Исследование рыбы на личинок гельминтов
Обновлено: 25.04.2024
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГЕЛЬМИНТОЗООНОЗОВ В ПРЕСНОВОДНЫХ РЫБАХ
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России В.М.Авилов 4 октября 1999 г. N 13-4-2/1738
С утверждением настоящих Методических указаний утрачивает силу "Методика определения возбудителей гельминтозоонозов в пресноводных рыбах", утв. ГУВ МСХ СССР 21.03.83 N 115-6а.
1. Общие положения
1.1. Гельминтозоонозы - группа паразитарных болезней, возбудители которых в личиночной стадии обнаруживаются у различных видов рыб, а в половозрелой - у человека и животных.
1.2. Возбудители гельминтозоонозов проходят сложный цикл развития с участием промежуточных (моллюски, циклопы, диаптомусы и олигохеты), дополнительных (пресноводные рыбы) и окончательных (человек, кошка, собака, дикий кабан, волк, лисица, выдра и др.) хозяев.
1.3. Личиночные стадии возбудителей гельминтозоонозов по отношению к дополнительным хозяевам имеют определенную приуроченность и характерные места локализации (приложение 1).
2. Исследование рыб
2.1. Для исследования отбирают 10-15 экземпляров живых или свежеуснувших рыб обследуемого вида, регистрируют с указанием даты исследования, вида рыб и места вылова.
2.2. Рыб взвешивают, измеряют длину от вершины рыла до начала лучей хвостового плавника. Осматривают плавники, чешую, жабры. Участки с изменениями просматривают под лупой и микроскопом (увеличение 2х8). Ножницами разрезают брюшко по средней линии от анального отверстия до области сердца. С помощью лупы просматривают сердце, гонады, печень, селезенку, почки, стенки желудка, кишечник, серозные покровы. Каждый орган отдельно помещают в чашки Петри или на часовые стекла. Из органов и тканей нарезают полоски длиной до 10 мм и толщиной 3-4 мм, помещают в компрессориум или между стеклами 9х12 см и микроскопируют. Мышцы осматривают, разрезая на продольные и поперечные полоски, и исследуют под микроскопом.
2.3. В мускулатуре рыб встречаются метацеркарии трематод, патогенные и непатогенные для человека и животных. Последних в половозрелой стадии обнаруживают в кишечнике рыбоядных птиц (чайки, цапли) и хищных рыб (щука). Для дифференциации этих личинок гельминтов у рыб пользуются таблицей (приложение 2).
2.4. Для патогенных человеку и животным метацеркарий трематод из сем. Opisthorchidae (описторхисы, меторхисы, псевдамфистомы, клонорхисы) при осмотре под микроскопом характерно наличие двух круглых одинакового размера присосок, которые окрашены светлее тела личинки, и черного экскреторного пузыря овальной или грушевидной формы, занимающего 1/3-1/4 тела личинки (рис.1-2). Для живых личинок характерно активное движение в цисте.
2.5. Из непатогенных для человека и животных метацеркарий трематод близкое строение к описторхидам имеют личинки из рода буцефал и рипидокотил, для которых характерно наличие одной крупной ротовой присоски чашеобразной формы с пальцеобразными выступами, экскреторного пузыря зигзагообразной формы, занимающего 2/3 тела личинки (рис.3), и слабой подвижности живых личинок в цисте.
2.6. Для метацеркарий параценогонимусов характерна большая черная экскреторная система с 3 белыми щелевидными пространствами (рис.4). Другие личинки, встречающиеся у рыб, определяют, пользуясь табл.2.
3. Определение жизнеспособности личинок
3.1. Извлеченных из органов и тканей рыбы (из цисты) плероцеркоидов помещают в подогретый (до 40°С) физиологический раствор или в искусственный желудочный сок (100 мл 0,5%-ного раствора поваренной соли, 0,5 г пепсина, 0,75 мл 35%-ного раствора соляной кислоты). Под лупой осторожно раздражают личинку препаровальной иглой. Наличие даже слабых движений указывает на жизнеспособность плероцеркоида.
3.2. Личинки из органов рыб освобождают от остатков ткани под контролем лупы. На препарат наносят 2 капли 3%-ного раствора розоловой кислоты на 70%-ном спирте на 2 минуты, добавляют каплю 0,1%-ного раствора едкого калия, оставляют на 2 минуты. Излишек краски смывают физиологическим раствором, препарат высушивают полоской фильтровальной бумаги, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. Мышечная ткань и мертвые личинки окрашиваются в розовый цвет, живые личинки не окрашиваются.
3.3. Жизнеспособность личинок трематод можно определять, используя микроскоп с подогревательным столиком. Выделенных паразитов переносят на столик (при 36-37°С), добавляют 2-3 капли желчи или 0,5%-ного раствора трипсина. Живые личинки через 5-10 минут выходят из цист.
3.4. Цисту, извлеченную из ткани рыб, под микроскопом в капле физиологического раствора препаровальными иглами освобождают от наружной оболочки. При легком надавливании иглой на покровное стекло, под которое помещают препарат, внутренняя оболочка разрывается. Наличие движений у личинки указывает на ее жизнеспособность.
4. Определение видовой принадлежности личинок
4.1. В сомнительных случаях, если не удается сразу установить вид метацеркарий трематод, обнаруженных в пробе, рекомендуется произвести освобождение личинок от оболочек механически (п.3.4) или химическим способом (п.3.2 и п.3.3).
Паразиты в рыбе и рыбопродуктах. Паразитологическое исследование
Среди всех классов паразитов, встречающиеся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов:
- цестод,
- трематод,
- нематод,
- скребней.
К наиболее широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и другие гидробионы, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз (рис. 1).
Рисунок 1 – Паразитологическое исследование: а – Opisthorchis felineus; б – Diphyllobothrium latum
Поэтому при обнаружении личинок гельминтов следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидод, метацеркарий, акантел и личинок нематод (рис. 2).
Рисунок 2 – Обнаруженные личинки гельминтов: а – личинки описторхоз; б – плероцеркоиды (личинки) лентеца широкого в икре щуки
1. Отбор проб и подготовка проб к анализу
Для паразитологических исследований пробы берут отдельно от проб на микробиологические и физико-химические анализы. Отбор проб и объем рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
Отбор проб сырья (свежей, охлажденной и мороженой рыбы, морских беспозвоночных, молок, икры) и полуфабрикатов. Пробы отбирают в чистую посуду, полиэтиленовые мешки или плотную бумагу. Количество единиц упаковки, подлежащих вскрытию, установлены стандартами, нормативно-методическими документами. Если на продукт отсутствуют стандарты или научно-технические документы, то вскрывают 5 % единиц упаковки от общего их количества в партии [48, 49].
Для исследования на наличие метацеркарий Opisthorchis felineus и плероцеркоидов Diphyllobothrium latum целесообразнее отбирать рыб старших возрастов, так как личинки паразитов живут несколько лет, и их число увеличивается с возрастом рыб. Метацеркарий Metorchis bills (albidus) чаще встречается у сеголеток и рыб младших возрастов, а Echinochasmus perfoliatus – преимущественно у мальков.
Хранение и подготовка к исследованию рыбы проводится следующим образом.
- Свежую или охлажденную рыбу сохраняют до исследования в холодильнике при температуре плюс 2–4 °С.
- Мороженую рыбу перед исследованием размораживают до температуры не ниже 0 °С в толще тела рыбы.
- Живых раков и крабов помещают в кипящую воду на 0,5–1,5 мин (в зависимости от размеров ракообразных) до прекращения движения.
- Вяленую и копченую, соленую рыбу перед исследованием предварительно вымачивают в течение суток до размягчения мышц, меняя воду каждые 4–6 ч.
- Соленую икру выдерживают в воде в течение 2–3 ч.
2. Гельминтологическое исследование рыбы
При исследовании используют два подхода: выявление личинок, видимых невооружённым глазом (плероцеркоиды, акнтелы, нематоды), и выявление личинок, невидимых вооружённым глазом с использованием оптических средств (трематоды). При этом проводят:
- Наружный осмотр рыбы для выявления личинок.
- Просмотр внутренних органов и полостей тела.
- Исследование мускулатуры в зависимости от вида гельминта:
- а) метод параллельных разрезов;
- б) метод исследования мышечной ткани на просвете;
- в) компрессорный метод (рис. 3).
Рисунок 3 – Компрессорий
Метод параллельных разрезов. Самый употребительный метод, позволяющий сравнительно быстро обследовать мясо рыб крупной и средней величины, пригоден для рыб всех видов разделки.
Обследуемую рыбу желательно вначале обесшкурить, чтобы проверить, нет ли под кожей паразитов или поражений. Метод применяется для обнаружения в мышечной ткани рыбы личинок гельминтов, видимых без использования увеличительных приборов (цестод, нематод, скребней). Мышечную ткань острым скальпелем разрезают на пластинки толщиной от 5 до 10 мм, которые затем раздвигают и просматривают в падающем свете невооруженным глазом. Разрезы можно делать как поперек, так и вдоль мышечных волокон.
Делая разрезы мускулатуры и встречая в ее толще крупных личинок или капсулы с личинками (величиной около 1 см и более), нужно извлечь несколько экземпляров паразитов целиком для определения вида. Выделенных личинок помещают в чашку Петри. При исследовании тихоокеанских лососей, кунджи и сахалинского тайменя на наличие плероцеркоидов Diphyllobothrium luxi (D. klebanovskii) разрезы проводят поперек мышечных волокон всей дорсальной части тела, большинство личинок локализуется между жировым и спинным плавниками [47, 48].
Метод исследования мышечной ткани на просвет. Это наиболее эффективный метод, позволяющий быстро обследовать большие количества рыбы и рыбной продукции. Используется для выявления личинок нематод, цестод, скребней. Для использования этого метода нужно иметь специальные приспособления – столик с прозрачной (лучше из молочного или матового стекла) крышкой и подсветкой снизу.
Рыба всех видов разделки перед обследованием должна быть обесшкурена, филе толщиной до 3–4 см просматривается целиком, сначала с одной, а потом с другой стороны. У рыбы других видов разделки мясо срезается с костей так, чтобы получившиеся куски или филейчики достигали в толщину не более 3–4 см. Слишком толстые куски соответствующим образом разрезаются.
Паразиты – личинки цестод, трематод и нематод, паразитические ракообразные и другие включения размером от нескольких миллиметров и более – обычно хорошо заметны на просвет, даже в довольно толстых филейчиках. Обнаруженных личинок гельминтов выделяют из мышечных тканей рыбы с помощью препаровальных игл. Выделенных личинок помещают в чашку Петри и определяют видовую принадлежность гельминта (рис. 4).
Рисунок 4 – Исследование мышечной ткани на просвет
Компрессорный метод. Метод применяется в основном для выявления метацеркарий трематод, им можно пользоваться лишь для выборочного контроля. Чаще всего метацеркарии поселяются в поверхностных слоях мышц на глубине до 2 мм и в подкожной клетчатке. Исследуются очень мелкие, незаметные или малозаметные невооруженным глазом объекты, поэтому для их обнаружения и дифференциации видовой принадлежности необходимы специальные микроскопические исследования. Используют метод при просмотре мышечной ткани и внутренних органов рыб, а также мышечной ткани ракообразных. Метод заключается в просмотре на просвет сдавленных между двух стекол кусочков мышечной ткани.
При компрессорном исследовании скальпелем удаляют чешую с одного бока под спинным плавником рыбы, затем надрезают кожу в двух направлениях. Первый разрез делают впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй – от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимают край кожи и отпрепаровывают ее на площадки до 25 см 2 так, чтобы подкожная клетчатка осталась на поверхности мышц. После этого срезают поверхностный слой мышц толщиной 0,2–0,5 см, нарезают мелкими кусочками и размещают по всей поверхности нижнего стекла компрессора, покрывают верхним стеклом и сжимают винтами [48].
Просмотр осуществляется невооруженным глазом или при слабом увеличении бинокуляра микроскопа. Удобнее всего использовать кусочки мышечной ткани объемом около 2–5 см 3 и стекла размером около 9×20 см. Стекла должны быть толстыми, не менее 4–5 мм. Под малым увеличением микроскопа или под трихинеллоскопом просматривают все кусочки, взятые от одной рыбы. Личинки легко обнаруживаются (рис. 5).
Рисунок 5 – Компрессорный метод исследования
Обследование печени, молок и икры. Печень, молоки и икра обследуются отдельно от других частей рыбы. Вначале проводится внешний осмотр печени или ястыков. Снаружи, чаще всего на покрывающих их пленках или под ними, могут быть инкапсулированные личинки цестод и нематод. Особое внимание нужно обращать на личинок нематод, свернутых в плоские спирали; диаметр таких спиралей может составлять 2–6 мм.
Затем пленки надрезаются или разрываются, небольшие порции молок, икры или ткани печени помещаются на стекло и просматриваются компрессорным методом. При этом могут быть встречены личинки нематод или взрослые трематоды, хорошо видимые визуально, а также другие паразиты или включения [47, 49].
Компрессорным методом удобно просматривать лишь мелкую икру. Порции более крупной икры приходится разбирать препаровальными иглами в чашке Петри с небольшим добавлением воды. Замеченные паразиты или включения, а также имеющие необычный вид икринки, отбираются глазным пинцетом для последующего определения. Отбираются также участки тканей, имеющие ненормальный вид или консистенцию.
3. Жизнеспособность метацеркариев
Определяют следующим образом. Их изолируют от ткани, помещают в каплю физиологического раствора на предметном стекле, покрывают покровным и микроскопируют вначале под малым, а затем большим увеличением микроскопа. У погибших метацеркариев нарушена целостность оболочки, содержимое в состоянии зернистого распада, экскреторный пузырь разрушен, присоски слабо выражены. Живые метацеркарии в цисте подвижны. Подвижность вызывают механическим воздействием или подогреванием личинки (не выше плюс 40 °С).
Неподвижность личинки не свидетельствует о ее гибели. При исследовании свежевыловленной рыбы, а также при комнатной температуре, живые личинки бывают неподвижными. Поэтому исследуют большое количество личинок с применением тепла, а также учитывают степень выраженности присосок и экскреторного пузыря.
4. Критерии оценки условно годной и не пригодной в пищу рыбной продукции
Рыба и продукты её переработки, в которых не обнаружено живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, подлежат сертификации и реализации в установленном порядке. При обнаружении живых личинок гельминтов, опасных для человека и животных, рыба не допускается в реализацию и подлежит обезвреживанию.
5. Паразитологические методы исследования рыбы и рыбных продуктов
Исследование проводят в следующем порядке: кожа, плавники, ротовая полость, жабры, глаза, кровь, сердце, брюшная полость (печень, селезенка, плавательный пузырь, мочевой пузырь, желчный пузырь, почки, половые железы, кишечник), мышцы, головной и спинной мозг.
Для обнаружения трипаносом и криптобий у рыбы берут кровь из сердца и делают мазки. Для предотвращения свертывания крови добавляют 1 %-й раствор лимоннокислого натрия, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Чтобы мазок не высыхал, края покровного стекла смазывают вазелином. Одновременно несколько мазков крови высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте, окрашивают по Романовскому-Гимзе или гематоксилином и микроскопируют [47, 48, 49].
Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки 30 с, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5–10 %-м раствором танина. Эритроциты окрашивают в красноватофиолетовый цвет, плазма простейших кровепаразитов – в яркоголубой, ядра лейкоцитов – в фиолетовый (рис. 6).
Рисунок 6 – Мазок крови рыб
Для изучения морфологии паразитических инфузорий их окрашивают железным гематоксилином по Гейденгайну, а также гематоксицилином Делафильда или квасцовыми кармином.
Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематоксилином или по Романовскому-Гимзе (рис. 7).
Рисунок 7 – Паразитические жгутиконосцы
Слизистых споров окрашивают 1 %-м водным раствором метиленового синего 30–60 мин, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-й и абсолютный) и просветляют ксилолом.
Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде и помещают в краску от 1 мин до нескольких часов (в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать микроскопией препаратов.
Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут их тщательно отмывают от краски. Отмытых паразитов осторожно сушат фильтрованной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96 %-м), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют маслом и ксилолом.
Мелких цестод можно окрашивать молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят в 2 раза дистиллированной водой, добавляют небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски). Жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают 20–60 мин водопроводной водой и помещают в бальзам (рис. 8).
Рисунок 8 – Сосальщики (трематоды)
При окраске крупных цестод этот способ модифицировали. Цестод промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре летом один день, в холодное время года – 3–4 дня. Затем их помещают на 4–6 ч в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-й молочной кислоты).
Интенсивность прокрашивания контролируют под микроскопом. После этого на сутки их переносят в дистиллированную воду, в которую добавляют 3 капли раствора сернокислого железа и 2 капли 1 %-го раствора фенола.
Далее цестод переносят на чистое предметное стекло, расправляют и высушивают при температуре плюс 30–37 °С. Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта [47].
Постоянные препараты для микроскопического исследования нематод готовят следующим образом. Фиксированных в 70 %-м спирте живых гельминтов через сутки помещают на несколько часов (в зависимости от величины нематод) в 96 %-й, а затем в абсолютный спирт на 3–5 мин. После этого их переносят в гвоздичное или хеноподиевое масло или карбоксилол на 2–5 мин, а затем кладут на чистое предметное стекло и заливают бальзамом (рис. 9).
Рисунок 9 – Нематоды
Скребней (акантоцефалов) для изучения хоботка и крючков просветляют. Для этого их из 70 %-го спирта переносят сначала в 50 %-й глицерин, а затем в чистый. Структуру других органов изучают после полного обезвоживания гельминтов путем постепенного проведения их через спирты возрастающей крепости. Из абсолютного спирта гельминтов переносят на предметное стекло в каплю кедрового масла, покрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой хранят. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином и др.
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
РЫБА, НЕРЫБНЫЕ ОБЪЕКТЫ И ПРОДУКЦИЯ ИЗ НИХ
Методы определения жизнеспособности личинок гельминтов
Fish, non-fish objects and products from them. Methods for evaluation of viability of the helminth larvae
Дата введения 2013-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии" (ФГУП "ВНИРО"), Обществом с ограниченной ответственностью "Каспийский научно-исследовательский и аналитический центр рыбной промышленности" (ООО НИиАЦРП "Каспрыбтестцентр")
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 300 "Рыбные продукты, пищевые, кормовые, технические и упаковка"
4 Настоящий стандарт соответствует международному стандарту CODEX STAN 244-2004* "Стандарт на сельдь атлантическую соленую и шпрот соленый" (CODEX STAN 244-2004 "Standard for salted atlantic herring and salted sprat", NEQ) в части определения жизнеспособности личинок нематод, приведенного в подразделе 9.4
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.
Введение
Настоящий стандарт в части определения жизнеспособности личинок нематод гармонизирован с международным стандартом Комиссии "Кодекс Алиментариус" стандарт Кодекса 244-2004 для соленой атлантической сельди и соленых шпрот (приложение 1) в той мере, в которой возможно его эффективное применение на территории Российской Федерации.
Настоящий стандарт устанавливает основные термины и соответствующие им определения, которые необходимы для понимания особенностей объекта стандартизации.
При определении жизнеспособности личинок гельминтов, опасных для здоровья человека, организация (лаборатория) самостоятельно устанавливает такой алгоритм проведения испытаний, который обеспечит получение достоверных данных об исследуемом объекте. С этой целью может быть использовано поэтапное проведение определения жизнеспособности личинок гельминтов несколькими методами, приведенными в настоящем стандарте.
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на рыбу, нерыбные объекты и продукцию из них (далее - продукция) и устанавливает методы определения жизнеспособности личинок гельминтов (далее - методы).
Примечание - Методы могут быть применимы для земноводных, пресмыкающихся и продукции из них.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 3309 Часы настольные и настенные балансовые механические. Общие технические условия
ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4025 Мясорубки бытовые. Технические условия
ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 6672 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9284 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 14919 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 16317 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 20469 Электромясорубки бытовые. Технические условия
ГОСТ 21240 Скальпели и ножи медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 21241 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 23932 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
ГОСТ 27752 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ 28498 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ Р 50380 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Термины и определения
ГОСТ Р 53228 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана сылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 50380, а также следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 гельминты (helminths): Паразитические черви.
Примечание - К гельминтам относят гирокотилиды, моногенеи, нематоды, пиявки, скребни, трематоды, турбеллярии и цестоды. К опасным для здоровья человека относят отдельные личинки нематод, скребней, трематод и цестод, установленные в нормативных правовых актах Российской Федерации*.
* До введения соответствующих нормативных правовых актов Российской Федерации - в нормативных документах федеральных органов исполнительной власти [1].
3.2 личинка гельминта (helminths larva): Постэмбриональная стадия индивидуального развития паразита, ведущего самостоятельную жизнь, активно питающегося и развивающегося, претерпевая характерные для этой стадии линьки.
3.3 жизнеспособность (личинки гельминта) (viability): Способность личинки гельминта сохранять свою жизнь в меняющихся условиях среды.
4 Сущность методов
Методы определения жизнеспособности основаны на выделении личинок гельминтов и стимулировании их движений физическим раздражением, электрическим или химическим воздействием.
5 Требования к условиям проведения определения жизнеспособности личинок гельминтов
5.1 Лаборатория, в которой проводят определение жизнеспособности личинок гельминтов, должна иметь разрешение на работу с патогенными биологическими агентами IV группы.
5.2 Помещения лаборатории должны удовлетворять требованиям, приведенным в [2], [3].
5.3 Специалисты, проводящие испытания по установлению жизнеспособности личинок гельминтов, должны быть подготовлены и иметь допуск к работе с патогенными биологическими агентами IV группы.
6 Требования к средствам измерений, оборудованию, материалам, реактивам
6.1 Для хранения и подготовки проб, проведения определений используют:
- холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда по ГОСТ 26678;
- приборы холодильные электрические бытовые по ГОСТ 16317;
- микроскоп стереоскопический МБС-9;
- микроскопы биологические Биолам, Бимам;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1)°С;
- мешалку магнитную с термостатической подогреваемой пластиной;
- мясорубки диаметром отверстий решетки от 3 до 5 мм по ГОСТ 4025, ГОСТ 20469;
- электроплитки бытовые по ГОСТ 14919;
- сито механическое диаметром не менее 140 мм и ячеей 0,5 мм;
- источник постоянного электрического тока с напряжением от 0,5 до 1,5 В;
- стол с прозрачной верхней крышкой из матового (молочного) стекла и электрической подсветкой;
- диск для просвечивания по [4];
- весы класса точности III, Мах=500 г, 1 г по ГОСТ Р 53228;
- термометр жидкостный стеклянный с ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498;
3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ РЫБЫ, МОЛЛЮСКОВ, РАКООБРАЗНЫХ, ЗЕМНОВОДНЫХ, ПРЕСМЫКАЮЩИХСЯ И ПРОДУКТОВ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ
Дата введения 2001-01-01
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации - Первый заместитель министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 25 октября 2000 г.
1. Область применения и общие положения
1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы и нерыбных объектов промысла (моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся), а также продуктов их переработки (далее по тексту - рыбная продукция).
1.2. Методические указания предназначены для применения в аккредитованных (или аттестованных, или лицензированных) лабораториях (в т.ч. контрольно-производственных) и лабораториях учреждений государственной санитарно-эпидемиологической и ветеринарной служб Российской Федерации, осуществляющих контроль качества гидробионтов и продуктов их переработки на соответствие СанПиН 2.3.2.560-96* и 3.2.569-96**, а также научных учреждений, занимающихся изучением паразитарных болезней.
** На территории Российской Федерации действует СанПиН 3.2.1333-03, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.
Специалисты лабораторий должны пройти подготовку в заявленной области аккредитации (аттестации, лицензирования), владеть метрологически аттестованными методиками и методами, утвержденными или допущенными к применению Госстандартом и госсанэпидслужбой России и соответствующих требованиям ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
1.3. Среди всех классов паразитов (простейшие, ракообразные, гельминты и др.), встречающихся в рыбе и других гидробионтах, опасными для здоровья человека являются только личинки гельминтов: цестод, трематод, нематод и скребней. К наиболее социально значимым и широко распространенным заболеваниям, передающимся через рыбу и других гидробионтов, относятся описторхоз, дифиллоботриозы и эндемичные для Дальнего Востока России метагонимоз, нанофиетоз и клонорхоз. Определенную опасность для здоровья людей могут представлять гельминты, приживающиеся, но не развивающиеся до взрослой стадии у человека (использующие его в качестве резервуарного хозяина), что затрудняет диагностику заболевания. Это спирометра, гнатостомы, болбозомы, коринозомы и некоторые виды анизакид и парагонимид. Заражение человека пирамикоцефалусами, апофаллами, криптокотилюсами происходит крайне редко. Других гельминтов (меторхисов, псевдамфистомумов, гетерофиесов, эхинохазмусов и др.) можно отнести к паразитам, спорадически встречающимся у человека на определенных территориях.
1.4. Объектами исследований являются промысловые пресноводные и морские рыбы, моллюски, ракообразные, земноводные, пресмыкающиеся и продукты их переработки.
1.5. Потенциальную опасность для здоровья человека представляют только живые личинки гельминтов. В связи с этим, при паразитологическом инспектировании гидробионтов и продуктов их переработки следует определить жизнеспособность выявленных плероцеркоидов, метацеркарий, акантелл и личинок нематод (см. раздел 5).
1.6. При исследовании гидробионтов и продуктов их переработки следует соблюдать режим работы с инвазионным материалом, регламентированный санитарными правилами 1.2.731-99* "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".
* Действуют СП 1.3.2322-08. - Примечание изготовителя базы данных.
2. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов и продуктов их переработки
Отбор и объем проб рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки для исследования на соответствие требованиям безопасности для здоровья человека по паразитарным показателям осуществляется в соответствии с требованиями:
- ГОСТ 7631-85 "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Правила приемки, органолептические методы оценки качества, методы отбора проб для лабораторных испытаний";
- Изменений N 2 к ГОСТ 7631-85 (п.1.2), утвержденному Постановлением Госстандарта СССР от 25.10.89 N 3195;
- СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", приложение 3, п.6.2 (при лабораторном контроле рыбной продукции) и п.п.15.12, 15.13 (при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов);
- правил по сертификации "Типовой порядок обращения с образцами, используемыми при проведении обязательной сертификации. ПР 50.3.002-95".
2.1. Отбор, хранение и подготовка к анализу проб гидробионтов при оценке и контроле паразитологического состояния районов промысла (биотопов)
Необходимые реактивы и оборудование:
1. Химические реактивы: глицерин; эфир или хлороформ
2. Кюветы эмалированные
4. Пинцеты хирургические и глазные
5. Препаровальные иглы
6. Химические стаканы
7. Кастрюли эмалированные
10. Весы с набором разновесов или весы электронные
11. Сантиметр или линейка
13. Фильтровальная бумага
2.1.1. При оценке паразитологического состояния водоема (района промысла) следует начинать исследовать виды гидробионтов, наиболее подверженные заражению. Так, наилучшими индикаторами неблагополучия водоема в отношении инвазии личинками описторхисов является язь, далее по убывающей - елец, линь и т.д. (см. табл.2), а в отношении Diphyllobothrium latum - щука и налим (см. табл.1).
Дифференциальные признаки плероцеркоидов сем. Diphyllobothriidae, опасных для здоровья человека
Прилавки рынков и магазинов радуют глаз: морская и речная рыба разных пород представлена в изобилии – свежая, мороженная, копченая, соленая, консервированная… Рыбу даже можно купить прямо у рыбаков: если Вы ехали по трассе Барнаул – Горно-Алтайск, наверное, видели огромных вяленных лещей, висящих на перекладинах. Однако мало кто знает, что в одной такой рыбине может находиться до 7000 личинок описторхов. Личинки эти в рыбе не заметны – они микроскопичны, но опасность от этого меньше не становится… Нам, жителям Западной Сибири, об описторхозе надо знать всё, ведь мы живем в самом напряженном очаге описторхоза на планете.
Итак, рыбы повинны в том, что люди болеют описторхозом. И не просто рыбы, а речные рыбы карповых пород – лещ, карась, карп, сорожка, чебак (язь), линь, пескарь, гольян, жерех и т.д. В некоторых водоемах Западной Сибири вся карповая рыба заражена описторхозом. По внешнему виду рыба выглядит нормально, так как личинок можно обнаружить, если под микроскопом просмотреть мышечную ткань рыб.
Моя знакомая заразилась описторхозам в гостях – не смогла удержаться при виде аппетитного вяленого леща. На следующие сутки она почувствовала тошноту и дискомфорт в животе. В это же время поднялась температура. Через неделю, не почувствовав улучшения, пошла к врачу. В общем анализе крови у заболевшей женщины нашли повышенное содержание эозинофилов. Как часто делается в таких случаях, врач назначил лабораторные анализы на гельминтозы, в том числе методом ИФА (иммуноферментный анализ). В сыворотке крови обнаружился высокий титр антител к описторхам. После лечения билтрицидом все симптомы прошли.
Как же не заразиться - совсем не есть речную рыбу. Способы обеззараживания просты – рыбу нужно варить или жарить достаточно долго (20мин.). Раньше считалось, что вымораживание в бытовом холодильнике может обезвредить личинок описторхов, но потом один из исследователей не обнаружил, что даже на 3 неделе заморозки личинки остаются живыми. Они погибают только при очень низких температурах! Именно поэтому в Санитарных правилах теперь прописаны такие режимы заморозки рыбы: 32 часа при -28 градусах, 14 часов при -35 градусах, 7 часов при -40 градусах. Низкотемпературные холодильники должны быть на всех рыбоперерабатывающих предприятиях.
Описторхоз – опасное заболевание, ведь чаще всего поражается жизненно важный орган – печень (реже – поджелудочная железа). Именно туда проникают личинки описторхов, если Вы съели зараженную рыбу. Личинки прикрепляются к стенкам желчных протоков печени - и через 3 месяца вырастают до 1 см. Так как человек может подзаражаться описторхозом многократно, число паразитов в его организме может достигать 40 000 экземпляров. Причем, описторхи – долгожители среди глистов. Если не лечиться, они живут 30 лет! При большом скоплении описторхов желчные ходы забиваются ими – и появляется желтуха. Такие случаи у нас встречаются. Кроме того, в течение всей своей долгой жизни паразиты выделяют токсины, которые могут вызвать рак или цирроз печени.
Диагноз ставится при обнаружении яиц описторхов в фекалиях больного или при обнаружении антител к описторхам в сыворотке крови. Сейчас описторхоз лечиться легко (курс лечения билтрицидом рассчитан на 1 день), но лучше лечиться в больнице, так как одновременно с назначением препарата проводят процедуры, чтобы удалить погибших описторхов из печени.
Итак, нашу речную рыбу надо есть с осторожностью – варите уху или жарьте рыбку в течение 20 минут. Остальные способы приготовления (копчение, посол, просушка) не убивают возбудителей описторхов.
Кошки и собаки тоже болеют описторхозом.
Неслучайно одно из названий описторха – кошачья двуустка
О других рыбных паразитах
Кроме личинок описторха в рыбе могут находиться и другие опасные паразиты. Несколько слов скажем и о них.
В речной рыбе нередко бывают личинки широкого лентеца, который вызывает дифиллоботриоз. Правда, в отличие от описторхов, эти личинки довольно крупные – выглядят они как белые червячки до 1 см длиной. Внимательный человек заметит – и есть столь непривлекательную рыбу не станет. Если заражение всё-таки произойдет, то у человека через 3 месяца в кишечнике вырастет огромный – до 10 метров - ленточный червь. Присутствие его заметно – у больного человека при дефекации будут выходить белые ленты (обрывки это паразита). Лечится это заболевание (дифиллоботриоз) также как описторхоз - билтрицидом. Только дозировка препарата другая и госпитализации больного не требуется: выпил дома препарат – и здоров. Опасны щуки, ерши, налимы, окуни, а также икра этих рыб.
На Дальнем Востоке в речной рыбе находится двоюродный брат описторха – клонорх, который поражает тоже карповую рыбу, живущую в бассейнах рек Амура и Уссури. Там же можно в рыбе встретить еще одного паразита, опасного для человека – метагонимуса.
Большой спектр паразитов бывает в морских рыбах. Чаще всего люди видят личинок селедочного червя – когда в селедке или другой морской рыбе (даже красной) обнаруживают свернутых спиралькой небольших белых червячков. Это анизакиды. Погибшие личинки вреда здоровью человека не приносят, но аппетита не прибавляют. Не так ли? А вот свежевыловленная рыба опасна. На Дальнем Востоке деликатесом является сырой рыбный фарш, приготовленный из красной рыбы. Хозяйки после посолки фарша видят, как анизакиды, словно травка, поднимаются из рыбной массы – и снимают живых червей ножом. Но горе, если удалят не всех – когда анизакида с рыбой попадает в рот человека и проглатывается, она способна внедриться куда угодно – в стенку пищевода или желудка, в миндалину. Проникая довольно глубоко, она вызывает страшную боль. Как правило, больные в этом случае попадают к хирургу, который удаляет внедрившихся личинок. Из-за опасности анизакидоза при промышленной ловле рыбы весь улов промораживается в холодильнике в течение 5 суток, чтобы анизакиды погибли. Добавлю, что если рыба сильно заражена личинками анизакид, ее бракуют.
Опасны ракообразные – раки, креветки, крабы, живущие в пресноводных водоемах Дальнего Востока и стран Юго-Восточной Азии. Если съесть их без термической обработки, они вызывают парагонимоз, протекающий с поражение легких, головного мозга и других органов. От этого заболевания больные нередко погибают. Пишу это, потому что сейчас наши люди выезжают на отдых за рубеж, пробуя без всякого страха экзотические местные блюда. Вряд ли они отдают себе отчет, что подобные кулинарные изыски могут иметь очень неприятные последствия для здоровья.
Совет один – рыбу и рыбопродукты можно употреблять только после термической обработки! А суши и роллы (с сырой рыбой) – не наша еда…
(c) Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Республике Алтай, 2006—2015 г.
Все права на материалы, размещенные на сайте, охраняются в соответствии с законодательством РФ, в том числе об авторском праве и смежных правах.
При использовании материалов сайта необходима ссылка на источник
Адрес: 649002, Республика Алтай, г. Горно-Алтайск, проспект Коммунистический, 173
Эл. почта:
Читайте также: