Какие методы используют для изучения морфологии спирохет

Обновлено: 27.03.2024

1. Морфология спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицетов

2. Морфология спирохет

Тип
Spirochaetes
Порядок Spirochaetales
Значение в патологии человека имеют представители трех
родов:
1. Treponema
T. pallidum – возбудитель сифилиса, T. pallidum subsp.
tenue – фрамбезии, T. carateum – возбудитель пинты.
2. Borrelia
B. recurrentis – возбудитель эпидемического возвратного
тифа, B. persica B. hispanica –клещевого возвратного тифа.
B.burgdorferi- болезни Лайма
Семейство
Spirochaetaceae
Семейство
Lepospiraceae
3. Lepospira
L. interrogans – возбудитель лептоспироза.

Морфология спирохет
Строение спирохет соответствует общему плану
строения грамотрицательных бактерий:
цитоплазматический цилиндр окружен оболочкой
из пептидогликана и наружной мембраной.
Важнейшей особенностью спирохет является
внутриклеточное расположение двигательного
аппарата.
Он представлен двумя пучками эндофлагелл,
которые по строению чрезвычайно схожи со
жгутиками.
Эндофлагеллы спирохет расположены в периплазматическом пространстве клеточной
стенки, они берут начало от базальных телец на концах клетки и направлены к её середине.
Эндофлагеллы и цитоплазматический цилиндр взаимно закручены, что определяет извитую
форму клетки и позволяет им совершать различные движения: колебательные, вращательные,
сгибательные.
Особый тип подвижности спирохет позволяет им эффективно передвигаться в вязких средах.

5. Подвижность обеспечивает внутриклеточный аппарат движения: пучки миофибрилл, обвивающие тело трепонемы. Крепятся к базальным телам у пол

Подвижность обеспечивает внутриклеточный аппарат движения: пучки
миофибрилл, обвивающие тело трепонемы. Крепятся к базальным
телам у полюсов клетки, в середине заканчиваются свободно
Электронная микроскопия.
ч - чехол; б - блефаропласт; ф - фибрилы

6. Морфология спирохет

Спирохеты размножаются путём
поперечного деления.
Для некоторых спирохет показано
формирование атипичных
морфологических форм: клеток со
вздутиями, округлых тел (ранее
обозначавшихся как цисты) и
биопленко-подобных агрегатов.

7. Методы микроскопии спирохет

Спирохеты изучают в нативных препаратах, используя темнопольную
микроскопию для выявления их формы и подвижности.
Их ультраструктуру изучают с помощью электронной микроскропии.
Для изучения спирохет в окрашенном состоянии применяют:
1. Метод Романовского-Гимзы. Представители разных родов окрашиваются в разные цвета: в сине-фиолетовый – боррелии, в бледнорозовый – трепонемы, в красно-розовый – лептоспиры.
2. Метод серебрения по Морозову основан на протравливании танином спирохет с последующей обработкой солями серебра; при этом
спирохеты (трепонемы, лептоспиры) несколько утолщаются и имеют вид
темно-коричневых спиралей на светло-желтом фоне препарата.
3. Негативный способ Бурри представляет собой окраску препарата
тушью. Тушь не проникает в тела микробов, поэтому в препаратах по
Бурри на темном фоне туши видны белые контуры спирохет (боррелий,
трепонем).
4. Простой способ окраски пригоден только для окраски боррелий,
другие спирохеты этим методом не окрашиваются.

Leptospira в
темном поле
зрения
Окраска по Романовскому-Гимзе
Leptospira.
Treponema pallidum.
Leptospira. Тушевой мазок
по Бурри
Borrelia reccurentis
Мазок крови во время
приступа
Treponema pallidum.
Серебрение по Морозову

9. Морфология риккетсий

Риккетсии названы по имени X. Т. Риккетса,
впервые описавшего возбудителя пятнистой
лихорадки Скалистых гор.
Риккетсиозы человека:
Группа тифов - эпидемический сыпной
тиф; эндемический (крысиный) сыпной тиф.
Группа пятнистых лихорадок - пятнистая
лихорадка Скалистых Гор;
средиземноморская прыщевая лихорадка;
бразильский сыпной тиф; североазиатский
клещевой риккетсиоз.
Группа лихорадок цуцугамуши - лихорадка
цуцугамуши японская; малайский
скребковый тиф; суматранский клещевой
тиф.
Смешанная группа - окопная лихорадка; Кулихорадка; осповидный риккетсиоз.
1.
2.
3.
4.
Здродовский
Павел Федорович
Howard Taylor
Ricketts
Stanislaus von Prowazek

10. Таксономическое положение

Домен:
Bacteria
Тип:
Proteobacteria
Порядок: Rickettsiales
Семейство: Rickettsiaceae
Патогенные для человека виды риккетсий входят в состав
родов Rickettsia, Rochalimaea и Coxiella
Наибольшее значение имеют возбудители
эпидемического сыпного тифа (Rickettsia prowazekii),
пятнистой лихорадки Скалистых гор (Rickettsia rickettsii)
североазиатского клещевого риккетсиоза (Rickettsia
sibirica).

11. Морфология риккетсий. Биологические свойства

грамотрицательные полиморфные
прокариоты,
могут иметь кокковидную, палочковидную
или нитевидную форму.
облигатные внутриклеточные
паразиты,
Жизненный цикл риккетсий включает 2
стадии – вегетативную (внутриклеточную) и
покоящуюся.
Риккетсии способны проникать в
цитоплазму клеток хозяина, разрушая
мембрану фагосом с помощью
фосфолипаз.
В цитоплазме они активно размножаются
бинарным делением, потребляя
необходимые им вещества.
Выход из клетки-хозяина может
осуществляться при её лизисе.

Жизненный цикл риккетсий
• Адсорбция;
• проникновение в
клетку путем
эндоцитоза;
• выход в
цитоплазму;
• переход в
вегетативную форму
и размножение;
• превращение в
покоящуюся форму
и дегенгерация
клетки-хозяина;
• выход риккетсий из
погибшей клетки.

Биологические свойства(продолжение)
Покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью; клетки округлые,
меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой, уплотненной
цитоплазмой.
Риккетсии содержат большое количество липидов и плохо воспринимают
анилиновые красители, для их окраски применяют сложные методы –
Романовского-Гимзы и Маккиавелло-Здродовского
Заражение риккетсиями происходит трансмиссивным путём через укусы
членистоногих.
В организме человека риккетсии преимущественно поражают клетки
эндотелия сосудов.
Rickettsia prowazekii (окраска по Здродовскому)
В клетках куриного эмбриона
В эндотелии кровеносных сосудов
Цитоплазма голубая, ядро синее и риккетсии внутри клеток красные

15. Биологические свойства(продолжение)

Риккетсии не обладают
ферментами,
необходимыми для
гликолиза, однако
способны осуществлять
окислительное
фосфорилирование с
помощью цикла
трикарбоновых кислот и
дыхательной цепи, а также
напрямую получать АТФ из
клетки-хозяина.
Данные бактерии лишены способности синтезировать большинство
витаминов и кофакторов, включая НАД, а также обладают
ограниченными возможностями синтеза аминокислот, нуклеотидов и
липидов.

16. Культивирование риккетсий

Риккетсии не растут на классических питательных средах, их
культивируют
в желточном мешке куриного эмбриона
и в некоторых линиях
клеток членистоногих или
млекопитающих.

17. Морфология хламидий

Хламидии свое название получили от Chlamyda - накидка, так как при
микроскопии пораженных клеток колонии хламидий как бы "накрывают"
ядро клетки.
Таксономическое положение хламидий:
Домен:
Тип:
Порядок:
Семейство:
Род:
Бактерии
Chlamydiae
Chlamydiales
Chlamydiaceae
Chlamydia
Хламидии, патогенные для человека:
Chlamydia trachomatis - возбудитель трахомы и урогенитальных инфекций,
Chlamydia pneumoniae - вызывает различные формы респираторных
инфекций,
Chlamydia psittaci – возбудитель орнитоза.

18. Биологические свойства хламидий

Хламидии - мелкие грамотрицательные прокариоты шаровидной или овоидной
формы, не образуют спор, неподвижны, не имеют капсулы.
В составе клеточной стенки отсутствует пептидогликан, ригидные функции
выполняют белки наружной мембраны,
облигатные внутриклеточные паразиты.
Хламидии зависят от энергетических ресурсов эукариотической клетки, а также
конкурируют с клеткой-хозяином за питательные вещества, витамины,
кофакторы.
Главной биологической особенностью хламидий является уникальный
внутриклеточный цикл развития, состоящий из чередования двух форм
возбудителя:
Элементарные тельца (ЭТ, мелкая инвазивная форма) обеспечивают
внеклеточное выживание, обеспечивает прикрепление к клетке-мишени и
проникновение в нее; метаболически мало активны, имеют жесткую клеточную
стенку, резистентны к осмотическому шоку, устойчивы практически ко всем
известным в настоящее время антибиотикам.
Ретикулярные тельца (РТ, значительно более крупная внутриклеточная форма)
обладают высокой метаболической активностью, выраженной
чувствительностью к антибиотикам, способны к бинарному делению.

21. Жизненный цикл хламидий

22. Микроколонии хламидий в клетке

Изучают хламидии в живом состоянии, в фазово-контрастном микроскопе и
окрашивают методом Романовского-Гимзы:
ЭТ окрашивается в пурпурный цвет и четко выделяется на голубом фоне
цитоплазмы клетки-мишени
РТ окрашивается в голубой цвет

23. Культивирование хламидий

24. Отличие риккетсий и хламидий от собственно бактерий

Являются облигатными
внутриклеточными паразитами
Внутри клетки хозяина они сохраняют свою клеточную
структуру и используют только ее энергию –
энергетические паразиты
Существуют в 2 формах
– внеклеточной и вегетативной
внутриклеточной
Имеют сложный цикл развития

25. Микоплазмы

26. Микоплазмы

Единственной поверхностной оболочкой микоплазм является
цитоплазматическая мембрана, в большинстве случаев содержащая
экзогенный холестерин эукариотического происхождения.
Для микоплазм характерен значительный полиморфизм с образованием
округлых и нитчатых форм, однако наиболее часто встречаются грушевидные
или веретеновидные клетки.
Это обуславливается наличием терминальной органеллы – выроста
мембраны, укрепленного сложным белковым аппаратом.
Терминальная органелла используется для адгезии, а также для особого вида
подвижности – скольжения по различным поверхностям.
Сканирующая электронная
микрофотография
движущейся микоплазмы

27. Микоплазмы

28. Микоплазмы

29. Микоплазмы

В связи с морфологическими особенностями микоплазмы не удается
окрашивать анилиновыми красителями, и их изучают в нативных препаратах в
фазово-контрастном микроскопе.
Для выявления микоплазм в культуре зараженных клеток активно
применяются красители, образующие флуоресцентные комплексы с ДНК,
например, 4',6-диамидино -2-фенилиндол (DAPI).
При культивировании микоплазмы даже при использовании самых богатых
питательных сред растут очень медленно (видимый рост через 2-4 недели),
колонии на твердой питательной среде имеют характерный вид: их
центральная зона утолщена и проникает вглубь агара, а периферическая часть
тонкая и расположена на поверхности.
Колонии микоплазм
Культура клеток,
инфицированных
микоплазмами

30. Актиномицеты

Актиномицеты (ветвящиеся бактерии, лучистые грибки) – прокароты с типичной
ультраструктурой клетки и чувствительностью к антибиотикам,
грамположительные палочки.
Отличительной особенностью является способность образовывать мицелий на
плотных питательных средах
За сходство с грибами длинные ветвящиеся клетки получил название гифы.
Таксономическое положение :
Порядок
Actinomycetales
Семейство
Actinomycetaceae
Род
Actinomyces
Вид
Actinomyces israelii (входит в состав нормальной микрофлоры рта);
Семейство Streptomycetaceae
Род
Streptomyces
Наиболее обычные возбудители, ответственные за внутригоспитальные
инфекции, например, сепсис, связанный с наличием катетера, или
послеоперационные раневые инфекции, принадлежат родам Nocardia и
Actinomadura, но от больных также иногда выделяют и другие актиномицеты.

31. Актиномицеты

Мазок из чистой культуры
актиномицетов. Окраска по
Граму
Актиномицеты неподвижны,
Ультраструктура клетки типична для прокариот, но по форме клетки
напоминают ветвящиеся нити. За это сходство с грибами клетки
актиномицетов получили название гифы.
Имеют клеточную стенку, типичную для грамположительных бактерий,
хотя отличаются внутри группы содержанием в ней разных
стереоизомеров диаминопимелиновой кислоты (ДАП), аминокислот
и сахаров.
В нитях актиномицетов могут выявляться гранулы волютина, который
образуется и накапливается в зависимости от состава среды, условий
роста и возраста культур.
В зрелых нитях мицелия встречаются крупные зернистые вакуоли.
Предполагается, что эти вакуоли образуются из запасных веществ.
Клетки мицелия представителей лучистых грибков хорошо окрашиваются
основными анилиновыми красками: метиленовой синью, метиловым
фиолетовым, карболовым фуксином и др.

32. Актиномицеты. Культуральные свойства

Актиномицеты хорошо растут на простых средах и
различаются между собой по росту на поверхности и в
глубине агара, по образованию воздушного и
субстратного мицелия, образованию спор, спорангиев
и т.п.
Субстратный мицелий развивается в глубине среды
и представляет собой как бы корневую питательную
систему. Нити его всасывают питательные вещества
среды и доставляют колонии, а оттуда в воздушный
мицелий.
По сложности строения плодоносных органов
актиномицеты разделяются на две группы — высшие
и низшие формы.
К высшим относятся организмы с хорошо развитым
мицелием, на отдельных ветках которого, называемых
спороносцами, образуются споры. Эти споры не
обладают такой устойчивостью, как споры бактерий,
хотя выдерживают высушивание, и служат для
размножения. В эту группу входит большинство
основных семейств и родов, составляющих класс
Actinomycetes.
К низшим формам относятся организмы,
не образующие мицелия и имеющие палочковидные
и кокковидные клетки. Размножаются актиномицеты
бинарным делением, фрагментами мицелия и
спорами.

33. Актиномицеты. Культуральные свойства

Из культуральных свойств
для разделения
актиномицетов на группы
наиболее значима окраска
культур — пигментация.
По этому признаку лучистые
грибки делятся на две
группы — бесцветные
и пигментированные.

34. Актиномицеты

Друза в ткани
Актиномикоз - хроническая болезнь, вызываемая
различными видами актиномицетов, характеризуется
поражением различных органов и тканей с
образованием плотных инфильтратов, которые затем
нагнаиваются с появлением свищей и своеобразным
поражением кожи - распространен повсеместно и
встречается в трех основных клинических формах:
шейно-челюстно-лицевой, торакальной и
абдоминальной, но может поражать и другие области.
В пораженном организме актиномицеты образуют
друзы, которые представляют собой желтоватые
комочки диаметром 1—2 мм, имеющие звездчатую,
лучистую форму.
При микроскопии в центре друз обнаруживается
скопление нитей мицелия, а по периферии —
колбовидные вздутия.
Центр друзы состоит из растущего или компактного
кальцинированного плотного мицелия,
периферийные (концевые) гифы, расположенные на
поверхности мицелия, покрыты капсулоподобными
эозинофильными чехлами, выполняющими защитную
функцию.
При окраске гематоксилин-эозином центральная часть
друзы окрашивается в синий цвет, а колбы в розовый.

35. Актиномицеты

Основная естественная среда обитания
всех патогенных для человека
ферментирующих актиномицетов полость рта здоровых взрослых людей,
где они живут в значительных
количествах.
Из многих культур актиномицетов получают
лекарственные препараты — антибиотики,
используемые в медицине, ветеринарии,
растениеводстве, пищевой промышленности.
Актиномицеты – основные продуценты
антибиотиков среди бактерий
Актиномицеты способны продуцировать
витамины, гормоны, ферменты, токсины,
ростовые вещества, аминокислоты и другие
полезные для человека биологические
вещества
Актиномицеты на питательной среде,
выделяя антибиотик, сдерживают
размножение бактерий

В периплазматическом пространстве клеточной стенки вдоль всего тела бактерий проходит осевая нить (аксиальная нить или фибрилла), состоящая – аналогично жгутику – из сократительного белка флагеллина и служащая органом движения. Поэтому спирохеты двигаются благодаря сокращению всего тела

Окраска по Романовскому-Гимзе

Преимущественно используемый для обнаружения вид микроскопии

Любой вид микроскопии

Методы выявления спирохет.

- Спирохеты плохо воспринимают красители. Обычно их окрашивают по методу Романовского-Гимзе или серебрением по Морозову, а также применяют негативное окрашивание по методу Бурри; в живом виде их исследуют с помощью фазово-котрастной и темнопольной микроскопии.

Метод Романовского-Гимзе. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура растворенных в смеси метанола с глицерином. Базофильная зернистость окрашивается в синий цвет, эозинофильная - в красный, а нейтрофильная - в сиреневый цвет.

Техника окраски.

1. Приготовить микроскопический препарат и обработать его в жидком фиксаторе.

2. Поместить фиксированный препарат на два стеклянных валика в чашку Петри вниз ко дну и подливают разведенный в 10-20 раз свежеприготовленный краситель. Окрашивание длится от 30-60 минут до нескольких часов.

3. Мазки промывают водой и высушивают на воздухе.

22. Актиномицеты. Систематическое положение. Роль в природе. Идентификация.

Систематическое положение актиномицетов.

Царство. Prokaryotae

Отдел. Firmicutes

Порядок. Actinomycetales

Семейство. Actinomycetaсeae

Роды. 1. Actinomyces

Актиномицеты - это бактерии, сходные с мицеллярными грибами. С бактериями у них общее строение клетки, с грибами - форма клетки и размножение. Большинство актиномицетов обитают в почве и составляют 20-60% общей микробной популяции. Патогенные представители - Actinomyces israelii, Actinomyces naeslundii вызывают актиномикоз. Стрептомицеты продуцируют антибиотики.

Методы выявления:

1. По Грамму (грамположительны). В пораженных тканях они образуют актиномикотическую друзу, которая представляет собой агрегаты переплетенного мицелия в центре с отдельными, отходящими наподобие лучей гифами с колбовидным утолщением на концах - по периферии. При окраске по Граму центр окрашивается позитивно, а поверхность негативно.

2. Микроскопические препараты из актиномицетов можно окрасить по методу Романовского-Гимзе и по Цилю–Нельсену (некоторые актиномицеты кислотоустойчивы).

3. Актиномицеты хорошо воспринимают анилиновые красители, например, метиленовый синий.

Морфология: представляют собой слабоветвящиеся (актиномицеты) палочки или сильноветвящиеся гифы (стрептомицеты). Стрептомицеты образуют экзоспоры. Пептидогликан содержит сахара, отсутствующие у других прокариот.

Для исследования живых спирохет и лептоспир используется метод тёмного поля и прямая люминесцентная микроскопия.

Препараты для них готовят одинаково с небольшими различиями

- берут 1 каплю биосубстрата (кровь, вода, соскоб из язвы и пр.), наносят на стекло

- осторожно закрепляют покровным стеклом и устанавливают на столик темнопольного, либо люминесцентного микроскопа

- микроскопируют с иммерсионной системой.

Особенности методов

Микроскопия в тёмном поле

1. Конденсор Аббе в обычном световом микроскопе заменяют на специальный тёмнопольный. При его отсутствии модернизируют обычный. Для этого:

- из чёрной фотографической бумаги вырезают круг размером с 50 копеечную монету;

- наклеивают на середину верхней линзы конденсора строго посередине с круговым зазором для света;

- фиксируют конденсор в микроскопе.

2. Перед микроскопией на конденсор наносят каплю дистиллированной воды для предотвращения рассеивания света, но можно не наносить.

3. На покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют.

4. При работе с большим объектом в биоматериале можно вместо ОИ-90 использовать один из сухих объективов (*7, * 10, *20, *40), а масло заменить дистиллированной водой.

При микроскопии на тёмном фоне видны серебристые движущиеся спирохеты.

Люминесцентная прямая микроскопия.

- При приготовлении препарата к биоматериалу для прижизненной окраски добавляют флюорохром акридин оранжевый в рабочем разведении 1:1000 и только после этого накрывают покровным стеклом. Микроскопируют в люминесцентном микроскопе МЛ-1 или МЛ-2 с набором пропускающих и запирающих фильтров для УФ-лучей.

- Вместо обычного иммерсионного масла используют нелюминисцирующее иммерсионное или его заменители (репелленты - дибутилфталат, диметилфталат). Микроскопируют в затемнённом помещении.

При микроскопии жизнеспособные клетки двигаются, имеют чаще зелёное свечение, нежизнеспособные и умирающие оранжевые и обездвижены. Оба метода особенно удобны при обнаружении лептоспир, которые невозможно окрасить.

Приложение 2

Окраска спирохет в чистом виде и в биоматериале

1. Серебрение по Морозову.

2. Окраска по Романовскому-Гимзе

- препарат фиксируют химическим фиксатором

- окрашивают раствором красителя краски Гимзе (2 капли — азур-эозин с метиленовой синью на 1 мл щелочной дистиллированной воды) 20 минут

- промывают водой, высушивают

- микроскопируют с иммерсией. Ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма - голубая или слабо-розовая. Примечание: если краситель спиртовой, то мазок не фиксируется

3. Окраска по Граму.

4. Обработка по Бурри.

Приложение 3

Вопросы для тестового контроля усвоения темы

1. Возбудители спирохетозов выявляют на препаратах по а) Ожешко б) Граму в) методом темного поля

2. Какие структурных элементов нет у спирохет? а) первичных анатомических завитков б) вторичных функциональных завитков в) осевой эластической нити д) фибрилы е) спор ж) цист

3. Чем микоплазмы отличаются от других видов бактерий: а) имеют ядро б) не имеют цитоплазматической мембраны в) не имеют клеточной стенки г) имеют нуклеоид

5. Какие из перечисленных микроорганизмов могут образовывать в организме больного цисты: а) риккетсии б) спирохеты в) микоплазмы

6. Назовите форму риккетсий: а) шаровидная б) палочковидная в) нитевидная г) полиморфная д) бациллярная

7. Риккетсии окрашивают по:

8. Риккетсии окрашиваются в цвет:

9. По своим биологическим свойствам простейшие относятся к:

10. По своим биологическим свойствам грибы относятся к:

11. По своим биологическим свойствам спирохеты относятся к:

12. Трофозоиды простейших окрашивают:

а) раствором Люголя б) по Романовскому — Гимзе

13. Цисты простейших окрашивают: а) раствором Люголя б) по Романовскому — Гимзе

14. Кому из грибов принадлежат мицелий и гифы: а) дрожжи и дрожжеподобные б) лучистые в) нитчатые г) все вышеперечисленные

15. Кому из грибов свойственно почкование и зерна волютина: а) дрожжи и дрожжеподобные б) лучистые в) нитчатые

16. Кому из грибов принадлежат друзы: а) дрожжи и дрожжеподобные б) гифальные

17. Чем являются для грибов аски (эндоспоры): а) органами размножения б) органеллами защиты в) органом дыхания г) органом сохранения вида

18. Чем являются для бактерий споры: а) органами размножения б) органеллами защиты в) органом дыхания г) органом сохранения вида

РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Лекция по теме.

2. Методическая разработка по теме.

3. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. С-Пб., 2005. С. 41-45.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. Воробьева А.А. М., 2006. С. 30-50.

5. Мотавкина Н.С., Артёмкин В.Д. Атлас по микробиологии и вирусологии. М. 1976. С. 7- 12.

6. Кашкин П.Н. Медицинская микробиология. М., 1999. С. 529-531.

Медицинская микробиология. Под редакцией В.И. Покровского, О.К. Поздеева. М., 1999.

Спирохеты (speira – виток, изгиб, chaite – волосы) – спиралевидные прокариоты, животной природы, не имеют ядра, не имеют клеточной стенки, движутся за счет осевой нити, при неблагоприятных условиях образуют цисты.

Патогенностью обладают спирохеты из родов Treponema (сифилис), Borellia (эпидемический и клещевой возвратный тиф), Leptospira (лептоспироз). Обладают способностью к активному движению – в клеточной стенке содержатся упорядоченно расположенные микрофибриллы – эндофлагеллы. Клетка спирохеты в структурном отношении представляет собой цитоплазматический цилиндр, ограниченный ЦПМ и покрытый клеточной стенкой. В цитоплазме содержатся нуклеоид, рибосомы, мезосомы, включения. Клеточная стенка тонкая, состоит из наружной мембраны и пептидогликанового слоя, тесно прилежащего к ЦПМ.

Микроскопия: Морфологию спирохет изучают в световом микроскопе в окрашенных препаратах, в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Спирохеты различаются по способности окрашиваться: одни хорошо окрашиваются обычными анилиновыми красителями - фуксином (боррелии – грамотрицательные), другие требуют специальных методов окраски (чаще всего по Романовскому-Гимзе).

Число и характер завитков

Характер движения

Окраска по методу Романовского-Гимзе

3-6, крупные, неравномерные

очень активное, вращательно-поступательное

2.Реакция преципитации (РП). Ускроенные серологические р-ии. Высокая чувств-ть. А: гаптен ,токсин. АТ содержатся в преципитирующей сыворотке. С пом. РП определяют видовую принадлежность белковых и кровяных пятен (в суд.медицине),вид. специфич-ть белковых добавок в пищ . продуктах.

Способ получения гаптена: суточную агаровую културу бактерий сываютизотонич. р-ром NaCl,кипятят,фильтруют и титруют. В резуль-те преципитации при титровании разводят не сыворотку,а АГ. Титр преципитир. р-ии–наименьшее кол-во АГ(наиб. его разведение) ,дающее видимую р-ю.

Варианты РП в геле: А) радиальная иммунодиффузия по Манчини. Использ-ся для определения ур-я Ig в сыворотке кр. больного пприопредел-иииммун. статуса. Для поставноуи р-ии необходимы наборы моноспецифических диагностич. сывороток протиIg-ов человека: IgA(H), IgG(H+L), IgM(H). Эти сыворотки получ. гипериммуниз-ей кроликов,овец или коз иммуноглоб-амиIgG ,A ,M чел-ка.

Способ постановки: На стеклянную пластинку,покрытую тонки слоем агара с лунками, вносят сыворотку больного и диагностическую монорецепторные сыворотки. Пластинки выдерж во влажной камере при t 24 С’- 48часов. учет результатов произв. по изм-ю диаметра колец преципит-ии.Кол-во Igпроизв-ят по колибровочной кривой: на оси абсцисс-диметр кольца преципит-ии,на оси ординат-ур-ньIg в МЕ/мл.

1. Морфология спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицетов

2. Морфология спирохет

Тип
Spirochaetes
Порядок Spirochaetales
Значение в патологии человека имеют представители трех
родов:
1. Treponema
T. pallidum – возбудитель сифилиса, T. pallidum subsp.
tenue – фрамбезии, T. carateum – возбудитель пинты.
2. Borrelia
B. recurrentis – возбудитель эпидемического возвратного
тифа, B. persica B. hispanica –клещевого возвратного тифа.
B.burgdorferi- болезни Лайма
Семейство
Spirochaetaceae
Семейство
Lepospiraceae
3. Lepospira
L. interrogans – возбудитель лептоспироза.

Морфология спирохет
Строение спирохет соответствует общему плану
строения грамотрицательных бактерий:
цитоплазматический цилиндр окружен оболочкой
из пептидогликана и наружной мембраной.
Важнейшей особенностью спирохет является
внутриклеточное расположение двигательного
аппарата.
Он представлен двумя пучками эндофлагелл,
которые по строению чрезвычайно схожи со
жгутиками.
Эндофлагеллы спирохет расположены в периплазматическом пространстве клеточной
стенки, они берут начало от базальных телец на концах клетки и направлены к её середине.
Эндофлагеллы и цитоплазматический цилиндр взаимно закручены, что определяет извитую
форму клетки и позволяет им совершать различные движения: колебательные, вращательные,
сгибательные.
Особый тип подвижности спирохет позволяет им эффективно передвигаться в вязких средах.

5. Подвижность обеспечивает внутриклеточный аппарат движения: пучки миофибрилл, обвивающие тело трепонемы. Крепятся к базальным телам у пол

Подвижность обеспечивает внутриклеточный аппарат движения: пучки
миофибрилл, обвивающие тело трепонемы. Крепятся к базальным
телам у полюсов клетки, в середине заканчиваются свободно
Электронная микроскопия.
ч - чехол; б - блефаропласт; ф - фибрилы

6. Морфология спирохет

Спирохеты размножаются путём
поперечного деления.
Для некоторых спирохет показано
формирование атипичных
морфологических форм: клеток со
вздутиями, округлых тел (ранее
обозначавшихся как цисты) и
биопленко-подобных агрегатов.

7. Методы микроскопии спирохет

Спирохеты изучают в нативных препаратах, используя темнопольную
микроскопию для выявления их формы и подвижности.
Их ультраструктуру изучают с помощью электронной микроскропии.
Для изучения спирохет в окрашенном состоянии применяют:
1. Метод Романовского-Гимзы. Представители разных родов окрашиваются в разные цвета: в сине-фиолетовый – боррелии, в бледнорозовый – трепонемы, в красно-розовый – лептоспиры.
2. Метод серебрения по Морозову основан на протравливании танином спирохет с последующей обработкой солями серебра; при этом
спирохеты (трепонемы, лептоспиры) несколько утолщаются и имеют вид
темно-коричневых спиралей на светло-желтом фоне препарата.
3. Негативный способ Бурри представляет собой окраску препарата
тушью. Тушь не проникает в тела микробов, поэтому в препаратах по
Бурри на темном фоне туши видны белые контуры спирохет (боррелий,
трепонем).
4. Простой способ окраски пригоден только для окраски боррелий,
другие спирохеты этим методом не окрашиваются.

Leptospira в
темном поле
зрения
Окраска по Романовскому-Гимзе
Leptospira.
Treponema pallidum.
Leptospira. Тушевой мазок
по Бурри
Borrelia reccurentis
Мазок крови во время
приступа
Treponema pallidum.
Серебрение по Морозову

9. Морфология риккетсий

Риккетсии названы по имени X. Т. Риккетса,
впервые описавшего возбудителя пятнистой
лихорадки Скалистых гор.
Риккетсиозы человека:
Группа тифов - эпидемический сыпной
тиф; эндемический (крысиный) сыпной тиф.
Группа пятнистых лихорадок - пятнистая
лихорадка Скалистых Гор;
средиземноморская прыщевая лихорадка;
бразильский сыпной тиф; североазиатский
клещевой риккетсиоз.
Группа лихорадок цуцугамуши - лихорадка
цуцугамуши японская; малайский
скребковый тиф; суматранский клещевой
тиф.
Смешанная группа - окопная лихорадка; Кулихорадка; осповидный риккетсиоз.
1.
2.
3.
4.
Здродовский
Павел Федорович
Howard Taylor
Ricketts
Stanislaus von Prowazek

10. Таксономическое положение

Домен:
Bacteria
Тип:
Proteobacteria
Порядок: Rickettsiales
Семейство: Rickettsiaceae
Патогенные для человека виды риккетсий входят в состав
родов Rickettsia, Rochalimaea и Coxiella
Наибольшее значение имеют возбудители
эпидемического сыпного тифа (Rickettsia prowazekii),
пятнистой лихорадки Скалистых гор (Rickettsia rickettsii)
североазиатского клещевого риккетсиоза (Rickettsia
sibirica).

11. Морфология риккетсий. Биологические свойства

грамотрицательные полиморфные
прокариоты,
могут иметь кокковидную, палочковидную
или нитевидную форму.
облигатные внутриклеточные
паразиты,
Жизненный цикл риккетсий включает 2
стадии – вегетативную (внутриклеточную) и
покоящуюся.
Риккетсии способны проникать в
цитоплазму клеток хозяина, разрушая
мембрану фагосом с помощью
фосфолипаз.
В цитоплазме они активно размножаются
бинарным делением, потребляя
необходимые им вещества.
Выход из клетки-хозяина может
осуществляться при её лизисе.

Жизненный цикл риккетсий
• Адсорбция;
• проникновение в
клетку путем
эндоцитоза;
• выход в
цитоплазму;
• переход в
вегетативную форму
и размножение;
• превращение в
покоящуюся форму
и дегенгерация
клетки-хозяина;
• выход риккетсий из
погибшей клетки.

Биологические свойства(продолжение)
Покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью; клетки округлые,
меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой, уплотненной
цитоплазмой.
Риккетсии содержат большое количество липидов и плохо воспринимают
анилиновые красители, для их окраски применяют сложные методы –
Романовского-Гимзы и Маккиавелло-Здродовского
Заражение риккетсиями происходит трансмиссивным путём через укусы
членистоногих.
В организме человека риккетсии преимущественно поражают клетки
эндотелия сосудов.
Rickettsia prowazekii (окраска по Здродовскому)
В клетках куриного эмбриона
В эндотелии кровеносных сосудов
Цитоплазма голубая, ядро синее и риккетсии внутри клеток красные

15. Биологические свойства(продолжение)

Риккетсии не обладают
ферментами,
необходимыми для
гликолиза, однако
способны осуществлять
окислительное
фосфорилирование с
помощью цикла
трикарбоновых кислот и
дыхательной цепи, а также
напрямую получать АТФ из
клетки-хозяина.
Данные бактерии лишены способности синтезировать большинство
витаминов и кофакторов, включая НАД, а также обладают
ограниченными возможностями синтеза аминокислот, нуклеотидов и
липидов.

16. Культивирование риккетсий

Риккетсии не растут на классических питательных средах, их
культивируют
в желточном мешке куриного эмбриона
и в некоторых линиях
клеток членистоногих или
млекопитающих.

17. Морфология хламидий

Хламидии свое название получили от Chlamyda - накидка, так как при
микроскопии пораженных клеток колонии хламидий как бы "накрывают"
ядро клетки.
Таксономическое положение хламидий:
Домен:
Тип:
Порядок:
Семейство:
Род:
Бактерии
Chlamydiae
Chlamydiales
Chlamydiaceae
Chlamydia
Хламидии, патогенные для человека:
Chlamydia trachomatis - возбудитель трахомы и урогенитальных инфекций,
Chlamydia pneumoniae - вызывает различные формы респираторных
инфекций,
Chlamydia psittaci – возбудитель орнитоза.

18. Биологические свойства хламидий

Хламидии - мелкие грамотрицательные прокариоты шаровидной или овоидной
формы, не образуют спор, неподвижны, не имеют капсулы.
В составе клеточной стенки отсутствует пептидогликан, ригидные функции
выполняют белки наружной мембраны,
облигатные внутриклеточные паразиты.
Хламидии зависят от энергетических ресурсов эукариотической клетки, а также
конкурируют с клеткой-хозяином за питательные вещества, витамины,
кофакторы.
Главной биологической особенностью хламидий является уникальный
внутриклеточный цикл развития, состоящий из чередования двух форм
возбудителя:
Элементарные тельца (ЭТ, мелкая инвазивная форма) обеспечивают
внеклеточное выживание, обеспечивает прикрепление к клетке-мишени и
проникновение в нее; метаболически мало активны, имеют жесткую клеточную
стенку, резистентны к осмотическому шоку, устойчивы практически ко всем
известным в настоящее время антибиотикам.
Ретикулярные тельца (РТ, значительно более крупная внутриклеточная форма)
обладают высокой метаболической активностью, выраженной
чувствительностью к антибиотикам, способны к бинарному делению.

21. Жизненный цикл хламидий

22. Микроколонии хламидий в клетке

Изучают хламидии в живом состоянии, в фазово-контрастном микроскопе и
окрашивают методом Романовского-Гимзы:
ЭТ окрашивается в пурпурный цвет и четко выделяется на голубом фоне
цитоплазмы клетки-мишени
РТ окрашивается в голубой цвет

23. Культивирование хламидий

24. Отличие риккетсий и хламидий от собственно бактерий

Являются облигатными
внутриклеточными паразитами
Внутри клетки хозяина они сохраняют свою клеточную
структуру и используют только ее энергию –
энергетические паразиты
Существуют в 2 формах
– внеклеточной и вегетативной
внутриклеточной
Имеют сложный цикл развития

25. Микоплазмы

26. Микоплазмы

Единственной поверхностной оболочкой микоплазм является
цитоплазматическая мембрана, в большинстве случаев содержащая
экзогенный холестерин эукариотического происхождения.
Для микоплазм характерен значительный полиморфизм с образованием
округлых и нитчатых форм, однако наиболее часто встречаются грушевидные
или веретеновидные клетки.
Это обуславливается наличием терминальной органеллы – выроста
мембраны, укрепленного сложным белковым аппаратом.
Терминальная органелла используется для адгезии, а также для особого вида
подвижности – скольжения по различным поверхностям.
Сканирующая электронная
микрофотография
движущейся микоплазмы

27. Микоплазмы

28. Микоплазмы

29. Микоплазмы

В связи с морфологическими особенностями микоплазмы не удается
окрашивать анилиновыми красителями, и их изучают в нативных препаратах в
фазово-контрастном микроскопе.
Для выявления микоплазм в культуре зараженных клеток активно
применяются красители, образующие флуоресцентные комплексы с ДНК,
например, 4',6-диамидино -2-фенилиндол (DAPI).
При культивировании микоплазмы даже при использовании самых богатых
питательных сред растут очень медленно (видимый рост через 2-4 недели),
колонии на твердой питательной среде имеют характерный вид: их
центральная зона утолщена и проникает вглубь агара, а периферическая часть
тонкая и расположена на поверхности.
Колонии микоплазм
Культура клеток,
инфицированных
микоплазмами

30. Актиномицеты

Актиномицеты (ветвящиеся бактерии, лучистые грибки) – прокароты с типичной
ультраструктурой клетки и чувствительностью к антибиотикам,
грамположительные палочки.
Отличительной особенностью является способность образовывать мицелий на
плотных питательных средах
За сходство с грибами длинные ветвящиеся клетки получил название гифы.
Таксономическое положение :
Порядок
Actinomycetales
Семейство
Actinomycetaceae
Род
Actinomyces
Вид
Actinomyces israelii (входит в состав нормальной микрофлоры рта);
Семейство Streptomycetaceae
Род
Streptomyces
Наиболее обычные возбудители, ответственные за внутригоспитальные
инфекции, например, сепсис, связанный с наличием катетера, или
послеоперационные раневые инфекции, принадлежат родам Nocardia и
Actinomadura, но от больных также иногда выделяют и другие актиномицеты.

31. Актиномицеты

Мазок из чистой культуры
актиномицетов. Окраска по
Граму
Актиномицеты неподвижны,
Ультраструктура клетки типична для прокариот, но по форме клетки
напоминают ветвящиеся нити. За это сходство с грибами клетки
актиномицетов получили название гифы.
Имеют клеточную стенку, типичную для грамположительных бактерий,
хотя отличаются внутри группы содержанием в ней разных
стереоизомеров диаминопимелиновой кислоты (ДАП), аминокислот
и сахаров.
В нитях актиномицетов могут выявляться гранулы волютина, который
образуется и накапливается в зависимости от состава среды, условий
роста и возраста культур.
В зрелых нитях мицелия встречаются крупные зернистые вакуоли.
Предполагается, что эти вакуоли образуются из запасных веществ.
Клетки мицелия представителей лучистых грибков хорошо окрашиваются
основными анилиновыми красками: метиленовой синью, метиловым
фиолетовым, карболовым фуксином и др.

32. Актиномицеты. Культуральные свойства

Актиномицеты хорошо растут на простых средах и
различаются между собой по росту на поверхности и в
глубине агара, по образованию воздушного и
субстратного мицелия, образованию спор, спорангиев
и т.п.
Субстратный мицелий развивается в глубине среды
и представляет собой как бы корневую питательную
систему. Нити его всасывают питательные вещества
среды и доставляют колонии, а оттуда в воздушный
мицелий.
По сложности строения плодоносных органов
актиномицеты разделяются на две группы — высшие
и низшие формы.
К высшим относятся организмы с хорошо развитым
мицелием, на отдельных ветках которого, называемых
спороносцами, образуются споры. Эти споры не
обладают такой устойчивостью, как споры бактерий,
хотя выдерживают высушивание, и служат для
размножения. В эту группу входит большинство
основных семейств и родов, составляющих класс
Actinomycetes.
К низшим формам относятся организмы,
не образующие мицелия и имеющие палочковидные
и кокковидные клетки. Размножаются актиномицеты
бинарным делением, фрагментами мицелия и
спорами.

33. Актиномицеты. Культуральные свойства

Из культуральных свойств
для разделения
актиномицетов на группы
наиболее значима окраска
культур — пигментация.
По этому признаку лучистые
грибки делятся на две
группы — бесцветные
и пигментированные.

34. Актиномицеты

Друза в ткани
Актиномикоз - хроническая болезнь, вызываемая
различными видами актиномицетов, характеризуется
поражением различных органов и тканей с
образованием плотных инфильтратов, которые затем
нагнаиваются с появлением свищей и своеобразным
поражением кожи - распространен повсеместно и
встречается в трех основных клинических формах:
шейно-челюстно-лицевой, торакальной и
абдоминальной, но может поражать и другие области.
В пораженном организме актиномицеты образуют
друзы, которые представляют собой желтоватые
комочки диаметром 1—2 мм, имеющие звездчатую,
лучистую форму.
При микроскопии в центре друз обнаруживается
скопление нитей мицелия, а по периферии —
колбовидные вздутия.
Центр друзы состоит из растущего или компактного
кальцинированного плотного мицелия,
периферийные (концевые) гифы, расположенные на
поверхности мицелия, покрыты капсулоподобными
эозинофильными чехлами, выполняющими защитную
функцию.
При окраске гематоксилин-эозином центральная часть
друзы окрашивается в синий цвет, а колбы в розовый.

35. Актиномицеты

Основная естественная среда обитания
всех патогенных для человека
ферментирующих актиномицетов полость рта здоровых взрослых людей,
где они живут в значительных
количествах.
Из многих культур актиномицетов получают
лекарственные препараты — антибиотики,
используемые в медицине, ветеринарии,
растениеводстве, пищевой промышленности.
Актиномицеты – основные продуценты
антибиотиков среди бактерий
Актиномицеты способны продуцировать
витамины, гормоны, ферменты, токсины,
ростовые вещества, аминокислоты и другие
полезные для человека биологические
вещества
Актиномицеты на питательной среде,
выделяя антибиотик, сдерживают
размножение бактерий

Читайте также: