Какой метод окраски будет использован для выявления спор ботулизма

Обновлено: 19.04.2024

Клиника и проявления ботулизма. Диагностика ботулизма

Инкубационный период ботулизма от нескольких часов до 2-5 дней, чаще 12-24 ч. Это подчеркивает универсальное значение токсина в развитии степени тяжести инфекционного процесса. Наши личные наблюдения полностью согласуются с этими данными (Б.П. Богомолов и соавт, 1971).

Ботулизм начинается, как правило, остро, внезапно с тошноты, реже рвоты, боли в животе; больные жалуются на головную боль, головокружение, чувство сдавления в груди, задержку стула (как правило наблюдаются запоры), поносы редко - в случаях сочетания ботулотоксина с другими бактериями. Больные отмечают сухость во рту, метеоризм (пученье), что принимается иногда ошибочно за непроходимость кишок вследствие механических причин.

Одновременно с диспепсическими расстройствами или несколько позже наблюдается слабость скелетных мышц, гортани, пищевода и др. Больные жалуются на слабость мышц шеи, невозможность удерживать голову в привычном положении, отмечают пошатывание при ходьбе. Протекает ботулизм обычно с нормальной температурой, но при тяжелых формах она может быть повышенной. Среди мионеврологических нарушений при ботулизме выделяют следующие синдромы: офтальмоплегический и назоглоссофарингеальный; синдромы дыхательных расстройств, гемодинамических нарушений и общей мионевроплегии.

При синдроме дыхательных расстройств больные испытывают чувство сдавления в груди, которое переходит в мучительную одышку с нарушением ритма дыхания и затруднением вдоха и выхода вследствие поражения дыхательных мышц и диафрагмы. Больные ищут удобное положение для дыхания. Обычно смерть наступает в этих случаях от остановки дыхания при продолжающейся сердечной деятельности.

В начальном периоде болезни наблюдаются гемодинамические расстройства, проявляющиеся бледностью лица, брадикардией, сменяющейся тахикардией, нарастает понижение звучности сердечных тонов, а бледность кожи сменяется цианозом.

В периферической крови количество лейкоцитов остается нормальным или слегка повышено с небольшим сдвигом влево и лимфопенией; количество эритроцитов и гемоглобина снижается; РОЭ не претерпевает больших изменений. В моче кроме легкой альбуминурии изменений обычно нет.

Реконвалесценция при ботулизме длительная. При легких формах больные выздоравливают через 3-4 недели, при тяжелых - через 2-3 мес и более. Астения постепенно уменьшается, исчезают неврологические симптомы, в первую очередь диплопия. Наиболее частым осложнением ботулизма является аспирационная пневмония.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Диагностика ботулизма. Микробиологическая диагностика ботулизма. Выявление ботулизма. Биологическая проба при ботулизме.

Цель исследования при ботулизме — обнаружение и идентификация токсина; выделение возбудителя — вторичный этап. Лабораторному исследованию при ботулизме подлежат остатки пищевых продуктов, материал, полученный от больного (кровь, испражнения, моча, промывные воды желудка, рвотные массы), и секционный материал. Кровь берут из вены пациента в количестве 5—10 мл; промывные воды из желудка забирают в объёме 50-100 мл, кал — 50-60 г. На секции забирают кусочки печени (50-60 г), отрезки кишечника и желудка и их содержимое. До поступления в лабораторию образцы хранят на холоде.

• Кровь исследуют только на наличие токсина ботулизма (для чего проводят биологическую пробу); испражнения — только на наличие возбудителя (проводят посев на питательные среды), весь остальной материал — на наличие возбудителя и его токсина.

• Банки с консервами при ботулизме выдерживают в термостате 10-12 сут, стерильно отбирают 50-100 г, растирают и центрифугируют. В надосадочной жидкости определяют наличие токсина, в осадке — возбудителя.

• Мясо и рыбу при ботулизме обрабатывают спиртом и забирают пробы из внутренних частей (пробы рыбы рекомендуют брать от хребта и внутренних органов). Пробы изучают аналогично исследованиям консервированных продуктов.

Идентификация токсинов ботулизма

Классический метод при ботулизме — биологическая проба на мышах. Для опыта отбирают партию из 5 животных. Первое заражают только исследуемым материалом, остальных — исследуемым материалом с введением 2 мл 200 ME антитоксической сыворотки типов А, В, С и Е. При наличии в материале токсина выживает животное, получившее антисыворотку, нейтрализовавшую токсин соответствующего типа. Для идентификации токсинов также используют РПГА с антительным диагностикумом (эритроциты, сенсибилизированные антитоксинами соответствующих типов).

Выделение возбудителя ботулизма

Методы получения культур возбудителя ботулизма принципиально сходны с таковыми, используемыми для прочих патогенных клостридий.

Серологических исследований при ботулизме не проводят, так как заболевание не сопровождается выработкой выраженных титров AT, что связано с незначительной (с точки зрения иммуногенных свойств) дозой токсина, вызвавшей поражение.

Ботулизм - инфекция вызванная Clostridium botulinum: диагностика, лечение, профилактика

В зависимости от антигенной структуры экзотоксина различают семь серотипов Clostridium botulinum — А, В, С, D, E, F, G, из которых А, В и Е наиболее патогенны для человека.

Эпидемиология и патогенез ботулизма

Контаминации Clostridium botulinum подвержены продукты питания (мясо, овощи и др.). Нарушение правил консервирования позволяет микроорганизмам выжить и продуцировать большое количество токсина. Ботулинический токсин относят к нейротоксинам (угнетают выброс нейромедиаторов). Различают три клинические формы заболевания: пищевая интоксикация, раневой и детский ботулизм. Две последние формы инфекции приводят к развитию генерализованной токсинемии.

Возбудитель ботулизма - Clostridium botulinum

Клинические признаки ботулизма

Через 6 ч после употребления заражённой пищи развивается нисходящий вялый паралич (начиная с черепных нервов). Наблюдают дисфагию и помутнение зрения, сопровождающиеся развитием общего паралича, при этом сознание пациента не нарушено, а его сенсорные функции сохранены в полном объёме. У детей отмечают апатию, общую мышечную слабость, запор.

Диагноз основан на данных клинической картины и указаниях на употребление инфицированного продукта. Токсин определяют в фекалиях и сыворотке крови с помощью ИФА.

Лечение и профилактика инфекции вызванной Clostridium botulinum

Для лечения ботулизма применяют ботулинический анатоксин, назначают пенициллин. При параличе дыхательных мышц проводят искусственную вентиляцию лёгких. Профилактика заболевания состоит в соблюдении санитарно-гигиенических норм и правил консервирования, хранения и потребления пищевых продуктов.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Возбудитель - Clostridium botulinum входит в семейство Bacillaceae, род Clostridium.

Материалом для микробиологического исследования являются рвотные массы, промывные воды желудка, кал, кровь, моча, остатки пищевых продуктов. При летальном исходе исследуют содержимое желудка, кишечника, лимфатические узлы, головной и спинной мозг.

Используют методы микробиологической диагностики: бактериологический, биологический (для выявления ботулотоксина в исследуемом материале).

С целью выявления ботулотоксина можно использовать также РОПГА с антительным диагностикумом (эритроциты, сенсибилизированные антитоксинами соответствующих типов) и определение активности фагоцитов (ботулинический токсин способен подавлять активность фагоцитов, которая восстанавливается в присутствии соответствующей антитоксической сыворотки).

Бактериологический метод. Исследуемый материал растирают в стерильной ступке с физиологическим раствором хлорида натрия.

Посев материала выполняют на специальные питательные среды, например, среду Китта-Тароцци.

Одну пробу засевают в 4 пробирки, две из которых прогревают при температуре 60°С 15 мин. (для селекции C. botulinum типа Е), а остальные - при температуре 80°С 20 мин. Накопление культур клостридий типа Е и F происходит при температуре 28°С, типа А, В, С - при 35°С в течение 48 часов.

Для идентификации чистой культуры возбудителя определяют сахаролитические и протеолитические свойства. Антигенные свойства изучают в реакции агглютинации с типовыми сыворотками. Одновременно с изучением ферментативных свойств возбудителя выявляют ботулотоксин в фильтрате бульонной культуры и определяют его тип в реакции нейтрализации.

Биологический метод. Выявление ботулотоксина и определение его типа с помощью реакции нейтрализации имеет важное значение для назначения специфической терапии.

Для проведения реакции нейтрализации используют сухие диагностические антитоксические сыворотки типов А, В, С, Е, F, которые разводят физиологическим раствором до 100-200 МЕ / мл, что обеспечивает нейтрализацию гомологичного токсина в исследуемой пробе.

Реакцию нейтрализации проводят либо со смесью сывороток (предварительная реакция), либо с моновалентными сыворотками для определения типа токсина.

Сахаролитические и протеолитические свойства Clostridium botulinum типов А, В, С, D, Е, F

КГ - образование кислоты и газа

(КГ) - кислота и газ не у всех штаммов

+ - разжижение или пептонизация, положительная реакция

Если в исследуемом материале есть ботулинический токсин, выживает только одна пара мышей, у которых произошла нейтрализация ботулинического токсина антитоксической сывороткой соответствующего типа.

Определение фагоцитарного показателя. Ботулинический токсин подавляет фагоцитарную активность лейкоцитов. Это свойство используют для выявления его в крови больных и в пищевых продуктах. Исследования проводят следующим образом: кровь больного смешивают в пробирке с 3% раствором цитрата натрия в соотношении 2:1. Опыт выполняют в двух пробирках с использованием поливалентной противоботулинической сыворотки. Если используют типовые сыворотки А, В, С, Е, F, соответственно, количество пробирок для исследования увеличивается. После смешивания взятых ингредиентов, пробирки помещают в термостат на 30 минут для нейтрализации токсина. В пробирки вносят по одному объему 2 млрд. суспензии Staphylococcus aureus и снова помещают в термостат на 20 минут для завершения фагоцитоза. После этого из содержимого каждой пробирки готовят мазок, фиксируют, окрашивают азурэозином и определяют фагоцитарный показатель (фагоцитарный показатель - количество стафилококков, поглощенных в среднем одним лейкоцитом. Для его определения подсчитывают микроорганизмы в 50 лейкоцитах и полученное число делят на 50.

Если в крови больного содержится ботулинический токсин, фагоцитарный показатель крови будет низким, за исключением фагоцитарного показателя той порции, в которой тип токсина соответствует типу добавленной в нее сыворотки, то есть произойдет реакция нейтрализации токсина соответствующими антителами, и фагоцитарный показатель будет значительно выше.

РОПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом.

Сущность реакции заключается в том, что эритроциты сенсибилизируются специфическими антителами, и гемагглютинация происходит при наличии в исследуемом материале антигена. Ее высокая чувствительность и специфичность позволяет найти в исследуемом материале микро количество токсинов. Диагностический титр 1:10.

Читайте также: