры (80% и более засеянных пробирок) бактериологическое исследование прекращают.

При просмотре посевов обращают внимание на характер роста микробов. На поверхности агара бруцеллы образуют мелкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью просвечивающиеся колонии, имеющие в отраженном свете голубоватый оттенок, в падающем - сероватый. С возрастом колонии мутнеют и приобретают более темную окраску, что связано с появлением пигмента.

В бульоне бруцеллы образуют равномерное помутнение и пристеночное кольцо, возвышающееся над уровнем бульона, а в дальнейшем небольшой осадок на дне пробирки. В отраженном свете пристеночное кольцо имеет голубоватый оттенок.

При обнаружении роста на жидких средах и отсутствии характерного роста на агаре из каждой пробирки готовят мазки, которые окрашивают одним из специальных методов и делают пересев на чашку с плотной средой для выделения чистой культуры. Пересевы на чашках культивируют так же, как и высевы из патологического материала.

Выделенные культуры идентифицируют по тинкториальным (окраска мазков по Граму и одним из специальных методов), морфологическим, культуральным свойствам и в реакции агглютинации на стекле с позитивной бруцеллезной сывороткой.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Руководитель Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации М.В.Кравчук 23 августа 2000 г. N 13-7-2/2130

1. Общие положения

1.1. Лейкоз крупного рогатого скота - хроническая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Клинически болезнь проявляется чаще у животных в возрасте старше 4 лет.

Болезнь протекает вначале бессимптомно, затем проявляется персистентным лимфоцитозом и (или) образованием опухолевидных разрастаний в кроветворных и других органах и тканях.

После установления опухолевой природы лейкоза болезнь как у животных, так и у человека получила название гемобластозы, то есть опухолевые заболевания крови. По характеру и месту локализации опухолевых разрастаний, а также по морфологии и принадлежности пролиферирующих клеток к определенным росткам гемопоэза гемобластозы разделены на две группы:

лейкозы - системные поражения органов кроветворения, включающие лимфоидную, миелоидную, моноцитарную и недифференцированную формы;

гематосаркомы - сопровождающиеся опухолевым ростом. К ним относятся лимфосаркома, ретикулосаркома, лимфогрануломатоз и миеломная болезнь.

Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является опухолеродный РНК-содержащий вирус из семейства Retroviridae.

Источник возбудителя инфекции - животное, зараженное ВЛКРС.

Факторами передачи являются кровь, молоко и другие секреты и экскреты, содержащие лимфоидные клетки, инфицированные ВЛКРС.

Заражение может происходить при совместном содержании здоровых и инфицированных ВЛКРС животных.

1.2. Диагностические исследования на лейкоз проводят серологическими, молекулярно-биологическим, гематологическим, клиническим, патоморфологическим методами, методом биопробы.

1.3. Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования - реакция диффузионной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД).

Из числа положительно реагирующих в РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического метода выявляют больных лейкозом.

2. Серологические методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

2.1. Реакция иммунодиффузии (РИД).

2.1.1. Сущность метода.

Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2-8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно.

2.1.2. Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте 6 месяцев и старше. Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных - за 30 суток до отела или через 30 суток после него.

2.1.3. Получение сыворотки. Сыворотки для исследования получают из крови испытуемого животного в количестве 2-3 мл и направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают название хозяйства, номер (кличку), возраст, пол, породу животного.

Кровь (для получения сыворотки) берут в бактериологические пробирки, выдерживают 1-2 ч в теплом месте (не выше 40°С). Для лучшего отделения сыворотки образовавшийся сгусток обводят в пробирке профломбированной после каждой пробы стальной спицей (проволокой). После этого пробирки выдерживают в течение 20-24 ч при 4-10°С. Полученные пробы сыворотки сливают в пробирки Флоринского (достаточно 2-3 мл) и маркируют.

При невозможности быстрого исследования подготовленные сыворотки хранят в замороженном состоянии.

2.1.4. Для постановки РИД используют набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (ТУ 10-19-442-87), в состав которого входят: сухой специфический антиген вируса лейкоза крупного рогатого скота, состоящий из гликопротеидного gр-51 и полипептидного р-24 антигенов, разбавитель антигена, специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) к вирусу лейкоза, солевая смесь агара (ССА) и разбавитель ССА, контрольные сыворотки: отрицательная, положительная, слабоположительная и положительная с антителами к р-24 антигену ВЛКРС.

Оборудование и реактивы:

- чашки Петри диаметром 100 мм;

- стандартный штамп-пробойник для просечения лунок в агаре;

- пипетки пастеровские или автоматические со сменными наконечниками;

- хлорид натрия (х.ч.);

2.1.5. Постановка РИД.

Подготовку компонентов реакции к работе осуществляют в соответствии с "Наставлением по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота". Антиген растворяют в 5 см разбавителя. Растворенный антиген хранят при температуре 4°С не более двух недель.

Разбавитель ССА и солевую смесь агара переносят в колбу и приливают дистиллированную воду до объема 200 см, затем колбу помещают в водяную баню и выдерживают до полного расплавления гранул агара. Расплавленный агаровый гель, имеющий температуру 50-70°С, разливают слоем 2-3 мм (12-15 мл) в обезжиренные чашки Петри и оставляют их приоткрытыми при комнатной температуре в течение 1 ч. После застывания агара специальным штампом-пробойником делают лунки в геле, не допуская образования трещин между ними и отслоения агара от дна чашки. В каждой чашке делают по четыре фигуры, каждая из которых состоит из семи лунок: одна в центре, остальные по периферии. Диаметр каждой лунки составляет 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками - 3 мм. Образовавшиеся диски геля удаляют из лунок канюлей, соединенных с вакуумным насосом.

Антиген, контрольные и испытуемые сыворотки вносят в лунки каждой фигуры пастеровскими или автоматическими пипетками со сменными наконечниками.

Антиген (А) вносят в центральную лунку, две диаметрально противоположные лунки заполняют контрольной сывороткой (КС). Оставшиеся в фигуре 4 периферические лунки (1, 2, 3, 4) заполняют испытуемыми сыворотками. Лунки заполняют доверху, не допуская переливания жидкости через край. После заполнения всех лунок чашки Петри закрывают крышками и инкубируют во влажной камере при температуре 22-27°С.

2.1.6. Учет и оценка результатов реакции.

2.1.6.1. Реакцию учитывают не ранее чем через 48 ч и не позднее чем через 96 ч. Чашки просматривают на темном фоне, направляя сфокусированный луч осветителя на дно чашки под углом 30-45°. Специфичность реакции оценивают по контрольной линии преципитата. Если она отсутствует или слабо выражена, то реакцию следует повторить.

Специфическая линия преципитации, формируемая преципитирующей контрольной сывороткой и антигеном, должна быть четкой, иметь форму прямой, располагаться на одинаковом расстоянии от лунок с антигеном и контрольной сывороткой.

Неспецифической считают линию преципитации, которая образуется между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном, но не сливается с контрольной линией преципитации, а пересекает ее или упирается в нее, образуя угол.

2.1.6.2. Оценка результатов.

В зависимости от наличия специфических антител против антигенов ВЛКРС в испытуемой сыворотке реакцию оценивают как положительную или отрицательную.

Положительной считают реакцию, если между лунками с антигеном и испытуемой сывороткой образуется полоса преципитации, которая соединяется с полосой преципитации контрольной сыворотки, образуя непрерывную линию, то есть идентична ей (рис.1 - не приводится, поз.1):

- если линия преципитации между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном отсутствует, но контрольная линия преципитирующей сыворотки образует вблизи лунки с испытуемой линией изгиб, направленный в сторону лунки с антигеном (рис.1, поз.2), - слабоположительная сыворотка;

- если контрольная линия значительно укорочена со стороны лунки с испытуемой сывороткой и имеет размытый изгиб к лунке с антигеном или образует линию преципитации, расположенную очень близко от лунки с антигеном (рис.1, поз.2), - резко положительная сыворотка.

Положительно реагирующая сыворотка может образовывать вторую линию преципитации, которая располагается ближе к лунке с испытуемой сывороткой. Эта линия указывает на наличие в сыворотке преципитирующих антител против второго антигена (р-24) ВЛКРС (рис.1, поз.3).

При образовании толстой, короткой, без загибов контрольной линии преципитации, не доходящей до лунки с испытуемой сывороткой, необходимо провести раститровку этой испытуемой сыворотки физраствором до получения результата, который можно будет оценить как отрицательный, положительный или неспецифический. Для этого необходимо физиологический раствор в объеме 100-500 мкл разлить в пробирки или в лунки стандартных пластиковых плат для постановки серологических реакций (количество пробирок или лунок соответствует числу необходимых разведений). В первую пробирку или лунку с физраствором внести такой же объем сыворотки, тщательно перемешать и перенести той же пипеткой в том же объеме в следующую пробирку или лунку, затем после перемешивания - в следующую и т.д. В результате в первой пробирке или лунке испытуемая сыворотка разведена в 2 раза, во второй - в 4 раза, в третьей - в 8 раз и т.д.

Реакцию считают отрицательной, если контрольная линия продолжается до лунки с испытуемой сывороткой без загиба (рис.1, поз.4).

В случаях, когда линия преципитации плохо просматривается или имеется зона опалесценции вокруг лунок, реакцию следует переставить.

Сдвиг контрольной линии преципитации в сторону лунки с антигеном или с контрольной сывороткой указывает на нарушение соотношения антигена и антител в тест-системе. В этом случае необходимо использовать другую серию диагностического набора.

2.1.7. Животных, сыворотки крови которых дали положительный результат в РИД, признают зараженными вирусом лейкоза, и их необходимо исследовать гематологическим методом.

2.2. Метод иммуноферментного анализа (ИФА).

2.2.1. Сущность метода. Иммуноферментный анализ основан на иммунохимической реакции взаимодействия антиген-антитело и использовании в качестве индикатора этой реакции маркированных ферментами антител или антигенов.

Существует две модификации иммуноферментного анализа: непрямой и конкурентный.

Метод непрямого иммуноферментного анализа основан на связывании специфических к вирусу лейкоза антител с антигеном ВЛКРС, адсорбированным на стенках лунок планшета для микротитрования. Связавшиеся антитела выявляют с помощью видоспецифических антител, меченых ферментом (пероксидазой), с последующим ферментативным превращением бесцветного субстрата пероксидазой в окрашенный продукт. Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию антител к ВЛКРС в сыворотке крови.

В основе конкурентного иммуноферментного анализа лежит способность антител к ВЛКРС, содержащихся в испытуемой сыворотке, блокировать связывание антигена ВЛКРС с антителами к ВЛКРС, иммобилизованными (адсорбированными) на стенках лунок планшетов для микротитрования (МТП). Антиген ВЛКРС, связавшийся с иммобилизованными антителами, выявляют с помощью антител к ВЛКРС, меченных пероксидазой (конъюгатом антител с пероксидазой) и последующего ферментативного превращения бесцветного субстрата пероксидазы в окрашенный продукт. В том случае, если испытуемый материал не содержал антител к ВЛКРС, интенсивность окрашивания максимальна. Антитела к ВЛКРС в испытуемом материале снижают интенсивность окрашивания прямо пропорционально их содержанию.

2.2.2. Материалы и оборудование.

2.2.2.1. Материалом для исследования методом иммуноферментного анализа может служить сыворотка крови, секрет вымени сухостойных коров, молозиво и молоко.

При исследовании сывороток крови их получают, как изложено в п.2.1.3. Сыворотки пригодны для использования в течение 10 дней при температуре хранения +4°С. Срок годности сыворотки, хранящейся при температуре -20°С и ниже, не ограничен.

Бактериально загрязненные, разложившиеся или сильно гемолизированные сыворотки непригодны для исследования.

2.2.2.2. При постановке реакции используют стандартные коммерческие диагностические наборы согласно прилагаемому к ним наставлению по применению.

Для проведения исследования применяют:

- микропипетки одноканальные автоматические;

- фотометр одно- или многоканальный с автоматической регистрацией результатов. Рекомендуется использовать анализатор иммуноферментный фотоэлектрический АИФ-Ц-01С;

- микротитровальные пластмассовые (полистироловые) планшеты с 96 лунками;

- автоматическое или полуавтоматическое оборудование для промывания пластин;

- термостат, обеспечивающий температуру 37+/-0,5°С;

- пипетки градуированные вместимостью 1 и 10 см.

2.2.3. Непрямой иммуноферментный анализ для выявления антител к вирусу лейкоза.

2.2.3.1. В состав диагностического набора входят:

- антиген вируса лейкоза лиофилизированный и разбавитель антигена;

- конъюгат антител против иммуноглобулинов крупного рогатого скота с пероксидазой или другим ферментом, жидкий или лиофилизированный, и разбавитель конъюгата;

- сыворотки контрольные - отрицательная и положительная (слабоположительная), лиофилизированные или жидкие;

- разбавитель для сывороток и промывающий раствор, содержащий детергент и инертный белок;

В магазинах, на рынках и ярмарках началась активная реализация семенного и посадочного материала. При этом, не секрет, что производители семян стараются привлечь внимание покупателя к своей продукции, используя яркие красочные пакеты. Однако не всегда содержимое пакета соответствует изображению. Управление Россельхознадзора по Нижегородской области и Республике Марий Эл рекомендует основное внимание уделить не внешнему виду упаковки, а документам на семенной материал.

Послепосевное внесение удобрений проводится с целью обеспечить культуру элементами питания во время интенсивного роста. К примеру, обязательным этапом возделывания озимых зерновых является подкормка азотом ранней весной. Подкормки практикуют на многолетних травах, выращиваемых в севообороте, на естественных и искусственных кормовых угодьях. Необходимость послепосевного внесения существует на участках, где не применялось посевное внесение, или оно произведено лишь частично от общей дозы. Если показатель требуемой общей дозы минеральных удобрений находится на среднем уровне, подкормка не практикуется из-за отсутствия положительного эффекта. При высоких дозах азотных удобрений, под пропашные культуры, на бедных этим элементам легких почвах, при условии достаточной увлажненности, наблюдается значительная прибавка урожая. При пропашном выращивании эффективность подкормки зависит от условий обеспеченности водой. Поскольку послепосевное внесение не предусматривает глубокой заделки, выбор останавливают на составах, которые хорошо растворяются и распределяются. Озимые, пастбища и многолетники удобряют, разбрасывая удобрения. При пропашном возделывание после распределения питательного состава следует культивация.

Сотрудниками отдела государственного земельного надзора Управления Россельхознадзора по Нижегородской области и Республике Марий Эл, в рамках исполнения Плана внеплановых профилактических визитов по государственному земельному надзору на апрель 2022 г., проведены профилактические визиты в отношении сельских администраций Волжского района Республики Марий Эл.

НАПОМИНАЕМ: убирайте сухую траву и мусор вокруг дома, но не сжигайте мусор; соблюдайте особую осторожность при обращении с огнем, непотушенная спичка или сигарета, брошенная в траву, может привести к серьезному пожару; если вы заметили огонек в поле или в лесу, постарайтесь его потушить, чтобы вовремя предотвратить большой пожар.

С начала апреля 2022 года в Волжском районе Республики Марий Эл Управлением проведено 6 (шесть) профилактических визитов юридических лиц и крестьянско-фермерских хозяйств.

В ноябре 2021 года Управлением Россельхознадзора по Нижегородской области и Республике Марий Эл (далее – Управление Россельхознадзора) была проведена внеплановая выездная проверка по исполнению ранее выданного предписания должностного лица об устранении выявленных нарушений законодательства. Срок исполнения предписания был установлен до 3 ноября 2021 года.


© 2022 Управление Федеральной службы
по ветеринарному и фитосанитарному надзору
по Нижегородской области и Республике Марий Эл. Все права защищены.

603105, г. Нижний Новгород, ул. Ижорская, 35
тел.: (831) 435-51-45, 435-51-36


В Российской Федерации за последние годы отмечается нестабильная эпизоотическая обстановка по таким болезням крупного рогатого скота как лейкоз и бруцеллёз.

Государственная ветеринарная служба Мурманской области держит на постоянном контроле возможность заноса и распространения указанных болезней на территории региона.

Ежегодно разрабатывается и исполняется план противоэпизоотических мероприятий, в котором предусмотрен обязательный отбор проб крови КРС во всех хозяйствах и проведение их лабораторных исследований.

В ходе проведенных исследований по всем пробам получен отрицательный результат (специфические антитела к возбудителям лейкоза и бруцеллеза не выявлены).


Справочно: Лейкоз крупного рогатого скота — это хроническая инфекционная, медленно протекающая болезнь опухолевой природы.

Болезнь сопровождается поражением органов кроветворной системы, появлением повышенного количества лимфоцитов в крови, иногда опухолеобразным поражением органов и тканей организма. Источник инфекции является зараженное животное на всех стадиях течения болезни.

Лейкоз причиняет хозяйствам большой экономический ущерб, связанный с: затратами на проведение противолейкозных мероприятий, снижением качества и количества молочной и мясной продукции.

Для лейкоза характерна большая длительность инкубационного (скрытого) периода от 2 до 6 лет.

Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота обязывают владельцев проводить исследования всего КРС в хозяйствах с 6-ти месячного возраста.

В сельскохозяйственных предприятиях, КФХ, ЛПХ исследования на лейкоз проводят 2 раза в год.

Оздоровление поголовья от вирусного лейкоза крупного рогатого скота проводят разными способами, в зависимости от процента заражения и статуса хозяйства. Все методы оздоровления сводятся к периодическим систематическим исследованиям поголовья с изоляцией больных животных, их выбраковкой и частичной заменой стада.

Бруцеллез у крупного рогатого скота – опасное бактериальное заболевание животных и человека, которое вызывается микроорганизмами рода Бруцелла (Brucella).

Характеризуется поражениями репродуктивной и нервной системы, сердца, сосудов, костей и суставов.

Проникая в организм коровы, инфекция перемещается в молочные железы, селезенку, печень и матку, в итоге провоцируя аборты.

Бактерия очень устойчива во внешней среде.

Заражение может осуществляться различными способами, но чаще всего инфекция проникает в организм животных фекально - оральным методом.

Человек может заразиться бруцеллезом при употреблении сырого заражённого молока и продуктов молочного происхождения изготовленных из него.

Недостаточная термическая обработка мяса больных животных также является фактором риска заражения.

Распространяется инфекция очень быстро, передаваясь от зараженных коров к здоровым особям.

Скрытый период протекания болезни может продолжаться от недели до нескольких месяцев.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Читайте также: