Исследование на сибирскую язву в кожевенном сырье

Обновлено: 26.04.2024

Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.

Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. Все образцы следует помещать в герметичные сосуды и транспортировать закупоренными в опломбированные боксы или деревянные ящики.

Выделение возбудителя сибирской язвы. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства. Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель сибирской язвы можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА.

Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).

Реакция термопреципитации по Асколи имеет большое значение, так как позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований. Для прижизненной же диагностики эта реакция не имеет серьёзных преимуществ перед вышеуказанными бактериологическими и серологическими методами.

Биологическая проба при диагностике сибирской язвы. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам (по 0,1-0,2 мл в спину), кроликам и морским свинкам (по 0,2-0,5 мл в область живота). Обычно мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики— через 2-4 сут. При выживании животных наблюдение за ними продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Клиника сибирской язвы. Формы поражения при сибирской язве

Наиболее часто встречается кожная форма сибирской язвы.
При расчесывании пораженных участков кожи или самостоятельно лопающихся быстро увеличивающихся в размерах папул образуется черный струп. Характерной особенностью сибиреязвенных поражений кожи является образование дочерних, вторичных пузырьков, окружающих первичный очаг поражения кожи. Возможно появление регионарного лимфаденита с серозно-геморрагическим воспалением.

До того мало нарушенное общее состояние к конце первых суток резко ухудшается, высоко поднимается температура, нарастает общая слабость, тахикардия, появляется головная боль. В случаях благоприятного течения через 5-6 дней температура снижается, иногда критически. Общее состояние больного становится лучше, регрессируют местные проявления, в течение 10-30 дней язвы рубцуются. Их может быть до 20 и более, чаще около 10 диаметром от 0,5 до 3 см.

Рубец несколько втянут с неровными краями. При неблагоприятном течении болезни (отсутствие лечения, ошибочно произведенное вскрытие карбункула) развивается вторичный сепсис с резким ухудшением состояния больного, нарастанием интоксикации и лихорадки, тахикардии и появлением новых кожных элементов по типу первичного карбункула или чаще вторичных пустул, а также других элементов септической сыпи. В этот период могут появиться кровавая рвота и понос с кровянистыми испражнениями. Нарастают явления ИТШ, ТГС и может быстро наступить летальный исход.

При локализации карбункула на лице особенно выражен отек (эдематозный вариант течения), который спускается на шею и верхнюю часть груди. Возможен рожистоподобный вариант кожных поражений с буллезными элементами.

При генерализованных формах болезнь бурно начинается, состояние больных прогрессивно ухудшается, температура быстро повышается, возникают тахикардия, нарушения гемодинамики, поражение ЦНС в виде менингоэнцефалита. При легочном варианте сибирской язвы на первом месте - симптомы дыхательной недостаточности, с болью в груди, одышкой, кашлем с кровянистой мокротой, которая очень быстро сворачивается в виде желе, тогда как кровь в испражнениях быстро не сворачивается. В легких- масса разнокалиберных хрипов.

Смерть в этих случаях наступает на 2-3-й день болезни при явлениях ИТШ и острой дыхательной недостаточности. Для кишечного варианта болезни характерны боль в животе, рвота и понос с кровью, быстро развивается парез кишечника, возможен перитонит Исход всегда неблагоприятный. Септическая форма заканчивается летальным исходом в течение 1-2 дней.

Диагноз кожной формы сибирской язвы основывается на характерных клинических данных, сочетающихся с эпидемическим анамнезом: участие в забое домашнего скота, работа с шерстью, вторичным сырьем Распознавание септической формы сибирской язвы вне эпидемической ситуации представляет большие трудности. Лабораторный диагноз предусматривает обнаружение возбудителя путем прямой микроскопии материала от больного (содержимого пустулы, карбункула - исследуют дочерние везикулы; кровь, мокроту, испражнения); проводят посевы на специальные среды и заражение лабораторных животных.

Лабораторная диагностика должна проводиться в особых режимных условиях, исключающих возможность инфицирования персонала и обсеменения окружающей среды. Взятие и доставку материала от больного в специальную лабораторию проводят с соблюдением всех правил работы с особо опасными инфекциями. В качестве аллергологической диагностики применяют кожную пробу с антраксином, а также внутрикожное его введение. При наличии сибирской язвы образуются покраснение и инфильтрат.

Для диагностики присутствия возбудителя сибирской язвы в продуктах животноводства, шкурах применяют метод преципитации со специфической сибиреязвенной сывороткой (реакция Асколи).

Сибирская язва у рабочих. Профилактика заражения на производстве

Профессиональными инфекциями называются те инфекционные болезни, которые возникают среди работающих в контакте с тем или иным инфекционным началом. Возбудителями профессиональных инфекций могут быть либо микробы, либо крупные паразиты (глисты, клещи), либо грибки.

Сибирская язва — болезнь животных. Особенно опасными в смысле возможности заражения человека являются профессии, связанные с уходом за животными, а также с убоем скота, сниманием, транспортировкой и обработкой кож, волоса и шерсти. Возбудителем болезни является сибиреязвгнная палочка, обладающая способностью образовывать споры.

Спорообразование начинается, как только бациллы приходят в соприкосновение с воздухом. Споры отличаются необыкновенной устойчивостью и иногда остаются вирулентными в течение многих лет. Заражение человека сибирской язвой может происходить либо через поврежденную кожу, либо через легкие путем вдыхания пыли, содержащей сибиреязвенные споры, либо через желудочно-кишечный тракт. В соответствии с этим различают три формы болезни: кожную, легочную и кишечную.

Кожная форма характеризуется геморрагическим безболезненным струпом, окруженным венчиком из пузырьков, лимфореей, отеком, не соответствующим по величине относительно небольшим размерам струпа. По своему течению и исходу кожная форма является наиболее доброкачественной.

Кишечная форма характеризуется острым началом, высокой температурой, поносом, сильным психическим возбуждением, падением сердечной деятельности. Легочная и кишечная формы сравнительно быстро заканчиваются смертью. Кожная форма в 70—80% случаев дает выздоровление. Локализация заболевания у человека находится в тесной связи с условиями его работы.

У кожевников заболевание в большинстве случаев наблюдается на коже лица и шеи, реже на руках (переноска шкур и кож на плечах); у мясников, шкуродеров, наоборот, чаще поражаются руки, чем лицо; у тряпичников сибирская язва обыкновенно принимает легочную форму.
Профилактика заражения сибирской язвой. Правильно организованный ветеринарный надзор, борьба с эпизоотиями, прекращение вывоза шерсти и шкур из. пораженных районов.

Согласно ветеринарному кодексу запрещается транспортировка по железным дорогам и водным путям сырых животных продуктов, в частности шкур, без удостоверения от ветеринарного врача. В нашей стране введено также обязательное применение серодиагностической реакции преципитации как диагностического средства при исследовании кож, подозрительных на сибирскую язву и поступающих для промышленной обработки и перевозки.

Необходима тщательная дезинфекция сырья, подозрительного на сибирскую язву. Для дезинфекции шкур и кож наиболее подходящим способом является пикелирование. Оно заключается в обработке сырья сначала подогретым до 20—40° раствором соляной кислоты и поваренной соли (соляной кислоты — 2%, поваренной соли—10%, воды — 88%), а затем 3% раствором соды. Щетину, волосы и изделия из н их дезинфицируют при помощи высокой температуры (текучего, пара) в условиях повышенного атмосферного давления.

При сортировке и обработке шерсти требуется ношение защитной одежды, местная вентиляция, влажная уборка. Большое значение имеет уход за кожей и быстрая ликвидация малейших поверхностных травм кожи и слизистых.

Согласно существующим правилам, изоляция лиц, перенесших кожную форму сибирской язвы, прекращается после отпадения струпьев, эпителизации и рубцевания язв. При легочной и кишечной формах изоляция прекращается после клинического выздоровления и двукратного отрицательного результата бактериологического исследования, производимого с интервалами в 5 дней. За лицами, соприкасающимися с больным человеком или больным животным до момента изоляции, устанавливается медицинское наблюдение в течение 8 дней после прекращения общения с больным, без отрыва их от работы.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы

1. РАЗРАБОТАНЫ: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Д.Кривуля, Н.Д.Пакскина); ФГУЗ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора (Е.И.Еременко, А.Н.Куличенко, Н.П.Буравцева, О.И.Цыганкова, А.Г.Рязанова, Е.А.Цыганкова, Л.Ю.Аксенова); ФГУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора (Н.А.Осина, И.Н.Шарова, В.Е.Куклев, Е.А.Плотникова, Т.В.Бугоркова); ФГУЗ Иркутский научно-исследовательский институт Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора (А.В.Родзиковский, З.Ф.Дугаржапова); ФГУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора (А.В.Липницкий, А.М.Барков, И.А.Баркова, В.В.Алексеев); ФГУЗ Противочумный центр Роспотребнадзора (В.Е.Безсмертный, С.М.Иванова, В.А.Подледнев); ФГУН Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора (Л.И.Маринин, И.А.Дятлов, Н.А.Шишкова, А.Н.Мокриевич); ФГУН Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора (Г.А.Шипулин, С.Б.Яцышина); ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии (Ю.О.Селянинов, И.Ю.Егорова).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июля 2008 г.

4. Введены в действие с 1 сентября 2008 г.

5. С введением в действие данных методических указаний при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора методические указания "Лабораторная диагностика сибирской язвы у животных и людей, обнаружение возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды", утвержденные 01.09.86 начальником Главного управления ветеринарии Госагропромкомитета СССР и начальником Главного управления карантинных инфекций Минздрава СССР, применению не подлежат.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами других заинтересованных организаций.

1.2. В методических указаниях определены порядок забора, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных и умерших людей, животных с подозрением на сибирскую язву, а также материала из объектов окружающей среды, подозрительного на контаминацию возбудителем данного заболевания.

ВНИИВВиМ - Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии;

ГИСК - Государственный институт стандартизации и контроля;

ГКИ - Государственный контрольный институт;

ДДМ - диско-диффузионный метод;

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота;

ИФА - иммуноферментный анализ;

ЛФ - летальный фактор;

МПА - мясопептонный агар;

МПБ - мясопептонный бульон;

МПК - минимальная подавляющая концентрация;

МФА - метод флуоресцирующих антител;

ОФ - отечный фактор;

ПА - протективный антиген;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации;

РТНГА - реакция торможения непрямой гемагглютинации;

"СОПЭК" - среда для сочетанного определения продукции экзотоксина и капсулы;

ЭДТА - этилендиаминтетераацетата динатриевая соль;

DCL - абсолютная летальная доза;

LD - половинная летальная доза;

MLVA - метод анализа областей генома с вариабельным числом тандемных повторов.

2. Нормативные и методические ссылки

2.1. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности). СП 1.3.1285-03".

2.2. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95".

2.3. "Сибирская язва. СП 3.1.089-96, ВП 13.3.1320-96".

2.4. Практическое руководство "Специфическая индикация патогенных биологических агентов", 2006.

2.5. Методические указания "Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности. МУ 1.3.1794-03".

2.6. Методические указания "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04".

2.7. Методические указания "Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I-IV групп патогенности, при исследованиях методом ПЦР. МУ 3.5.5.1034-01".

2.8. Методические рекомендации по использованию этилового спирта с 3% перекиси водорода для фиксации на предметном стекле возбудителя сибирской язвы, 1984.

2.9. Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителей сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов, 1984.

2.10. Методические рекомендации "Использование 0,05-0,1% раствора Твина-80, как разводящей жидкости, для определения концентрации спор сибиреязвенного микроба", 1986.

2.11. Методические рекомендации "Определение гемолитической активности у сибиреязвенного микроба", 1989.

2.12. Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения, Госкомсанэпиднадзор РФ, 1995.

2.13. Методические рекомендации "Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики". МЗ РФ, ЦНИИЭ, 2004.

2.14. Методические рекомендации "Взаимодействие органов управления, учреждений и специализированных формирований при ликвидации последствий террористических актов с применением патогенных биологических агентов и опасных химических веществ. МР 0100/0556-04-34", 2005.

2.15. Инструкция по определению чувствительности возбудителей опасных инфекционных заболеваний к антибиотикам и химиопрепаратам, 1990.

3. Общие положения

Сибирская язва (Anthrax) - это острое инфекционное заболевание животных и человека, относящееся к группе особо опасных инфекций. Основным источником инфекции для человека при сибирской язве являются больные травоядные животные. Они в течение всего периода болезни выделяют возбудитель с мочой, испражнениями и слюной в почву, которая становится его дополнительным резервуаром. Заражение животных происходит главным образом алиментарным (через корм и питьевую воду, инфицированные спорами), реже - трансмиссивным (через укусы кровососущих насекомых) и воздушным путями.

В подавляющем большинстве случаев человек заражается сибирской язвой при разделке туш вынужденно убитого скота; употреблении в пищу полученных от него мяса или мясных продуктов; непосредственном контакте с трупами погибших животных, шерстью, шкурами, кожей, щетиной, зараженными возбудителем; уходе за больными животными. Возможно также заражение через укусы кровососущих насекомых, контаминированную почву и при вдыхании содержащего споры аэрозоля.

В зависимости от путей заражения у человека развивается кожная или висцеральная (кишечная, легочная) формы сибирской язвы. Любая из этих форм может приводить к развитию сепсиса и осложняться сибиреязвенным менингитом (генерализованная форма).

Возбудитель этой инфекции в 2001 г. в США был использован как средство биологического терроризма, что привело к человеческим жертвам и возникновению паники среди населения. Поэтому своевременная и точная лабораторная диагностика сибирской язвы приобретает сейчас особое значение.

Диагностика сибирской язвы у человека и животных основывается на эпизоотологических, эпидемиологических, клинических, лабораторных и патологоанатомических данных. Лабораторные исследования направлены на обнаружение и идентификацию возбудителя сибирской язвы, выявление специфических антител и аллергической перестройки в организме больных людей.

3.1. Краткие сведения о возбудителе сибирской язвы

Возбудитель сибирской язвы - В. anthracis, относится к семейству спорообразующих микроорганизмов Васillасеае, роду Bacillus. В роду Bacillus, насчитывающем 101 вид, выделяют группу видов Bacillus cereus, в которую входят близкородственные В. cereus, В. anthracis, В. thuringiensis, В. mycoides и недавно признанный новым видом психротолерантный микроб В. weichenstephanensis.

Морфология В. anthracis. В зависимости от стадии развития культуры, а также условий окружающей среды, возбудитель сибирской язвы может существовать в трех формах - в виде бескапсульных вегетативных палочек (бацилл), инкапсулированных палочек и спор.

Процесс спорообразования состоит из четырех основных стадий: подготовительной, образования проспор, готовых спор и зрелых спор. Спорогенез зависит от особенностей штамма, наличия тех или иных питательных веществ, рН среды, температуры выращивания, влажности и др.

При попадании спор в благоприятные условия (влажность, аэрация, температура, наличие необходимых питательных веществ) из них быстро образуются вегетативные клетки. Время прорастания спор может составлять несколько часов и зависит от температуры (оптимум - 37 °С) и других факторов.

Культурально-биохимические свойства. Сибиреязвенный микроб - факультативный анаэроб, оптимальная температура роста 34-37 °С, оптимальное значение рН 7,2-7,8, неподвижный, хорошо растет на обычных питательных средах - МПБ и МПА. Характер роста в совокупности с другими признаками учитывается при идентификации.

При посевах на чашки Петри с питательным агаром после суточной инкубации при (36±1) °С микроб формирует крупные шероховатые сухие матовые колонии в R-форме, с "шагреневой" поверхностью, с неровными краями и отходящими от них волнистыми отростками. При малом увеличении под микроскопом (7x10) они напоминают локоны волос или львиную гриву (прилож.7, рис.4).

Характерный придонный рост сибиреязвенного микроба в МПБ или 1%-й пептонной воде похож на комочек ваты, с трудом разбивающийся при встряхивании, при этом бульон остается прозрачным (прилож.7, рис.5).

Сибиреязвенный микроб способен разлагать с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу и некоторые другие сахара, но не разлагает лактозу. Обладает относительно низкой протеолитической активностью и при посеве уколом в столбик 10-12%-го мясопептонного желатина и выращивании при 22 °С рост микроба напоминает елочку, опрокинутую верхушкой вниз; на 3-5 день желатин разжижается в виде воронки. Большинство сапрофитов полностью разжижает желатин в более короткие сроки. При росте на кровяном агаре с 3-5% дефибринированной крови барана через 20-24 ч гемолиз не наблюдается, в то время как многие сапрофиты дают быстрый гемолиз (через 12-18 ч при 37 °С). Большинство штаммов сибиреязвенного микроба не образует фермент лецитиназу. При росте на агаре с куриным желтком вокруг колоний не происходит помутнения среды в виде беловатой зоны, а при посеве на жидкую желточную среду желток не свертывается даже при 5-6-суточном инкубировании. Сапрофиты свертывают желток в течение 6-10 ч. Сибиреязвенный микроб, в отличие от сапрофитных бацилл, обладает низкой фосфатазной активностью и не способен разлагать фосфаты, добавляемые в питательную среду (тест на фосфатазу).

Большинство штаммов сибиреязвенного микроба чувствительны к пенициллину и при выращивании на МПА или МПБ в присутствии 0,5-0,05 ЕД/мл бензилпенициллина через 3 ч инкубирования образуют цепочки из шарообразных клеток - "жемчужное ожерелье" (прилож.7, рис.6).

До 95% штаммов сибиреязвенного микроба лизируется сибиреязвенными бактериофагами "Гамма", "К" и Fah-ВНИИВВиМ (прилож.7, рис.7).

Чувствительность к антибиотикам. Возбудитель сибирской язвы чувствителен к большинству антибиотиков - цефалоспоринам I поколения, тетрациклинам, рифампицинам, аминогликозидам и фторхинолонам. Пенициллин способен задерживать развитие сибиреязвенного микроба даже при низкой концентрации в питательной среде. К некоторым макролидам сибиреязвенный микроб умеренно устойчив, а к цефалоспоринам II-IV поколения устойчив.

Факторы вирулентности (агрессии). Возбудитель сибирской язвы обладает почти универсальной патогенностью для млекопитающих - человека и других приматов, сельскохозяйственных и диких животных, лабораторных животных.

Важнейшими факторами патогенности у микроба являются капсула и экзотоксины. Сибиреязвенный микроб образует их в инфицированном макроорганизме или при культивировании на искусственных питательных средах в специальных условиях.

Наличие капсулы необходимо на первых этапах инфекционного процесса для предотвращения опсонизации и фагоцитирования микроорганизма.

Типичные вирулентные штаммы В. anthracis образуют капсулу в организме больных людей и животных, а также при культивировании на 1%-м бикарбонатно-сывороточном агаре в атмосфере, содержащей 5-50% углекислоты или на жидкой среде ГКИ, содержащей 40% инактивированной бычьей (лошадиной) сыворотки и 60% раствора Хенкса. На 1%-м бикарбонатном агаре микроб растет в SM-форме в виде гладких, блестящих, влажных, слизистых колоний с неровными краями (прилож.7, рис.8).

Геном типичных штаммов сибиреязвенного микроба представлен одной кольцевой хромосомой и двумя плазмидами. Токсинообразование и капсулообразование детерминированы плазмидами рХО1 и рХО2. Отсутствие хотя бы одной из этих плазмид приводит к снижению вирулентности вплоть до полной ее утраты.

Читайте также: