Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций

Обновлено: 28.03.2024

Термин арбовирусы (arthropod borne viruses – вирусы, передающиеся членистоногими) не является классификационным, а отражает одинаковый для этих вирусов путь передачи инфекции, характеризующейся природной очаговостью. Арбовирусы входят в состав нескольких семейств (Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae, Rhabdoviridae, Picornaviridae, Iridoviridae, Poxviridae, Arenaviridae) и насчитывают более 500 патогенных для животных и человека вирусов, среди которых около 100 являются патогенными для человека.

К арбовирусным инфекциям относятся:

системные лихорадки (флеботомная, Денге);

геморраги­ческие лихорадки (желтая, Денге, Чикунгунья, крымская гемор­рагическая, омская геморрагическая, киассанурская лесная бо­лезнь);

энцефалиты и энцефаломиелиты (клеще­вой энцефалит, американские, западный, восточный и венесу­эльский лошадиный энцефаломиелит, энцефалит Сан-Луи, до­лины Муррея, западно-нильский, японский, африканский) и др.

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций имеет важное практическое значение, т.к. многие из них имеют одинаковые клинические проявления, нередко заболевание протекает в атипичной или стертой форме. Кроме того, сходные с арбовирусными инфекциями могут вызывать другие вирусы, бактерии, риккетсии, спирохеты. Исследование на арбовирусы проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций.

Материалом для исследования являются кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы, моча, плевральная жидкость, органы трупа (мозг, печень, селезенка, легкие, почки). Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций у человека включает экспресс-методы, вирусологический и серологический методы (схема 22).

Материал для исследования: кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы, моча, плевральная жидкость, органы трупа

Экспресс-диагностика – обнаружение специфических вирусных антигенов в материале от больного с помощью РИФ

хема 22.Вирусологическая диагностика арбовирусных инфекций

Вирусологический метод: заражение РКЭ, культур клеток, белых мышей. Индикация вирусов с помощью РГА, учета ЦПД, по образованию бляшек, гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификация выделенных вирусов с помощью РН, РТГА, РСК, РИФ, РИА.

Серологический метод - исследование парных сывороток крови для выявления нарастания титра антител к арбовирусу с помощью РТГА, РСК, РН, РИФ, РНГА, РОНГА, РРГ, ИФА, РИА.

Экспресс-диагностика – обнаружение специфических вирусных антигенов в материале от больного с помощью РИФ (лихорадка Денге, крымская геморрагическая, колорадская лихорадка), РНГА или РОНГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (крымская ге­моррагическая лихорадка, лимфоцитарный хориоменингит), ИФА (японский энцефалит). РИФ применяют также для обнаружения вирусного антигена в слюн­ных железах переносчиков и в гемолимфе клещей (клещевой энцефалит).

Вирусологический метод в диагностическом отношении имеет ограничения, связанные с длительностью его выполнения (до 3 недель). Вирус выделяют путем заражения новорожденных или взрослых белых мышей в мозг, внутрибрюшинно или подкожно, первично-трипсинированных или перевиваемых культур клеток (куриные фибробласты, клетки почек эмбриона свиньи, перевиваемые линии ВНК-21, СПЭВ, ПЭС, Vero, а так­же культуры тканей членистоногих - клещей, комаров). Реже заражают куриные эмбрионы в тело, амнион, желточный ме­шок, на ХАО. Заболевших в течение 2-3 недель мышей исследуют на наличие арбовирусов.

Индикацию вирусов проводят с помощью РГА (с гусиными эритроцитами), учета ЦПД, по образованию бляшек, гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификация выделенных вирусов осуществляется обычно с помощью РН, РТГА или РСК, реже - РИФ, РИА.

Серологический метод - исследование парных сывороток крови для выявления нарастания титра антител (в 4 раза и более) с помощью РТГА при наличии у арбовируса гемагглютинина, а при его отсутствии – РСК, РН, а также РИФ, РНГА, РОНГА, РРГ, ИФА, РИА.

Термин арбовирусы (arthropod borne viruses – вирусы, передающиеся членистоногими) не является классификационным, а отражает одинаковый для этих вирусов путь передачи инфекции, характеризующейся природной очаговостью. Арбовирусы входят в состав нескольких семейств (Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae, Rhabdoviridae, Picornaviridae, Iridoviridae, Poxviridae, Arenaviridae) и насчитывают более 500 патогенных для животных и человека вирусов, среди которых около 100 являются патогенными для человека.

Большинство арбовирусов - возбудители природноочаговых зоонозов, распространенных в опр. (эндемичных) регионах и ландшафтных зонах. Они имеют характерных (специф.) переносчиков, определяющих эколого - эпидемиологические особенности арбовирусных инфекций. Передача возбудителей у ч\ногих осуществляется трансовариально и трансфазово (по этапам метафорфоза) из поколения в поколение. Арбовирусы обладают способностью размножаться при температуре тела теплокровных животных, а также в организме членистоногих, температура тела которых зависит от природных условий окружающей среды.

Клинически арбовирусные инфекции проявляются преимущественно в трех вариантах - лихорадки неясного генеза (“денге - подобной”), поражения центральной нервной системы (энцефалита), геморрагической лихорадки.

К арбовирусным инфекциям относятся:

системные лихорадки (флеботомная, Денге);

геморраги­ческие лихорадки (желтая, Денге, Чикунгунья, крымская гемор­рагическая, омская геморрагическая, киассанурская лесная бо­лезнь);

энцефалиты и энцефаломиелиты (клеще­вой энцефалит, американские, западный, восточный и венесу­эльский лошадиный энцефаломиелит, энцефалит Сан-Луи, до­лины Муррея, западно-нильский, японский, африканский) и др.

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций имеет важное практическое значение, т.к. многие из них имеют одинаковые клинические проявления, нередко заболевание протекает в атипичной или стертой форме. Кроме того, сходные с арбовирусными инфекциями могут вызывать другие вирусы, бактерии, риккетсии, спирохеты. Исследование на арбовирусы проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций.

Материалом для исследования являются кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы, моча, плевральная жидкость, органы трупа (мозг, печень, селезенка, легкие, почки).

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций у человека включает экспресс-методы, вирусологический и серологический методы

Экспресс-диагностика – обнаружение специфических вирусных антигенов в материале от больного с помощью РИФ (лихорадка Денге, крымская геморрагическая, колорадская лихорадка), РНГА или РОНГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (крымская ге­моррагическая лихорадка, лимфоцитарный хориоменингит), ИФА (японский энцефалит). РИФ применяют также для обнаружения вирусного антигена в слюн­ных железах переносчиков и в гемолимфе клещей (клещевой энцефалит).

Вирусологический метод в диагностическом отношении имеет ограничения, связанные с длительностью его выполнения (до 3 недель). Вирус выделяют путем заражения новорожденных или взрослых белых мышей в мозг, внутрибрюшинно или подкожно, первично-трипсинированных или перевиваемых культур клеток (куриные фибробласты, клетки почек эмбриона свиньи, перевиваемые линии ВНК-21, СПЭВ, ПЭС, Vero, а так­же культуры тканей членистоногих - клещей, комаров). Реже заражают куриные эмбрионы в тело, амнион, желточный ме­шок, на ХАО. Заболевших в течение 2-3 недель мышей исследуют на наличие арбовирусов.

Индикацию вирусов проводят с помощью РГА (с гусиными эритроцитами), учета ЦПД, по образованию бляшек, гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификация выделенных вирусов осуществляется обычно с помощью РН, РТГА или РСК, реже - РИФ, РИА.

Серологический метод - исследование парных сывороток крови для выявления нарастания титра антител (в 4 раза и более) с помощью РТГА при наличии у арбовируса гемагглютинина, а при его отсутствии – РСК, РН, а также РИФ, РНГА, РОНГА, РРГ, ИФА, РИА.

Термин арбовирусы (arthropod borne viruses – вирусы, передающиеся членистоногими) не является классификационным, а отражает одинаковый для этих вирусов путь передачи инфекции, характеризующейся природной очаговостью. Арбовирусы входят в состав нескольких семейств (Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae, Rhabdoviridae, Picornaviridae, Iridoviridae, Poxviridae, Arenaviridae) и насчитывают более 500 патогенных для животных и человека вирусов, среди которых около 100 являются патогенными для человека.

Большинство арбовирусов - возбудители природноочаговых зоонозов, распространенных в опр. (эндемичных) регионах и ландшафтных зонах. Они имеют характерных (специф.) переносчиков, определяющих эколого - эпидемиологические особенности арбовирусных инфекций. Передача возбудителей у ч\ногих осуществляется трансовариально и трансфазово (по этапам метафорфоза) из поколения в поколение. Арбовирусы обладают способностью размножаться при температуре тела теплокровных животных, а также в организме членистоногих, температура тела которых зависит от природных условий окружающей среды.

Клинически арбовирусные инфекции проявляются преимущественно в трех вариантах - лихорадки неясного генеза (“денге - подобной”), поражения центральной нервной системы (энцефалита), геморрагической лихорадки.

К арбовирусным инфекциям относятся:

системные лихорадки (флеботомная, Денге);

геморраги­ческие лихорадки (желтая, Денге, Чикунгунья, крымская гемор­рагическая, омская геморрагическая, киассанурская лесная бо­лезнь);

энцефалиты и энцефаломиелиты (клеще­вой энцефалит, американские, западный, восточный и венесу­эльский лошадиный энцефаломиелит, энцефалит Сан-Луи, до­лины Муррея, западно-нильский, японский, африканский) и др.

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций имеет важное практическое значение, т.к. многие из них имеют одинаковые клинические проявления, нередко заболевание протекает в атипичной или стертой форме. Кроме того, сходные с арбовирусными инфекциями могут вызывать другие вирусы, бактерии, риккетсии, спирохеты. Исследование на арбовирусы проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций.

Материалом для исследования являются кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы, моча, плевральная жидкость, органы трупа (мозг, печень, селезенка, легкие, почки).

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций у человека включает экспресс-методы, вирусологический и серологический методы

Экспресс-диагностика – обнаружение специфических вирусных антигенов в материале от больного с помощью РИФ (лихорадка Денге, крымская геморрагическая, колорадская лихорадка), РНГА или РОНГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (крымская ге­моррагическая лихорадка, лимфоцитарный хориоменингит), ИФА (японский энцефалит). РИФ применяют также для обнаружения вирусного антигена в слюн­ных железах переносчиков и в гемолимфе клещей (клещевой энцефалит).

Вирусологический метод в диагностическом отношении имеет ограничения, связанные с длительностью его выполнения (до 3 недель). Вирус выделяют путем заражения новорожденных или взрослых белых мышей в мозг, внутрибрюшинно или подкожно, первично-трипсинированных или перевиваемых культур клеток (куриные фибробласты, клетки почек эмбриона свиньи, перевиваемые линии ВНК-21, СПЭВ, ПЭС, Vero, а так­же культуры тканей членистоногих - клещей, комаров). Реже заражают куриные эмбрионы в тело, амнион, желточный ме­шок, на ХАО. Заболевших в течение 2-3 недель мышей исследуют на наличие арбовирусов.

Индикацию вирусов проводят с помощью РГА (с гусиными эритроцитами), учета ЦПД, по образованию бляшек, гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификация выделенных вирусов осуществляется обычно с помощью РН, РТГА или РСК, реже - РИФ, РИА.

Серологический метод - исследование парных сывороток крови для выявления нарастания титра антител (в 4 раза и более) с помощью РТГА при наличии у арбовируса гемагглютинина, а при его отсутствии – РСК, РН, а также РИФ, РНГА, РОНГА, РРГ, ИФА, РИА.

Содержательный модуль 14. Специальная вирусология.

Тема 7: Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций.

Актуальность темы:

Арбовирусы(от англ. arthropod borne viruses - вирусы, передаваемые членистоногими) - многочисленная экологическая группа вирусов, циркулирующих в природных очагах между восприимчивыми позвоночными животными и кровососущими членистоногими.

Классификация арбовирусных инфекций

Togaviridae

Западный лошадиный энцефалит

Восточный лошадиный энцефалит

Лихорадка реки Росс

Flaviviridae

Лихорадка западного Нила

Энцефалит долины Мюррей

Болезнь Кьясанурского леса

Bunyaviridae

Лихорадка долины Рифт

Reoviridae

Колорадская клещевая лихорадка

Rhabdoviridae

Таксономия.Арбовирусы не являются единой таксонбмичес-кой группой, а включают представителей из разных семейств. Наибольшее число арбовирусов относится к семействам Togaviridae (более 30 представителей), Flaviviridae (около 60), Bunyaviridae (около 200),Reoviridae(60),Rhabdoviridae(около 50). В настоящее время известно около 450 арбовирусов, число которых постоянно растет за счет открытия новых представителей. Около 100 из них способны вызывать заболевания у людей. Наибольшее значение в патологии человека имеют вирусы клещевого энцефалита, японского энцефалита, омской геморрагической лихорадки, крымской геморрагической лихорадки, желтой лихорадки, лихорадки денге, москитной (флеботомной) лихорадки.

Морфология, химический состав, антигенная структура.В зависимости от таксономического положения арбовирусы могут иметь сферическую или реже пулевидную (рабдовирусы) форму; размер вирусов от 40 до 100 нм. Состоят из РНК и белкового капсида, окруженного наружной липопротеидной оболочкой, на поверхности которой имеются шипики, образованные гликопротеидами. Вирусы имеют группоспецифические антигены, связанные с нуклеокапсидом, и видоспецифические антигены гликопротеидной природы. К настоящему времени известно около 70 антигенных групп арбовирусов. Большая часть арбовирусов обладает гемагглютинирующими свойствами.

Культивирование.Арбовирусы культивируют в организме новорожденных белых мышей, в культурах клеток (первичных и перевиваемых), иногда в куриных эмбрионах. У мышей-сосунков при заражении в мозг развивается острая инфекция с поражением ЦНС, которая заканчивается параличами конечностей и гибелью животных. Цитопатический эффект наблюдается только в некоторых культурах клеток.

Резистентность.Арбовирусы чувствительны к эфиру и другим жирорастворителям, формалину, низким значениям рН, УФ-облучению, инактивируются при 56-60 0 С в течение 30 мин. Длительно сохраняются в замороженном и лиофилизированном состоянии.

Эпидемиология.Арбовирусы широко распространены на земном шаре, ареал обычно ограничен зоной обитания переносчиков. Резервуаром арбовирусов в природе являются теплокровные и холоднокровные животные, особенно птицы, грызуны и летучие мыши.Основной механизм передачи- кровяной трансмиссивный (через укус инфицированного переносчика - кровососущего членистоногого). Специфическими переносчиками арбовирусов являются комары, клещи, москиты, мокрецы. Некоторые виды членистоногих способны к длительному пожизненному хранению возбудителя и передаче его потомству, т. е. выполняют роль природного резервуара арбовирусов. При некоторых условиях арбовирусы могут передаваться через кровососущих членистоногих от человека к человеку. Сезонность заболеваний связана с периодом активности переносчика.

В ряде случаев возможны другие механизмы и пути передачи этих вирусов - аэрогенный, алиментарный (через инфицированные пищевые продукты), контактный (при попадании крови больных на поврежденную кожу). В лабораторных условиях заражение может произойти в результате вдыхания вирусного аэрозоля при высокой концентрации вирусов в воздухе, поэтому работа с арбовирусами должна проводиться с соблюдением специального защитного режима. Арбовирусы могут вызывать эпидемические вспышки и спорадические случаи заболевания.

Патогенез и клиническая картина.После укуса кровососущим членистоногим возбудитель с током крови заносится в регионарные лимфатические узлы, где происходит его первичная репродукция, затем он попадает в кровь (вирусемия). Далее вирусы могут поражать клетки центральной нервной системы, кровеносные капилляры кожи, слизистых оболочек, а также внутренние органы и ткани (печень, селезенку, почки и др.). В патогенезе арбовирусных инфекций значительную роль играют иммунологические реакции с развитием реакции ГЗТ.

Клиническая картина арбовирусных инфекций характеризуется многообразием симптомов и форм проявления - от тяжелейших случаев с летальным исходом до бессимптомных форм. Выделяют три группы синдромов:

системные лихорадки, иногда с сыпью и поражением суставов, протекающие доброкачественно;

энцефалиты, характеризующиеся тяжелым течением и высокой летальностью.

Иммунитет.После перенесенного заболевания формируется стойкий гуморальный типоспецифический иммунитет.

Лабораторная диагностика.В связи с высокой опасностью лабораторного заражения арбовирусами аэрогенным путем работа с ними может проводиться только в специально оборудованных лабораториях. Материалом для исследования служат кровь, спинномозговая жидкость, в летальных случаях - материал из всех органов. Для диагностики некоторых арбовирусных инфекций разработаны экспресс-методы - РИФ, ИФА, РИА, РИГА, применяемые для обнаружения вирусного антигена. Универсальным методом выделения арбовирусов является заражение новорожденных (1-3-дневных) мышей в мозг. При некоторых арбовирусных инфекциях (лихорадка денге) используют культуры клеток. Выделенный вирус идентифицируют с помощью РСК, РТГА и РН. Эти же реакции применяют для серодиагностики арбовирусных инфекций.

Специфическая профилактика и лечение.Для создания активного иммунитета против ряда арбовирусных инфекций используют инактивированные формалином вакцины. Единственным исключением является живая вакцина против желтой лихорадки. Вакцинация проводится по эпидемическим показаниям лицам, проживающим в эндемических очагах или направляемых на временные работы в такие очаги, а также работающим с арбовирусами. Для экстренной профилактики и лечения применяют гомологичные и гетерологичные специфические иммуноглобулины. Для лечения некоторых арбовирусных инфекций используют также препараты рибавирина, интерферона и др.

Южно-американские геморрагические лихорадки. Лимфоцитарный хориоменингит. Диагностика аренавирусов. Лечение и профилактика инфекций ареновирусов.

Возбудители южно-американских геморрагических лихорадок — вирусы Хунйн (возбудитель аргентинской геморрагической лихорадки), Мачупо (возбудитель боливийской геморрагической лихорадки) и Гуанарито (возбудитель венесуэльской геморрагической лихорадки).

Длительность инкубационного периода южно-американских геморрагических лихорадок 7-14 сут. Для клинической картины южно-американских геморрагических лихорадок типичны прогрессирующая лихорадка, головная боль, мышечные боли, гиперестезия кожных покровов, гиперемия конъюнктивы. Обычно с 5-го дня присоединяется геморрагический диатез — петехии, геморрагии и признаки поражения почек (олигурия, альбуминурия). В особо тяжёлых случаях развивается ДВС-синдром.

Южно-американские геморрагические лихорадки. Лимфоцитарный хориоменингит

Микробиологическая диагностика аренавирусов

Проводят комплекс вирусологических, биологических и серологических исследований. Возбудители геморрагических лихорадок чрезвычайно контагиозные, работу с ними проводят в специализированных учреждениях.

Материал для исследований аренавирусов — смывы из носоглотки, кровь, СМЖ, моча, плевральный выпот и секционный материал (например, лимфатические узлы). Выделение аренавирусов проводят заражением культур клеток (например, VERO или амниона человека). Вирусы идентифицируют в РСК, РН или РНИФ. Выбор животного для биопробы определяет патогенность возбудителя для них. Обычно используют мышат, хомячков, морских свинок, обезьян, заражаемых интрацеребрально.

Специфические AT к аренавирусам выявляют в РСК и РНИФ; последняя предпочтительнее, так как выявляемые с её помощью AT появляются раньше и циркулируют дольше. При наличии стёкол с фиксированными культурами, заражёнными арена вирусами, диагностика инфекций не представляет большого труда и даёт возможность быстро получить результат. Видовую принадлежность аренавирусов определяют в РН.

Лечение и профилактика инфекций ареновирусов

Проводят симптоматическое лечение инфекций ареновирусов, так как средства этиотропной лекарственной терапии отсутствуют. Для лечения лихорадки Ласса используют гипериммунную сыворотку от иммунизированных доноров и реконвалесцентов. Для специфической профилактики разработаны аттенуированные живые вакцины.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Читайте также: