Какие исследование проводят в инфекционном отделение
Обновлено: 18.04.2024
Профилактика внутрибольничных инфекций. Принципы
В каждом лечебном учреждении необходимо проводить мероприятия, препятствующие возникновению и распространению инфекции. В них принимает участие весь персонал. Группа контроля за инфекционной заболеваемостью должна состоять из микробиолога (врача-инфекциониста) и квалифицированной медицинской сестры. Организация противоэпидемических мероприятий возложена на руководство учреждения. Группой будет проводиться особый контроль за распространением специфических микроорганизмов (например, МРЗС).
Группа должна осуществлять надзор за состоянием внутренней среды учреждения, принимать участие в планировании, размещении и перепланировке зданий.
При обнаружении инфекционного заболевания больного немедленно изолируют для предотвращения его распространения. Необходимо установить источник инфекции и пути её передачи, организовать проведение бактериологических исследований пациентам и медперсоналу, контактирующему с больным. Пациентов, особенно восприимчивых к инфекции, также следует размещать в отдельных палатах. При несоблюдении персоналом санитарно-гигиенических норм поддерживать противоэпидемический режим в больнице достаточно сложно. Например, значительно усложнить ситуацию может пренебрежение таким простым правилом, как обязательное мытьё рук.
Изоляция больных с открытыми ранами и после выполнения полостных операций для профилактики внутрибольничной инфекции. Пациента помещают в изолированную палату с отдельной уборной. При проведении лечебных и гигиенических процедур необходимо надевать одноразовые перчатки и стерильную одежду. После выполнения всех манипуляций их выбрасывают, а руки тщательно моют с мылом и вытирают одноразовым полотенцем. Для снижения микробной контаминации окружающей среды применяют специальные дезинфицирующие вещества, например хлорсодержащие растворы для борьбы с Clostridium difficile.
Профилактика внутрибольничных респираторных инфекций
Помимо соблюдения вышеперечисленных мер предосторожности медперсонал больницы обязан носить маски. При транспортировке из одного отделения в другое маску должен иметь и сам пациент. Строгие меры респираторной изоляции необходимы для предупреждения распространения инфекций, вызываемых мультирезистентными штаммами возбудителей туберкулёза, и тяжёлого острого респираторного синдрома. Они предполагают размещение в комнатах с отрицательным давлением и использование специальных индивидуальных респираторов.
Соблюдение мер предосторожности особенно важно во время процедур, сопровождающихся высоким риском воздушно-капельного заражения (например, при выполнении бронхоальвеолярного лаважа).
Строгая изоляция для профилактики внутрибольничной инфекции. Этот метод изоляции направлен на предупреждение распространения таких инфекций, как вирусные геморрагические лихорадки. Пациента помещают в специальный изоляционный бокс с отрицательным давлением, снабжённый собственной закрытой системой вентиляции, что позволяет избежать воздушно-капельного распространения инфекции. При работе в боксе соблюдают строгий противоэпидемический режим.
Защитная изоляция для профилактики внутрибольничной инфекции. Защитная изоляция необходима больным с повышенной восприимчивостью к инфекционным заболеваниям (например, пациентам с нейтропенией). Больного помещают в одноместную палату (бокс) с приточно-вытяжной вентиляцией и обязательной фильтрацией и дезинфекцией воздуха для предотвращения инфицирования пищи (устойчивыми грамо-трицательными бактериями — овощей или Listeria — мягких сыров).
Типирование при внутрибольничной инфекции
Типирование применяют после определения вида возбудителей, а также для диагностики перекрёстной инфекции. Выбранный метод должен быть достаточно прост и воспроизводим, дающий схожие результаты, когда используется в других лабораториях. Различают следующие виды типирования:
• простое лабораторное типирование, проводимое при помощи фенотипических маркёров;
• серологическое типирование, основанное на определении антигенной структуры возбудителя (применяют для идентификации различных штаммов шигелл, сальмонелл и др.);
• фаготипирование — установление принадлежности выделенного бактериального штамма к определённому фаготипу, основанное на различной чувствительности к бактериофагам (различные бактериофаги лизируют определённые виды бактерий). Этот принцип лежит в основе фаготипирования стафилококков, некоторых штаммов возбудителей рода Salmonella и др.;
• колицинотипирование — некоторые бактерии продуцируют белковые антибиотики, такие как колицин, которые тормозят рост родственных микроорганизмов; этот метод может быть использован для типирования штаммов родов: Shigella и Pseudomonas;
• молекулярное типирование — применение различных рестриктаз, приобретающих характерную окраску при взаимодействии с геномной или плазмидной ДНК, а также с рибосомальной РНК. Одинаковые микроорганизмы будут иметь одинаковую окраску. Кроме того, возможно определение последовательности нуклеиновых кислот. Например, при мультилокусном секвенировании-типировании используют набор из семи облигатных генов, не кодирующих факторы вирулентности или патогенности, но являющихся маркёрами филогенетического родства.
В настоящее время молекулярное типирование приобретает всё большую популярность, вытесняя другие методы.
Стерилизация для профилактики внутрибольничной инфекции
Во время стерилизации (методом автоклавирования или облучения) происходит инактивация всех патогенных микроорганизмов. В автоклаве различные предметы (например, хирургический инструментарий и др.) обрабатывают горячим паром под высоким давлением, в результате чего происходит обеззараживание любого инфицированного материала. Для обработки хрупких и чувствительных материалов используют стерилизацию в специальных автоклавах с более низким давлением и температурой, в которые пар подают в смеси с формальдегидом.
Предметы одноразового использования (пластиковые катетеры, шприцы, протезы и др.) подвергают стерилизации у-излучением во время промышленного производства. Кроме того, при условии соблюдения временных нормативов для стерилизации инструментов используют альдегиды (глутаральдегид и формальдегид). Растворы, содержащие хлор (диоксид хлора), применяют вместо глутаральдегида для снижения токсического воздействия на людей, проводящих стерилизацию.
Дезинфекция для профилактики внутрибольничной инфекции
Дезинфекция — комплекс мероприятий, направленных на уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее важный этап дезинфекции — мытьё рук с мылом или очищающим средством. Дезинфицирующими называют химические средства, уничтожающие микробы или замедляющие их рост. Их используют в случаях, когда невозможно обеспечить полную стерильность (например, при обработке рук хирурга перед операцией) или после попадания биологических жидкостей (мочи, крови, кала) на различные предметы. Растворы, содержащие гипохлориты (гипохлорит натрия), эффективны в отношении вирусов. Кроме того, их применяют для обработки поверхностей.
Следует помнить, что гипохлориты обладают выраженными коррозийными свойствами. Растворы, содержащие йод и другие галогены, эффективно уничтожают бактерии (в том числе и спорообразующие), но отличаются сравнительно медленным действием. Обычно их используют для дезинфекции кожного покрова. Дезинфицирующие средства на основе фенола обладают выраженным антибактериальным эффектом. Их применяют для обработки поверхностей в больницах, лабораториях и др. Спирт (70% раствор) быстро уничтожает бактерии, грибы и вирусы. Его применяют для дезинфекции кожного покрова перед хирургическими операциями. Эффективным противобактериальным средством (особенно против стафилококков) считают хлоргексидин, который также применяют для обработки кожи.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Что представляет собой поточно-пропускной принцип устройства инфекционной больницы?
На весь заразный период инфекционных больных госпитализируют в инфекционные больницы или специально приспособленные отделения. При госпитализации больных медицинская сестра следит за санитарной обработкой, текущей дезинфекцией.
Старшая сестра отделения должна следить за тем, чтобы в отделении всегда был достаточный запас белья. Матрацы с кроватей выписанных больных отправляют в дезинфекционную камеру и используют только после дезинфекции.
Как осуществляется контроль за продуктовыми передачами в инфекционное отделение?
Медицинская сестра должна помнить, что питание больного, особенно ослабленного интоксикацией, лихорадкой, диспепсическими явлениями, - важнейший метод восстановления его здоровья. Необходимо следить за передачами больным, чтобы к ним не попали продукты, абсолютно противопоказанные при данном заболевании (например, копчености, молочные продукты при брюшном тифе и др.).
Как распределяются служебные и функциональные обязанности медицинских сестер отделения?
В отделении выделяют несколько сестринских постов и четко распределяют служебные обязанности. Рекомендуется выделять процедурную медицинскую сестру, в обязанности которой входит выполнение подкожных, внутримышечных, внутривенных инъекций, подготовка систем для капельных и струйных инфузий. В палатах интенсивной терапии работают наиболее квалифицированные медицинские сестры.
Для выполнения различных диагностических и лечебных процедур выделяют специальные комнаты (например, для ректороманоскопии, спинномозговых пункций и т. д.). В кабинете для ректороманоскопии работает, как правило, специально выделенная медицинская сестра. Она готовит больных к этой процедуре, помогает врачу при ее проведении и содержит в полном порядке ректоскопы, реостат, лампочки и т. п. Эта же сестра обычно проводит лечение микроклизмами.
Что входит в задачи медицинской сестры инфекционного отделения?
Медицинская сестра инфекционного отделения быстро сообщает врачу о переменах в состоянии больных; внимательно следит за изменениями назначений врача; выполняет их без промедления; вовремя подклеивает полученные результаты анализов в историю болезни. Указанные врачом в истории болезни лечебные и диагностические назначения сестра переносит в соответствующие тетради или на индивидуальные карты назначений, принятые в данном отделении.
Медицинская сестра отделения постоянно инструктирует поступающих больных о режиме в отделении, санитарно-гигиенических навыках и правильном питании при данном инфекционном заболевании.
Как осуществляется выписка больных?
Выписка больных возможна не ранее обязательных сроков изоляции, при исчезновении клинических симптомов заболевания и при отрицательных результатах бактериологического исследования. Кратность последнего зависит от специальности и места работы больного.
Пациент покидает отделение в своей одежде, предварительно обработанной в дезинфекционной камере больницы.
Посещение больных родными или знакомыми в инфекционных отделениях, как правило, не допускается.
Дезинфекция (обеззараживание) - это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение или удаление возбудителей заразных болезней в окружающей человека среде, в том числе и в живых организмах (членистоногие и грызуны). Цель дезинфекции - прерывание путей распространения инфекционных болезней. Принято различать следующие дезинфекционные мероприятия: собственно дезинфекцию, дезинсекцию и дератизацию.
Что подразумевается под "собственно дезинфекцией"?
Собственно дезинфекция заключается в уничтожении или удаление патогенных микроорганизмов на различных объектах и предметах окружающей среды. Дезинфекцию подразделяют на профилактическую и очаговую.
Что такое профилактическая дезинфекция?
Профилактическая дезинфекция - это обеззараживание тех объектов, где лишь предполагается наличие патогенных возбудителей (хлорирование водопроводной воды и воды в плавательных бассейнах, дезинфекция в местах скопления людей и общего пользования и т. д.).
Что такое очаговая дезинфекция?
Очаговая дезинфекция (текущая и заключительная) производится в очаге инфекционного заболевания, т. е. там, где находится или был инфекционный больной, например, в квартире или инфекционной отделении. У постели инфекционного больного проводят текущую дезинфекцию, задачей которой является уничтожение патогенных микроорганизмов по мере их выделения из организма больного.
Что является объектом текущей дезинфекции?
Объектами текущей дезинфекции являются белье и постельные принадлежности, выделения больного, предметы ухода за ним и др. Например, при дизентерии возбудитель в большом количестве выделяется с испражнениями больного, обсеменяя предметы окружающей обстановки, при брюшном тифе - с калом и мочой; следовательно, эти выделения больных и должны будут в первую очередь подвергаться текущей дезинфекции.
Что представляет собой заключительная дезинфекция?
Заключительная дезинфекция проводится в очаге после удаления из него источника инфекции (в инфекционном отделении - после выписки или смерти больного) с целью уничтожения возбудителей заболевания, которые, возможно, остались в помещении, где находился больной. В отличие от текущей дезинфекции, проводится однократно.
Таким образом, в инфекционном отделении проводится текущая и заключительная дезинфекция. Медицинская сестра отделения должна знать основные средства и способы дезинфекции для того, чтобы грамотно их использовать в своей работе и обучать правилам дезинфекции санитарок и младших медицинских сестер.
Какие способы дезинфекции выделяют в инфекционной больнице?
Различают 3 основных способа дезинфекции: механический, физический и химический.
Что представляет собой механический способ дезинфекции?
Механический способ дезинфекции предполагает влажную уборку помещений, мытье, стирку, вытряхивание и выколачивание. Сюда же относится фильтрация воздуха и воды, заключающаяся в очистке их от посторонних частиц, в том числе и микробов. Механический способ не приводит к полному освобождению от микробов, поэтому его обычно сочетают с физическим и химическим способами.
Что представляет собой физический способ дезинфекции?
Физический способ дезинфекции - кипячение, обработка паром и горячим воздухом, а также ультрафиолетовое облучение. Кипячение используется для обработки белья (кипятят в мыльно-содовом растворе в течение 2 часов), посуды (в 2 % содовом растворе в течение 15 минут), питьевой воды, игрушек, остатков пищи. Паровоздушная смесь является действующим началом в пароформалиновой дезинфекционной камере; в дезинфекционных камерах обеззараживают вещи больного и постельные принадлежности. Ультрафиолетовое облучение используется для обеззараживания воздуха помещений в лечебных и других учреждениях (лампа БУВ-15 или БУВ-30).
Что представляет собой химический способ дезинфекции?
Химический способ дезинфекции состоит в применении химических средств, губительно действующих на возбудителей инфекционных заболеваний.
Какие химические вещества используются для химической дезинфекции?
Из химических дезинфицирующих средств в практической работе инфекционных отделений наиболее часто используются хлорсодержащие препараты, фенолы, формалин, перекись водорода, спирты.
Каким образом для химической дезинфекции используется хлорная известь?
Хлорная известь - белый комковатый порошок с характерным запахом хлора; действующим началом являются кислород и хлор. Содержание активного хлора в препарате при отгрузке с завода составляет 32 до 36 %, при хранении оно постепенно падает. При наличии активного хлора менее 15 % использование хлорной извести для дезинфекции не разрешается. Сухая хлорная известь употребляется для дезинфекции испражнений, мочи, мокроты. Например, при кишечных инфекциях (дизентерия, брюшной тиф) к испражнениям с мочой в судно добавляют сухую хлорную известь из расчета 200 г на 1 л выделений.
Каким образом для химической дезинфекции используется хлорноизвестковое молоко?
Хлорноизвестковое молоко используется в свежеприготовленном виде для обработки помойных и мусорных ям в 10 % или 20 % концентрации (на ведро воды берут 1-2 кг сухой хлорной извести). Осветленные растворы хлорной извести используются для дезинфекции помещений, посуды и других объектов, за исключением тканей и металлических изделий. Приготовляют осветленные растворы из 10 % хлорноизвесткового молока, которое отстаивается в течение 24 часов, после чего верхний осветленный слой жидкости сливают в темную стеклянную бутыль. Полученный основной осветленный раствор (10 % концентрации) хранят не более 5 дней; из него приготовляют осветленные растворы меньшей концентрации, например, поверхности помещений и дверей при кишечных инфекциях орошаются 0,2 % осветленным раствором хлорной извести.
Каким образом для химической дезинфекции используется хлорамин?
Хлорамин - белый или кремового цвета порошок с запахом хлора, частично растворимый в воде. Содержит от 24--28 % активного хлора. Препарат используется в виде водных растворов 0,1-10 % концентрации. Растворы хлорамина более стойки при хранении, чем растворы хлорной извести и меньше разрушают ткани. Хлорамин широко используется для обеззараживания больничных помещений, посуды, белья, рук. Нательное белье обеззараживают путем замачивания его в 0,2-0,5 % растворе хлорамина с последующей стиркой или посредством кипячения в бучильниках.
Каким образом для химической дезинфекции используется ДТСГК?
Каким образом для химической дезинфекции используется гексахлорофен?
Гексахлорофен - используется для изготовления мыла "Гексафен", которое рекомендуется для персонала лечебно-профилактических учреждений (в первую очередь инфекционных больниц), детских учреждений и родильных домов.
Каким образом для химической дезинфекции используется надуксусная кислота?
Надуксусная (перуксусная) кислота обладает бактерицидным и спороцидным действием в концентрациях 0,1-2 %. Применяется в виде 0,1 % раствора для обработки медицинских термометров, инструментов из пластмассы и резины, помещений и предметов обстановки.
Каким образом для химической дезинфекции используется лизол?
Лизол - смесь крезолов и калийного зеленого мыла, темно-бурая маслянистая жидкость с резким своеобразным запахом. Кроме бактерицидных, обладает и инсектицидными свойствами, в связи с чем рекомендуется к использованию в очагах чумы. Применяется в виде 3- 5 % растворов для дезинфекции предметов обстановки, игрушек, белья, туалетов и выделений больных. Лизол не действует на туберкулезную палочку и споровые формы бактерий.
Каким образом для химической дезинфекции используется формалин?
Формалин - 40 % раствор формальдегида в воде. В медицинской практике используется для распыления в пароформалиновых дезинфекционных камерах при обеззараживании вещей и постельных принадлежностей.
Перекись водорода - бесцветная прозрачная жидкость, обладает выраженным бактерицидным и спороцидным действием. Выпускается в виде 27,5-40 % растворов, рабочие концентрации растворов составляют 3-6 %. Перекись водорода может использоваться для промывания ран, дезинфекции белья, посуды и помещений.
Каким образом для химической дезинфекции используется спирт?
Из спиртов для целей дезинфекции используется обычно 70 % этиловый спирт, так как растворы большей концентрации хуже проникают в глубину бактериальной клетки. Этиловый спирт применяется для обработки кожи при различных инъекциях, стерилизации режущих медицинских инструментов и др.
Диагностика инфекционных заболеваний является одной из самых сложных проблем в клинической медицине. Лабораторные методы исследования при ряде нозологических форм играют ведущую, а в целом ряде клинических ситуаций решающую роль не только в диагностике, но и в определении конечного исхода заболевания.
Диагностика инфекционных заболеваний почти всегда предусматривает использование комплекса лабораторных методов.
- бактериологические;
- серологические;
- метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания в исследуемом материале.
У одних пациентов для диагностики этиологии инфекционно-воспалительного процесса достаточно провести бактериологическое исследование, в других клинических ситуациях решающее значение имеют данные серологических исследований, в третьих, предоставить полезную информацию может только метод ПЦР. Однако наиболее часто в клинической практике врачу-клиницисту необходимо использовать данные различных методов лабораторных исследований.
Бактериологические методы исследования
Бактериологические исследования наиболее часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания (составляют 40-60% в структуре хирургических заболеваний) с целью их диагностики, изучения этиологической структуры, определения чувствительности возбудителей к антибактериальным препаратам. Результаты бактериологических анализов способствуют выбору наиболее эффективного препарата для антибактериальной терапии, своевременному проведению мероприятий для профилактики внутрибольничных инфекций.
Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний являются истинно-патогенные бактерии, но наиболее часто условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав естественной микрофлоры человека или попадающие в организм извне. Истинно-патогенные бактерии в большинстве случаев способствуют развитию инфекционного заболевания у любого здорового человека. Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания преимущественно у людей с нарушенным иммунитетом.
Бактериологические исследования при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, направлены на выделение всех микроорганизмов, находящихся в патологическом материале, что существенно отличает их от аналогичных исследований при заболеваниях, вызванных истинно патогенными микроорганизмами, когда проводится поиск определенного возбудителя.
Для получения адекватных результатов бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях особенно важно соблюдать ряд требований при взятии биоматериала для анализа, его транспортировки в лабораторию, проведения исследования и оценки его результатов.
- микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия) из доставленного биоматериала;
- выращивание культуры микроорганизмов (культивирование);
- идентификацию бактерий;
- определение чувствительности к антимикробным препаратам и оценку результатов исследования.
Доставленный в бактериологическую лабораторию биоматериал первоначально подвергается микроскопическому исследованию.
Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму или другими красителями, проводят при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек (мазок из цервикального канала, зева, носа, глаза). Результаты микроскопии позволяют ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видов микроорганизмов в биологическом материале, а также дают предварительную информации об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет врачу сразу начать лечение (эмпирическое). Иногда микроскопия позволяет выявить микроорганизмы, плохо растущие на питательных средах. На основании данных микроскопии проводят выбор питательных сред для выращивания микробов, обнаруженных в мазке.
Культивирование микроорганизмов. Посев исследуемого биоматериала на питательные среды производят с целью выделения чистых культур микроорганизмов, установления их вида и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Для этих целей используют различные питательные среды, позволяющие выделить наибольшее количество видов микроорганизмов. Оптимальными являются питательные среды, содержащие кровь животного или человека, а также сахарный бульон, среды для анаэробов. Одновременно производят посев на дифференциально-диагностические и селективные (предназначенные для определенного вида микроорганизмов) среды. Посев осуществляют на стерильные чашки Петри, в которые предварительно заливают питательную среду для роста микроорганизмов.
Микроскопия мазков, окрашенных по Граму
1 - стрептококки; 2 - стафилококки; 3 - диплобактерии Фридленда; 4 - пневмококки
Колонии отсевают на плотные, жидкие, полужидкие питательные среды, оптимальные для культивирования определенного вида бактерий.
Выделенные чистые культуры микроорганизмов подвергают дальнейшему изучению в диагностических тестах, основанных на морфологических, ферментативных, биологических свойствах и антигенных особенностях, характеризующих бактерий соответствующего вида или варианта.
Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Чувствительность к антимикробным препаратам изучают у выделенных чистых культур микроорганизмов, имеющих этиологическое значение для данного заболевания. Поэтому в направлении на бактериологические анализы требуется указать диагноз заболевания у больного. Определение чувствительности бактерий к спектру антибиотиков помогает лечащему врачу правильно выбрать препарат для лечения больного.
Оценка результатов исследования. Принадлежность условно-патогенных микроорганизмов к естественной микрофлоре организма человека создает ряд трудностей при оценке их этиологической роли в развитии гнойно-воспалительных заболеваний. Условно-патогенные микроорганизмы могут представлять нормальную микрофлору исследуемых жидкостей и тканей или контаминировать их из окружающей среды. Поэтому для правильной оценки результатов бактериологических исследований необходимо знать состав естественной микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, когда исследуемый биоматериал в норме стерилен, как, например, спинномозговая жидкость, экссудаты, все выделенные из него микроорганизмы могут считаться возбудителями заболевания. В тех случаях, когда исследуемый материал имеет собственную микрофлору, как, например, отделяемое влагалища, кал, мокрота, нужно учитывать изменения ее качественного и количественного состава, появление несвойственных ему видов бактерий, количественную обсемененность биоматериала. Так, например, при бактериологическом исследовании мочи степень бактериурии (число бактерий в 1 мл мочи), равная и выше 10 5 , свидетельствует об инфекции мочевых путей. Более низкая степень бактериурии встречается у здоровых людей и является следствием загрязнения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.
Установить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры помогают также нарастание количества и повторность выделения бактерий одного вида от больного в процессе заболевания.
Врач-клиницист должен знать, что положительный результат бактериологического исследования в отношении биологического материала, полученного из в норме стерильного очага (кровь, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, пунктат органа или ткани), всегда тревожный результат, требующий немедленных действий по оказанию медицинской помощи.
Серологические методы исследования
В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Серологические реакции используются в двух направлениях.
2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.
Серологические исследования не обладают 100%-й чувствительностью и специфичностью в отношении диагностики инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с антителами, направленными к антигенам других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, а также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.
В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических антител к возбудителям различных инфекционных заболеваний.
Авидность - характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген.
Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-антител при различных инфекционных заболеваниях.
Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности антител класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или планировании беременности.
Метод полимеразной цепной реакции
Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.
Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы.
Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С. ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.
В ПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д. В первую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.
Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях. Методы
Отбор проб для анализа при инфекционных заболеваниях. Для микробиологического исследования может быть отобрана любая ткань или физиологическая жидкость организма.
Выделение чистой культуры способствует увеличению количества бактерий и их точной идентификации. Для этого используют питательные среды. Если в образце присутствует нормальная микрофлора, то применяют избирательные (селективные) среды, позволяющие создать условия, неблагоприятные для роста непатогенных микроорганизмов и способствующие росту патогенной микрофлоры.
Для получения точных результатов следует выбрать оптимальный метод отбора проб и подойти к этому процессу с должной аккуратностью. При несоблюдении правил асептики контаминация проб крови микроорганизмами извне может привести к назначению неправильного лечения.
Большинство бактерий не способны существовать вне организма хозяина: облигатные анаэробы погибают под действием кислорода воздуха, а некоторые возбудители очень чувствительны к высыханию (Neisseria gonorrhoeae). Именно поэтому анализируемые образцы сразу после отбора должны быть помещены на подходящие среды или посеяны на среды для транспортировки.
Лабораторные методы исследования при инфекционных заболеваниях
Образцы могут быть проанализированы невооружённым глазом (например, для определения взрослых гельминтов в фекалиях или крови в мокроте). Микроскопия — быстрый и недорогой метод исследования, но требует высокого технического мастерства, характеризуется низкой чувствительностью: для точного определения необходимо присутствие большого количества возбудителей.
Кроме того, очень часто условно-патогенные микроорганизмы принимают за патогенные, что связано с недостаточной специфичностью метода.
Для определения возбудителя могут быть использованы различные красители (например, аурамин или окрашивание по Цилю—Нильсену для идентификации микобактерий). Уротропиновый серебряный окрашивает хитин клеточной стенки грибов и Pneumocystis jiroveci. Краситель Гимза применяют для окрашивания возбудителей малярии, лейшманий и других паразитов.
В основе иммунофлюоресцентного метода лежит применение специфических антител, помеченных флюоресцентными маркёрами. Микроскопию осуществляют в ультрафиолетовом свете, при этом возбудитель и связанные с ним антитела светятся ярко-зелёным цветом.
Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях
Выделение чистой культуры возбудителя при инфекционных заболеваниях
Иногда, даже при выраженных клинических симптомах, возбудитель может присутствовать в очаге инфекции в количестве, недостаточном для микроскопического определения. В этом случае выделение чистой культуры позволяет увеличить численность микроорганизмов в исследуемом субстрате.
Существует два способа выращивания микроорганизмов: на жидких (увеличивается количество возбудителей) и твёрдых (исследуют отдельные колонии, в том числе и на чувствительность к антибиотикам) питательных средах. Большинство возбудителей инфекций человека достаточно требовательны к условиям культивирования. Именно поэтому питательные среды для их выращивания должны содержать белки, сахарозу и нуклеиновые кислоты (присутствующие в крови и сыворотке).
Кроме того, необходимо поддерживать соответствующий газовый состав: для культивирования анаэробов необходимо отсутствие кислорода, в то время как для облигатных аэробов (Bordetella pertussis) — наоборот. Оптимальная температура выращивания большинства патогенных микроорганизмов составляет 37 °С; культивирование некоторых фибов осуществляют при 30 С.
Идентификация возбудителя инфекционного заболевания
Симптомы заболеваний зависят от вида возбудителей, вызвавших их. Именно поэтому идентификация микроорганизма позволяет предположить клиническую картину вызываемого им заболевания (например, симптомы инфекции, вызванной Vibrio cholerae, отличны от таковых при заражении Shigella sonnei). Большое значение имеет выделение Neisseria meningitidis именно из спинномозговой жидкости. Идентификация микроорганизмов основана на:
• изучении морфологических свойств их колоний в агаре;
• различной окраске по Граму;
• способности возбудителей к образованию спор;
• изучении биохимических свойств (каталазный или коагулазный тесты).
Точное определение штамма обычно зависит от результатов биохимического анализа (например, уреазный тест) или обнаружения продуктов жизнедеятельности бактерий (индол). Возбудителей, которые не могут быть выращены на питательных средах, идентифицируют при помощи молекулярно-генетического метода ДНК и секвенирования (например, Trophyrema whippelii).
Определение чувствительности возбудителя инфекционного заболевания к антибиотикам
Если для эрадикации микроорганизмов достаточно стандартной дозы антимикробного препарата, то их считают чувствительными, если необходимо увеличение дозы лекарственного средства — относительно устойчивыми. Абсолютно устойчивыми (резистентными) называют возбудителей, в отношении которых антибиотикотерапия неэффективна. Существует широкий спектр различных методов определения чувствительности к антимикробным препаратам.
Методы Британской ассоциации антимикробной химиотерапии (British Society of Antimicrobial Chemotherapy — BSAQ и Института клинических лабораторных стандартов (Clinical Laboratory Standards Institute — С LSI) основаны на определении диаметра зоны слабого роста микроорганизмов на твёрдой питательной среде при применении антимикробного препарата.
Минимальную подавляющую концентрацию антибиотика измеряют с помощью Е-теста, растворения препарата в питательном бульоне или нанесения его на плотный агар. В последнем случае на засеянный исследуемыми микроорганизмами агар наносят бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками (метод бумажных дисков).
Уровень чувствительности зависит от диаметра зоны пониженного роста бактерий. Однако тестирование in vitro предоставляет лишь приблизительные данные, так как в клинической практике многое зависит от состояния больного.
Серологический анализ при инфекционном заболевании
Различные виды инфекций можно идентифицировать с помощью определения иммунного ответа, возникающего при внедрении возбудителя. Для этого существует большое количество различных методов: реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК), реакция нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ (ИФА). Диагноз устанавливают на основании:
• определения уровня антител (IgM) в ответ на попадание в организм чужеродного белка (антигена);
• определения антигена.
Молекулярный анализ при инфекционном заболевании
Южный блоттинг и метод гибридизации нуклеиновых кислот. Методы основаны на связывании меченой ДНК с анализируемым образцом, при условии, что он имеет определённую последовательность аминокислот. Связанный комплекс определяют по активности метки. Это достаточно быстрый и надёжный способ, который, тем не менее, уступает по чувствительности молекулярно-генетическим методам.
Метод молекулярно-генетический (NAAT)
Для диагностики инфекционных заболеваний используют несколько молекулярно-генетических методов. Механизм выделения патогенной ДНК или РНК в количестве, достаточном для постановки диагноза, для каждого метода индивидуален. Так, при молекулярно-генетическом методе ДНК возбудителя разделяют на отдельные цепи, затем синтезируют праймеры для связывания с целевыми последовательностями. Образование новой ДНК катализирует полимераза.
Основное преимущество — достижение результата даже при наличии всего лишь одной копии ДНК. Благодаря автоматизированным системам и большому выбору специальных наборов эти методы стали доступны большинству диагностических лабораторий. Новые аппараты способны выдавать результат в режиме реального времени. Генетические методы позволяют идентифицировать микроорганизмы, выращивание которых отличается сложностью или сопряжено с риском для человека (например, Mycobacterium tuberculosis и Chlamydia trachomatis).
Кроме того, их можно использовать для определения генов, кодирующих устойчивость к действию антибиотиков (например, мутационный ген rpoВ, обеспечивающий устойчивость М. tuberculosis к рифампицину). Это позволяет заранее выбрать альтернативный путь лечения инфекционных заболеваний.
Иногда необходимо проводить типирование микроорганизмов в случае их распространения в больницах или в окружающей (внебольничной) среде.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Читайте также: