Кишечная палочка увидеть в микроскоп

Обновлено: 28.03.2024

Мазок на флору. Показатели влагалищного мазка в норме и при патологии

Практически каждой женщине известно, что ее урогенитальный тракт не стерилен, а заселен различными бактериями - это и есть нормальная микрофлора. Эти микроорганизмы стимулируют местный иммунитет, не давая размножаться возбудителям инфекции. Однако на слизистой влагалища и уретры проживают условно патогенные бактерии, которые не наносят вреда, если нормальная микрофлора и иммунная система сдерживают их численность. Таким образом, когда ослабевают защитные силы организма, возникает дисбактериоз, условно патогенные микроорганизмы начинают активно делиться и атаковать слизистую, вызывая воспалительный процесс. И, конечно, воспаление имеет место при заражении заболеваниями, передающимися при половом контакте.

Проявляться это может патологической секрецией часто сопровождающейся неприятным запахом, зудом, жжением, тянущими болями внизу живота. Как раз при таких жалобах врач обязательно берет мазок на флору, чтобы выяснить первопричину заболевания и назначить этиотропное лечение. Какие показатели этого анализа нормальные, а какие говорят о заболевании?

Мазок берется стерильным шпателем, обычно со слизистой мочеиспускательного канала, влагалища и шейки матки. Затем он окрашивается особым образом и рассматривается под микроскопом. В нормальном вагинальном мазке специалист увидит множество палочек Додерлейна, проще говоря - лактобактерий, которые создают во влагалище кислую среду, предохраняя тем самым от размножения возбудителей инфекции. Кстати, в уретральном секрете и мазке с шейки матки в норме они отсутствуют.

мазок на флору

Также в поле зрения обнаруживается небольшое количество лейкоцитов и эпителиальных клеток. В норме мазок из влагалища может содержать грибы Candida и гарденеллы, но их очень мало у здоровых женщин. Оценивается также уровень кислотности. pHидеального мазка на флору составляет 4.0-4.5 - это кислая реакция. Когда число лактобацилл уменьшается, уровень pH несколько сдвигается и составляет 4.5-5.0. Реакция при этом все еще кислая, но это намек на то, что в мазке присутствуют и патогенные бактерии, хотя их пока мало. Иногда такой уровеньpH обнаруживается у беременных женщин из-за гормональных перестроек. В целом этот результат можно считать удовлетворительным.

При патологическом процессе лейкоцитов в мазке будет гораздо больше, вплоть до наличия гноя. Безусловно, это является признаком воспаления. А в норме мазок из влагалища содержит до 10 лейкоцитов в поле зрения, с шейки матки - до 30, из уретры - до 5. Нормальный секрет содержит клетки слизистой лишь в небольшом количестве. Много эпителия в мазке говорит о воспалении. Но его отсутствие - тоже нехороший признак, возможно, в таком случае снижен уровень эстрогенов. Эритроциты - красные кровяные клетки должны быть единичными в поле зрения. Если их много, возможно произошла травма с нарушением целостности сосудов.

Что касается микроорганизмов, то при патологии в мазке снижается уровень лактобактерий, что влечет за собой изменение уровня pH. Когда он становится 5.0-7.0, можно говорить уже о слабокислой реакции. При этом имеют место описанные выше признаки воспаления, а также обнаруживаются виновники таких изменений - болезнетворные бактерии. Еще хуже, когда среда становится щелочной, и уровень pHдостигает 7.0-7.5. При этом полезныелактобактерии вытесняются патогенной флорой. Мицелий грибов Candida, большое количество гарденелл, кишечных палочек и кокков свидетельствуют о дисбактериозе влагалища. Особенно если обнаруживаются и так называемые "ключевые" клетки. Они представляют собой клетки слизистой оболочки, на которые плотно "приклеились" бактерии. Это - безусловный признак воспаления.

Специалисту важно оценить соотношение нормальной флоры (лактобациллы) и условно патогенной (кокки, гарденеллы, дрожжеподобные грибки, кишечная палочка). Если перевешивают первые - все хорошо. Преимущество вторых - признак патологического процесса.

мазок на флору

Диагностика инфекций, передающихся половым путем, также во многом основана на анализе подобного мазка. Если в нем обнаруживаются хламидии (возбудитель хламидиоза), гонококки (возбудители гонореи) или трихомонады (возбудители трихомониаза), то это говорит о болезни, ведь в норме таких микроорганизмов быть не должно. Нередко их обнаруживают даже одновременно. В таком случае врач назначает лекарства против обоих возбудителей инфекции. Но прежде принимать следует антибиотик против гонореи, а уже после против трихомониаза, так как гонококки могут "прятаться" внутри трихомонад, оставаясь жизнеспособными после их гибели.

Напоследок отметим, что сдавать мазок на флору следует не только при появлении явных симптомов воспаления. Это обязательно нужно делать при планировании ребенка, чтобы во время беременности на фоне изменившегося гормонального фона не возникло инфицирования и последующих осложнений. По той же причине у беременных женщин периодически берется мазок на флору. Этот анализ также желательно сдавать после курса антибактериальной терапии. Определив тяжесть патологического процесса, врач решит, имеет ли смысл назначать лекарства и главное - какие. Некоторые при легкой форме дисбиоза влагалища обходятся лишь иммуностимуляторами, чтобы нормализовать микрофлору. А кому-то требуется прием антибиотиков, которые прописываются, исходя из конкретного возбудителя заболевания.

Чтобы облегчить задачу специалистам, нужно подготовиться к взятию мазка. Примерно за два дня до этого лучше воздержаться от половых контактов, не использовать спермициды, вагинальные суппозитории, крема или тампоны, не делать спринцеваний, использовать для подмываний только мыло. Непосредственно за пару часов до сдачи анализа придется отказаться от посещения туалета. Процедура проходит быстро и безболезненно. Но даже если результат оказался плохим, не стоит сильно огорчаться. Большинство подобных заболеваний сегодня с успехом лечатся. Самое главное - не экспериментировать на себе, а вовремя обращаться к специалисту.

- Вернуться в оглавление раздела "Гинекология"

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Бактерии под микроскопом

Большинство бактерий имеет крайне малые размеры, что делает невозможным их изучение без микроскопа. Однако и среди них есть свои гиганты, и карлики.

Наиболее крупной бактерией долгое время считалась Spirochaeta plicatilis, открытая еще в 1997г. Имея длину до 0,5 мм, она могла быть различима и при незначительном увеличении даже в лупу. В 1997г. она уступила пальму первенства Thiomargarita namibiensis- бактерии, обнаруженной у берегов Намибии. Длина ее тела – около 0,75 мм. Однако большинство бактерий малы (0.3-6мкм), и для их изучения необходима увеличительная техника.

Довольно крупные бактерии можно видеть в самый обычный школьный микроскоп, не обладающий дополнительными приспособлениями к увеличению. Для того, чтобы рассмотреть, к примеру, культуру сенной палочки Bacillus subtilis, достаточно иметь микроскоп с увеличением х800. Бактерии бесцветны, поэтому необходимо окрасить препарат одноэтапным, доступным красителем типа метилового фиолетового, люголя, бриллиантового зеленого, тушью.

Препарат культуры бактерий можно легко приготовить самому. Для этого необходимо вырастить Bacillus subtilis, поместив немного сена в колбу с водой. Через несколько дней поверхность воды покроется пленкой, которая будет состоять из колоний искомых бактерий. Кусочек пленки помещают на покровное стекло, окрашивают тушью. При рассматривании сенная палочка будет выглядеть как неокрасившаяся светлая палочка. Клетка имеет вытянутую форму с тупо закругленными концами. Цитоплазма светлая, оболочка тонкая. Без ядра.

Таким же образом можно рассмотреть в обычный лабораторный микроскоп бактерии, содержащиеся в зубном налете. Для этого собранный налет помещают в каплю воды на предметном стекле. Небольшие палочки, нитевидные образования, столбики - это и есть бактерии, а обилии скапливающиеся на зубах.

Фазово-контрастный микроскоп позволяет увидеть больше. Его отличие от обычной увеличительной техники заключается в разной окраске частиц в зависимости от их плотности: более плотные будут выглядеть темнее, менее плотные – светлее.

Так, выделяют группу шаровидных бактерий - кокков, среди которых в зависимости от группировки можно различить диплококков (бактерия, состоящая из 2-х шаровидных образований), тетракокков (из 4-х), стрептококков (длинная цепочка), стафилококков ( структура в виде виноградной грозди). Большинство из них – возбудители инфекционных заболеваний.

Палочковидные бактерии могут быть как безвредными-сапрофитами (живущая в кишечнике Escherichia coli), так и возбудителями тифа (Salmonella typhi) и дизентерии (Shigella dysenteriae).

С помощью электронного микроскопа возможно увидеть органы передвижения некоторых бактерий - жгутики. Их можно также различить и в световом микроскопе, предварительно протравив (окрасив) культуру. Краситель оседает на жгутике, делая его более толстым и заметным при увеличении.

Темнопольный микроскоп позволяет не только увидеть бактерий как светлые включения на темном фоне, но и наблюдать за их движением. По характеру перемещения отдельных клеток можно распознать возбудителей некоторых заболеваний. Рассмотреть бактерии вам помогут следующие микроскопы:


Обзор

Герой февраля: кишечная палочка Escherichia coli

Автор
Редакторы

Скромная бактерия за полстолетия с момента ее открытия в конце XIX в. стала настоящей волшебной палочкой для молекулярной биологии. Сейчас результаты опытов с ее использованием занимают главы и тома профессиональных и популярных изданий. Конечно, в нашем путеводителе по модельным организмам E. coli должна была занять свое почетное место.


Двенадцать модельных организмов

Escherichia и Eschrichtius — Болезнь путешественников — Главная модельная бактерия — Учебник молекулярной генетики — Невезение с CRISPR/Cas

Escherichia

Рисунок 1а. Escherichia длиной 2 мкм

Теодор Эшерих

Рисунок 1б. Теодор Эшерих (1857–1911)

Eschrichtius

Рисунок 1в. Eschrichtius длиной 14 метров

Даниэль Фредрик Эшрихт

Рисунок 1г. Даниэль Фредрик Эшрихт (1798–1863)

Клетки с относительно тонкой клеточной стенкой, не окрашивающиеся красителем генцианом фиолетовым (окраской бактерий по методу датского микробиолога Кристиана Грама).

Зачем же такую опасную бактерию сделали модельной? Дело в том, что в условиях культивирования кишечная палочка часто теряет патогенность, становится неспособной жить в естественных для себя условиях (то есть одомашнивается). И этим свойством в 1940-е годы воспользовались микробиологи, проведя с лабораторными штаммами E. coli (например, со знаменитым штаммом К12) много прорывных для науки экспериментов.

Так, манипулируя мутированными штаммами кишечной палочки, которые уже научились получать при помощи облучения, Джошуа Ледерберг и Эдуард Лаури Тейтем в 1947 году обнаружили способность разных штаммов обмениваться генетическим материалом и спасать друг друга от образовавшихся дефектов, проявлявшихся в неспособности расти на минимальной питательной среде. Так был открыт процесс конъюгации бактерий, который затем послужил важным инструментом для картирования бактериального генома . Ведь тогда это можно было делать только косвенными, микробиологическими методами — сама природа генетического кода была неизвестна.

Кстати, Джошуа Ледерберг был некоторое время мужем Эстер Ледерберг, первооткрывательницы бактериофага лямбда [3].

С начала 1950-х годов исследования по молекулярной генетике с использованием кишечной палочки и ее вирусов в качестве основного инструмента росли как снежный ком. Не будет преувеличением сказать, что к 70-м годам E. coli написала учебник молекулярной генетики! Вспомним открытие генетического кода, в котором участвовало несколько коллективов физиков и молекулярных биологов, в том числе Френсис Крик, Георгий Гамов и другие выдающиеся люди того времени [6]. Основные эксперименты по расшифровке кода велись на бесклеточных лизатах кишечной палочки.

Позднее обнаружилось, что E. coli хорошо подходит для зародившейся в 1960–1970-е годы биотехнологии [7]. Бактерия хорошо переносит введение в свою клетку гетерологичных (то есть чужеродных) генов и во многих случаях способна синтезировать их продукты без вреда для себя. Белки, полученные таким способом, стали называть рекомбинантными, и теперь они широко используются в медицине и других практических задачах.

Кишечная палочка — возможно, самый исследованный организм с точки зрения молекулярной биологии. Тем не менее у элементов ее генома до сих пор обнаруживают новые свойства. Это одновременно плохо (как же мало мы знаем!) и хорошо (будет чем заняться!). Совсем недавно на защите диссертации я услышал о том, как у одной из генных кассет эшерихии, участвующей в каскаде переработки сульфолипидов, также обнаружена и лактазная активность [8]. До этого такая активность была известна только у знаменитого лактозного оперона Жакоба и Моно, описанного в 1961 году!

Кажется, что E. coli — модельный организм без недостатков. Тем не менее биотехнологам не повезло, что у этой бактерии от природы нет системы бактериального иммунитета CRISPR/Cas [9], о которой я уже упоминал в эссе о бактериофаге лямбда [3]. Именно поэтому эту систему, ныне незаменимую в генной инженерии, открыли относительно поздно.

Кишечная палочка-выручалочка — это здорово (рис. 2). Но теперь пора переместиться в мир ядерных организмов. Удобным инструментом для молекулярной биологии и генетики эукариот оказались одноклеточные грибы — дрожжи — и гаплоидный плесневый гриб — нейроспора. Как они дошли до такой одноклеточной и гаплоидной жизни и что было открыто с их помощью — читайте в следующем материале нашего путеводителя по модельным организмам через месяц.

Благодарность


Новость

Микрофлюидный чип, изготовленный с помощью 3D принтера.

Автор
Редакторы


Генеральный партнер конкурса — ежегодная биотехнологическая конференция BiotechClub, организованная международной инновационной биотехнологической компанией BIOCAD.

SkyGen

Спонсор конкурса — компания SkyGen: передовой дистрибьютор продукции для life science на российском рынке.

Out of control

Что же делать? Однозначного ответа, наверное, не даст никто. С одной стороны, разработка новых антибиотиков занимает в среднем больше десяти лет, а срок службы такого препарата — вполовину меньше, пока бактерии вновь не приобретут резистентность. С финансовой точки зрения такой подход весьма затруднителен. С другой же стороны, появляется всё больше альтернативных стратегий преодоления антибиотикорезистентности: от использования личинок насекомых до всеми любимой коры дуба [4], [5]. Что остаётся? Улучшать уже существующие препараты и методы изучения лекарственной устойчивости разных бактерий.

Исследование, о котором будет сказано в этой статье, было опубликовано в журнале Lab on a Chip в июне 2020 года [2]. Озадаченные проблемой неэффективности многих антибиотиков, объединившиеся учёные Великобритании предлагают подойти к вопросу разработки лекарств именно со стороны изучения процесса накопления антибиотиков в клетке и влияния их количества на резистентность бактерий. Предметом исследования стали грамотрицательная бактерия группы кишечных палочек E. coli , признанная одной из самых антибиотикорезистентных, и один из наиболее активных в отношении этой бактерии антибиотик — офлоксацин. Опираясь на знания о структуре клеточной стенки, влиянии питательного субстрата, а также динамике и фазе роста бактерий, британские учёные предложили новый метод — мощный инструмент, имеющий все шансы стать возможным решением общечеловеческой проблемы.

И у стен есть уши

Особый интерес со стороны исследователей вызывают грамотрицательные бактерии из-за особенности их клеточной оболочки. Она тоньше, но устроена чуть сложнее, чем у грамположительных собратьев. Главной отличительной чертой является двойная структура плазмолеммы: на пути проникновения в клетку антибиотику придётся преодолеть и внешнюю мембрану, где находится одна из точек входа в клетку — белковые поры, — и внутреннюю мембрану. Обе мембраны, кстати, также защищают бактерии от ядов, токсинов и антибиотиков, что повышает их резистентность.

Схема транспорта антибиотика

Mother-machine и полная иллюминация

Антибиотик офлоксацин был также выбран не случайно. Он относится к лекарственным веществам группы фторхинолонов, антибактериальное действие которых основано на угнетении активности ДНК-гиразы (фермента, регулирующего спирализацию молекулы ДНК). Проще говоря, проникая в клетку, офлоксацин начинает подавлять процессы, связанные с клеточным делением, и в конце концов приводит к гибели бактерии. Кроме того, поскольку цель данного исследования — определить количество поглощённого клеткой лекарства, а многие антибиотики из группы фторхинолонов флуоресцируют, офлоксацин — идеальный претендент [10].

Теперь углубимся в детали. Конструкция микрофлюидного устройства (чипа) представляет собой две герметично совмещённые пластины, внутри одной из которых находится основной посевной канал с тысячью маленьких боковых каналов — такое внутреннее строение ограничивает клеточное движение и позволяет изучать каждую клетку индивидуально. Функция другой пластины — защитная, поэтому её структура монолитна. Высота чипа 0,5–1 см, общий объем всех каналов — 150 нл (в этих каналах потом и будут находиться исследуемые клетки и офлоксацин) (рис. 2).

Устройство микрофлюидного чипа

Рисунок 2а. Устройство микрофлюидного чипа. Незакреплённая защитная пластина чипа и пластина с посевными каналами.

Устройство микрофлюидного чипа

Рисунок 2б. Устройство микрофлюидного чипа. Схематичное изображение уже собранного чипа. Ребята из проекта iGEM даже составили инструкцию по изготовлению чипа в лабораторных условиях.

Микрофотография фрагмента mother-machine

Рисунок 3. Микрофотография фрагмента mother-machine. На фотографии видно, что в первую очередь бактерии проникают в основной посевной канал (концентрация клеток в нём больше) и со временем начинают заполнять боковые.

Итак, девайс готов, клетки внутри, что дальше? А дальше эстафету перенимает флуоресцентный микроскоп Olympus IX73. Благодаря комплексу возбуждающих фильтров, которые пропускают опредёленный диапазон излучения, и особому направлению света от светодиода в микроскопе, глаз или камера (как в нашем случае) фиксируют момент свечения молекулы (рис. 4). Сама по себе флуоресценция — это разновидность физического процесса люминесценции. Наблюдаемое излучение вызвано переходом электронов молекулы с одного энергетического уровня на другой. Сначала молекула поглощает энергию, переносимую светом, и её электроны переходят в возбуждённое состояние, которое длится в среднем 10 −11 –10 −6 с, что говорит об их нестабильности в таком положении. Из-за неспособности удержаться на высоком энергетическом уровне электроны молекулы переходят на более низкий. Потеря энергии происходит в виде испускания квантов света (фотонов), чем и обусловлено видимое в микроскоп свечение молекулы [14], [15].

Принцип работы

Расти или не расти?

В проведённом эксперименте популяцию E. coli разделили на две группы по признаку фазы роста. В первую группу отнесли клетки в стационарной фазе роста, во вторую — растущие и делящиеся. Также было выбрано несколько штаммов кишечной палочки, имеющих разные транспортные белки (порины) на внешней мембране. Целью было определить, только ли транспортные пути мембраны влияют на проникновение и накопление веществ в клетке, а если нет — может ли клеточный метаболизм влиять на ситуацию.

Загрузив клетки в чип, учёные начали вводить в него офлоксацин, одновременно контролируя его дозировку и накопление в клетках, опираясь на их флуоресценцию (с повышением концентрации антибиотика в окружении клетки увеличивалось и излучение рис. 5).

Клетки бактерий в боковых каналах микрофлюидного чипа

Рисунок 5. Клетки бактерий в боковых каналах микрофлюидного чипа. Флуоресцентное изображение получено с помощью камеры Evolve 512 EMCCD (Photometrics), которая одновременно с собственным запуском активировала светодиод микроскопа. Мы видим, как от первой картинки (секунда 0 — офлоксацин ещё не поступил в чип) к последней (400 секунд, где содержание офлоксацина 12,5 мкг/мл) вместе с концентрацией антибиотика увеличивается флуоресценция каждой клетки и окружающего пространства.

Также в ходе эксперимента обнаружилось, что штамм с удалённым транспортным белком (порином) OmpF на внешней мембране накапливал намного меньше антибиотика, чем штамм дикого типа (у него-то всё было на месте) в одинаковой фазе роста, что говорит о положительном влиянии данного белка на транспортировку лекарства внутрь клетки. Интересно и то, что даже с удалённым белком OmpF этот штамм в растущей фазе накопил больше офлоксацина, чем дикий штамм в стационарной фазе.

Подводя итог, можно однозначно ответить на два вопроса:

  1. Влияет ли фаза роста на количество антибиотика внутри клетки? — Да, влияет.
  2. Влияют ли определённые порины клетки на количество антибиотика? — Да, влияют, но в меньшей степени, чем фаза роста.

* — Гомер

Что же нам в конечном итоге даёт это исследование, как оно поможет в неравной борьбе с резистентностью бактерий, чем послужит для будущего? В действительности, данный эксперимент предлагает новую методику изучения накопления антибиотиков в бактериях, основанную на понимании роли метаболизма и строения клеточной оболочки. Использование комбинации микроскопа и чипа помогут быстрее тестировать микрофлору на чувствительность к антибиотикам, рациональнее подбирать лекарства, эффективнее разрабатывать препараты нового поколения или модернизировать процесс тестирования уже существующих. Перед нами предстаёт намного более обширная и детальная картина взаимодействия клеток с веществом. Благодаря относительной простоте реализации данного метода уже сейчас врачи, клиники и фармкомпании могут сделать огромный шаг вперед. За счёт конструкции параллельных каналов в чипе становится возможным тестировать сразу несколько лекарств, проверять проницаемость отдельных патогенов разными видами антибиотиков в разных питательных средах и фазах роста. Также данный метод предусматривает использование очень низких дозировок лекарств, что потенциально может снизить экономические затраты на исследования.

А что касается нас, лучшее, что мы можем сделать в такое непростое время — вспомнить банальную истину: антибиотики — серьёзное лекарство, за которым нельзя бежать и сметать его с полок по наитию без рецепта врача! Помнить: здоровье нашего микромира зависит от нас. И непрерывно учиться, стараясь понемногу разбираться в происходящем вокруг и внутри нас.

Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки.

Своё название бактерии получили в честь немецкого педиатра Т. Эшериха, впервые выделившего Escherichia coli из содержимого кишечника детей. Род образуют подвижные (перитрихи) прямые палочковидные бактерии размером 1,1-1,5x2,0-6,0 мкм. В мазках они располагаются одиночно или парами. У большинства штаммов существуют капсулы или микрокапсулы.

Температурный оптимум для роста эшерихий 37 °С. Эшерихии ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа, оксидаза-отрицательны и каталаза-положительны.

Эшерихии входят в состав микрофлоры толстой кишки теплокровных, пресмыкающихся, рыб и насекомых. Эшерихии — основная аэробная микрофлора кишечника, вызывающая, однако, обширную группу заболеваний человека, известных как эшерихиозы.

Эшерихиозы характеризуются не только клиническим полиморфизмом, но и создают особую эпидемиологическую ситуацию. Основное медицинское значение имеет кишечная палочка (Escherichia coli). Кишечные палочки рассматривают как санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) при анализе воды и пищевых продуктов.

Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки

Кишечная палочка. Escherichia coli

В настоящее время среди прочих энтеробактерии кишечная палочка — основной возбудитель эшерихиозов у человека.

Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки

Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами.

• На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями.

• В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо).

• На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза-отрицательные — бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно-синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные — бесцветные, на среде Плоскирева — соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Читайте также: