Качество дезинфекции по кишечной палочке

Обновлено: 23.04.2024

1. Настоящая методика предназначена для контроля качества проведенной профилактической или вынужденной дезинфекции животноводческих помещений при заболеваниях, возбудители которых относятся к неспорообразующим микробам и к вирусам.

Качество дезинфекции определяется по выделению с поверхностей обеззараживаемых объектов кишечной палочки лактозопозитивной группы (Е. coli commune, citovorum aerogenes) и стафилококка (S. albus, aureus, citreus).

По наличию кишечной палочки определяется качество профилактической и вынужденной дезинфекции при паратифозных инфекциях, роже свиней, бруцеллезе, пастереллезе, чуме свиней, чуме птиц, а при ящуре - текущей дезинфекции.

По наличию стафилококка определяется качество дезинфекции при ящуре (заключительная дезинфекция), оспе овец, оспе птиц, лептоспирозе и туберкулезе и вирусном гепатите утят.

2. Для бактериологического исследования после проведенной дезинфекции пробы берут с 10-20 различных участков (с поверхностей полов, стойл и проходов, с кормушек, со стен и т.п.).

Пробы берут стерильными ватными тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе.

При применении для дезинфекции раствора едкого натра в качестве нейтрализующего раствора берут раствор уксусной кислоты, при дезинфекции формалином - раствор нашатырного спирта, при дезинфекции хлорной известью - раствор гипосульфита и при дезинфекции щелочным раствором формальдегида - раствор, состоящий из растворов уксусной кислоты и нашатырного спирта.

Нейтрализующие растворы готовят в концентрации, в 10 раз меньшей, чем концентрация применяемого дезинфектанта.

При применении для дезинфекции других средств в качестве нейтрализующего раствора используют стерильную обычную воду.

3. После проведения профилактической дезинфекции пробы берут через 2-3 часа после проведения дезинфекции, а после проведения вынужденной дезинфекции (в очагах инфекций) - по истечении срока экспозиции, как указано в соответствующих разделах инструкции по дезинфекции.

4. Пробы, взятые для исследования, каждую в отдельности отмывают во флаконе в 20 мл стерильной нейтрализующей жидкости или воды, как указано в пункте 2, путем нескольких погружений и отжатий тампона. Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют при 3000-3500 об/мин в течение 20-30 минут. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку доливают равное количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют в течение 20 минут. После этого надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата на соответствующие элективные среды делают посевы.

5. Для индикации кишечной палочки пробы высевают на модифицированную среду Хейфеца, по 0,5 мл центрифугата на 5 мл среды. Посев выдерживают в термостате при температуре 43° в течение 12-18 часов.

Наличие кишечной палочки в посеве характеризуется изменением малинового цвета среды в зеленый или салатный, с помутнением среды и газообразованием. Другие цветовые изменения (желтоватый, розовый, сероватый), возникающие при росте посторонних микроорганизмов, не учитываются.

Для индикации стафилококков высевают по 0,5 мл центрифугата в 5 мл 50%-ного сахарозного мясо-пептонного бульона. Через 24 часа инкубирования в термостате при 37° делают пересевы петлей на 8,5%-ный солевой мясо-пептонный агар. Посевы также выдерживают в термостате 24 часа при температуре 37°. Выросшую культуру исследуют под микроскопом.

6. Проведенная дезинфекция признается удовлетворительной, если нет роста тестмикробов в исследованных пробах:

профилактическая - во всех пробах

текущая - не менее чем в 90% проб

заключительная - во всех пробах

Методики приготовления элективных питательных сред

1. Модифицированная среда Хейфеца представляет собой среду, в которой 5 г маннита заменено 4 г лактозы, а рН с 7,0-7,6 доведен до 7,4-7,8*.

Для приготовления среды к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть в пределах 7,4-7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикаторов 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини.

Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 минут или в аппарате Коха при температуре 100° в течение 20 минут. Исходный цвет среды - красновато-сиреневый.

2. Сахарозный мясо-пептонный бульон. К обычному мясо-пептонному бульону с рН 7,2-7,6 добавляют 50% сахарозы и подогревают до полного ее растворения. После этого сахарозный бульон разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут.

3. Солевой мясо-пептонный агар. К мясо-пептонному агару добавляют 8,5% хлористого натрия. Затем среду стерилизуют при 1,5 атм. 30 минут. Перед использованием среду расплавляют и разливают в чашки Петри с соблюдением условий стерильности.

С изданием настоящей инструкции отменяются:

1. Указания по дезинфекции, дезинсекции, дератизации и дезинвазии в животноводческих хозяйствах, утвержденные Ветуправлением Главживупра Министерства сельского хозяйства и заготовок СССР 25 апреля 1953 г.

2. Временное наставление по применению однохлористого йода, утвержденное Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23 января 1962 г.

3. Наставление по применению ксилонафта (дезинфекционного препарата N 5), утвержденное Госинспекцией по ветеринарии МСХ СССР 21 июня 1960 г.

4. Наставление по проведению аэрозольной дезинфекции животноводческих и птицеводческих помещений, утвержденное Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 29 апреля 1962 г.

5. Дополнение к Указаниям по дезинфекции от 25 апреля 1953 г. о проведении дезинфекции при роже свиней и листериозе, утвержденное Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 9 августа 1962 г.

6. Указание Главного управления ветеринарии МСХ СССР от 24 июля 1965 г. N 31-6/1 о порядке применения для целей дезинфекции сухого порошкообразного формалина.

7. Наставление по применению каустифицированной содо-поташной смеси для дезинфекции в ветеринарии, утвержденное Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 15 июня 1967 г.

8. Временное указание по применению аэрозольного способа для борьбы с амбарными вредителями и наружными паразитами с.-х. животных, утвержденное МСХ СССР 27 мая 1952 г. (Раздел "Применение аэрозольного способа для борьбы с паразитами с.-х. животных").

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Пробы берут стерильными ватными тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе.

профилактическая - во всех пробах

текущая - не менее чем в 90% проб

заключительная - во всех пробах

Методики приготовления элективных питательных сред

С изданием настоящей инструкции отменяются:

Контроль качества проведенной дезинфекции животноводческих помещений должен проводиться после профилактической, текущей и заключительной дезинфекции при заболеваниях, возбудители которых относятся к неспорообразующим микробам и вирусам. По наличию кишечной палочки определяется качество профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции при сальмонеллезе, роже свиней, бруцеллезе, ящуре (текущей дезинфекции), чуме свиней и птиц. По наличию стафилококка определяется качество дезинфекции при оспе овец и птиц, лептоспирозе, туберкулезе, вирусном гепатите утят и при ящуре --- после заключительной дезинфекции.

Для бактериологического исследования после проведенной дезинфекции пробы берут с 10 - 20 различных участков (с поверхностей полов, стен, кормушек, стойл и проходов и т. п.) стерильными ватными тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе. При применении для дезинфекции растворов щелочей в качестве нейтрализующего раствора берут раствор уксусной кислоты, при дезинфекции формалином -- раствор нашатырного спирта, при дезинфекции окислителями (хлорная известь) раствор гипосульфита, при дезинфекции щелочным раствором формальдегида -- раствор, состоящий из уксусной кислоты и нашатырного спирта. Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньшей, чем концентрации дезинфицирующего раствора. При применении для дезинфекции других средств, в качестве нейтрализующего раствора используют обычную стерильную воду.

После проведения профилактической дезинфекции пробы берут через 2--3 часа после проведения дезинфекции, и после проведения текущей дезинфекции -- по истечении срока экспозиции, как указано в инструкциях по дезинфекции при отдельных заболеваниях.

Пробы, взятые для исследования, каждую в отдельности отмывают во флаконах в 20 мл стерильной нейтрализующей жидкости или воды путем нескольких погружений и отжатий тампона. Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют при 3000--3500 об/мин, в течение 20--30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, к осадку в пробирку доливают равное количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют в течение 20 мин. После этого надосадочную жидкость снова сливают, а осадок высевают на соответствующие питательные среды.

Для индикации кишечной палочки пробы высевают на модифицированную среду Хейфеца по 0,5 мл центрифугата на 5 мл среды. Посев выдерживает в термостате при температуре 43°С в течение 12--18 часов. Наличие кишечной палочки в посеве характеризуется изменением малинового цвета среды на зеленый или салатный с помутнением среды и газообразованием. Другие цветовые изменения (желтоватый, розовый, сероватый), возникающие при росте посторонних микробов, не учитываются.

Для индикации стафилококков высевают по 0,5 мл, центрифугата в 5 мл 50-процентного сахарного мясопептонного бульона. Через 24 часа после инкубирования в термостате при 37°С делают пересевы на 8,5%-ный солевой мясопептонный агар. Посевы также выдерживают в термостате 24 часа при температуре 37°С. Выросшую культуру исследуют под микроскопом.

Проведенная дезинфекция признается удовлетворительной, если нет роста тест микробов в исследуемых пробах:

профилактическая -- во всех пробах;

текущая -- не менее чем в 90% проб;

заключительная -- во всех пробах.

Питательные среды, используемые при контроле качества дезинфекции

1. Модифицированная среда Хейфеца. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть в пределах 7,4---7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки но 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 минут. Исходный цвет среды-- красновато-сиреневый.

Сахарный мясопептонный бульон. К обычному мясопептонному бульону с рН 7,2--7,6 добавляют 50% сахарозы и подогревают до полного ее растворения. После этого сахарозный бульон разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут.

Солевой мясопептонный агар. К мясопептонному агару добавляют 8,5% хлористого натрия, затем среду стерилизуют при 1,5 атм. 30 минут. Перед использованием среду расплавляют и разливают в чашки Петри с со-блюдением стерильности.

Самостоятельная работа студентов (2 часа)

Цель занятия: научить студентов методам проверки качества дезинфекций

Место занятия: аудитория кафедры.

Обеспечение занятия: исходная суточная бульонная культура кишечной палочки, дощатые и кирпичные объекты (поверхности кирпича и доски), 1 и 2%-ные растворы едкого натрия, 0,1 и 0,2%-ные растворы уксусной кислоты, ватные тампоны, центрифуга с пробирками, стерильные пинцеты, кипяченая (стерильная) вода, платиновые петли, спиртовки, питательные среды Хейфица.

Ход занятия: лаборанты кафедры предварительно инфицируют поверхность (двух досок и кирпичей) суточной бульонной культурой кишечной палочки, после высыханий поверхности досок (кирпичей) проводят дезинфекцию одной доски (кирпича) 1%-ным, а другой доски (кирпича) 2%-ным горячим (70--80°) раствором едкого натрия из расчета 1 л раствора на 1 кв. м поверхности.

Методика бактериологического контроля качества дезинфекции

Культуры просматриваются студентами на следующем занятии. Наличие кишечной палочки в посеве характеризуется изменением малинового цвета на зеленый или салатный, с помутнением среды и газообразованием. Другие цветовые изменения (желтоватый, розовый, сероватый) не учитываются. При профилактической дезинфекции роста кишечной палочки не должно быть во всех пробах.

Бактериологический метод. Бактериологическим методом контролируют качество дезинфекции помещений при болезнях, вызываемых бактериальной и вирусной микрофлорой. По наличию кишечной палочки определяют качество профилактической и вынужденной дезинфекции при сальмонеллезах, роже и чуме свиней, бруцеллезе, чуме птиц, текущей — при яшуре; по наличию стафилококков — при оспе овец и птиц, лептоспирозе, туберкулезе, вирусном гепатите утят и при ящуре после заключительной дезинфекции.

Стерильные ватные тампоны массой 0,25. 0,33 г помешают в колбочки со стерильным нейтрализующим раствором, концентрация которого в 10 раз меньше концентрации дезинфектанта. Если в качестве дезинфектанта применяли хлорсодержащие средства, для нейтрализации используют раствор тиосульфата натрия, если щелочные—раствор уксусной кислоты; для формальдегидсодержащих препаратов используют нашатырный спирт; при отсутствии специфического нейтрализатора (фенолсодержащие препараты и др.) — стерильную воду.

Через 2. 3 ч после окончания профилактической дезинфекции или по истечении определенной экспозиции при вынужденной дезинфекции пробы берут с 10. 20 различных участков (пола, стен, углов, кормушек, оборудования).

Скальпелем, мелом или с помощью трафарета намечают квадраты размером 10 х 10см и протирают их в течение 1. 2мин ватным тампоном, хорошо отжатым в колбочке. Тампон кладут обратно в колбочку с нейтрализующим раствором или стерильной водой (объем 20 мл) и не позднее чем через 2 ч доставляют в лабораторию с документом, в котором указывают: название и адрес хозяйства, вид животных, диагноз, дату заболевания, дату наложения карантина или ограничений, дату и время дезинфекции, дату и время взятия проб, санитарное состояние помещений, качество механической очистки, должность и подпись лица, взявшего пробы для исследования.

Пробы в лаборатории исследуют в день их поступления. Тампон тщательно отжимают в той же колбочке, где он находился, и удаляют, жидкость центрифугируют при 3000. 3500 мин~1 в течение 20. 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют такое же количество стерильной воды и после 20-минутного центрифугирования при указанном режиме снова удаляют надоса-дочную жидкость, а центрифугат исследуют бактериологическим методом с использованием элективных питательных сред.

Для идентификации кишечной палочки пробы (0,5 мл) высевают на модифицированную среду Хейфеца (5 мл) и выдерживают в термостате при 43 °С в течение 12. 18 ч. Помутнение среды Хейфеца и изменение ее цвета после инкубирования в термостате из малинового в зеленый или салатный при газообразовании свидетельствует о наличии в посевах кишечной палочки. Другие цветовые изменения среды, обусловленные ростом другой микрофлоры, не учитывают.

Для идентификации стафилококков центрифугат (0,5 мл) высевают в 5%-й сахарозный бульон (5 мл) с, последующим пересевом через 24ч инкубации в термостате при 37 °С на 8,5%-й солевой МПА и снова выдерживают 24 ч при той же температуре. Выросшую на питательных средах бактериальную культуру исследуют под микроскопом.

Дезинфекцию признают удовлетворительной, если бактериального роста нет при профилактической дезинфекции во всех пробах; текущей — не менее чем в 90 % проб; заключительной — во всех пробах.

При контроле качества дезинфекции используют элективные питательные среды следующего состава.

Модифицированная среда Хейфеца. К 1л. дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть в пределах 7,4. 7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5%-го спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-го водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,05 МПа 15 мин. Исходный цвет среды красновато-сиреневый.

Сахарозный МПБ. К обычному МПБ рН 7,2. 7,6 добавляют 5 % сахарозы и подогревают до полного ее растворения. Сахарозный бульон разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,05 МПа 20 мин.

Солевой МПА. К МПА добавляют 8,5 % хлорида натрия и стерилизуют при 0,05МПа 30 мин. Перед использованием среду расплавляют и разливают в чашки Петри с соблюдением стерильности.

Метод индикаторных трубок. Качество аэрозольной дезинфекции наряду с бактериологическим можно контролировать и другим, менее трудоемким методом, принцип которого заключается в следующем: об эффективности обеззараживания объекта судят по глубине изменения цвета индикаторной среды, пробирку с которой помещают на поверхности объекта. Индикаторная среда изменяет свой цвет под воздействием формальдегида, который применяют при аэрозольной дезинфекции.

Глубина окрашивания среды зависит от концентрации формальдегида в воздухе и на поверхности объекта, времени, в течение которого трубка находилась в помещении, обработанном аэрозолем, а также окружающей температуры: чем выше температура, тем больше глубина окрашивания.

Индикаторные трубки — это стеклянные трубочки длиной 40. 50 мм и диаметром 5. 6 мм, запаянные с одного конца. В трубки до уровня их обреза наливают индикаторную среду (сульфатную среду или среду Эндо), заливают расплавленным парафином, хранят при температуре О. 5 °С до 1 мес.

Сульфатная среда. Агар-агар — 2 %, сульфат натрия кристаллический — 1 %, 0,1 н. раствор серной кислоты — 2. 4 капли, дистиллированная вода—96,5%. Кипятят и разливают по пробиркам. Среда бесцветная. Под воздействием формальдегида приобретает малиновое окрашивание.

Среда Эндо. Из сухой среды готовят 2%-ю водную взвесь, доводят до кипения, фильтруют через ватный фильтр и разливают по пробиркам. Под воздействием формальдегида среда приобретает красно-фиолетовое окрашивание.

Перед аэрозольной дезинфекцией 10. 15 индикаторных трубок без парафиновых колпачков закрепляют с помощью пластилина открытым концом вверх на стенах, полу, потолке, оборудовании.

Качество дезинфекции оценивают через 12 или 24ч экспозиции, измеряя линейкой глубину окрашивания индикаторной среды в пробирке.

Дезинфекцию считают эффективной, если глубина окрашивания после 24-часовой экспозиции будет не менее 30 мм для сульфатной среды и 26 мм для среды Эндо.

Контроль качества дезинфекции проводится с целью определения полноты обеззараживания продезинфицированного объекта, правильности выбора методов дезинфекции и своевременности ее проведения.

Контролю подлежат дезрастворы и дезинфекционные камеры, продезинфицированные объекты методы и способы воздействия дезраствора на возбудителей, обсеменяющих дезинфицируемые объекты.

Контроль качества дезинфекции проводится как при проведении текущей дезинфекции, так и при проведении очаговой заключительной дезинфекции.

Контроль дезинфекционных мероприятий осуществляют дезинфекционные станции, отделы очаговой и профилактической дезинфекции СЭС, бактериологические лаборатории лечебно – профилактических учреждений.

Методы контроля по качеству дезинфекционных мероприятий излагаются в инструктивно – методических материалах и справочниках.

Качество дезинфекционных мероприятий определяется контролем, проводимым визуально, химическим и бактериологическим методами.

Визуальный (эпидемиологический) контроль – это контроль, который дает возможность установить уничтожены ли все пути передачи возбудителя инфекции.

При визуальном контроле выясняют санитарное состояние обеззараживаемых объектов, своевременность и полноту проведения дезинфекционных мероприятий, правильность выбора объектов и методов Обеззараживания, качество обеззараживания поверхностей помещений, отдельных вещей, предметов обстановки и объектов. Проверяют правильность отбора вещей, взятых для камерной дезинфекции, правильность обеззараживания белья, посуды, выделений больного.

При химическом контроле проводится проверка содержания активнодействующих веществ в препаратах и рабочих растворах, соответствие концентраций растворов, предусмотренных нормативными документами, правильности хранения дезинфицирующих средств.

Для правильного заключения о качестве проводимых дезинфекционных обработок необходимо пробы (не менее 10) брать из разных мест.

При отборе проб каждая проба сопровождается этикеткой с указанием даты взятия пробы, даты приготовления дезинфекционного раствора, его концентрации и условий хранения дезинфицирующего препарата.

При контроле заключительной дезинфекции отбор проб для химического анализа берется в очаге инфекции из более концентрированных растворов дезинфицирующих препаратов.

Обнаружение во взятых пробах активнодействующего вещества в меньшем количестве, чем требуется, является доказательством некачественного проведения дезинфекции.

При обнаружении в работе нарушения регламента проведения дезинфекции назначается повторная дезинфекция.

Бактериологический контроль имеет основное значение. Бактериологический контроль дезинфекции в очагах кишечной инфекции проводят путем обнаружения кишечной палочки, воздушно – капельных инфекций путем обнаружения стафилококка, в очагах туберкулеза – стафилококка и микобактерий туберкулеза.

Пробы отбирают не позже 30 45 минут по окончании дезинфекции очага. В лабораторию пробы должны быть доставлены не позже 2-х часов после взятия проб.

При профилактической дезинфекции отбор проб проводят с чистых предметов.

При текущей и заключительной дезинфекции в квартирных очагах берутся не менее 10 контрольных смывов, в детских и лечебно – профилактических учреждениях – не менее 30. Каждый смыв должен быть сделан с площади не менее 200 – 300 кв.см. на 2 – 3 смежных участках обследуемого объекта.

При контроле качества дезинфекции пробы берут со столовой и чайной посуды, вилок, ножей, с обеденного стола, игрушек, ручек дверей жилых комнат, палат, ручек сливного бачка и дверей туалетов, водопроводных кранов, выключателей, постельного и нательного белья, матрацев, подушек. Бактериологическому контролю подвергаются ветошь для мытья посуды и уборки, ванны, мочалки, щетки. В медицинских лечебных учреждениях смывы берутся также с рук и халатов медицинского персонала.

В пищеблоках больниц и детских учреждений смывы берут со столовой посуды, тазов для готовой продукции, ножей для варенного мяса, вареных овощей, раздаточных столов и подоконников, мясорубок для варенного мяса, Дуршлагов, водопроводных кранов, рук и халатов работников пищеблока.

Взятие смывов осуществляют стерильными ватными тампонами, смоченными в 1% растворе натрия тиосульфата или в среде обогащения.

Для этого заранее готовят ватные тампоны на палочках, вмонтированных в ватные пробки и вставленных в пробирки. Пробирки с ватными тампонами стерилизуют. Параллельно в пробирки разливают по 5 мл 1% раствор натрия тиосульфата или жидкой среды обогащения и также стерилизуют.

При отборе проб тампон вынимают из стерильной пробирки, смачивают в растворе тиосульфата или в среде обогащения и смоченным тампоном протирают обследуемый объект, после чего тампоном производится посев на питательную среду.

Посев регистрируется под соответствующим номером в журнале, где сообщается фамилия, имя, отчество больного, его адрес и возраст, дата заболевания и диагноз, дата и время отбора контрольных проб, место и способ дезинфекции, номер наряда и фамилии дезинфекторов.

Смыв с каждого объекта производится отдельным тампоном.

Посев на стафилококк, кишечную палочку и микобактерии производится по общепринятым методикам.

Текущая дезинфекция считается качественной, если с обеззараженных предметов не высеваются микроорганизмы.

Положительная оценка качества заключительной дезинфекции при кишечных инфекциях дается в случае полного отсутствия роста 5кишечной палочки во всех пробах, при капельных инфекциях – отсутствие стафилококка, при туберкулезе – отсутствие роста стафилококка и микобактерий туберкулеза.

Читайте также: