Как обнаружить трихинеллез в микроскопе

Обновлено: 24.04.2024

Сайт предоставляет справочную информацию. Адекватная диагностика и лечение болезни возможны под наблюдением добросовестного врача. У любых препаратов есть противопоказания. Необходима консультация специалиста, а также подробное изучение инструкции!

Трихинеллез — это гельминтозное заболевание, которое вызывается червем-нематодой небольших размеров. Самка червя откладывает личинки, которые попадают в мышцы зараженного человека, растут и развиваются в них, а позже приобретают спиралевидную форму и покрываются капсулой (примерно на 3 – 4 неделе заболевания).

Возбудитель

Распространенность трихинеллеза

Трихинеллез представляет собой биогельминтоз (заболевание, которое вызывается паразитическими червями-трихинеллами). Он может поражать человека или животных.

Трихинеллез распространен среди таких животных, как медведи, барсуки, кабаны, лисицы, волки. Иногда личинки трихинелл заражают домашних свиней. Это случается, когда свиньи поедают мясо падших животных или крыс.

высокая восприимчивость человеческого организма к возбудителю;
нестойкий иммунитет: после перенесенного трихинеллеза формируется иммунитет, но он достаточно слаб и непродолжителен, что способствует повторным возникновениям заболевания;
высокая распространенность во всех климатических зонах: трихинеллы способны хорошо переносить высокие и низкие температуры;
часто встречаются групповые вспышки: например, начинают болеть все члены семьи, употребившие зараженное мясо.

Подпишитесь на Здоровьесберегающий видеоканал

Способы заражения трихинеллезом

Заражение происходит перорально, то есть через пищу. Личинки попадают в организм человека при употреблении мяса зараженных животных: свиней, тюленей, медведей, кабанов. Особенно опасно сырое, вяленое, не до конца проваренное мясо.

Развитие трихинеллеза в организме человека после заражения:

Время с момента заражения	Процесс
1 – 1,5 часа	Освободившаяся от капсулы личинка внедряется в слизистую оболочку желудка или двенадцатиперстной кишки и расположенную под ней соединительную ткань.
1 сутки	Личинка превращается в зрелого червя.
3 – 4 сутки	Зрелая самка червя откладывает личинки (одна самка способна произвести на свет от 100 до 2000 новых червей). Личинки попадают в кровеносные сосуды и доставляются с током крови в мышцы.
42 – 56 суток	Время, в течение которого взрослая самка червя способна откладывать личинки.
17 – 18 сутки с момента отложения самкой личинок	Личинки созревают в мышцах и становятся заразными для нового хозяина.
3 – 4 неделя с момента отложения самкой личинок	Личинка покрывается капсулой. Спустя год происходит обызвестление капсул.
10 – 40 лет	Это срок, в течение которого личинка в виде капсулы способна сохраняться в мускулатуре хозяина.

Клинические признаки трихинеллеза

Сами личинки червя не вызывают в организме патологических изменений. Она находится в мышечной ткани, не причиняя ей никакого вреда. Но белки, из которых состоит их тело, являются сильными аллергенами. В организме развивается сильная аллергическая реакция, в результате которой поражаются суставы, сосуды.

Инкубационный период Трихинеллеза

Продолжается в течение 5 – 30 суток (иногда дольше). В среднем — 10 – 25 суток. При этом пациент не отмечает никаких симптомов. Трихинеллез может протекать в легкой или тяжелой форме. Чем тяжелее течение, тем дольше инкубационный период.

Период разгара

По своим проявлениям трихинеллез может напоминать инфекционное заболевание, миозит (воспаление мышц), аллергическую реакцию. Поэтому на первых стадиях пациент может не подозревать о том, что у него паразитарное заболевание.

Миокардит — воспалительное заболевание сердечной мышцы, которое в данном случае имеет аллергическую природу и связано с чрезмерной реакцией иммунной системы. Миокардит является самой распространенной причиной гибели пациентов.
Поражение легких — пневмония. Это эозинофильная пневмония — она вызвана скоплением в легочной ткани аллергических клеток — эозинофилов. Иногда гона осложняется плевритом (воспалением плевры — тонкой оболочки из соединительной ткани, которая выстилает грудную полость и покрывает легкие), состояниями, напоминающими бронхиальную астму.
Менингоэнцефалит — воспалительный процесс в головном мозге и его оболочках.
Гепатит— воспалительное поражение иммунными клетками печени.
Нефрит — воспалительное поражение почек.
Сильные мышечные боли в сочетании с нарушением подвижности или полной обездвиженностью больного.

При благоприятном течении заболевания выздоровление наступает в течение 5 – 6 недель с момента появления первых симптомов заболевания.

Диагностика трихинеллеза

Общий анализ крови

В крови человека присутствует несколько разновидностей белых кровяных телец — лейкоцитов, — каждая из которых выполняет собственные функции. Эозинофилы — разновидность лейкоцитов, которая принимает участие в аллергических реакциях. Во время трихинеллеза, сопровождающегося аллергией, их содержание в крови очень высоко. Это выявляется при помощи общего анализа крови.

увеличение общего количества лейкоцитов, что свидетельствует о воспалительном процессе и активации защитной системы организма;
повышение содержания аллергических белых кровяных телец — эозинофилов, которые в разгар заболевания составляют 50 – 80% от общего количества лейкоцитов.

Серологическая диагностика

Представляет собой обнаружение антител, которые вырабатываются в организме больного в ответ на внедрение паразитов. Для этого используют реакцию крови с антигенами, полученными из личинок трихинелл.

Виды серологической диагностики при трихинеллезе:

Аббревиатура	Расшифровка	Суть
РСК	Реакция связывания комплемента	Если в крови больного есть антитела, то они соединяются с антигеном и присоединяют к себе молекулу комплемента — особого вещества, участвующего в иммунных реакциях. В этом случае реакция будет считаться положительной.
РНГА	Реакция непрямой гемагглютинации	Основана на способности эритроцитов склеиваться между собой, когда на их поверхности находится антитело и антиген.
ИФА	Иммуноферментный анализ	Проводят реакцию между антителами и антигенами. В качестве метки, позволяющей оценить результат, служат особые ферменты.
РИФ	Реакция иммунофлюоресценции	В материале есть специальная метка, которая приводит к свечению после того, как антитело прореагирует с антигеном.
РЭМА	Реакция энзим-меченых антител.	Оценить результат позволяет специальная метка, в качестве которой выступает фермент.

Внутривенная аллергическая проба

При помощи этого анализа выявляют аллергическую реакцию, которая развивается в ответ на присутствие трихинелл. Пациенту под кожу вводят раствор с антигенами. На месте укола должно появиться покраснение и волдырь.
Внутривенная аллергическая проба позволяет выявить заболевание, начиная со второй недели. В дальнейшем результат будет положительным еще в течение 5 – 10 лет.

Биопсия мышц

Если трихинеллез не удается выявить другими способами, то врач может назначить биопсию - исследование под микроскопом небольшого кусочка пораженной мышцы, который был взят при помощи иглы.

Исследование мяса больных животных

Для подтверждения диагноза может применяться исследование мяса больного животного, которое пациент ел до того, как заболеть. Под микроскопом хорошо видны капсулы, образованные личинками трихинелл.

Лечение трихинеллеза

в течение первых трех дней – по 100 мг 3 раза в день;
последующие 10 дней – по 500 мг 3 раза в день.

в течение первых трех дней – по 100 мг 2 – 3 раза в день;
затем в течение 10 дней по 500 мг 3 раза в день.

Если болезнь сопровождается сильным поражением мышц и обездвиженностью, то пациент, прикованный к постели, нуждается в тщательном уходе. После выздоровления проводится реабилитационное лечение, включающее массаж и физиотерапию. Оно направлено на восстановление мышечной подвижности.

При развитии осложнений параллельно с основным лечением назначают витамины, препараты, улучшающие циркуляцию крови в мелких сосудах, лекарственные средства, которые защищают от патологических воздействий клетки печени (при гепатите), головного мозга (при менингоэнцефалите).

Профилактика трихинеллеза

Тщательная готовка мяса домашних животных, особенно свиней. Кусок мяса должен нагреться внутри до 74°С и более в течение не менее чем 15 секунд. При этом личинки, которые находятся в нем, погибают. Но, если вокруг личинки уже имеется обызвествлевшая капсула, то нагревание не способно ее уничтожить. Это происходит в том случае, если животное больно достаточно давно.
Заморозка — более эффективное мероприятие. Личинок в мясе можно уничтожить, если заморозить его до –15°С в течение 20 дней или до –20°С в течение трех дней.
Уход за свиньями. Эта рекомендация касается фермеров и сельских жителей, которые разводят домашних животных на мясо. Нельзя допускать, чтобы свиньи поедали мертвых крыс. Это достигается при помощи специальных мер дератизации — борьбы с грызунами.
Тщательное приготовление дичи. Мясо диких животных более опасно в плане заражения трихинеллезом, чем домашних. Причем, в медведях, тюленях, барсуках и пр. паразитируют черви, которые отличаются от живущих в свиньях. Их невозможно уничтожить даже при очень длительном замораживании. Большое значение имеет именно термическая обработка высокими температурами. Обнаружение разновидностей трихинелл, которые паразитируют только на птицах, свидетельствует о том, что мясо дикой птицы тоже может быть опасным в плане заражения.

Массовые мероприятия по профилактике вспышек трихинеллеза

Этими вопросами занимается Роспотребнадзор. Должен проводиться постоянный контроль санитарных условий, в которых содержатся сельскохозяйственные животные.

Какие симптомы трихинеллеза на разных стадиях болезни?

Симптомы трихинеллеза на ранней стадии зависят от количества попавших в организм гельминтов. В дальнейшем состояние больного будет зависеть от количества личинок, мигрировавших в мышцы, и особенностей иммунитета. Так, большинство опасных для жизни осложнений трихинеллеза (миокардит, пневмония, гепатит, нефрит) связано именно с патологической иммунной реакцией, а не с деятельностью самих паразитов.

1-я неделя после заражения. Признаки болезни связаны с проникновением гельминтов в тонкий кишечник и последующим воспалением кишечной стенки. Освободившаяся от оболочки личинка спускается в тонкий кишечник и там превращается во взрослую особь. Одним концом она вгрызается в слизистую оболочку кишки, другой остается в просвете кишечника. В этот период паразиты достигают половой зрелости, и оплодотворенные самки рожают новое поколение личинок. Взрослые трихинеллы живут в кишечнике не более 55 дней, за этот период каждая самка производит на свет до 1500 личинок. Симптомы ранней стадии:

понос или запор;
боли в животе в области пупка;
тошнота;
рвота;
потеря аппетита.

постепенное восстановление функций внутренних органов на протяжении 2-3 недель;
боли в мышцах исчезают через 1-2 месяца;
эозинофилия продолжается на протяжении 3-х месяцев.

лихорадка;
повышение уровня эозинофилов в крови;
периорбитальный отек – припухлость вокруг глаз.

Как проверить мясо на трихинеллез?

Личинки трихинелл обнаруживают у домашних свиней, лошадей, диких кабанов, лосей, медведей, лис, барсуков, моржей, тюленей, кошек, собак, диких птиц и грызунов разных видов. Поэтому необходимо проверять на трихинеллез мясо диких и домашних животных, которое употребляется в пищу. В эпидемическом плане наибольшую опасность представляют:

свинина;
мясо дикого кабана;
медвежатина.

Зараженное мясо может содержать до 200 личинок в 1 г. При этом оно ничем не отличается по консистенции, внешнему виду, цвету и запаху от мяса здоровых животных. Личинки обнаруживаются только под микроскопом при лабораторном исследовании. Мясо, которое прошло трихинеллоскопию, имеет соответствующее клеймо на туше.

Где можно проверить мясо на трихинеллез? Такими исследованиями занимается ветлаборатории, которые есть на рынках, или лаборатория санэпидстанции. Для отбора проб лучше привести всю тушу. Для исследования берут образцы мяса весом не менее 5г с разных участков туши животного. Наиболее тщательно исследуют участки, в которых лучше всего развито кровообращение: межреберные мышцы, диафрагма, язык и жевательные мышцы.

При обнаружении хотя бы одной трихинеллы вся туша считается непригодной в пищу и подлежит уничтожению.

Несмотря на ветеринарный контроль, зараженное мясо и изделия из него можно встретить в местах стихийной торговли или на рынках, особенно в осенне-зимний период, когда происходит массовый забой скота, и в охотничий сезон.

Американские исследователи предупреждают, что даже самая тщательная трихинеллоскопия может не выявить гельминтов. По статистике, 30% случаев заболевания вызваны употреблением проверенного мяса, поэтому мы рекомендуем в любом случае длительно проваривать и протушивать мясо. Особенно это касается дичи, так как в некоторых эндемических районах заражены 100% диких животных.

Как готовить мясо, чтобы исключить заражение трихинеллезом?

Личинки трихинелл, находящиеся в мышцах животных, покрыты плотной капсулой из соединительной ткани и известковых солей. Эта оболочка надежно защищает паразитов от воздействия высоких и низких температур. К сожалению, далеко не всегда сельские жители, заколовшие свинью, или охотники, подстрелившие кабана, отдают мясо на экспертизу. Поэтому очень важно знать, как правильно готовить мясо.

Основное правило - в толще мяса температура должна достигнуть 80°С, в таком случае трихинеллы гибнут на протяжении 15 минут.

Как готовить мясо, чтобы исключить заражение трихинеллезом?

Варить мясо кусками не больше 8 см на протяжении 2,5 часов.
Обжаривать небольшими кусочками (2,5 см), а после протушивать мясо на протяжении 1,5 часов.
Наружный жир (сало) разрешено употреблять только после топления.

1. Сырое сало и мясо
2. Бифштексы с кровью
3. Домашние колбасы
4. Копченое и вяленое мясо
5. Запеченный окорок
6. Соленое мясо
7. Замороженное мясо (трихинеллы гибнут при -27°С на протяжении 20-30 суток)
8. Сырокопченую колбасу
9. Пельмени, беляши, котлеты

Как лечить трихинеллез народными средствами?

Лечение трихинеллеза народными средствами не в состоянии избавить от личинок, находящихся в толще мышц. Лекарственные травы воздействуют на взрослых трихинелл, находящихся в кишечнике, а также помогают снизить интоксикацию на начальных стадиях болезни.

Отвар пижмы. 2 столовых ложки измельченных цветков пижмы заливают 500 мл воды и проваривают на слабом огне 10 минут, охлаждают 1 час, процеживают. Полученный отвар принимают натощак за 30 минут до еды 3 раза в день на протяжении месяца. Это средство губительно действует на гельминтов, нормализует желчеотделение и улучшает состояние кишечника.
Масло расторопши. Масло применяют по 1 чайной ложке 3 раза в день во время еды. Курс лечения 1 месяц. Масло способствует выведению токсинов, улучшает работу печени и ускоряет восстановление тонкого кишечника, поврежденного трихинеллами.

Как проявляется трихинеллез у детей?

Ребенок заражается, съев плохо прожаренное или проваренное мясо, причем достаточно даже небольшого кусочка 10-15 г. Инкубационный период трихинеллеза у детей длится 5-45 суток, и чем короче срок от заражения до появления симптомов, тем тяжелее будет протекать заболевание.

Легкая форма трихинеллеза у детей. Симптомы держатся 7-14 суток. Незначительные боли в мышцах продолжаются еще 7-10 дней после выздоровления.

Трихинеллез — опасный антрозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами 2 видов (Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis), протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина — половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная — в мышечной ткани.

Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны, а также лошади.

Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полтуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.

При послеубойной диагностике трихинеллеза используют 2 метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом имму-ноферментного анализа (ИФА).

Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.

Шпик (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.

Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.

Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

Правила отбора проб мышечной ткани для исследования натрихинеллез

Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии — части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих — мышцы кончика языка и глаза, от туш конины — мышцы языка или массетера, ножки диафрагмы (относятся к наиболее поражаемым).

Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.

Пробы шпика соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.

Пробы копченостей отбирают от 3% упаковочных единиц, делая по 10-15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихи-неллоскопии, исследуют следующим образом: от 3% упаковочных единиц берут по 10-15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.

В партии импортной свинины (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10% единиц продукции, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования — не менее 25 г.

В партии импортной свинины в блоках исследуют не менее 1% мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.

Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

Методы исследования мяса на трихинеллез

Микроскопическое исследование (компрессорная трихинеллоскопия)

При исследовании мяса и мясопродуктов в зависимости от эпизоотической и эпидемиологической ситуаций на конкретной территории приготавливают от 24 до 96 срезов мышечной ткани: из кусочков отобранных мышц изогнутыми глазными ножницами по ходу мышечных волокон делают срезы величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессори-ума. Срезы накрывают вторым стеклом, завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.

При исследовании шпика с прослойками мышечной ткани из каждого куска делают 24 среза мышц, помещают в чашку Петри с 0,5 см 3 1%-ного раствор фуксина в 5%-ном растворе едкого натра на 5-8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают.

Срезы исследуют под малым увеличением (8 х 10) с помощью микроскопа или проекционного трихинеллоскопа.

При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл.

Нормально инкапсулированные трихинеллы (одна или несколько) спиралеобразно свернуты и заключены в полость, окруженную капсулой. Внутри такой полости содержится прозрачная жидкость. Форма капсулы может быть различной в зависимости от вида инвазированного животного: округлой, овальной, грушевидной, лимонообразной, веретенообразной (рис. 7). В волокнах, смежных с полостью трихинеллы, поперечная исчерченность исчезает.

Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах, и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей срезы.

При длительном нахождении трихинелл в мышечных волокнах они подвергаются дегенеративным изменениям: обызвествлению и прорастанию соединительной тканью. Обызвествление начинается с полюсов капсулы (рис. 8), при сильном обызвествлении образуются сплошные конкременты.

а б в

Рис. 7. Личинки трихинелл в мышцах: а — свиньи; б — лисицы; в — медведя

Рис. 8. Обызвествление капсул трихинелл

Для просветления обызвествленных капсул срезы мышц помещают в чашку Петри с 5-10%-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 20-30 мин. Затем срезы переносят на ком-прессориум и просматривают.

В соленом, мороженом и копченом мясе и шпике обычно происходит обызвествление капсул и дегенеративные изменения трихинелл, что значительно затрудняет диагностику. Поэтому трихинеллоскопию вышеуказанного материала проводят с использованием методов специальной обработки срезов.

Трихинеллоскопия солонины

Так как мышечная ткань соленого мяса обычно более плотная, мышечные срезы из солонины делают вдвое тоньше обычного. Срезы раздавливают между стеклами компрессориума, после чего снимают верхнее стекло и пипеткой наносят на каждый срез каплю глицерина, разведенного пополам с водой, или каплю 5%-ного раствора молочной кислоты. Срезы обрабатывают в течение 1 мин, после чего накладывают верхнее стекло и исследуют обычным методом. При обызвествлении капсулы или самого паразита (известковые конкременты) при трихинеллоскопии видны зернистые помутнения капсулы или темные массы извести. Для растворения последней срезы помещают на 2-3 ч в 10%-ный раствор соляной кислоты, после чего можно обнаружить живых паразитов или остатки их тел. Если исследуемый материал очень твердый, то срезы делают острым ножом (бритвой) или размягчают мышечные волокна нагреванием кусочков мяса на часовом стекле с 5%-ным раствором едкого калия до температуры не выше 45 °С в течение 10 мин. После этого препараты обрабатываются глицерином по описанной выше методике.

Трихинеллоскопия мороженой свинины

Перед исследованием мороженую свинину оттаивают. Из нее готовят срезы толщиной не более 1,5-2 мм. Их кладут на стекло, сверху покрывают вторым стеклом и сжимают с таким расчетом, чтобы вытек лишний мясной сок. После этого верхнее стекло снимают и на каждый срез пипеткой наносят одну каплю 0,5%-ного раствора соляной кислоты или раствора метиленового голубого (0,5 см 3 насыщенного спиртового раствора метиленовой синьки на 10 см 3 дистиллированной воды). Обработанные срезы покрывают стеклом и исследуют в трихинеллоскопе. Срезы, обработанные соляной кислотой, становятся прозрачными или приобретают серый цвет, а капсула имеет вид серебристого ободка. Срезы, обработанные метиленовой синькой, окрашиваются в светло-голубой цвет, капсула — в лилово-розовый или синий, личинка не окрашивается.

Трихинеллоскопия копченого мяса (обработка по П.М. Ямщикову)

Приготовленные обычным способом срезы раздавливают между стеклами компрессориума, после чего верхнее стекло снимают, а срезы с помощью пинцета помещают в чашку Петри или небольшую ванночку с 1%-ным раствором красного стрептоцида, приготовленным на 5%-ном растворе едкого натрия, на 1-2 мин. Раствор красного стрептоцида можно заменить однопроцентным раствором риванола, акрихина или тропифламина. После этого срезы переносят на 1—2 мин в ванночку с насыщенным раствором метиленового голубого (15 г на 100 см 3 80%-ной уксусной кислоты). Окрашенные срезы тщательно промывают в горячей воде (80-90 °С) до почти полного обесцвечивания и помещают в компрессориум. Трихинеллоскопию проводят обычным методом.

В результате обработки мышечные волокна окрашиваются в светло-желтый цвет, капсулы трихинелл — в ярко-зеленый, а трихинеллы — в синий. В некоторых случаях трихинеллы не окрашиваются, но хорошо видны на окрашенном фоне мышечной ткани.

С помощью данного метода также можно исследовать соленое и мороженое мясо.

Для исследования колбас и свинокопченостей срезы обрабатываются в чашках Петри 10%-иым раствором едкого калия в течение 0,5-1 ч.

Трихинеллоскопия свиного шпика

Трихинеллы могут локализоваться в подкожной жировой ткани, в которой макроскопически не видно мышечных прослоек. Шпик без видимых мышечных прослоек разрезают на всю толщину и срезы берут с внутренней поверхности шпика по линии его расслоения (в местах атрофированных мышц).

Из линии расслоения вырезают скальпелем узкую пробу длиной 2-3 см. Такую же пробу берут с поверхности шпика, прилегающей к мышцам скелета. Из каждой пробы делают бритвой продольные срезы толщиной 0,3-0,5 мм. Срезы раздавливают между стеклами, затем, снимая верхнее стекло, наносят на срезы по 1-2 капли 1%-ного раствора метиленового голубого. Стекла сдавливают вновь,и препарат подогревают 10-15 с на спиртовой или газовой горелке до просветления срезов (при этом соединительная ткань окрашивается в голубой цвет, а мышечная — в зелено-голубой), после чего их просматривают.

Метод двойной окраски препаратов. Расплющенные между стеклами компрессориума срезы снимают и погружают на 1-2 мин в насыщенный раствор едкого натра, а после — на 1-2 мин в насыщенный раствор метиленового голубого. Окрашенные срезы вынимают и промывают в горячей воде, после чего микроскопируют обычным методом. При данной методе окраски ткани окрашиваются в светло-желтый цвет, капсула трихинеллы — в ярко-зеленый, а трихинелла — в интенсивно синий цвет

Биохимическое исследование (трихинеллоскопия после искусственного переваривания мышц)

Метод основан на переваривании образцов мышечной ткани, взятых от партии свиных туш, искусственным желудочным соком и обнаружении в осадке (переваренной массе) личинок трихинелл.

Искусственный желудочный сок (ИЖС) готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41^42 °С — 1 000 см 3 ; кислота соляная концентрированная — 10 см 3 ; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов — 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпика — 10,0 г. При использовании пепсина медицинского дозу увеличивают до 20,0 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.

При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют в соответствии с общими правилами (см. с. 66 лабораторного практикума).

Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1 : 15. Колбу помещают в термостат при температуре 4142 °С и выдерживают 5-7 ч, периодически перемешивая. За 10 мии до окончания переваривания перемешивание прекращают.

После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

Из колбы осторожно сливают 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм, установленное в стеклянной воронке диаметром 90-120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см 3 .

Залитый осадок отстаивают 15-20 мин, затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8 х Ю) увеличением микроскопа или в трихинеллоскопе.

Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ.

Метод группового исследования свинины на трихинеллез в аппарате АВТ

Исследование осуществляют с помощью аппарата для выделения личинок трихинелл (АВТ) Он представляет собой термостатируемую камеру с вмонтированными в нее восемью реакторами, предназначенными для переваривания мышечной ткани специальной жидкостью. Каждый реактор имеет мешалку с приводом от электродвигателя и отстойник для сбора осадка.

В термостатируемую камеру аппарата заливают до отмеченного уровня водопроводную воду с температурой 40-42 °С и подключают электронагревательный элемент.

В каждый из реакторов заливают теплую (40—42 °С) воду по 2,5 дм 3 . Непосредственно перед заправкой реактора измельченной групповой пробой в него вносят 6 г пищевого пепсина активностью 100 тыс. ЕД и 30 см 3 концентрированной соляной кислоты. Для перемешивания смеси включают мешалку на 1 мин. Затем добавляют измельченную групповую пробу и включают мешалку на 45 мин. Продолжительность переваривания контролируют посредством реле времени. В такой же последовательности загружают и остальные реакторы.

По окончании переваривания реле времени автоматически отключает мешалку. После отстаивания жидкости в реакторе (в течение 15-20 мин) открывают зажим, перекрывающий эластическую трубку-отстойник, сливают 1-1,5 см 3 жидкости с осадком на часовое стекло и осадок исследуют на наличие трихинелл под микроскопом, лупой или в трихинеллоскопе.

После каждого исследования через трубку-отстойник сливают отработанную жидкость, реактор промывают горячей (80 °С) водой и подготавливают для последующей работы. По окончании смены реакторы промывают раствором моющих средств.

При выявлении в осадке одной или более личинок трихинелл исследуемую группу свиных туш переводят на запасной подвесной путь, разделяют ее на 8 групп по 12-13 туш (первоначальная групповая проба от 100 туш) или по 2-3 туши (первоначальная групповая проба от 20 туш), снова берут пробы и проводят повторную трихинеллоскопию групповым методом.

Туши из группы, давшей положительный результат при повторной три-хинеллоскопии, исследуют индивидуально в аппарате АВТ, выявляя тушу, пораженную личинками трихинелл.

Дифференциальная диагностика трихинеллеза

Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровых мешочков) и микрофинн, а также от пузырьков воздуха и конкрементов. Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы.

Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри — спирально свернутая личинка (или несколько личинок).

Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.

Микрофинны, в отличие от трихинелл, располагаются между мышечными волокнами и имеют величину в диаметре до 2 мм (значительно крупнее трихинелл). Обызвествленные, погибшие в раннем возрасте мелкие финны имеют круглую или овальную форму и отличаются наличием слоистой соединительнотканной оболочки вокруг раздавленного паразита (рис. 9).

Обызвествленные мишеровы мешочки можно спутать с обызвествленными трихинеллами. В отличие от последних, они бывают разной величины, а их обызвествление начинается с центра, при этом на периферии мешочков можно видеть спороцисты. Обызвествленные мишеровы мешочки, помимо скелетной мускулатуры, обнаруживают также в мышце сердца, в то время как трихинеллы там никогда не развиваются.

Рис. 9. Дифференциальная диагностика трихинелл: а — саркоцисты в мышцах; б — микрофинна

Известковые конкременты могут быть различной величины. Иногда вокруг конкрементов образуется плотная соединительнотканная оболочка. При образовании сплошных известковых конкрементов обнаружить трихинеллу методом компрессорной трихинеллоскопии невозможно.

Пузырьки воздуха круглой или овальной формы с резкой черной каемкой вокруг при сжатии стекол компрессориума расплываются или исчезают.

Для дифференциации обызвествленных трихинелл от обызвествленных саркоцист и конкрементов нетрихинеллезной природы проводят окраску срезов по методу Ямщикова с дополнительной обработкой их на предметном стекле 15%-ным раствором соляной кислоты в течение 1-2 мин и промыванием водой. Срезы просматривают под малым передним увеличением микроскопа.

Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя при трихинеллезе

Обо всех случаях обнаружения трихинеллеза у свиней необходимо известить ветеринарные и медицинские органы тех районов, откуда поступило зараженное животное.

Для цитирования:
Скворцова Ф.К., Успенский А.В. Диагностика трихинеллеза на ранних стадиях развития личинок. // Российский паразитологический журнал. – М., 2016. – Т.35. – Вып. 1 . – С.

For citation:
Skvortsova F. K., Uspensky A.V. Diagnostics of trichinosis in the early stages of larval development. RussianJournalofParasitology, 2016, V.35, Iss.1, pp.

ДИАГНОСТИКА ТРИХИНЕЛЛЕЗА НА РАННИХ СТАДИЯХ РАЗВИТИЯ ЛИЧИНОК

Основой профилактики трихинеллеза является обязательная ветеринарно-санитарная экспертиза мяса всех используемых в пищу туш свиней, кабанов, барсуков, медведей, других всеядных и плотоядных животных методами компрессорной трихинеллоскопии и пептолиза мышечной ткани зрелых личинок трихинелл. Подтверждение диагноза на трихинеллез зависит от многих факторов, в числе которых значится отбор образцов мышечной ткани от определенных наиболее инвазированных частей туши, метода исследования и используемого оборудования.

В число таких факторов также входит стадия развития паразита в течение биологического цикла до заражения нового хозяина. Единичные ювенильные личинки трихинелл появляются в миофибриллах мышечной ткани уже на 5-7-й дни после заражения, то есть с начала миграции по крови. Развитие личинок до инвазионной стадии возможно только в поперечно-полосатой мускулатуре, где они проходят сложный органогенез и увеличиваются в длину более чем в 10 раз. (Геллер Э.Р., Тимонов Е.В.,1969). Длительная миграция личинок ведет к накоплению их в мышцах к 25-30 суткам в зависимости от интенсивности инвазии.

Вопросу об инвазионности личинок трихинел всегда уделялось большое внимание. Трихинеллы становятся нвазионными на 16-17-й день после заражения, когда у большинства личинок заканчивается органогенез (Лемишко П.М.,1947,1948, 1949).

По данным Richels (1955) на 17-19 день после заражения кутикула личинок становится непроницаемой и стойкой в отношении влияния химических веществ. Устойчивость мышечных трихинелл к действию желудочного сока объясняется своеобразным строением кутикулы. Геллер Э.Р. и Е.В.Тимонов (1969)) считают, что личинки трихинелл приобретают устойчивость к перевариванию с 17-го дня после заражения и с этого возраста становятся инвазионными.

По Березанцеву Ю.А. (1969) только с 19-го дня единичные личинки бывают заметными в мышцах при трихинеллоскопии.

Некоторые разногласия авторов в сроках достижения инвазионности и образования начальной капсулы объясняются использованием для заражения различных изолятов и даже видов трихинелл или их хозяев.

Отсутствие четко различимой капсулы у инвазионных личинок в раннем возрасте (16-24 сутки после заражения) затрудняет постановку диагноза. Так на практике при исследовании мяса на трихинеллез компрессорным методом трихинеллоскописты ищут инкапсулированных трихинелл, то есть трихинелл, спирально свернутых и окруженных капсулой. Это объясняется тем, что существующие руководства и методические положения по диагностике трихинеллеза направлены на выявление в основном инкапсулированных личинок (у капсулообразующих трихинелл) и редко упоминают свернутых в виде скрепки личинок бескапсульных трихинелл T. pseudospiralis или личинок на ранних стадиях развития.

Таким образом, часть инвазионных неинкапсулированных личинок или личинок с формирующейся капсулой на ранних стадиях развития могут оказаться невыявленными. Особенно это актуально при спонтанном заражении промысловых животных и обычной при этом невысокой интенсивности инвазии.

Следовательно, в ранние сроки после заражения (16-24 сутки) затруднительно обнаружить в мышечной ткани мигрирующие личинки трихинелл без капсул или с формирующейся капсулой компрессорным методом, который чаще всего применяется в повседневной практике.

Целью нашей работы являлась диагностика неинкапсулированных личинок трихинелл на ранних стадиях развития компрессорным методом и методом пептолиза на аппаратах для выделения личинок. Метод пептолиза широко внедрен в производство и становится незаменимым в спорных случаях для подтверждения диагноза трихинеллеза.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили образцы мышечной ткани от экспериментально зараженных Trichinella spiralis крыс. Всего было заражено 18 беспородных белых крыс весом 90-100г в дозе 10 л/г. Для проведения ранней диагностики при трихинеллезе крыс убивали с 6 по 24 день после заражения.

В первую очередь исследовали компрессорным методом наиболее поражаемые и доступные мышцы: диафрагму, массетер и грудные мышцы при увеличении (х 25, 50, 100). На каждый срок сделаны микрофотографии личинок на срезах.

Диагностика неинкапсулированных личинок трихинелл компрессорным методом

В период формирования в мышечных волокнах инвазионной личинки в ней происходят сложные преобразования. Личинка увеличивается в длину, при этом начинается формирование внутренних органов и вырабатываются защитные приспособления на реакцию хозяина для существования на мышечной стадии. Выявление в мышечной ткани личинок трихинелл юных мигрирующих личинок при обычном увеличении трихинеллоскопа (х50) или МБС микроскопа (х25-50) затруднительно, так как в начале развития личинки располагаются по длине мышечных волокон и имеют лишь незначительные изгибы, легко маскируясь мышечной тканью. Срезы мышечной ткани для изучения должны быть предельно тонкими.

При компрессорном исследовании установили, что небольшое количество новорожденных личинок появляется в мышечных волокнах уже на 6-й день после заражения, куда заносятся по капиллярам с током крови. В мышечном волокне юная личинка располагается вдоль его. Однако, увидеть личинки на срезе крайне сложно даже при увеличении х100, но около среза в выделившейся жидкости наблюдали светлые юные личинки даже при увеличении х25.

Рис. 1. Личинки T. spiralis в жидкости возле среза на 10-е сутки после заражения

В мышечных волокнах личинки располагались вдоль оси волокна, заметить их возможно только при увеличении не менее х 100 на очень тонком срезе и при высокой интенсивности инвазии исходного образца.

Через 11-12 дней в жидкости возле среза возрастало число выделившихся личинок разных размеров и с разной степенью дифференциации органов (Рис.2).

Рис. 2. Личинки T. spiralis в жидкости возле среза на 13-е сутки после заражения

Вокруг пораженных волокон иногда видны воспалительные клеточные инфильтраты (х100).

Через 13-14 дней личинки разных размеров хорошо видны в жидкости возле срезов в разных стадиях органогенеза, часть из них со сформированной пищеварительной системой и зачатками половых гонад (х 50).

На мышечном срезе прямые ровные личинки трихинелл длиной около 0,3 ммв единичных случаях можно обнаружить под сарколеммой мышечного волокна по его длине при увеличении х 100.

Через 15 суток в жидкости возле среза видно большое количество разновозрастных личинок на разных стадиях органогенеза. Выделяются единичные личинки темного цвета, согнутые в дугу или в полукольцо. Длина отдельных личинок достигает 0,5 мм (Рис. 3).

Рис. 3. Личинки T. spiralis в жидкости возле среза на 15-е сутки после заражения

На срезе ткани прямые личинки, расположенные по длине мышечного волокна, плохо просматриваются даже при х 100. Первые попавшие в волокна единичные трихинеллы начинают скручиваться, изгибаться дугообразно или в виде петли.

Через 16 суток множество личинок разных размеров видны в жидкости возле среза. Наряду со светлыми и почти прозрачными юными личинками встречаются единичные темные личинки с оформленной пищеварительной и половой системами длиной до 0,6-0,7 мм.

В мышечной ткани встречались личинки с изогнутыми концами, свернутые дугообразно, в виде овала или петли, редко – свернутые спиралью (х100).

Через 17 и 18 суток. Личинки трихинелл разных размеров в большом количестве видны в жидкости возле срезов, среди них увеличилось число темных подвижных личинок длиной до 0,8 мм (Рис. 4)

Рис. 4. Личинки T. spiralis в жидкости возле среза на 17-е сутки после заражения

В мышечной ткани накопилось значительное количество как вытянутых по длине волокон личинок, так и изогнутых дугообразно в виде восьмерок, скрепок или свернутых спирально, которые хорошо видны на тонких срезах при увеличении х 50 и 100.

Через 19 и 20 дней личинки трихинелл разных размеров в большом количестве видны в жидкости возле срезов, среди них выделяются темные подвижные личинки размером до 0,9 мм, свернутые в спираль.

На срезе ткани у значительной части личинок изогнуты оба конца или они различно свернуты в виде скрепок, дуг, восьмерок, спирали, при внимательном изучении их можно заметить при увеличении х 25-50.

Через 21 и 22 дня. Личинки разных размеров видны в жидкости возле среза, но количество светлых юных форм значительно уменьшилось. Большинство выделившихся личинок - темные подвижные размером до 0,9 мм (Рис. 5).

Рис. 5. Личинки T. spiralis в жидкости возле среза на 22-е сутки после заражения

В мышечной ткани преимущественно встречались изогнутые с двух концов или спирально свернутые личинки. Капсулы у таких личинок не просматривались даже при высоком увеличении (х 100).

Через 24 дня в жидкости возле среза видны единичные светлые личинки и полностью сформированные темные подвижные трихинеллы в большом количестве длиной до 1 мм.

В мышечной ткани вокруг некоторых личинок с трудом различали тонкие капсулы, которые видны при х 50 и 100. Большинство личинок изогнуты дугообразно или скручены в спираль без заметных границ капсулы и хорошо видны при трихинеллоскопии.

Таким образом, выявление неинкапсулированных трихинелл на ранних стадиях развития требует дополнительного внимательного просмотра жидкости вокруг среза ткани при максимальном увеличении. Появление в выделившейся жидкости личинок на разных стадиях органогенеза говорит о заражении трихинеллами. Личинки с малопроницаемой темной кутикулой с полностью сформированной пищеварительной и половой системами появляются через 16 полных суток после заражения.

Тонкая соединительная капсула у личинок просматривается у единичных личинок обычно на 23-24сутки после заражения.

При исследовании на трихинеллез необходимо тщательно исследовать срезы и жидкость, выделяемую возле них, так как нельзя быть уверенными в пригодности мяса вследствие всегда невысокой инвазии трихинеллами при спонтанном заражении.

Диагностика неинкапсулированных трихинелл методом автоматизированного пептолиза

При пептолизе мышечной ткани 6 инвазированных трихинеллами крыс в дозе 10 л/г, с 10 по 15 сутки после заражения при микроскопировании в осадке личинок не обнаружили.

Через 16 суток после заражения крыс в образцах мышечной ткани от 2 крыс после пептолиза обнаружили 17 и 38 подвижных трихинелл (0,34 и 0,76 л/г). Личинки имели плотную слабопроницаемую кутикулу и сформированную пищеварительную и половую системы. Длина личинок не превышала 0,7 мм.

Выделенными личинками заразили две белые мыши. Через 36 дней после пептолиза мышечной ткани мышей обнаружили в небольшом количестве живые трихинеллы.

Через 17 суток в образце мышечной ткани после пептолиза обнаружили 176 подвижных трихинелл (30,5 л/г). Длина личинок составляла 0,8 мм. У личинок была хорошо выражена пищеварительная и половая системы и отчетливо заметен ректум. Личинками были заражены две мыши. После пептолиза мышечной ткани через 35 дней выявили высокую зараженность мышей трихинеллами.

Через 19 суток в образце обнаружили 877 личинок трихинелл длиной до 1.2 мм с законченным органогенезом (170,5 л/г). По длине ректума легко можно было различить половую принадлежность трихинелл (самцов и самок). Личинками заразили 10 мышей в дозе 10 л/г. Зараженность мышей через 32 дня оказалась очень высокой.

Через 21 сутки в образце обнаружили 920 личинок трихинелл (180,4 л/г).

Через 24 сутки – 985 личинок (190,7 л/г).

Таким образом, при пептолизе автоматизированным методом мышечной ткани крыс, инвазированных личинками T.spiralis, установили, что личинки в возрасте с 10 по 15 сутки после заражения данным методом не выявляются. Единичные трихинеллы, начиная с 16-дневного возраста, выявляются при микроскопировании, несмотря на недостаточные размеры личинок. Массовое выделение трихинелл начинается с 17-го дня после заражения, когда большая часть личинок достигает инвазионности.

Неинкапсулированные трихинеллы 16-дневного возраста становятся инвазионными, что показало успешное заражение белых мышей личинками, выделенными после пептолиза. По результатам биопробы основная масса личинок становится инвазионными к 19-20 дням после заражения.

Таким образом, автоматизированным методом пептолиза мышечной ткани легко диагностировать заражение животных неинкапсулированными личинками трихинелл, что затруднительно или иногда невозможно при компрессорном исследовании. Диагностика трихинеллеза автоматизированным методом наиболее эффективна при достижении личинками инвазионности.

2. Геллер Э.Р., Переверзева Э.В. // Мат. научн. конф. ВОГ- Ч.4.- М.-1965.-С.42-46.

4. Лемишко П.М. //Ветеринария.-1947.-№ 5.-С.37.

5. Лемишко П.М. // Ветеринврия.-М.-1948.-№ 11.-С.36-37.

7. Силакова Л.Н. // Мат. докл. Всесоюз. конф. по проблемам трихинеллеза человека и животных.- Вильнюс.- 1972,- С.63-66.

Мы привыкли к тому, что в магазине приобретаем уже проверенный продукт и нам не приходится ни о чем задумываться. Но на охоте дело обстоит иначе. Статистика говорит, что около 90% волков заражено опасными гельминтами. Не обошла стороной эта проблема и других диких хищных и всеядных млекопитающих: кабанов, медведей, бобров — они тоже нередко становятся переносчиками болезни. Если употребить в пищу зараженного кабана, например, приготовив себе шашлык, вы практически наверняка рискуете здоровьем. Трихинеллы погибают только при очень высоких температурах! И если мясо было нарезано крупными кусками, то в глубине температура не достигнет необходимого порога. Никто не хочет рисковать своим здоровьем. Возникает резонный вопрос: как же узнать о наличии возбудителя?

Портативный трихинеллоскоп Микмед — одно из решений.

Компрессорный метод проверки мяса на трихинеллез

Суть метода состоит в том, чтобы взять небольшие пробы мышц из ножек диафрагмы, так же подходят наружная жевательная, межреберная, сгибателей и разгибателей пасти, языка и глаз. Из проб одноразовым лезвием берутся срезы, величиной не более 5х5х2 мм (по 12 шт. с пробы). Надрезы делаются вдоль мышечных волокон. Их общее количество по вет. стандартам: 72 для туш диких животных, 24 — для домашних. Их количество напрямую влияет на качество проверки, повышая вероятность выявить паразита. Срезы помещают между предметными стеклами (или компрессорием) и сжимают, чтобы удалить излишнюю жидкость, а так же сделать их максимально тонкими. Именно благодаря такому подходу, становится возможным исследовать мышечную ткань в трихинеллоскопе "на просвет" и обнаружить гельминта.

Как выглядит трихинелла?

Срез просматривают на наличие круглых или овальных капсул, по краям которых образовались жировые отложения треугольной формы. Внутри капсулы можно увидеть личинку, свернувшуюся в спираль. Инкапсулированный возбудитель может находиться в мышечных волокнах долгие годы.

Но опасны и неинкапсулированные гельминты — такие личинки можно обнаружить у недавно зараженного животного. Их жизненный цикл в среднем составляет месяц. К инвазионными относят тех, что старше 2 недель (длиной более 0,6 мм). Они располагаются вдоль волокон мышечной ткани. Их проще всего заметить в жидкости, собирающейся на предметном стекле. Распознают их благодаря наличию изгибов на концах тела паразита.

Читайте также: