Исследования воды по сальмонеллезу

Обновлено: 07.05.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Сальмонеллез: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Определение

Сальмонеллез – инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Salmonella. Чаще всего протекает с поражением органов желудочно-кишечного тракта, но описаны и случаи развития тяжелого системного процесса (с поражением других органов и систем), и бактерионосительства без клинических проявлений.

Заболевание распространено повсеместно, заразиться может человек любого возраста.

В последние годы наблюдается подъем заболеваемости во всем мире, при этом сальмонеллы становятся все менее чувствительными к антибактериальным препаратам.

Тяжелее всего сальмонеллез протекает у детей младшего возраста и характеризуется высоким риском летальности.

Причины появления сальмонеллеза

Причиной возникновения заболевания являются бактерии сальмонеллы. Они хорошо сохраняются и долго живут в окружающей среде. Им не страшен холод, поэтому заморозка продуктов не предотвращает заражение. Зато при кипячении эти бактерии погибают мгновенно.

На белье Salmonella может сохраняться до 3 месяцев, в фекалиях – до месяца, в засушенных фекалиях – годами. В водопроводной воде сальмонеллы способны жить 4–5 месяцев, в пыли – до полугода. На поверхности яйца – до 24 дней. В продуктах, даже замороженных, копченых или засоленных, сальмонеллы комфортно проживают и активно размножаются: это касается мяса крупного рогатого скота и домашней птицы, рыбы горячего копчения, колбасы, сосисок, сливочного масла, сыров, кондитерских кремов, яиц, яичного порошка и других продуктов.

Сальмонеллы проникают в желудочно-кишечный тракт с пищей, водой или через загрязненные руки, беспрепятственно проходят кислотный барьер желудка и заселяются в тонком кишечнике (реже – в толстом отделе кишечника), где и происходит дальнейшее развитие заболевания. В борьбе с клетками иммунной системы сальмонеллы разрушаются, высвобождая опасный токсин. В некоторых случаях бактерии могут с током крови и по лимфатическим путям попасть в другие органы - в печень, селезенку, легкие, кости.

Классификация заболевания

Сальмонеллез протекает в локализованной (гастроинтестинальной) или генерализованной (распространенной по всему организму) форме.

При локализованной форме сальмонеллы не выходят за пределы просвета кишечника (а если и выходят, то сразу гибнут). В зависимости от места протекания воспаления и симптоматики выделяют следующие типы сальмонеллеза:

с преимущественным поражением желудка (гастритический);
с преимущественным поражением желудка и тонкого кишечника (гастроэнтеритический);
с преимущественным поражением тонкого кишечника (энтеритический);
с преимущественным поражением тонкого и толстого кишечника (гастроэнтероколитический);
с преимущественным поражением толстого кишечника (колитический);
с преимущественным поражением толстого кишечника с появлением крови в кале (гемоколит).

Локализованные формы развиваются в большинстве случаев у практически здоровых взрослых и детей старше трех лет.

При генерализованной форме сальмонеллеза может наблюдаться тифоподобное (острейшее) течение с вовлечением в процесс нервной системы, септицемическое течение (с проникновением бактерий в кровь), семптикопиемическое течение (с развитием гнойных очагов поражения в органах, куда с током крови попала сальмонелла).

Генерализованные формы могут развиваться у пожилых, ослабленных людей с серьезными хроническими заболеваниями, детей раннего возраста, лиц с врожденным или приобретенным иммунодефицитом.

Возможно бессимптомное выделение сальмонелл с фекалиями – бактерионосительство. В течение трех месяцев после перенесенного заболевания носительство считается острым, более трех месяцев – хроническим, однократное выделение сальмонелл у здорового человека считается транзиторным и может наблюдаться в очаге заболевания.

Симптомы сальмонеллеза

Инкубационный период (время от вторжения сальмонелл в организм до первых клинических проявлений) составляет один-два дня, но может увеличиться до восьми дней. Это зависит от состояния организма и количества сальмонелл, попавших в желудочно-кишечный тракт.

Заболевание всегда начинается остро - с подъема температуры тела до 38–39оС и выше, интоксикации (слабости, разбитости, ломоты в мышцах и суставах). Сразу или на следующий день присоединяются симптомы поражения желудочно-кишечного тракта.

При поражении ЖКТ наблюдаются тошнота, многократная рвота, которая приносит облегчение, боли в области желудка (эпигастрия).

При поражении тонкого кишечника появляется жидкий, обильный, зловонный, зеленый, пенистый и частый стул, в котором возможна примесь слизи и прожилок крови, а также непереваренные остатки пищи. Живот болезненный в правой подвздошной области, около пупка. Усилена перистальтика (живот урчит).

При поражении толстого кишечника боли чаще разлитые и в правой, и в левой подвздошной области, в нижней части живота. Стул с примесью слизи, крови, гноя, редко бывают болезненные позывы к дефекации. Выражено вздутие живота.

Эти симптомы наблюдаются изолированно или в комбинации. Во время ультразвукового обследования может фиксироваться увеличение печени и селезенки. Риск обезвоживания возрастает при поражении желудка и тонкого кишечника. При оценке тяжести состояния обращают внимание на длительность и кратность рвоты и диареи.

Легким течением считается наличие жидкого стула в течение одного-трех дней по два-пять раз в день и рвота один-два раза в день (при этом общее состояние сильно не меняется).

Длительность заболевания более 9 дней с диареей больше 15 раз в сутки, многократной рвотой и симптомами интоксикации говорят о тяжелом течении болезни.

Диагностика сальмонеллеза

Диагностика сальмонеллеза включает осмотр и выявление жалоб больного, определение пути заражения (выявление контакта с больным инфекционной диареей или употребления воды или продуктов питания, опасных в отношении сальмонеллеза).

Наилучшим из существующих тестов для подтверждения сальмонеллеза является выявление сальмонелл в кале, рвотных массах, промывных водах желудка бактериологическим методом. Если сальмонеллы не обнаруживаются, применяют серологическое исследование крови на наличие антител к антигенам сальмонелл.

Определение этиологии ОКИЗ (острого кишечного инфекционного заболевания) и выбор рациональной антибиотикотерапии. Рациональная терапия дизентерии основана на идентификации её возбудителя - бактерий рода Shigella. Шигеллы (по имени японского учёного К. Шиги) грамотрицательные неподвижные .

4.2. Биологические и микробиологические факторы

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ, ОБНАРУЖЕНИЕ САЛЬМОНЕЛЛ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Дата введения 2010-09-02

1. Методические указания разработаны ФГУН "ЦНИИ эпидемиологии" Роспотребнадзора (С.Ш.Рожнова, А.Т.Подколзин).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 13.08.2010 г.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.

2. Термины и сокращения

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР - полимеразная цепная реакция

Н-антиген - жгутиковый антиген, представляющий собой термолабильный белок

О-антиген - соматический антиген, представляющий собой липополисахарид клеточных мембран

Смесь О-сывороток - диагностические адсорбированные сыворотки сальмонеллезные

R-форма - шероховатая форма

RAPD - амплификация с произвольными (случайными) праймерами

ISO-6579 - международная организация стандартизации

MLST - мультилокусное секвенирование-типирование

PFGE - электрофорез в пульсирующем поле

VNTR - амплификация тандемных повторов с переменной копийностью

S-форма - гладкая форма

SS-агар - сальмонелла-шигелла агар

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

AFLP - оценка полиморфизма длины фрагментов амплификации

3. Нормативные ссылки

МУ по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями - 1984 г.

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб".

ГОСТ 7702.20-95 "Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб".

ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 "Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа".

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов".

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют МУ 1.3.2569-09, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

Информационное письмо МЗ РСФСР N 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

"Методы контроля бактериологических питательных сред". Методические указания. МУК 4.2.2316-08.

"Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

"Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории" МУ 4.2.2039-0.

Инструкция по применению набора реагентов "Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий" от 22.08.2008 N 6854-Пр/08.

Laboratory Protocol "Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces" 5 Ed June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, 9 edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonella.

4. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы

4.1. Аппаратура и инструментарий

Наименование аппаратуры и материалов

Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)

Анализатор потенциометрический, погрешность измерений pH±0,01

Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160±5) °С

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 41,5 °С с отклонением от заданной ±1 °С

Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ТУ 3-3.404-83, ТУ 3-3.154-80, ТУ 3-3.190-80, ТУ 3-3.193-80, ТУ 3-3.986-81, являющиеся авторской разработкой. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 51935-2002. - Примечание изготовителя базы данных.

Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с

Гомогенизатор перистальтического типа "Микс-2", "Стомайкер", или других наименований

AES Lab., Cat.N AESAP 1066

Гомогенизатор типа "вортекс"

Микропипетки на 200-1000 мкл

BIOHIT, Cat.N 720040 или "Ленпипет"

Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов

Холодильник бытовой электрический

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 21239-93. - Примечание изготовителя базы данных.

Скальпель хирургический, 15 см

Часы механические сигнальные

Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)

4.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная

* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 9412-93. - Примечание изготовителя базы данных.

Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости

Вата медицинская гигроскопическая

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см

Пробирки типов II1, II2

Стекла предметные для микропрепаратов

Спиртовки лабораторные стеклянные

Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С (цена деления шкалы 1 °С)

Сальмонеллы являются подвижными грамотрицательными аэробами, которые не образуют спор и капсул. Бактерии растут при температуре 35-37 °C, но способны выдерживать и более высокую – до +45 °C.

Сальмонеллы могут достаточно долго оставаться в воде – например, в открытых источниках они могут содержаться на период до четырех месяцев, в морской воде – до одного месяца, в водопроводной и сточной воде – от двух месяцев дней и дольше. В почве количество бактерий уменьшается спустя 5 месяцев, в комнатной пыли – 3 месяца.

Сальмонеллы опасны тем, что могут находиться в воде любого типа – сточной (коммунальной или сельскохозяйственной), грунтовой, питьевой и морской.

Устойчивость микроорганизмов проявляется и в пищевых продуктах – однако в таких условиях помимо проживания они также способны размножаться. В мясных и колбасных изделиях Salmonella остается на протяжении нескольких месяцев, в замороженном мясе – до года. Также сальмонеллы длительное время могут жить в яйцах – до 13 месяцев.

Сальмонеллы могут переносить и относительно низкие температурные показатели, даже минусовые – при -2 °C на термометре они выживают 3-6 месяцев. Также они устойчивы к высушиванию и могут находиться в таком состоянии годы. При этом бактерии не переносят высокую температуру, особенно это касается кипячения – в таком случае они погибают практически сразу.

Однако, если микроорганизмы находятся в мясе толщиной около 10 см, палочки удастся уничтожить только при варке в течение нескольких часов. Науке известна категория штаммов, которые также практически невосприимчивы к антибиотикам и дезинфектантам.

Какое заболевание вызывают сальмонеллы?

Заболевание, вызываемое палочками рода Salmonella называют созвучно – сальмонеллезом. Данная болезнь чаще всего нападает на молодой скот, а также щенков пушных зверей. В первую очередь она поражает желудочно-кишечный тракт, а протекая хронически также может вызывать артрит и пневмонию.

Опасен ли сальмонеллез для человека? Безусловно. В семействе Salmonella можно выделить два вида, безопасных для животных, но вызывающих серьезные проблемы у людей. К данной категории относятся Salmonella typhi и Salmonella paratiphi. Они вызывают септицемию, которая в последствии приводит к инфицированию большинства органов – в итоге в человеческом организме происходит развитие брюшного тифа или паратифа.

Заболевание начинается из-за попадания микроорганизмов в эпителий тонкой кишки, после чего запускается воспалительный процесс, а также появляется риск образования энтеротоксина. Среди симптомов болезни может выделить тошноту, рвоту, лихорадку, нарушение работы желудка и головные боли. Их длительность зависима от ряда факторов, включая силу иммунитета, а также поступающие в организм дозы.

Среди хронических последствий следует выделить появление симптомов артрита спустя 3-4 недели. Инкубационный период при этом составляет 6-8 часов. Другие виды заболевания чаще всего отличаются меньшим уровнем опасности – среди таких можно выделить сальмонеллез, который вызывается Salmonella enteritidis.

Доза клеток, достаточная для возникновения болезни, зависит от возраста, текущего состояния организма и отличий между родами Salmonella. Чувствительность к заболеванию характерна для всех возрастных групп, но более выражена тяжесть симптомов у детей, людей, иммунитет которых ослаблен другими заболеваниями, и граждан пенсионного возраста.

Доступные меры профилактики

Для профилактики развития сальмонеллеза требуется проводить санитарно-ветеринарную экспертизу при переработке сырья и изготовлении продуктов питания. Также важно:

следить за соблюдением санитарных требований во время размораживания мяса;
хранить сырье и полуфабрикаты при оптимальной температуре в зависимости от их типа;
обеспечивать оптимальные условия на каждом этапе производственного процесса, в том числе при транспортировке;
соблюдать сроки реализации продукта.

Не менее важно вовремя определять и отправлять на лечение сотрудников, у которых обнаружены симптомы сальмонеллеза.

Определение бактерий рода Salmonella

Исследование воды на содержание бактерий рода Salmonella проводят в следующих случаях:

при превышении уровня содержания бактерий в повторно взятых образцах;
в случае ухудшения санитарно-гигиенической обстановки;
при переходе на новые источники водоснабжения и зоны рекреации;
при определении уровня влияния выбросов сточных вод на водоемы;
при возникновении неблагоприятного санитарно-гигиенического и эпидемического положения.

То, насколько часто нужно проводить исследования, зависит от конкретного случая – все варианты предусмотрены программой центров Госсанэпиднадзора. Анализ воды на сальмонеллу необходимо проводить в аккредитованной лаборатории, которая оборудована в соответствии с современными стандартами и имеет профессиональный штат квалифицированных микробиологов. Немаловажным является обеспечение оптимальных условий, а также соблюдение правил техники безопасности.

Проведение анализа

В зависимости от вида воды, различается и необходимое для анализа количество. Так, воды из открытых водоемов достаточно 1 дм³, питьевой воды – 1,3 дм³, сточной жидкости – 300-500 см³. Исследуемый образец засевается в две среды обогащения – это может быть селенитовый бульон, среда Мюллера-Кауфмана или тетратионатная среда.

Среди самых распространенных методов определения воды следует выделить два:

Выявление сальмонелл количественным методом, путем посева воды в магниевую среду с титрованием в нескольких параллельных рядах.
Исследование воды на наличие сальмонелл методом мембранной фильтрации. В данном случае отбирается 2 образца по 500 мл. Каждый образец профильтровывается с помощью одного или нескольких мембранных фильтров. Далее проба помещается в две любые вышеперечисленные среды.

Учитывая уровень осведомленности об особенностях сальмонелл, которые относятся к болезнетворным микроорганизмам, на данный момент существует множество методов их обнаружения, однако ИСТО 6340 устанавливает основной. Он является универсальным и помогает определять микроорганизмы во всех типах вод, за исключением необработанных сточных.

Сущность метода заключается в предварительном обогащении проб воды, дальнейшем посеве на культуральной среде и определении выращенных колоний. Для приготовления культуральных сред используются химические вещества аналитического качества. Применяемая при проведении испытаний вода должна быть дистиллированной и не иметь в своем составе веществ, которые могут вызвать замедление роста микроорганизмов в рамках исследований.

Стоит отметить, что, как и в случае с любым другим анализом, важно предварительно обеспечить правильность отбора образца и его безопасную доставку в лабораторию. Для этого сотрудники нашего центра готовы выехать на объект с собственным оборудованием, что позволит избежать каких-либо ошибок, допустить повреждение пробы и последующее искажение результатов исследований.

ГОСТ 31659-2012 (ISO 6579:2002)*
____________________
* Поправка (ИУС 5-2015).

Метод выявления бактерий рода Salmonella

Food products. Method for the detection of Salmonella spp

____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ 31659-2012 с ГОСТ Р 52814-2007 см. по ссылке.
- Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________

Дата введения 2013-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" (ГНУ ВНИИКОП) на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 июля 2012 г. N 50)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 ноября 2012 г. N 715-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31659-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ISO 6579:2002* Microbiology of food and animal feeding staffs** - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод выявления Salmonella spp.) в части пищевых продуктов. При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребности экономики указанных выше государств и особенностей межгосударственной стандартизации, выделены в тексте стандарта курсивом***.

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей.

*** В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе "Предисловие", приложении ДА и по тексту документа отмеченные знаком "**" приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечания изготовителя базы данных.

Степень соответствия - модифицированная (MOD).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие в ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, указанные в приложении ДА.

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

ВНЕСЕНЫ: поправка*, опубликованная в ИУС N 5, 2015 год; поправка, опубликованная в ИУС N 1, 2022 год, введенная в действие с 23.08.2021

* См. ярлык "Примечания".

Поправки внесены изготовителем базы данных

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной массе или объеме продукта бактерий рода Salmonella, включая Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi.

Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления бактерий рода Salmonella.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 4209-77 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6691-77 Реактивы. Карбамид. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9536-79 Спирт изобутиловый технический. Технические условия

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактерии рода Salmonella: Микроорганизмы, которые на агаризованных селективно-диагностических средах образуют типичные или не совсем типичные колонии.

Примечание - Описание и методы определения биохимических и серологических характеристик этих микроорганизмов приведены в настоящем стандарте.

3.2 выявление бактерий рода Salmonella: Определение присутствия или отсутствия бактерий рода Salmonella в определенной массе или объеме продукта в соответствии с настоящим стандартом.

4 Сущность метода

4.1 Общие положения

Метод выявления бактерий рода Salmonella в определенной массе или объеме продукта состоит из четырех этапов (см. 4.2; 4.3; 4.4; 4.5 и приложение А).

4.2 Предварительное обогащение в неселективной жидкой среде

Бактерии рода Salmonella могут присутствовать в продукте в небольшом количестве вместе с большим количеством других бактерий из семейства Enterobacteriaceae или других семейств. Поэтому предварительное обогащение необходимо для выявления небольшого числа бактерий рода Salmonella или сублетально поврежденных бактерий рода Salmonella.

Навеску массой 25 г вносят в забуференную пептонную воду, затем инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (18±2) ч.

Для некоторых пищевых продуктов используют другое предварительное обогащение (см. 8.1.2).

Для большего эффекта перед внесением навески продукта забуференную пептонную воду нагревают до температуры (37±1) °С.

4.3 Обогащение в селективной жидкой среде

Среду Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) и одну из двух сред: Мюллер-Кауфман тетратионатный бульон (МКТ-бульон) или селенитовую среду - инокулируют культурой, полученной по 4.2. После посева RVS-бульон инкубируют при температуре (41,5±1,0) °С в течение (24±3) ч, а МКТ-бульон и селенитовую среду - при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.

4.4 Пересев на чашки для идентификации

Культуры, полученные по 4.3, пересевают на две селективные агаризованные среды:

- ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-arap) и

- на одну из следующих агаризованных сред: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева, среду Эндо, среду Левина или бриллиантовый зеленый агар.

Посевы на агаризованных средах инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.

4.5 Проведение идентификации

Колонии, предположительно относящиеся к бактериям рода Salmonella, полученные на чашках по 4.4, идентифицируют с помощью биохимических и серологических тестов.

5 Питательные среды, реактивы и сыворотки

5.1 Общие положения

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов, должны быть аналитического качества (не ниже ч.д.а. или х.ч.).

5.2 Питательные среды и реактивы

Состав и приготовление питательных сред и реактивов указаны в приложении В.

5.2.1 Среда для неселективного предварительного обогащения: забуференная пептонная вода по В.1.

5.2.2 Первая селективная обогатительная среда: среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) по В.2.

5.2.3 Вторая селективная обогатительная среда: селенитовая среда по В.3.

5.2.4 Третья селективная обогатительная среда: тетратионатный бульон Мюллер-Кауфмана (МКТ-бульон) по В.4.

5.2.5 Агаризованные селективные среды для чашек.

5.2.5.1 Первая среда: ксилоза-лизин-деоксихолатный агар (XLD-arap) по В.5.

Сальмонеллезы — не одно, а группа острых заболеваний, которые чаще всего проявляются поражением органов пищеварения. Болеют не только люди, но и птицы, животные. По госпитальной статистике на сальмонеллезы приходится больше половины случаев всех инфекционных заболеваний.

Болезнь чаще всего регистрируется как вспышка в родовспомогательном учреждении, в детских садах, лагерях отдыха. Дети — наиболее чувствительный к заражению контингент, особенно грудного возраста.

Поэтому анализ на сальмонеллез включен в перечень обязательных осмотров людей, которые оформляются на работу в учреждения, связанные с обслуживанием детей, пищеблоки. Своевременно выявить заболевание у носителей необходимо для предотвращения его распространения.

Другой опасный контингент — люди со сниженным иммунитетом. Их наибольшее число находится на лечении в больницах разного профиля. Заражение человека в условиях стационара отличается от других случаев высокой устойчивостью возбудителя инфекции к лекарственным препаратам и сложным лечением.

Что известно о возбудителях сальмонеллеза?

В 1880 году впервые выделена сальмонелла у больного брюшным тифом. Дальнейшее изучение позволило обнаружить почти аналогичные бактерии у свиней, кур, других животных. Оказалось, что возбудители сальмонеллеза чаще всего находят у пациентов с клинической картиной острого отравления или гастроэнтерита.

Данные современных микробиологических исследований позволяют разделить класс сальмонелл на два вида и выделить 7 подтипов. Раньше считалось, что их значительно больше, но иммунологическим изучением возбудителей доказана многочисленная разновидность, связанная с антигенным составом (до 2500).

Диагноз сальмонеллеза ставится после выявления конкретной причины у больного. Для человека основным поражающим видом является подвид Еnterica. Он выявлен у 99% заболевших. Подтип сальмонеллы Typhimurium — способен вызвать тяжелое распространенное (генерализованное) поражение с наличием возбудителя в крови.

Редко обнаруживаются такие варианты, как:

Choleraesuis,
Heidelberg,
Derby,
Anatum.

Характеристика возбудителя

Сальмонеллы имеют вид палочек, по отношению к окраске Грамм-отрицательны. Хорошо двигаются. Способны образовать защитную капсулу из полисахаридов. Относятся к факультативным (условным) анаэробам, то есть способны жить как в кислородной среде, так и без него. Энергию получают в результате окислительно-восстановительных реакций соединений, добытых из организма носителя.

Сальмонеллы снабжены множеством пилей (ворсинки на поверхности) и жгутиками

Биохимические свойства положены в основу создания питательных сред. Сальмонеллы способны расщеплять многие углеводы (кроме лактозы, сахарозы), включая глюкозу, мальтозу, арабинозу, и образовывать при этом кислоту и газ.

Отдельные типы имеют отличительные свойства, что также используется в микробиологической диагностике. Например, Тyphi не образует газ, а Paratyphi A не выделяет индол. Все сальмонеллы расщепляют белок до сероводорода. Не имеют фермента оксидазы, содержат каталазу.

Сальмонеллы отличаются живучестью и сохранением заразности :

в реках и открытых водоемах — 120 суток;
соленой морской воде — месяц;
земле до 9 месяцев;
пыли домашнего происхождения — до 1,5 лет;
колбасе и мясных изделиях — от 2 до 4 месяцев;
при заморозке мяса — 12 месяцев;
яйцах — 1 год;
в скорлупе — почти месяц.

Сальмонеллы используют такие продукты, как молоко, творог, сметану, фарш в качестве питательной среды, где активно размножаются.

Бактерии особо чувствительны к нагреванию, кипячению, действию хлоросодержащих дезинфицирующих средств.

Какие свойства определяют способность сальмонелл заражать человека?

Степень заразности определяется факторами вирулентности сальмонелл. К ним относятся:

синтез особых белков, способствующих проникновению возбудителя вовнутрь эпителиальных клеток кишечника и обеспечивающих выживаемость;
стимуляция сальмонеллами цитокинов и хемокинов к воспалительной реакции;
разрушение макрофагов крови человека;
размножение внутри макрофагов с выделением эндотоксинов;
действие эндотоксинов способствует поражению сосудов и нервных окончаний кишечника, повышает проницаемость клеток;
стимуляция выделения хлоридов и выраженной диареи.

Какие антигенные свойства сальмонелл используются в диагностических целях?

Иммунная диагностика сальмонеллеза имеет богатые возможности благодаря наличию у возбудителя выраженных антигенных свойств. По ним можно типировать вид сальмонеллы. Различают 3 основных антигена:

О-антиген — выдерживает длительное кипячение (2,5 часа), имеет свойства эндотоксина;
Н-антиген — находится в жгутиках, разрушается при нагревании выше 75 градусов, состоит из белка флагеллина. Существенным отличительным признаком от других энтеробактерий является способность выделять по фазам оба антигена.
К-антиген — содержится в капсуле.

Vi-антиген характерен только для возбудителей тифа и паратифа. По антигенной преобладающей структуре Ф. Кауфман и П. Уайт в 2001 году предложили классификацию сальмонелл, которая используется и поныне.

Для проведения иммунных тестов сальмонеллеза у пациента, контактного человека берут анализ крови или мочи

Серологическое исследование считается довольно трудоемким, поэтому используется редко в виде реакции гемагглютинации, при помощи эритроцитарных диагностикумов. Определяется не только наличие антител, но и их титр. Для анализа достаточно 1–2 мл крови. Ее разводят изотоническим раствором и добавляют диагностикум с О-антигеном.

Имеет значение результат при определении антител в разведении 1/100 и росте титра в динамических исследованиях почти в 4 раза.Более чувствительной считается реакция непрямой гемагглютинации.

Возможны отрицательные результаты:

в случаях легких форм болезни;
наоборот, при тяжелом течении сальмонеллеза, у новорожденных и грудничков.

Если берут анализ на сальмонеллез из кала или мочи, то используются реакции коагглютинации и иммуноферментный метод.

С помощью ИФА можно исследовать титр антител в крови, раздельно подсчитать его для специфических антител. Наличие высокого показателя М-иммуноглобулинов всегда указывает на активный инфекционный процесс.

Способ иммуноферментного анализа (ИФА) проводят в специальных лабораториях по контролю за эпидемиологической ситуацией. Они представляют эпидемиологам свои данные о выявлении нового подтипа возбудителя.

Анализ также проводится при выздоровлении пациента от сальмонеллеза с помощью парных сывороток с интервалом в неделю. При этом особенно важно выявить бактерионосительство:

острое — три месяца после заболевания;
хроническое — более трех месяцев;
транзиторное — одно-, двухкратный положительный высев сальмонелл из кала без симптоматики и выявления антител.

Культуральные свойства сальмонелл и их значение в бак. диагностике

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основывается на бактериологическом способе исследования кала. Он гораздо доступнее и достаточно информативен. Проводится в эпидемиологических лабораториях по направлению врача.

Учитываются способности возбудителя:

расти на самых простых питательных средах при температуре 8–45 градусов;
образовывать равномерное помутнение в жидкой среде;
давать полупрозрачные бесцветные колонии на мясопептонном агаре.

Существуют селективные среды. Так называют добавление специфических веществ, при которых выживают только колонии сальмонелл. К ним относятся любые среды с желчью, селенитовый бульон, висмут-сульфит-агар. Дифференциально-диагностическими средами считаются лактозосодержащие варианты: Эндо, Левина, МакКонки. Колонии вырастают бесцветными, поскольку сальмонеллы неспособны раcщеплять лактозу.

Для посева петлей берется образец материала и размазывается на чашке Петри, содержащей питательную среду

Сальмонеллы можно выявить в фекалиях, рвотных массах, моче, промывных водах из желудка, в крови и спинномозговой жидкости. Оптимальным считается посев крови в течении периода повышения температуры. Из локтевой вены достаточно взять около 7 мл крови, провести засев в желчный бульон или на среду Рапопорта.

Бак анализ включает обязательное исследование биохимических свойств возбудителя, изучение строения под микроскопом. При определении длительности исследования приходится учитывать не только работу лаборантов, но и сколько времени занимает рост колоний.

Обычно результат выдается спустя неделю. Положительные данные получают при бак исследовании у 40–80% пациентов с симптомами сальмонеллеза. Максимальная высеваемость приходится на первые 7 дней заболевания.

При эпидемиологическом расследовании вспышки сальмонеллеза по указанию врача для анализа берутся:

остатки приготовленных блюд;
продукты, использованные в кулинарной обработке;
смывы с кухонного оборудования, тарелок;
при выявлении заражения в медицинском учреждении — смывы с рук персонала, оборудования.

Каждый случай учитывает соблюдение технологии приготовления пищи, санитарную обработку и состояние объекта.

На висмут-сульфит-агаре образуются характерные черные блестящие колонии

Как лабораторным способом выявляют пути заражения?

Для определения кому и как сдавать анализ на сальмонеллез учитываются возможные источники возбудителя. Больной человек с легкой формой или носитель — выявляется при обследовании всего персонала, круга контактных лиц взятием мазка кала на дизгруппу.

В исследование включены наиболее распространенные инфекционные заболевания, проявляющиеся одинаковой клинической картиной (понос, температура, боли в животе, рвота):

дизентерия,
сальмонеллез,
амебиаз,
ротавирусная инфекция.

Забор материала проводится из анального отверстия только под контролем медицинского работника в инфекционном кабинете стерильной тонкой ватной палочкой. В случае выявления сальмонелл или других инфекционных агентов сотрудника отстраняют от работы на срок лечения и получения контрольных отрицательных результатов.

Домашние птицы (куры, утки, индюки) — являются источником заражения человека в половине случаев. Сальмонеллы находятся внутри кишечника или в крови птицы, проникают сквозь скорлупу яиц несущихся особей. Заражение происходит при употреблении невареных яиц. Недостаточной температуре кулинарной обработки.

Некоторые мамы практикуют приготовление для детей напитка из взбитых сырых яиц с сахаром и молоком, забывая про сальмонеллез

Домашние животные (кошки, собаки, хомячки, мыши), а также скот (свиньи, коровы) могут быть носителями инфекции. Они передают сальмонелл через загрязненную калом, слюной, мочой внешнюю среду. Детям достается возбудитель с грязными руками. До 20% случаев заражения зависят от употребления свинины, говядины.

Мясо может заразить больной человек в процессе транспортировки, хранения, переработки.

Эпидемиологическая диагностика

Диагностика сальмонеллеза учитывает:

клиническое течение и особенности симптоматики;
уточнение очага распространенности;
обследование контактных лиц;
выявление нарушения санитарных норм;
исследование продуктов питания.

Особую опасность представляют групповые случаи заболевания в род. домах, психиатрических стационарах, домах престарелых и инвалидов. Сальмонеллез может привести к прерыванию беременности у будущей матери, смертельному исходу младенцев.

Санитарной службе предоставлены широкие права по проведению расследования для выявления источников инфекции и быстрейшей локализации распространения

Принимаются решения о временном закрытии торговых точек, стационаров или перепрофилизации в инфекционное отделение, обработке помещений дезинфицирующими жидкостями. Виновников наказывают административными мерами, штрафами. От того насколько быстро сделают свою работу эпидемиологи зависит недопущение распространения инфекции на территории.

Клиническая диагностика сальмонеллеза

Клиническая диагностика сальмонеллеза основана на учете специфических симптомов и отличительных признаков с другими похожими заболеваниями.

К типичным признакам сальмонеллеза относятся проявления острого поражения желудка и кишечника:

начало внезапное, тяжесть быстро нарастает;
повышение температуры, озноб;
рвота съеденной пищей и желчью в первые часы заболевания;
головная боль;
максимальная болезненность в эпигастрии при гастритической форме, по ходу кишечника при гастроэнтеритическом течении, в правой подвздошной области в случае гастроэнтероколита;
язык сухой, обложен густым налетом;
скопление газа и урчание в кишечнике;
понос с зеленоватыми фекалиями и зловонным запахом, примесью слизи и крови.

Для детей до года характерны обезвоженность организма, увеличение печени и селезенки, сонливость, вялость из-за токсического воздействия на мозг, возможны судороги.

Яркая клиническая картинка начинается с обычного ощущения слабости

В анализе крови наблюдается значительный лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, рост СОЭ. В большинстве случаев на этой стадии инфекционный процесс может завершиться.

Тяжелое течение (тифоподобное) наблюдается при попадании возбудителя сальмонеллеза в кровяное русло, сопровождается септическим состоянием, выраженной интоксикацией, розеолезной сыпью. Сальмонеллы при этом способны вызывать дистрофию в селезенке и печени, сформировать очаги вторичного гнойного воспаления по всему телу.

Дифференциальная диагностика

Признаки сальмонеллеза важно отличить от очень похожих симптомов дизентерии, холеры, острого аппендицита, тромбоза мезентериальных сосудов, отравления мышьяком и ядовитыми грибами.

Для дизентерии более характерны тенезмы (ложные позывы к дефекации), скудный стул из слизи с кровью, спазм сигмовидной кишки, определяемый пальпаторно в подвздошной области слева, редкая рвота.

К признакам острого аппендицита относятся:

боль начинается в эпигастрии и переходит в подвздошную область справа;
по характеру боль постоянна, не уменьшается после поноса, усиливается при кашле;
наличие симптомов раздражения брюшины;
чаще запор, если понос, то 3–4 раза без примесей;
рвота не всегда, 1–2 раза в начале заболевания;
в крови выраженный лейкоцитоз, при наблюдении усиливается.

Для тромбоза мезентериальных сосудов необходимо следующие сочетание признаков:

пожилой возраст пациента;
наличие выраженного атеросклероза сосудов;
проявления ишемии судя по клинической картине болей в сердце и на ЭКГ;
в отличии от сальмонеллеза боль невыносимая по интенсивности;
отсутствие определенной локализации болей;
жидкий стул без запаха с примесью крови;
вздутие живота;
нет признаков обезвоживания;
нарастающий лейкоцитоз в крови.

При сальмонеллезе рвота появляется одним из начальных симптомов

При отравлении мышьяком наблюдаются:

головные и мышечные боли;
судорожный синдром;
рвота носит упорный характер, ощущается запах чеснока;
в жидком стуле много слизи;
боль в животе без четкой локализации;
сухость, жжение во рту;
металлический привкус;
отечность лица;
выраженный конъюнктивит;
возможны парезы и параличи.

Для отравлений грибами в отличии от сальмонеллеза характерны:

связь с приемом в пищу грибных блюд (перед проявлением симптомов может пройти от одного до трех часов);
бурное начало сразу всех признаков;
боли в животе по типу сильных схваткообразных колик;
тошнота, рвота, бледная поганка вызывает неукротимую рвоту;
слюнотечение;
стул водянистый с кровью;
сильная головная боль, слабость из-за интоксикации;
головокружение, падение артериального давления;
расстройства психики с галлюцинациями, бредом, сопорозным состоянием;
желтушность кожи.

Такое многообразие симптоматики сальмонеллезной инфекции способствует соучастию в процессе диагностики врачей разных специальностей. Сходство признаков часто требует консультации хирурга, кардиолога, у женщин — гинеколога. При этих заболеваниях важным аргументом в пользу сальмонеллеза служат положительные результаты посева, серологических и иммунных тестов.

Читайте также: