Кровяной агар для бактероидов

Обновлено: 25.04.2024

Компоненты растворить при нагревании, установить рН 7,2, профильтровать через ватный тампон, разлить во флаконы, автоклавировать при 1 атм. 20 минут.

Перед употреблением среду растопить, охладить до 50 о С, добавить 5% лизированной двукратным замораживанием и оттаиванием цитратной крови донора и витамин К₁ из расчета 0,1 мл 1% раствора на 100мл среды, и канамицин из расчета 1 мг/мл (бактероиды обладают природной устойчивостью к аминогликозидам и желчи). Перемешать, разлить в чашки Петри. После застывания подсушить 10-15 мин.

Свежеразлитую (в течение 2 ч после приготовления) или прередуцированную, т.е. выдержанную в течение суток в анаэростате, среду используют для первичного выделения бактероидов группы B.fragilis, субкультивирования, определения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Среда для бактероидов Хенеля-NH – неомицин-агар

Среда NH –основная

Натрия хлорид – 3, 0 г

Na2HPO4*2H2O – 2, 0г

Мясной экстракт – 3, 0 (30, 0 мл мясной воды)

Дрожжевой экстракт – 4, 0 г (40 мл)

Декстроза – 6, 0 г

Агар-агар – 20, 0 г

Дистиллированная вода –до 1000 мл

стерилизация 0, 5 атм.30 минут.

Перед розливом в чашки к основному агару добавляют неомицина или неовитина – 0, 08 г, дезоксихолата натрия – 0, 2г, крови 30 мл или эритроцитарной массы – 20 мл.

Обогащенная питательная среда для контроля стерильности с канамицином и желчью.

Канамицин добавить в среду из расчета 1 мг/мл. для этого 1 г канамицина растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Весь объем раствора канамицина и 20 г сухой желчи добавляют к 1 л среды до стерилизации.

Среда может быть использована для селективного выделения бактероидов группы B.fragilis/

Кровяной агар для бактероидов (КАБ)

Цитратная кровь человека – 7% (70 мл)

Дрожжевой аутолизат – 6% (60 мл)

Глюкоза – 0, 6% (6, 0 г)

Na2HPO4*2H2O – 0, 2% (2, 0г)

Твин -80 – 0, 1% (1 мл)

Na2SO3 – 0, 05% (0, 5 г)

Тиогликолевая кислота – 0, 04% (0, 4 мл)

Цистеин – 0, 025% (250 мг)

МПА расплавленный – 86% (869 мл)

Среду готовят на мясо-пептонном агаре (МПА). 2 г Na2HPO4*2H2O и 1 г твина-80 растворяют при подогревании в 60 мл дрожжевого аутолизата. После фильтрации добавляют смесь к 860 мл МПА. Стерилизуют при 0, 5 атм. 20 минут

После фильтрации добавляют 250 мг цистеина, 0, 04 мл тиогликолевой кислоты и 6 г глюкозы. Устанавливают рН 7, 0, разливают в проьирки по 10 мл. стерилизуют при 0, 5 атм.20 минут. Перед посевлом среду расплавляют на водяной бане, и после охлаждения (до 60°С) прибавляют в каждую пробирку по 0, 2 мл 2, 5% раствора Na2SO3 9приготовленный заранее на стерильной дистиллированной воде) и 0, 7 мл цитратной крови человека (без анотибиотиков).

БАКТЕРОИДЫ (греческий bakterion палочка + eidos вид) облигатноанаэробные, не образующие спор, грамотрицательные бактерии палочковидной формы, относящиеся к роду Bacteroides семейства Bacteroidaceae. Бактероиды — одни из наиболее частых возбудителей неклостридиальных анаэробных и смешанных анаэробно-аэробных инфекций у человека.

Впервые грамотрицательные бесспоровые анаэробы были выделены Вейоном и Зюбером (A. Veillon, H. Zuber) в 1898 году у больного с абдоминальным абсцессом, о писаны как Bacillus fragilis; эти анаэробы вызывали абсцессы при экспериментальном заражении подопытных животных. В 1912 году Дистазо (A. Distaso) обнаружил подобные микробы в испражнениях здоровых людей. Кастеллани (A. Castellani) и Чалмерс (A. J. Chalmers) в 1919 году предложили для этих бактерий родовое название Bacteroides.

Семейство Bacteroidaceae состоит из трех родов; Bacteroides, насчитывающий 22 вида, Fusobacterium, объединяющий 16 видов, и Leptotri-chia, включающий 5 видов. В 1979 году Колли (J. G. Collee) предложил разделить род Bacteroides на три группы на основе их устойчивости к 20% желчи в питательной среде, пигментообразовании и сахаролитической активности в отношении глюкозы, мальтозы, сахарозы, маннита, рамнозы, трегаллозы (табл. 1).

Бактероиды — палочки с биполярной окрашиваемостью, размером 0,5—0,8 X 1 —3 мкм, морфологически сходные или с выраженным полиморфизмом, неподвижные или движущиеся с помощью перитрихиально расположенных жгутиков, нередко имеют полисахаридную капсулу, являющуюся важным фактором вирулентности (см.). Различные виды варьируют по своей чувствительности к окислительно-восстановительному потенциалу. Окисленные среды тормозят рост бактероидов. В пределах вида рост бактероидов зависит также от величины посевной дозы.

При росте на кровяном агаре бактероиды образуют округлые, слабо выпуклые, полупрозрачные сероватые или черно-коричневые колонии, часто имеющие внутри включения в форме концентрических колец, диаметр колоний 1—3 мм, менее 1% штаммов бактероидов вызывают гемолиз. При росте бактероидов на жидкой питательной среде происходит равномерное помутнение бульона и образование осадка. Основными компонентами питательных сред для культивирования бактероидов являются пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, глюкоза и кровь. Стимулируют рост бактероидов гемин, витамин Кх (менадион), для некоторых видов — бычья желчь. Рост бактероидов улучшается также, если в окружающей анаэробной атмосфере содержится углекислый газ (5—10%). Бактероиды растут в значительном диапазоне температур (от 25 до 45°), оптимум роста при t 37°. Оптимальное значение pH питательных сред 7,0.

При росте на глюкозопеитонном бульоне бактероиды продуцируют в качестве конечного продукта метаболизма смесь жирных кислот: большое количество янтарной и небольшое количество уксусной, пропионовой, изовалериановой, изомасляной и масляной. Бактероиды образуют протеолитические ферменты, некоторые виды продуцируют нейраминидазу, действующую как фактор распространения бактерий. Устойчивые к Р-лактамным антибиотикам бактероиды продуцируют Р-лак-тамазы, разрушающие пенициллины и цефалоспорины.

Антигенные свойства бактероидов изучены недостаточно. Общий родовой антиген для бактероидов не описан. Bacteroides fragilis — пока единственный вид бактероидов, для которого доказано наличие видоспецифического антигена; в диагностических целях используют капсульный полисахаридный антиген.

Бактероиды —одни из основных представителей нормальной микрофлоры человека (см.) и животных. В наибольшем количестве бактероиды содержатся в толстой кишке (около 30% всех микробов), значительно преобладая над аэробной микрофлорой, в том числе в сотни раз превышая количество кишечных палочек. Среднее количество бактероидов в 1 г фекалий взрослого здорового человека составляет св. 10 млрд. и зависит от физиологического состояния организма и диеты. У лиц, находящихся на смешанной диете, обнаруживается больше бактероидов, чем у людей, в диете которых преобладают углеводы. Более интенсивному размножению и метаболизму бактероидов способствует диета, богатая животными продуктами. При стрессовых состояниях содержание В. thetaiotaomicron в толстой кишке может быть повышено и составлять 20—30% всей микрофлоры (при норме 2—4%). Наиболее часто в микрофлоре фекалий здорового взрослого человека встречаются В. vulgatus (12%), В. thetaiota-omicron (до 4,5%), В. fragilis (0,5%). Из бактероидов, являющихся условно-патогенными микробами (см.), наиболее частым возбудителем анаэробных и смешанных анаэробно-аэробных инфекций является В. fragilis.

Физиологическое значение бактероидов во многом не ясно, однако известно, что они проявляют антагонистическую активность по отношению к шигеллам, сальмонеллам и некоторым эшерихиям.

Бактероиды проявляют патогенные свойства при изменении иммунитета. Они выступают в качестве инфекционных агентов при самых разнообразных заболеваниях гнойного и септического характера, могут поражать любые органы и ткани организма человека или животного, в очагах инфекции находятся в ассоциации с другими анаэробными и аэробными микробами. Бактероиды выделяют при гнойном перитоните, аппендиците, эндометрите, аднексите, кольпите, септическом аборте, абсцессе внутренних органов, плеврите, пневмонии, при поражениях костей и суставов, при пародонтозе и воспалительных заболеваниях ротовой полости, кожи, подкожной клетчатки. Бактероидный инфекционный процесс любой локализации может осложниться эндокардитом (см.) или сепсисом (см.).

Для эффективного лечения болезней, вызванных бактероидами, большое значение имеет микробиологическая диагностика. Успешное выделение бактероидов во многом зависит от правильного забора и доставки материала в лабораторию. Если есть возможность получить патологический материал с помощью пункции, его следует доставить в шприце, вытеснив из него воздух. Доставка материала на обычном тампоне малоэффективна. Тампоны лучше доставлять в транспортной среде либо забирать материал тампоном, имнрегнированным 10% раствором гемоглобина. Вместо гемоглобина можно использовать лизированную донорскую кровь (10% лизированной крови, 10% глицерина, 80% изотонического раствора хлорида натрия).

Посев материала производят на плотные и жидкие питательные среды. Плотные среды содержат лизированную кровь и при необходимости канамицин или неомицин — ингибиторы сопутствующей факультативно-анаэробной микрофлоры. Посевы инкубируют не менее 2 суток (из-за медленного роста бактероидов) в анаэробных условиях при t° 37°. Одновременно с посевом производят микроскопию окрашенного по Граму мазка из патологического материала.

До уровня семейства бактероиды можно идентифицировать на основании отрицательной окраски по Граму, отсутствия роста в аэробных условиях, отсутствия спорообразования, установления перитрихиально расположенных жгутиков, если бактерии подвижны. Способность к спорообразованию проверяют прогреванием пятисуточной культуры на жидкой питательной среде с крахмалом (1 г на 1 i среды) при t° 80° в течение 10 минут. Выжившие клетки свидетельствуют о их спорогенности. Тип жгутиков определяют соответствующим методом окраски (см. Леффлера методы).

До рода и вида бактероиды идентифицируют на основании определения продуктов метаболизма (состав жирных к-т Ci—Св, а также янтарной и молочной кислот) с помощью газожидкостной хроматографии (см.) и изучения ферментативной активности. В таблице 2 представлены данные Бартлетта (J. G. Bartlett) с сотр. (1975), позволяющие ориентировочно идентифицировать бактероиды группы В. fragilis.

Предпринимаются попытки ускоренной идентификации бактероидной группы

В. fragilis и В. melaninogenieus с помощью реакции иммунофлюоресценции (см.) в прямой и непрямой модификациях. Для обнаружения бактероидов непосредственно в патологическом материале необходимы соответствующие специфические диагностические сыворотки. Для подтверждения этиологической роли бактероидов при различных воспалительных заболеваниях (например, при поражениях тазовых органов у женщин) используют серологическую диагностику. При этом применяют радиоиммунологический метод (см.) и иммуно-ферментный метод выявления антител, а также определяют титры антител против В. fragilis в парных сыворотках.

Бактероиды наиболее чувствительны к метранидазолу, левомицетину, некоторым цефалоспоринам и др. Некоторые виды бактероидов, за исключением В. fragilis, могут быть чувствительны к пенициллину, но необходимо учитывать, что бактероиды могут продуцировать бета-лактамазы. Бактероиды устойчивы к стрептомицину, гентамицину, канамицину, мономицину. Для успешной антибактериальной терапии необходимо определение чувствительности выделенных бактерий к химиопрепаратам. При лечении инфекций, вызываемых бактероидами, также необходимо помнить, что эти инфекции носят смешанный характер: бактероиды чаще всего выделяются в ассоциации с другими микроорганизмами.

Специфическая профилактика бактероидных инфекций — вакцины и сыворотки — пока не разработана.

Таблица 1. КЛАССИФИКАЦИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ БАКТЕРОИДОВ ПО ГРУППАМ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИХ ОТНОШЕНИЯ К САХАРАМ, УСТОЙЧИВОСТИ К ЖЕЛЧИ И ОБРАЗОВАНИЮ ПИГМЕНТА (по Колли, 1979)

Признаки, отличающие различные виды бактероидов

В. fragilis, В. thetaiotaomicron, В. ovatus, В. distasonis, В. vulgatus, В. splan-chnicus, В. eggerthii, В. hypermegas, В. multiacidus

Сахаролитические, не образуют пигмента, устойчивы к желчи

В. melaninogenicus subsp. melaninogenicus, subsp. intermedius, subsp. levii B. bivius, B. disiens, B. oralis, B. rumini-cola

Сахаролитические, образуют пигмент, чувствительны к желчи Сахаролитические, не образуют пигмента, чувствительны к желчи

B. asaccharolyticus, B. putredinis, B. praeacutus, B. pneumosint.es, B. corrodens*, B. nodosus

H e с а х а р о литические

* Новое название В. ureolyticus.

Таблица 2. ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ БАКТЕРОИДОВ, НАИБОЛЕЕ ЧАСТО ВЫДЕЛЯЕМЫХ ИЗ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА (по Бартлетту, 1975)

Бактероиды (лат. Bacteroides) — род грамотрицательных анаэробных бактерий. Бактероиды — наиболее типичные нормальные обитатели кишечника человека, составляющие около половины всей его микрофлоры. Бактероиды полиморфны, часто имеют форму палочки с закругленными концами размером 1–3 на 0,5–0,8 мкм. Бактероиды не образуют спор, но могут образовывать капсулы.

В связи с трудностью анаэробного культивирования и, следовательно, с высокой стоимостью исследования бактероиды при анализах во многих лабораториях не определяются (Ардатская М.Д., Минушкин О.Н.). Бактероиды — антагонисты шигелл, сальмонелл, некоторых видов эшерихий (Лобзин Ю.В. и др.).

Основными продуктами брожения являются уксусная кислота, изовалериановая кислота, янтарная кислота.

Бактероиды — нормальная микрофлора человека

у детей первого года — 10 7 –10 8 КОЕ/г
у детей старше года и взрослых — 10 9 –10 10 КОЕ/г
у пожилых — 10 10 –10 11 КОЕ/г

Бактероиды и заболевания человека

Присутствуя в организме человека бактероиды могут вызывать различные гнойно-воспалительные заболевания после травм, оперативных вмешательств, инструментальных исследований, при онкопатологиях или иммунодефиците, такие как перитонит, абсцессы, эндокардит, сепсис, тонзиллит, пародонтоз, анальная трещина и другие. Бактероиды являются причиной более чем половины всех внутрибрюшинных анаэробных инфекций.

Наиболее изучены патогенные свойства бактероидов вида Bacteroides fragilis. Этот вид может вызывать как внутрибрюшинные инфекции, такие как перитонит, хронический язвенный колит, но и синовиит, сальпингит, болезнь Рейтера, хронический тонзиллит. Бактероиды часто вызывают поражение женских внутренних половых органов: цервициты, эндометриты, аднекситы, инфекции в малом тазу. Обнаруживают бактероиды и при простатитах, хронически протекающих осложнённых уретритах у мужчин, у пациентов с упорным течением заболевания и частыми рецидивами.

Бактероиды ассоциируются с колоректальным раком, бронхиальной астмой (Bacteroides fragilis), воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК), сахарным диабетом, ожирением, неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП) (Bacteroides thetaiotaomicron); титр бактероидов уменьшается при болезни Крона (Карпеева Ю.С. и др.).

Ассоциация бактероидов с Gardnerella vaginalis, Mobiluncus характерна для бактериального вагиноза.

Бактероидные инфекции лечатся метронидазолом, тинидазолом, левомицетином, эритромицином, рифаксимином.

Материалы для пациентов

Публикации для профессионалов здравоохранения, затрагивающие роль бактероидов в заболеваниях человека

Чувствительность бактероидов к антимикробным препаратам

Бактероиды устойчивы к аминогликозидам (стрептомицину, гентамицину, канамицину, мономицину). Большинство штаммов бактероидов устойчивы к тетрациклину. Доксициклин активен в отношении некоторых штаммов бактероидов, но большинство штаммов Bacteroides fragilis к нему устойчивы. В отношении бактероидов активен линкомицин.

чувствительны: пенициллин G, амоксициллин + клавулановая кислота, мезлоциллин, пиперациллин, импенем, цефтриаксон, эритромицин, клиндамицин, хлораменикол, фузидин, офлоксацин, метронидазол
слабочувствительны: карбенициллин, цефотаксим, цефтазидим, доксициклин, новобицин
не чувствительны: оксациллин, клоксациллин, диклоксациллин, ампициллин, амоксициллин, цефазолин, цефалотин, цефамандол, цефоперазон, цефалексин, цефаклор, гентамицин, амикацин, тобрамицин, канамицин, эритромицин, азитромицин, ванкомицин, полимиксин В, рифампицин, ципрофлоксацин, пефлоксацин, триметроприм, котримоксазол, амфотерицин В, кетоконазол, флуцитозин.

Чувствительность Bacteroides spp. к антибактериальным препаратам (Косинец В.А.)

Бактероиды в систематике бактерий

По современной систематике род бактероиды входит в семейство Bacteroidaceae, порядок Bacteroidales, класс Bacteroidia, тип Bacteroidetes, Bacteroidetes/Chlorobi group, Fibrobactere-Chlorobi-Bacteroidetes superphylum, царство Бактерии.

В состав рода бактероиды входят виды: B. acidifaciens, B. barnesiae, B. caccae, B. caecicola, B. caecigallinarum, B. cellulosilyticus, B. caecimuris, B. clarus, B. coprocola, B. coprophilus, B. coprosuis, B. denticanum, B. dorei, B. eggerthii, B. faecichinchillae, B. faecis, B. finegoldii, B. fluxus, B. fragilis, B. galacturonicus, B. gallinaceum, B. gallinarum, B. graminisolvens, B. helcogenes, B. heparinolyticus, B. intestinalis, B. luti, B. massiliensis, B. mediterraneensis, B. neonati, B. nordii, B. oleiciplenus, B. ovatus, B. paurosaccharolyticus, B. plebeius, B. propionicifaciens, B. pyogenes, B. reticulotermitis, B. rodentium, B. salanitronis, B. salyersiae, B. sartorii, B. stercorirosoris, B. stercoris, B. thetaiotaomicron, B. timonensis, B. uniformis, B. vulgatus, B. xylanisolvens, B. xylanolyticus, B. zoogleoformans.

Ранее к роду бактероиды относился целый ряд видов, впоследствии реклассифицированые в виды рода Prevotella. В частности, Bacteroides melaninogenicus и Bacteroides intermedius были реклассифицированы в Prevotella melaninogenica и Prevotella intermedia. Вид Bacteroides urealyticus перенесён в род Campylobacter и назван Campylobacter ureolyticus, виды Bacillus necrogenes, Bacteroides freundii и Bacteroides russii перенесены в род Fusobacterium и названы Fusobacterium necrogenes, Fusobacterium mortiferum и Fusobacterium russii, виды Bacteroides distasonis, Bacteroides goldsteinii и Bacteroides merdae реклассифицированы в виды Parabacteroides distasonis, Parabacteroides goldsteinii и Parabacteroides merdae рода парабактероидов, соответственно. Вид Bacteroides termitidis — в Sebaldella termitidis, Bacteroides corrodens — в Eikenella corrodens, Bacteroides hypermegas — в Megamonas hypermegale, вид Bacteroides forsythus — в Tannerella forsythia и т.д.

Основные места обитания фузобактерий в человеческом организме — толстая кишка и респираторный тракт. Фузобактерии продуцируют масляную (основной метаболит) и уксусную кислоты (дополнительный) (Акопян А.Н.).

у детей раннего возраста — 10 8 –10 9 КОЕ/г
у взрослых — 10 7 –10 10 КОЕ/г
у пожилых — 10 8 –10 9 КОЕ/г.

Согласно современным представлениям, бактерии рода Fusobacterium относятся к основной резидентной микрофлоре желудка здорового человека, при условии отсутствия в нём Helicobacter pylori в доминирующем количестве (Engstrand L., 2012).

Фузобактерии — возбудители заболеваний

Некоторые виды фузобактерий являются условно-патогенными и при имуннодефицитах могут вызывать вторичные гангренозные и гнойно-гангренозные процессы. При ангине, герпетическом стоматите, гипотрофии у детей, при имуннодефицитных состояниях возможно развитие фузоспирохетоза — некротического воспалительного процесса на миндалинах, слизистой оболочки полости рта.

Fusobacterium necrophorum (ранее называемой палочкой Шморля) — представитель нормальной микрофлоры ротовой полости и кишечника человека, рубца жвачных животных, известен также как возбудитель копытной гнили (некробиоза) крупного рогатого скота;
Fusobacterium nucleatum (палочка Плаута) — превалирующий компонент нормальной микрофлоры зубного налета и возбудитель заболеваний дёсен и других органов человека.

Публикации для профессионалов здравоохранения, затрагивающие роль фузобактерий в нормальной физиологии и заболеваниях человека

Антибиотики, активные и неактивные в отношении фузобактерий

Антибактериальные средства (из имеющих описание в данном справочнике), активные в отношении фузобактерий: метронидазол, тинидазол, клиндамицин, левофлоксацин, моксифлоксацин.

Фузобактерии устойчивы к рокситромицину.

Фузобактериозы лечатся, в том числе, фосфимицином (торговые наименования: Монурал, Урофосфабол и др.).

Фузобактерии в систематике бактерий

По современной классификации род Fusobacterium входит в семейство Fusobacteriaceae, порядок Fusobacteriales, класс Fusobacteriia, тип Fusobacteria, царство Бактерии.

В состав рода фузобактерии входят виды: F. canifelinum, F. equinum, F. gastrosuis, F. gonidiaformans, F. hwasookii, F. massiliense, F. mortiferum, F. naviforme, F. necrogenes, F. necrophorum, F. nucleatum, F. perfoetens, F. periodonticum, F. russii, F. simiae, F. ulcerans, F. varium.

Вид Fusobacterium necrophorum имеет подвиды: Fusobacterium necrophorum subsp. funduliforme, Fusobacterium necrophorum subsp. necrophorum.

У вида Fusobacterium nucleatum выделяют подвиды: Fusobacterium nucleatum subsp. animalis, Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii.

Из-за своей близости к бактероидам ранее род фузобактерий относился к семейству бактероидов (Bacteroidaceae), однако позже был отнесен к семейству Fusobacteriaceae.

Одно время включаемый в род фузобактерий вид Fusobacterium sulci был отнесен к роду эубактерий и классифицирован как Eubacterium sulci, однако позже его включили в семейство с временным наименованием Clostridiales Family XIII. Incertae Sedis и пока именуются [Eubacterium] sulci.

Читайте также: