Какие питательные среды используются для выращивания стрептококков

Обновлено: 24.04.2024

В статье отражены оригинальные данные, полученные в ходе изучения роста микроорганизмов, относящихся к штамму СЛП из рода Streptococcus, в различных питательных средах. Оценка интенсивности роста микроорганизмов проводилась с учетом изменения плотности бактериальной взвеси на разных этапах культивирования. Определены среды, обладающие оптимальным составом для использования при выращивании стрептококков изучаемого штамма. При этом установлено, что синтетическая питательная среда, состав которой разработан авторами, может эффективно применяться при культивировании микроорганизмов, относящихся к роду Streptococcus.

The original data obtained during the study of the growth of microorganisms belonging to the strain of SLA from the genus Streptococcus in diff erent nutrient media have been shown in the article. An estimate of the growth rate of microorganisms has been carried out taking into account changes in the density of bacterial suspension at diff erent stages of cultivation. The media with the optimal composition for use in the growth of streptococci of the strain under study have been determined. It has been found that a synthetic nutrient medium, the composition of which was developed by the authors, can be eff ectively used in the cultivation of microorganisms belonging to the genus Streptococcus.

1. Кисленко В. Н. Ветеринарная микробиология и иммунология. Иммунология / В. Н. Кисленко, Н. М. Колычев. – М.: КолосС, 2007. – Ч. 2. – 224 с.

2. Покровский В. И. Стрептококки и стрептококкозы / В. И. Покровский, Н. И. Брико, Л. А. Ряпис. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – 546 с.

3. Поляков М. С. Питательные среды для медицинской микробиологии / М. С. Поляков, В. И. Сухаревич, М. Э. Сухаревич. – СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2002. – 80 с.

4. Терехов В. И. Стрептококкоз телят и поросят / В. И. Терехов, А. В. Скориков, О. Б. Терехов // Ветеринария Кубани. – 2006. – № 6. – С. 12–14.

5. Федорова О. В. Питательные среды в производствах медицинских и ветеринарных препаратов / О. В. Федорова, С. А. Понкратова, Р. Т. Валеева, И. Р. Исламгулов // Вестник Казанского технологического университета. – 2017. – № 4. – С. 130–133.

Для культивирования микроорганизмов в искусственных условиях in vitro необходимы особые субстраты – питательные среды разного химического состава, соответствующие требованиям изучаемого вида.

Питательные среды являются основным звеном в системе микробиологических работ, и их качество нередко определяет результаты всего исследования, которые должны создавать наилучшие (оптимальные) условия для жизнедеятельности культур [5].

В последние годы значительное развитие получают многокомпонентные синтетические среды, содержащие только химически чистые соединения. Достоинством синтетических питательных сред является стандартность и воспроизводимость с высокой степенью точности.

Данные среды наиболее удобны для проведения экспериментальных исследований в области обмена веществ микроорганизмов [3]. Скорость роста микроорганизмов в значительной степени зависит от питательной ценности среды, ее доброкачественности.

Вoзбудители cтрептoкoккoзoв – микрooргaнизмы рoдa Streptococcus, включaющегo бoльше 24 видoв, грaмпoлoжительные круглые илиoвoидные (лaнцетoвидные) кoкки, cпoр не oбрaзуют. Микроорганизмы этого рода вызывают заболевания животных, хaрaктеризующиеся рaзнooбрaзными фoрмaми прoявления инфекциoннoй пaтoлoгии. Стрептококки требовательны к питательным средам, так как не могут синтезировать многие аминокислоты [1, 2].

Изучение особенностей роста отдельных штаммов микроорганизмов, относящихся к роду Streptococcus, на различных питательных средах является актуальным, так как полученные данные могут быть использованы в практической деятельности ветеринарных лабораторий.

Целью работы – оценка особенностей роста штамма СЛП из рода Streptococcus на жидких питательных средах различного состава.

Изучали особенности роста бактерий, относящихся к роду Streptococcus, на различных жидких питательных средах. В работе использовался штамм бактерий СЛП (СЛП выделен в хозяйстве Липецкой области от поросенка с явлениями сепсиса).

Бактериальную массу для исследований получали на мясо-пептонном агаре с добавлением 0,2 % глюкозы и 5 % крови. Односуточную культуру, выращенную в стационарных условиях при 37° С, смывали с поверхности агара стерильным физиологическим раствором хлористого натрия. Клетки микроорганизмов отмывали два раза от остатков питательной среды физиологическим раствором путем центрифугирования при 1000 g в течение 15 мин. Затем исследуемую суспензию культуры вносили на питательные среды различного состава в количестве 10 млн/мл (табл. 1).

И. Тахавиев, А. Алимов, Изучение роста микроорганизмов рода Streptococcus на различных питательных средах. Ветеринария сельскохозяйственных животных №8 2018. 2018;8.

Ранее в род Streptococcus включали пиогенные стрептококки, энтерококки и молочнокислые стрептококки, которые в настоящее время отнесены соответственно в самостоятельные роды Streptococcus, Еnterococcus и Lactococcus. В данном разделе рассматриваются вопросы лабораторной диагностики болезней, вызываемых видами родов Streptococcus и Еnterococcus.

Виды рода Streptococcus имеют клетки сферические или овальные, диаметром 0,5-2 мкм, при росте в жидкой питательной среде клетки парные или в виде цепочек. Клетки грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, иногда имеют капсулу. Факультативные анаэробы, каталазоотрицательные, растут в диапазоне температур 25-45° С.

Вид стрептококка	Естественная среда обитания	Вызываемая патология
S. рneumoniае '	Верхние дыхательные пути	Септицемия, воспаление суставов, при подостром течении пневмония, воспаление кишечника у телят, ягнят, реже у поросят
S. руoqenes	Верхние дыхательные пути	Иногда маститы у коров, лимфангит жеребят
S. equi sudsp. equi	Миндалины лошадей	Лошади - маститы, мыт
S. equi sudsp . equisimilis	Вагина и кожа лошадей	Маститы, эндометриты лошадей
S. equi zooepidemicus	Слизистые и кожа свиноматок, овец, кур, вагина и кожа лошадей	Крупный рогатый скот - маститы и метриты; свиньи — септицемия и артриты у 1-3-недельных поросят; ягнята- пневмонии; птица — септицемия; лошади - аборты, маститы, пневмонии
S. agalactiae	Молочные каналы	Крупный рогатый скот, овцы, козы - маститы; собаки - септицемия щенков; кошки - маститы
S. dysagalactiae	Гениталии и носовая полость крупного рогатого скота, овец	Крупный рогатый скот - маститы, эндометриты; ягнята - полиартриты
S. dysagalactiae equisimilis	Вагина и кожа лошадей	Лошади - эндометриты, маститы
S. porcinus	Слизистые свиней	Свиньи - лимфадениты поросят
S. suis mun	Носовая полость, миндалины свиней	Свиньи — артриты, менингиты, септицемия молодняка
S. uderis 2	Миндалины, вагина, кожа крупного рогатого скота	Крупный рогатый скот — маститы
S. canis	Слизистые, генитальный тракт плотоядных	Плотоядные - септицемия новорожденных, поражения гениталиев, кожи
S. bovis, S. equines 2	Кишечный тракт многих видов животных	Возбудители оппортунистических инфекционных болезней

Патогенные свойства и экология патогенных стрептококков представлены в табл. 6.

Энтерококки (Е. faecalis, E. faecium, E. durans) обитают в кишечном тракте многих видов животных, могут быть причиной оппортунистических инфекций и септицемии у кур, маститов коров, инфекций мочевого тракта у собак, эндокардитов у ягнят и крупного рогатого скота.

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование. Для исследования на стрептококковую инфекцию животных в лабораторию направляют кровь сердца, печень, селезенку, головной мозг и трубчатую кость. При пневмониях дополнительно берут кусочки легкого на границе здоровой и пораженной тканей, средостенные лимфатические узлы, при артритах - синовиальную жидкость. Трупы мелких животных доставляют целиком. В случае маститов направляют секрет пораженной доли вымени, эндометритов — содержимое влагалища, взятое при помощи стерильных тампонов.

Учитывая малую устойчивость возбудителя материал должен быть доставлен не позднее 6 часов после гибели или убоя животного при условии транспортировки его в термосе со льдом (4-6°С). При более высокой температуре срок доставки материала не должен превышать 2-3 часа.

Микроскопическое исследование исходного материала. Готовят мазки, окрашивают по Граму, при подозрении на наличие капсулообразующих стрептококков препараты окрашивают на капсулы по Романовскому-Гимза, Ольту и др. Мазки из молока можно окрашивать по Граму, используя методы, нивелирующие присутствие жира и белка.

Клетки S. рneumoniае в окрашенных препаратах овальные или сферические, размером 0,5-1,25 мкм, обычно парные, причем соприкасающиеся стороны клеток уплощены, а наружные вытянуты и заострены (ланцетовидный диплококк). Также клетки могут располагаться одиночно, короткими цепочками, окружены капсулой.

Клетки S. equi сферической или овальной формы, размером
0,6-1,0 мкм, располагаются одиночно, парами, короткими цепочками, в мазках из гноя в виде длинных цепочек, имеют капсулу.

Клетки S. agalactiae (S. dysagalactiae) сферические, размером 0,6-
1,2 мкм, чаще располагаются в виде коротких или средней длины цепочек.

Клетки S. руoqenes сферические, размером 0,5-1,0 мкм, в виде коротких или длинных цепочек (в бульоне длинные цепочки). Энтерококки имеют овальную форму, размер 0,6-2,0х0,6-2,5 мкм, располагаются парами или короткими цепочками.

Результаты микроскопического исследования, с учетом полиморфизма бактерий на фоне лекарственной терапии, имеют ориентировочное диагностическое значение.

Культивирование. Стрептококки - факультативные анаэробы. Исследуемый материал высевают на кровяной, глюкозо-кровяной агар (кровь барана или крупного рогатого скота), глюкозо-сывороточный МПБ (рН 7,4-7,8). Контаминированный материал засевают на селективные среды: агар с антибиотиками, азидом натрия; образцы молока целесообразно высевать на среду Эдварда для выявления гемолиза и гидролиза эскулина.

Для обнаружения энтерококков используют специальные селективные среды: молочно-полимиксиновая среда Калины, желчно-кровяной агар Беленького и др. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-
48 часов.

Характер роста стрептококков на питательных средах. На глюкозо-кровяном агаре стрептококки в основном растут в виде мелких, прозрачных или слегка мутноватых колоний с ровными краями, как правило окруженных зоной гемолиза. Различают α- и β-гемолитические стрептококки.

Гемолиз типа α-: неполный гемолиз, часто с зеленоватым оттенком за счет перехода гемоглобина в метгемоглобин, далее обычно находится узкая зона β -гемолиза.

β -гемолиз - полный гемолиз эритроцитов. Отсутствие разрушения эритроцитов и гемоглобина обозначают как γ-гемолиз. Гемолитическая активность различных видов стрептококков представлена в табл. 7.

Эти среды рекомендуют для селективного выделения и подсчета всех вариантов стрептококков, включая b-гемолитические группы А.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 45,6 г порошка М304 или 30,6 г порошка М303 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Если предполагается использовать среду в тот же день, автоклавирование не требуется. В противном случае стерилизовать автоклавированием при 0,9 атм (118°С) в течение 15 мин. НЕ ДОПУСКАТЬ ПЕРЕГРЕВАНИЯ СРЕДЫ.

Предупреждение: Азид натрия имеет тенденцию к образованию взрывчатых соединений с металлами, поэтому рекомендуется использовать много воды для удаления остатков среды.

Принцип и оценка результата:

Данные среды основаны на прописи Pike (1) предложенной для селективного выделения стрептококков из различных материалов, особенно обильно контаминированных сопутствующей микрофлорой (2). Другими авторами (3) показана возможность использования этих сред для выделения b-гемолитических стрептококков группы А.

Папаиновый перевар соевой муки, гидролизат казеина, соли и глюкоза служат источником необходимых питательных веществ для роста стрептококков. Азид и сульфит натрия подавляют рост грамположительных палочек, а кристаллический фиолетовый – рост стафилококков. Вместе с тем указанные ингибиторы в данных концентрациях не подавляют рост стрептококков, поэтому среды можно использовать для выделения и культивирования стрептококков в санитарно-эпидемиологических и клинических исследованиях. На этой среде активно подавляется рост колиформных бактерий, протеев, псевдомонад и бацилл, но некоторые стафилококки и пневмококки могут давать на ней рост. Все колонии стрептококков, выросшие на данной среде, нуждаются в дальнейшей идентификации.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М304).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри или пробирках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М304 (4,56% вес/об) или М303 (3,06% вес/об) имеют рН 7,4 ± 0,2.

является высокопитательной средой, которую применяют для стимуляции роста притязательных кокков и других микроорганизмов при выделении гемокультур и в патогенетических исследованиях.

Эта среда является стандартной неингибирующей средой для дифференциации и подсчета бактерий в молоке.

используется в качестве эффективной основы для приготовления кровяного, шоколадного агаров, а также различных селективных и дифференциальных сред
FD030 *Staph-Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стафилококков и стрептококков
FD031 *Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стрептококков

Эта среда является средой общего назначения и используется также для культивирования прихотливых микроорганизмов из клинического материала
FD031 *Strepto Supplement Селективная добавка для выделения стрептококков

в качестве селективной дифференциальной среды используют для быстрого выделения стрептококков, вызывающих мастит у крупного рогатого скота

для определения и подтверждения присутствия энтерококков, как индикаторов фекального загрязнения воды и других материалов

Среду рекомендуют в качестве среды общего назначения для культивирования широкого круга микроорганизмов из крови, особенно, стрептококков, а также возбудителя дифтерии.

Эту среду в качестве селективной рекомендуют использовать для подсчета энтерококков в воде поверхностных источников методом мембранных фильтров или при непосредственном посеве на среду в чашке.
FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)
FD093 *Brom Cresol Purple Бромкрезоловый пурпурный

для определения и подсчета энтерококков в пробах воды различных категорий, а также для исследования фекалий и других материалов
FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)

L.S. Differential Medium Base (Lactobacillus Streptococcus Dif-ferential Medium Base)
Дифференциальная среда L.S. (для молочнокислых бактерий)

для получения обильного роста и дифференциации лактобактерий и стрептококков по культуральным свойствам, восстановлению ТТХ и казеиновой реакции
FD057 *TTC Solution 1% (pack of 5 vials of 10 ml each) 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида (5 флакончиков по 10 мл)

для выделения из смешанных культур стрептококков, особенно Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius, Enterococcus faecalis, которые дают на кровяном агаре альфа-гемолиз или относятся к негемолитическим
FD052 Теллурит калия 1% раствор (5 флакончиков по 10 мл)

в качестве селективной среды используют в диагностических исследованиях для определения энтерококков и их дифференциации от других кокков

Streptococcus Lactis Differential Agar Base
Основа дифференциального агара для молочнокислых стрептококков

для дифференциации утилизирующих и не утилизирующих цитрат вариантов Lactococcus lactis и Lactococcus lactis подвида cremoris

для селективного выделения и подсчета всех вариантов стрептококков, включая b -гемолитические группы А

Читайте также: