Лабораторная диагностика при сальмонеллезе ветеринария
Обновлено: 19.04.2024
В основу классификации сальмонелл положена их антигенная структура, установленная Кауфманом и Уайтом (1940), по которой определяют группу и серотип возбудителя. Антигены сальмонелл представлены соматическими 0-антигенами, расположенными на поверхности клетки, жгутиковыми Н-антигенами и поверхностными К-антигенами. Для серологической дифференциации многочисленных вариантов сальмонелл используют реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сыворотками. Клинически выраженную болезнь у животных вызывают сравнительно немногие серовары сальмонелл.
Устойчивость—в почве, навозе сальмонеллы сохраняются 9—10 мес., в питьевой воде 10—120 дней, в комнатной пыли — 8—18 мес. Переносят замораживание более 4—5 мес, при нагревании до 70—75 С погибают за 15—20 мин; 20 %-ная взвесь свежегашеной извести, 3 %-ный раствор едкого натра, 2 %-ный раствор формальдегида, хлорная известь, содержащая 2% активного хлора, надежно обеззараживают помещения от сальмонелл при экспозиции не менее 1 ч.
Засол и копчение не обеспечивают обеззараживание мяса; проваркой мяса в кусках весом 1 кг в течение 3 ч достигается надежное обеззараживание.
Эпизоотологические данные. Сальмонеллы патогенны для животных многих видов, в том числе и птиц, но клинически выраженную болезнь вызывают отдельные серологические варианты, адаптировавшиеся к конкретным видам. В неблагополучном по сальмонеллезу хозяйстве заболевает только часть молодняка. Большинство же инфицированных молодых и взрослых животных переболевают бессимптомно и остаются длительное время сальмонеллоносителями.
Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, в том числе и грызуны, которые выделяют его в большом количестве с фекалиями, мочой, а также и молоком.
Больные и переболевшие животные своими выделениями загрязняют окружающие предметы, корма, воду и т. д., которые становятся факторами передачи возбудителя. Заражение происходит главным образом алиментарным путем, реже — аэрогенно. Возможно внутриутробное заражение, вследствие чего животные рождаются больными и часто погибают в первые дни жизни. Переносчиками сальмонелл могут быть грызуны (мыши, крысы), мухи, тараканы.
К сальмонеллезу восприимчивы телята с 10 дней до 2—3-месяч-иого возраста, поросята с первых дней жизни до 4 мес, ягнята в первые дни жизни (реже .в более старшем возрасте), жеребята в первые 8—10 дней после рождения и реже — до 3 мес, цыплята до 20-дневного возраста, а также 1—2-месячные щенки серебристо-черных лисиц, песцов и нутрий.
Эпизоотическое значение различных видов сальмонелл неодинаково. Сальмонеллы, адаптированные к конкретным видам животных (S. dablin — к крупному рогатому скоту, S. cholera suis и S; typhi suis—K свиньям, S. abortus equi—K лошадям, S. abortus ovis — к овцам, S. enteritidis — к уткам, S. gallinarum — pullorum — к курам, S. typhimurium — ко всем видам животных), вызывают первичные сальмонеллезы, тогда как неадаптированные сальмонеллы обусловливают возникновение так называемых вторичных сальмонеллезов. Хотя адаптированные сальмонеллы и имеют сравнительно высокую вирулентность среди животных соответствующего вида, однако характер эпизоотической вспышки и в таком случае находится в большой зависимости от групповой устойчивости животных.
Кроме того, в возникновении сальмонеллеза среди молодняка, наряду с вирулентностью и количеством (дозой) возбудителя, cyщественное значение имеет действие различных неблагоприятных факторов внешней среды, отрицательно влияющих на резистентность организма животных (скученное содержание, антисанитарные условия, неудовлетворительное кормление, параметры микроклимата, переохлаждение, перегревание). Эти факторы выступают не;
только в роли предрасполагающих к заболеванию, они влияют на интенсивность и тяжесть течения сальмонеллеза.
У кобыл, овцематок и реже у коров, инфицированных сальмонеллами определенных серовариантов, наблюдают аборты. Абортировавшие животные остаются сальмонеллоносителями и являются опасными как источники возбудителя.
Из лабораторных животных восприимчивы белые мыши, в меньшей степени — морские свинки и кролики. Патогенез. Сальмонеллы, попадая с кормом водой, размножаются в тонком кишечнике, заселяют толстый, проникают в фолликулы, и пейеровые бляшки, из которых попадают в кровь и заносятся во все органы и ткани. В этот период микроб размножается в крови и органах (септицемия), многие из них разрушаются с освобождением эндотоксина. В местах размножения развивается воспаление (слизистая кишечника, желчный пузырь, печень), а эндотоксин обусловливает экссудативные процессы и диапедез эритроцитов с последующим появлением кровоизлияний на слизистых и серозных оболочках, очаговые некрозы клеток печени, селезенки и почек. Возможны поражения легких, суставов, головного мозга, матки и плода.В некоторых случаях с момента заражения или после затухания септицемии процесс ограничивается воспалением слизистой оболочки и лимфатических фолликулов кишечника с образованием изъязвлений и некроза (хронический сальмонеллез). Гибель животного наступает от обезвоживания, многочисленных кровоизлияний, интоксикации и сепсиса. У переболевших животных возбудитель может локализоваться в желчном пузыре, мезентериальных лимфоузлах и печени, откуда он попадает в просвет кишечника и выделяется во внешнюю среду. У многих клинически выздоровевших животных, вследствие постоянного раздражения слизистой оболочки кишечника, часто отмечают расстройство пищеварения.
Течение и симптомы. Сальмонеллез у молодняка протекает остро, подостро, хронически и атипично (у телят). Инкубационный период колеблется от 1—3 до 7 сут., а его продолжительность зависит от резистентности организма, вирулентности и дозы возбудителя, а также способа заражения и условий, в которых находится восприимчивое животное.
При остром течении у телят, поросят, ягнят и жеребят наблюдается вялость, температура тела повышается на 1—2 °С. Заболевшие больше лежат, дыхание учащенное. Аппетит изменчив, появляется жажда. В день повышения температуры тела, как правило, отмечают диарею (понос). Фекалии становятся жидкими, серо-желтоватого цвета с примесью слизи, пузырьков газа, нередко — крови. В дальнейшем диарея усиливается, и жидкие массы вытекают из ануса непроизвольно. При тяжелом течении поражаются почки: моча становится мутной, иногда с примесью эритроцитов, мочеиспускание частое, болезненное. Наблюдаются артриты, чаще поражаются запястные и заплюсневые суставы (рис. 33).
У поросят в дополнение к указанным признакам развивается конъюнктивит с выделением экссудата, который, засыхая в виде желто-грязных корочек, склеивает веки. На коже области живота, пахов, кончиков ушных раковин появляются очаге от темно-синего до фиолетового цвета. У жеребят, заразившихся в период внутриутробного развития, клинические признаки острого сальмонеллеза проявляются сразу после рождения.
Подострое течение характеризуется менее выраженными симптомами, с появлением признаков пневмонии (истечения из носовых ходов, кашель, хрипы в легких, лихорадка перемежающегося типа), При хроническом сальмонеллезе, который чаще развивается после острой или подострой стадии, наряду с упорными диареями начинают преобладать признаки воспаления легких. Больные-хроники резко отстают в росте, упитанность у них снижается; поражаются запястные, коленные, заплюсневые суставы. У поросят, кроме того, кожа утрачивает эластичность, на ней появляется струпьевидная экзема, кожа ушных раковин темно-фиолетовая с очагами некроза. Иногда у телят старших возрастных групп (2—4 мес.) наблюдают легкое переболевание сальмонеллезом (атипичиая, или абортивная, форма). У них уменьшается аппетит, незначительно повышается температура тела. У отдельных появляется понос, и через 3—6 дней животные выздоравливают. У пушных зверей, заразившихся сальмонеллами, повышается температура тела, отмечают понос и нередко рвоту. При остром течении больные погибают на 2—3-й день, при подостром—на 7—14-й день. У самок, заболевших в период гона или беременности, наблюдают бесплодие (14—20%), аборты (до 15%) и большой падеж (до 20%) молодняка в первые 10 дней после щенения.
Патологоанатомические изменения. Трупы животных, павших от острого сальмонеллеза, как правило, нормальной упитанности. При вскрытии обнаруживают многочисленные точечные и полосчатые кровоизлияния под серозными оболочками кишечника, перикарда и. эпикарда, гиперплазию лимфатических узлов и селезенки, дегенеративные изменения в печени и почках, а также катаральное или геморрагическое воспаление слизистых оболочек желудка и кишечника. Лимфатические узлы, особенно мезентериальные портальные и почечные, увеличены, гиперемированы, на разрезе сочные с очагами гиперемии. Селезенка значительно увеличена, края закруглены, капсула напряжена, под ней имеются мелкоточечные кровоизлияния. Печень полнокровна, незначительна увеличена, окрашена неравномерно; под серозной оболочкой печени иногда видны кровоизлияния. Под капсулой и в корковом слое почек у некоторых трупов обнаруживают кровоизлияния.
Слизистая оболочка желудка (сычуга у жвачных) отечная, гиперемирована, с кровоизлияниями. Слизистая оболочка тонкого кишечника гиперемирована, покрыта слизью, часто усеяна мелкоточечными или полостчатыми кровоизлияниями. Аналогичные изменения находят и в толстом кишечнике.
При подостром и хроническом сальмонеллезе патологоанатомические изменения выражены более четко. В этих случаях труп, как правило, истощен, а поражения находят не только в желудочно-ки-шечном тракте, но и в легких. Участки легких уплотнены, бугристые, серо-красного или вишнево-красного цвета, на разрезе гнойно-некротические очаги; из бронхов при надавливании выделяется слизисто-гнойный экссудат. Средостенные и бронхиальные лимфатические узлы увеличены, на разрезе видны некротические очажки желтоватого цвета. Легочная плевра покрыта фибринозными пленками, которые распространяются и на костальную плевру. Сердечная мышца дряблая, серо-глинистого цвета; под эпикардом и эндокардом точечные и пятнистые кровоизлияния.
При хроническом сальмонеллезе более выражены изменения в печени и толстом кишечнике. Печень у большинства трупов с желтоватым оттенком, в паренхиме сероватые очаги дегенерации, Желчный пузырь переполнен густой желчью, иногда перемешанной с кровью, слизистая оболочка гиперемирована с полосчатыми кровоизлияниями.
Слизистая оболочка толстого кишечника, особенно слепой кишки и илео-цекального клапана, воспалена с многочисленными некротическими участками. Некротизированная ткань покрывает слизистую оболочку в виде отрубьевидного налета, перемешанного со слизью. Солитарные фолликулы кишечника выступают над поверхностью слизистой оболочки, некротизированы и покрыты пленками фибрина. Под пленками фибрина видны язвы с плоскими или валикообразными краями (цв. табл. Vl-Б). Лимфатические узлы толстого кишечника увеличены, на разрезе сочные, в паренхиме имеются желтоватые очажки некроза. Наиболее выражены описанные изменения в толстом кишечнике у поросят, у которых, кроме того, нередко обнаруживают гнойный перитонит и перикардит, а также темно-фиолетовые пятна на коже ушных раковин, нижней стенки живота, промежности. При сальмонеллезе овец и кобыл, сопровождающемся абортами, патологоанатомические изменения обнаруживают у абортированных плодов. Отмечают отечность плодных оболочек и подкожной i соединительной ткани, многочисленные точечные и полосчатые кровоизлияния под серозными оболочками, очажки некроза в печени, размягчение паренхимы почек, увеличенные селезенку и лимфатические узлы. Диагноз. Ставят на основании анализа эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также результатов бактериологических и серологических исследований. Для бактериологического исследования в ветеринарную лабораторию направляют желчный пузырь с прилегающей частью ткани печени, мезентериальные лимфатические узлы, кровь из сердца, кусочки пораженного легкого размером 5х5 см, трубчатую кость, а от абортированных животных—плод, а также сыворотку крови абортировавшей матки. Появление заболевания среди молодняка, чаще содержащегося скученно, с нарушениями, зооветеринарных правил, клинически проявляющийся диареей, повышением температуры тела, пневмониями с характерной патологоанатомической картиной (кровоизлияния под серозными оболочками, некротические очаги в печени, селезенке и лимфоузлах, а также солитарных фолликулах толстого кишечника и др.), дает основание для подозрения на сальмонеллез. Окончательный диагноз устанавливают на основании результатов бактериологического исследования.
В ветеринарной лаборатории делают высевы из патологического материала с целью выделения чистой культуры, которые затем идентифицируют в реакции агглютинации до серологического варианта. Прижизненную диагностику осуществляют путем исследования сыворотки крови с антигенами из сальмонелл с целью обнаружения специфических агглютининов.
Дифференциальный диагноз. У телят исключают колибактериоз, рота- и коронавирусную и стрептококковую инфекции; у поросят — чуму, вирусный гастроэнтерит, стрептококкоз, дизентерию; у животных всех видов — неспецифические гастроэнтериты, пневмонии, аборты другой природы, а также пастереллез. Дифференцируют эти болезни от сальмонеллеза на основании бактериологических, вирусологических и серологических исследований.
Лечение. Больных животных изолируют в отдельное помещение, где им создают оптимальные условия содержания и организуют диетическое кормление. Лечение должно быть комплексным, направленным на уничтожение возбудителя в организме, устранение интоксикации и на восстановление функции пищеварения и дыхания. Больным назначают голодную диету, а также антибиотики (кроме препаратов пенициллинового ряда), сульфаниламиды и нитрофураны. Антибактериальные средства применяют с таким расчетом, чтобы подавить размножение сальмонелл в крови и в кишечнике. Назначают препараты внутрь и в виде инъекций.
При сальмонеллезе молодняка в качестве специфических средств используют поливалентную антитоксическую сыворотку против паратифа и колибактериоза, а также бактериофаг. Антитоксическую сыворотку вводят внутримышечно 2-З раза с интервалом 3-4 ч телятам, до 30-дневного возраста по 10—20 мл, старше 30 дней—по 20—30 мл на одну инъекцию; поросятам до 2 мес — 30—60 мл, старше 2 мес — 60—80 мл. Антитоксическую сыворотку можно давать больным телятам и поросятам перорально в дозе 30—50 мл. Бактериофаг выпаивают им по 30—50 мл не менее 3 раз с интервалом 3—4 ч.
Из антибактериальных средств рекомендуются комплексные неомициновый и полимиксиновый препараты. В состав неомицинового лечебного премикса входят (на 1 кг массы тела животного):
неомицин 10 тыс. ЕД, хлортетрациклин 20 мг, фуразолидон 7 мг, аскорбиновая кислота 5 мг; полимиксинового—полимиксин М сульфат 20 тыс. БД, хлортетрациклин 20 мг, фуразолидон 7 мг, аскорбиновая кислота 5 мг. Нужное количество препарата готовят в виде смеси, в разовой дозе добавляют 100—150 мл кипяченой воды и эту смесь выпаивают телятам перед кормлением 2 раза в день (утром и вечером) в течение 6 сут.
Хороший лечебный эффект получен при применении гентамицина-сульфата, который, вводят внутримышечно по 0,08 г 2 раза в день в течение 5 сут, трибриссена (с молоком 2 раза в день по 7,5 мг в течение 5 дней), витабиомицина.
Из антибиотиков эффективны синтомицин, левомицетин, тетрациклины; из сульфаниламидов — норсульфазол, дисульфан, этазол, сульцимид, сульфадимезин, сульфидин; из нитрофуранов — фуразолидон, фурацин, фуразолин. Все эти препараты применяют в соответствии с наставлением, где указаны дозы, кратность и метод введения.
Иммунитет. У переболевшего сальмонеллезом молодняка формируется напряженный иммунитет длительностью до 8—9 мес. Новорожденные телята, поросята, ягнята при рождений не содержат в крови гамма-глобулинов (основных защитных белков); они получают их с молозивом матери. Матки, в крови которых содержатся специфические к сальмонеллам антитела, через молозиво передают их новорожденным, обеспечивая создание колострального иммунитета длительностью до 25—35 дней. Поэтому для создания колост-рального иммунитета у новорожденных животных проводят вакцинацию беременных маток, а затем вакцинируют молодняк.
В неблагополучных по сальмонеллезу хозяйствах коров вакцинируют концентрированной формолквасцовой вакциной первый раз за 40 дней (доза 10 мл), второй — за 30 дней до ожидаемого отела (доза 15 мл). Телята, полученные от вакцинированных коров и получившие молозиво, приобретают колостральный (пассивный) иммунитет; но в 20—30-дневном возрасте их вакцинируют этой же ..вакциной двукратно с интервалом 7—10 дней (доза вакцины 1,5 для первой и 2 мл для второй инъекции). Телятам от невакцинированных коров вакцину вводят подкожно в 1—2-дневном возрасте в дозе 1мл, затем в 5—7-дневном (2 мл) и в 2-месячном возрасте (доза 2 мл). Для вакцинации коров и телят используют также формолтиомерсаловую вакцину против колибактериоза и паратифа.
Ягнят прививают поливалентной формолтиомерсаловой вакциной внутримышечно двукратно с интервалом 7—10 дней. Овцематкам для профилактики абортов вакцину вводят внутримышечно перед первой случкой двукратно и затем ревакцинируют однократно; за 30—15 дней до окота.
Формолтиомерсаловую вакцину используют также для профилактики сальмонеллеза пушных зверей. Щенков серебристо-черных лисиц, песцов и нутрий вакцинируют с 30—45-дневного возраста, а взрослых — однократно перед гоном за 15—20 дней до покрытия. Профилактика и меры борьбы. Наряду с вакцинами строго соблюдают ветеринарно-санитарные и зоогигиенические правила подготовки маточного поголовья к отелу, опоросам, охотам, молозивного кормления и содержания новорожденных и молодняка более старшего возраста.
При появлении заболевания больных изолируют в отдельное помещение и лечат. Выздоровевших животных содержат обособленными группами, откармливают и сдают на убой. Клинически здоровых животных, подозреваемых в заражении, вакцинируют. Помещения, предметы ухода дезинфицируют раствором хлорной извести, содержащим 2% активного хлора, 2 %-ным раствором формальдегида, горячим 4 %-ным раствором едкого натра, 3 %-ным раствором однохлористого йода, 20; %-ной взвесью свежегашеной извести.
Абортировавших по причине сальмонеллеза животных изолируют и лечат (антитоксическая сыворотка, антибиотики, сульфаниламидные и нитрофурановые препараты); плоды утилизируют.
ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗА У ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF
Актуальность обусловлена высокой заболеваемостью , антибиотикорезистентностью возбудителей, тяжестью течения локализованных форм и высокой летальностью при генерализованных формах. В Башкирии по статистики стали чаще болеть сальмонеллезом, у людей было зафиксировано 644 случая этой острой кишечной инфекции. В прошлом году таких случаев было на 33,4% меньше. Специалисты предупреждают: основной источник сальмонеллы – яйца, мясо и молоко.
Возбудители — бактерии рода Salmonella отнесены к семейству Enterobacteriaceae. Этот род состоит из 2017 серологических вариантов, объединенных по степени антигенного родства в 52 серогруппы, большинство из которых имеют самостоятельные названия [1].
Независимо от серологического варианта сальмонеллы представляют собой мелкие (1—4 х 0,5 мкм) палочки с закругленными концами, по Граму окрашиваются отрицательно, спор и капсул не образуют, подвижные (за исключением S gallinarum — pullorum).
Большинство сальмонелл растет на обычных питательных, средах с рН 7,2—7,6 при температуре 37°С. В жидкой среде (МПБ) они образуют интенсивное помутнение с обильным серо-белым слизистым осадком; на поверхности среды формируется нежная, разбивающаяся при встряхивании пленка [1].
Ферментативные свойства сальмонелл разнообразны, что зависит от серологического варианта [1]. Общие для них свойства - образование сероводорода, утилизация цитратов; они не разжижают желатин, не ферментируют лактозу.
Распространение болезни происходит алиментарным путем, попадая в организм, сальмонеллы поселяются в тонком кишечнике и выделяют токсин, способствующий потере воды через кишечник, нарушению тонуса сосудов и повреждению нервной системы. Болезнь развивается через 6 ‑ 72 часа после попадания сальмонелл в организм. Различают несколько клинических форм сальмонеллеза. [1]
1) гастроинтестинальная (локализованная), протекающая в гастритическом, гастроэнтеритическом, гастроэнтероколитическом и энтероколитическом вариантах;
2) генерализованная форма в виде тифоподобного и септического вариантов;
3) бактерионосительство: острое, хроническое и транзиторное;
4) субклиническая форма [1].
Симптомы сальмонеллёза: высокая температура (до 41-42 градусов) тела, при низкой температуре конечностей и ушей; лихорадка, вялость, снижение аппетита, болезненность в брюшной полости, вынужденная поза, учащение дыхания и сердцебиения, аритмия, развивается конъюнктивит. Начинается диарея, фекалии приобретают грязно-серый цвет, имеют зловонный запах, у птиц дополнительный симптом увеличение зоба и живота, летальность достигает 50-80%.[4]
Одним из главных факторов, затрудняющих профилактику, диагностику и лечение сальмонеллезной инфекции принято считать большую устойчивость и изменчивость сальмонелл во внешней среде, ее огромную адаптивную способность к неблагоприятным факторам. В литературе данные по поводу устойчивости сальмонелл весьма противоречивые, но они позволяют констатировать, что при высушивании погибает 99 % бактерий, остальные выживают. Низкие температуры сальмонеллы переносят хорошо и сохраняют жизнеспособность при температуре -76-100°С, размножаются при 5-47°С, оптимум роста составляет 35-37°С.
Большинство сальмонелл проявляют высокую терморезистентность и хорошо переносят присутствие высоких концентраций NaCl, солей висмута, магния. Необходимо учитывать, что наиболее эффективно и полно можно уничтожить сальмонелл во внешней среде, только применяя дезинфицирующие препараты. [3]
В условиях ветеринарных клиник и лабораторий сальмонеллез индицируют методами бактериологического и серологического исследований [2]. Используют микрокопирование мазков крови, окрашивают по Граму, обрабатывают сальмонеллезными люминесцирующими сыворотками и микроскопируют (рисунок 1).
Рисунок 1-Возбудитель Salmonella окрашена по Граму
Но более эффективным способом является реакция агглютинации. Агглютинины в крови больных животных появляются на 7—10-й сутки болезни. Наличие агглютинационных титров 1:100 и выше дает основание подозревать сальмонеллез.[2]
Диагноз сальмонеллёза считается подтверждённым в том случае если учтены все методы диагностики и анализы анамнеза и дефферинцированы другие диагнозы такие как: от колибактериоза и диплококковой инфекции; у поросят — от чумы, вирусного гастроэнтерита и дизентерии [1].
Список использованных источников.
1. Антонова, Т.В. Инфекционные болезни / Т.В. Антонова, М.М. Антонов, В.Б. Барановская, и др.. - М.: СПб: СпецЛит, 2004
3. Богомолов, Б. П. Инфекционные болезни / Б.П. Богомолов. - М.: Издательство МГУ, 2006
4.Роудер, Дж. Ветеринарная токсикология / Дж. Роудер. - М.: Аквариум, 2008.
Сальмонеллезы (лат., англ. – Salmonellosis ; паратиф) – большая группа зоонозных болезней преимущественно сельскохозяйственных животных и промысловых животных, характеризующихся у молодняка при остром течении лихорадкой, септицемией, токсикозом и диареей, а при подростковом и хроническом – пневмонией и артритами; у взрослых самок – абортами; у людей протекает в виде пищевых токсикоинфекций.
Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением диагноза лабораторными исследованиями.
Для исследования на наличие сальмонелл отбирают испражнения, рвотные массы, кровь, мочу. Исследуемый материал следует доставлять в лабораторию в возможно короткий срок, но не позднее 12 ч после отбора, испражнения (фекалии) — не позднее 3—4 ч. В случае невозможности доставки в установленные сроки материал посылают в консерванте или в транспортной среде. Такой материал до исследования хранят при 4—6°С не более 24 ч. При отборе проб необходимо исключить возможность контаминации их за счет смежных областей кожи, других органов, внешней среды и т. п.
Кровь для серологического исследования берут в количестве 5-10 мл.
Мочу собирают при естественном мочеиспускании в чистые пробирки. Мочу микроскопируют непосредственно в хозяйствах.
Взятые пробы помещают в ящик, опечатывают и направляют в лабораторию с нарочным (курьером).
В сопроводительном документе к пробам патологического материала указывают время гибели животного или время взятия проб при жизни.
Материал для исследования:
При жизни- кал, сыворотка крови
Посмертно - трупы мелких животных, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.
Методы окраски: простой метод, по Граму;
Микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно;
Спор не образуют;
Капсулу не образуют;
Подвижные (за исключением S . pullorum ).
Посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др. накопительные.
Особенности выделения возбудителя:
Оптимальная температура 37°С
Культуральные свойства: все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихам:
На МПА образуют прозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-4 мм. У некоторых видов сальмонелл по краю колоний заметен выпуклый слизистый вал.
На агаре Эндо колонии бледно-розовые прозрачные
На агаре Плоскирева – бесцветные, непрозрачные
На среде Левина - прозрачные с фиолетовым оттенком.
Наиболее характерный рост отмечается на селективной для сальмонелл среде висмут-сульфит-агаре: образуют черные колонии с металлическим блеском.
В МПБ - слабое помутнение, на дне пробирки осадок серо-белого цвета, на поверхности среды в старых культурах иногда тонкая пленка или пристеночное кольцо.
Список использованных источников
Бессарабов Б. Ф. "Инфекционные болезни животных" [Текст] : Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений/ Б. Ф. Бессарабов - М. : КолосС, 2007.-78с.
Госманов Р.Г., Колычев Н.М. "Практикум по ветеринарной микробиологии и микологии" [Текст] : учеб. пособие/ Госманов Р.Г. – Спб.: Лань, 2014-221с.
Сидоров М.А, Скородумов Д.И, Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. – М.: Колос, 2007.
Сальмонеллезы — группа инфекционных бактериальных болезней, преимущественно молодняка сельскохозяйственных животных, в том числе и птиц, промысловых и мелких домашних животных.
У животных сальмонеллезы могут проявляться в виде трех основных форм: первичные, вторичные и бактерионосительство.
Первичные сальмонеллезы при остром течении характеризуются лихорадкой, явлениями септицемии, токсикоза и поражением кишечника, а при хроническом — воспалением легких. У взрослых животных (кобыл, овец и реже у коров) могут наблюдаться аборты.
Вторичные сальмонеллезы осложняют течение основного заболевания (чума свиней, пастереллез и др.), при этом характерные для сальмонеллезов признаки обычно слабо выражены или отсутствуют.
Бактерионосительство сальмонелл характеризуется тем, что животные, будучи внешне здоровыми, выделяют бактерии во внешнюю среду с фекалиями и мочой. У таких животных возбудителя обнаруживают главным образом в печени (в желчи, в слизистой желчного пузыря, в лимфатических узлах печени), в мезентериальных лимфатических узлах, в содержимом слепой кишки.
У человека сальмонеллез протекает в виде пищевых токсикоинфекций (острых кишечных инфекций).
Возбудители сальмонеллезов относятся к роду Salmonella семейства Е nterobacteriaceae. В настоящее время все сальмонеллы разделяют на два вида. Вид S . bongori содержит менее 10 очень редких сероваров. Все остальные 2500 сероваров выделены внутри вида S . choleraesuis , который по фенотипическим и генетическим критериям разделен на 6 подвидов: S . choleraesuis subsp . arizonae ; S . choleraesuis subsp . choleraesuis ; S . choleraesuis subsp . diarizonae ; S . choleraesuis subsp . houtenae ; S . choleraesuis subsp . indica и S . choleraesuis subsp . salamae . Все серовары внутри подвида choleraesuis имеют названия, тогда как в других подвидах серовары (за исключением некоторых в подвидах salamae и houtenae) не имеют названий.
Диагностическим лабораториям рекомендовано для имеющих названия сероваров бактерий рода Salmonella использовать эти названия, а не имеющие названий серовары обозначать с помощью антигенной формулы и указанием подвида.
Лабораторная диагностика сальмонеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований.
Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.
Бактериологическое исследование
Материал для исследования. Для посмертной диагностики в лабораторию направляют свежий труп мелких животных, в том числе и птиц, целиком, от трупов крупных животных — трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, почку, селезенку, брыжеечные лимфоузлы, пораженные участки легких, слепую кишку с содержимым; в случае аборта — свежий плод.
Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии, носовую слизь, истечения из родовых путей.
Для получения гемокультуры на 1-4-й день болезни (не позже, т.к. период бактериемии при сальмонеллезах короткий) от животных может быть взята кровь, а для серологического исследования по РА — сыворотка крови. От птиц берут кровь для постановки кровекапельной реакции агглютинации или кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации для диагностики пуллороза-тифа.
Микроскопическое исследование исходного материала. Изпоступившего материала готовят мазки, окрашивают по Граму. Сальмонеллы являются грамотрицательными, мелкими палочками с закругленными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. Не образуют спор и капсул.
Выделение и идентификация культур сальмонелл. Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Хемоорганотрофы; обладают и дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная температура культивирования 37° С, рН среды 7,2-7,4, хорошо растут на обычных питательных средах.
Исследуемый материал высевают на обычные МПА и МПБ, на плотные селективные среды, а в ряде случаев (главным образом при исследовании фекалий и при получении гемокультуры) в среды накопления (см. табл. 12). Из селективных наиболее часто используют среды Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфит агар, а из сред накопления — Мюллера, Кауфмана, Киллиана.
Характер роста сальмонелл на питательных средах. В МПБсальмонеллы дают рост в виде равномерного помутнения среды, на МПА образуют небольшие, диаметром 2-4 мм, гладкие выпуклые прозрачные или серо-голубоватые колонии с ровными краями. Некоторые серовары ( S . abortus equi , S . abortus ovis , S . typhisuis ) образуют более мелкие колонии диаметром около 1 мм. На среде Эндо колонии сальмонелл слегка розовые, прозрачные, на средах Плоскирева и Мак-Конки — бесцветные, но выглядят более плотными и мутноватыми, чем на МПА. На агаре Левина сальмонеллы растут в виде прозрачных колоний, иногда с фиолетовым оттенком. На висмут-сульфит агаре почти все сальмонеллы образуют черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание участка среды под колонией в черный цвет. Отдельные немногочисленные серовары составляют исключение, и на висмут-сульфит агаре образуют светлые или светло-зеленоватые колонии.
Морфология клеток сальмонелл в культуре. В мазках, приготовленных с питательных сред, сальмонеллы обнаруживают в виде грамотрицательных, мелких палочек с закругленными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. В мазках располагаются одиночно, беспорядочно, иногда попарно. Не образуют спор и капсул. Обладают, как правило, выраженной подвижностью за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Некоторые серовары ( S . gallinarum pullorum ) всегда неподвижны, могут встречаться неподвижные мутанты и среди других сероваров.
Идентификация сальмонелл по ферментативным признакам. Чистые культуры бактерий с характерными для сальмонелл культуральными свойствами с целью установления родовой принадлежности засевают в дифференциально-диагностические среды для определения ферментативных свойств. Критерии для родовой идентификации сальмонелл приведены в таблице 14.
К роду Salmonella относят бактерии: оксидазоотрицательные; катала-зоположительные; не образующие индол; дающие отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра (желтое окрашивание среды); положительную пробу с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет); способные расти на среде Симмонса с цитратом; лизин- и орнитиндекарбоксилазо-положительные; образующие H2S; не сбраживающие лактозу, сахарозу; не расщепляющие мочевину; не разжижающие желатину. По аргининдегидрогеназе, способности расти в присутствии KCN и использованию малона-та сальмонеллы различаются. Как правило, сбраживаемые ими углеводы включают L-арабинозу, D-ксилозу, мальтозу, D-маннитол, D-маннозу, L-рамнозу, D-сорбитол, трегалозу и глюкозу.
Частота выявления позитивных реакций при изучении некоторых биохимических характеристик сальмонелл представлена в таблице 8.
Таблица 8 - Биохимические свойства рода Salmonella
Признаки | % позитивных реакций |
Ферментация глюкозы | 100% |
Образование газа на среде с глюкозой | 91,9% |
H2S | 91,6% |
Индол | 1,1% |
Арабиноза | 89,2% |
Сорбит | 94,1% |
Дульцит | 86,5% |
Маннит | 99,7% |
Рост на среде Симмонса | 80,1% |
На основании биохимических характеристик возможна не только родовая идентификация сальмонелл, но и определение их видовой и подвидовой принадлежности (таблица 9).
Наибольшее значение для ветеринарии имеют сальмонеллы подвидов choleraesuis и arizonae, объединяющие более 80% всех сальмонелл.
Таблица 9 -Дифференциация видов и подвидов бактерий рода
Salmonella , первоначальные источники их выделения
Подвиды вида S. choleraesuis
Примечания: Данные по подвиду Indica приведены по Bergeys Manual of
Determinative Bacteriology (1994).
Учитывая возможность отклонений отдельных из перечисленных признаков, следует отметить, что биохимическая идентификация сальмонелл является лишь первым этапом работы в этом направлении. Окончательную идентификацию выделенных штаммов осуществляют с учетом последующего изучения их антигенной структуры.
Серологическая идентификация сальмонелл. Сальмонеллы имеют сложное антигенное строение. Основными антигенами, имеющими значение для идентификации сальмонелл на уровне рода, опре деления их видовой, серогрупповой и серовариантной принадлежности, являются соматический или О-антиген и жгутиковый или Н-антиген.
О-антиген расположен на поверхности бактериальной клетки ипредставляет собой термостабильный (не разрушается при кипячении в течение 2 часов) фосфолипидо-полисахаридный комплекс. Он не однороден исодержит различные антигенные факторы (дидезоксигексозы, или иначе полиозиды) на концах полисахаридных цепей, что обуславливает специфичность О-антигена в серологических реакциях.
В соответствии с содержанием тех или иных О-антигенов сальмонеллы делят на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. Отдельные антигенные факторы О-антигена обозначаются арабскими цифрами. Некоторые антигенные факторы О-антигена (далее просто О-антигены) называют главными О-антигенами, т.к. они встречаются только в одной из групп сальмонелл и именно они определяют групповую принадлежность бактерий. Другие О-антигены называют малыми, т.к. они встречаются в нескольких или даже многих группах сальмонелл и, следовательно, не могут определять их групповую принадлежность. В настоящее время выделено более 50 О-групп сальмонелл.
Одним из компонентов О-антигена является Vi-антиген — полимер N-ацетиламино-гексуроновой кислоты. Он обнаруживается у отдельных сероваров сальмонелл (S. dublin , S . paratyphi и др.) и некоторых других бактерий семейства энтеробактерий (Escherichia, Citrobacter). Vi-антиген затрудняет серологическую идентификацию сальмонелл в РА, т.к. препятствует агглютинации бактерий в О-сыворотках.
Vi-антиген термолабилен. Он полностью разрушается при кипячении в течение 10 минут, частично инактивируется при нагревании при 60° С в течение часа и под действием фенола, чувствителен к действию соляной кислоты и этанола. Наиболее полное его развитие у соответствующих се-роваров происходит при температуре 37° С.
Антигенные факторы 1-й фазы обозначаются прописными буквами латинского алфавита, антигены 2-й фазы - арабскими цифрами или прописными буквами латинского алфавита с арабскими цифрами. Сальмонеллы, у которых Н-антиген представлен двумя фазами, называются двухфазными, а имеющие антигенные факторы 1-й фазы-монофазными.
Помимо перечисленных основных антигенов, у сальмонелл обнаружены и другие антигены. Среди них — М-антиген (слизистый). Он выявляется у некоторых слизистых штаммов сальмонелл сероваров S . choleraesuis , S . dublin , S . anatum и др. М-антиген — кислый полисахарид. Он нерастворим в воде, разрушается под действием кислоты и этанола, обладает слабыми антигенными свойствами.
У ряда сероваров сальмонелл ( S . typhimurium , S . choleraesuis , S . stanley , S . anatum и др.) показано наличие белково-полисахаридного комплекса, отнесенного к К-антигену. Он устойчив к действию кислоты, этанола и обладает выраженными антигенными свойствами.
У сальмонелл имеется несколько видов антигенных вариаций, знание которых необходимо для получения однородных результатов идентификации и правильной их интерпретации.
Н-О-вариации — переход из жгутиковой НО-формы в безжгутиковую О-форму. Встречается редко, но такой переход почти всегда необратим. Некоторые серовары сальмонелл ( S . gallinarum - pullorum ) существуют только в О-форме.
S-R-вариации — переход от гладких S-форм к шероховатым R-формам, сопровождающийся качественными и количественными изменениями О-антигена.
О-вариации — количественные изменения О-антигена. Наиболее часто изменениям подвергаются О-антигены 1,6, и 12. Этот тип вариаций антигенов связывают с фаговой конверсией сальмонелл.
V-W-вариации (или Vi-вариации) — количественные изменения Vi-антигена, влияющие на агглютинабельность культур, содержащих этот антиген (V-форма — О — инагглютинабельна из-за большого количества Vi-антигена, W-форма не содержит Vi-антиген и агглютинируется О-сыворотками, VW — форма является промежуточной, т.е. содержит Vi-антиген, но является О-агглютинабельной).
Н-вариации — качественные изменения жгутиковых антигенов, в результате чего отдельные антигенные комплексы, входящие в 1-ю и 2-ю фазы, могут присутствовать или отсутствовать.
При идентификации сальмонелл следует помнить и то, что они могут иметь общие антигены не только в пределах их отдельных О-групп, но и с представителями других родов семейства энтеробактерий (Escherichia , Shigella , Klebsiella , Citrobacter и др.). Несмотря на мозаичность и вариабельность антигенной структуры сальмонелл, при их серологической идентификации во внимание принимаются лишь два основных антигена (О и Н). Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. В этой схеме, в соответствии со структурой О-антигенов, сальмонеллы распределены по О-группам с различным числом сероваров, расположенных в пределах этих О-групп в алфавитном порядке в соответствии с обозначением их Н-антигенов 1-й фазы. Фактически схема Кауфмана-Уайта представляет собой каталог антигенов сальмонелл, имеющих первостепенную диагностическую ценность. Краткая схема Кауфмана-Уайта, касающаяся антигенной структуры групп сальмонелл, в которые входят патогенные сероварианты бактерий, представлена в таблице 10.
Таблица 10 - Антигенная структура групп сальмонелл, в которые входят патогенные для животных сероварианты ( Bergey - s Manual of Determinative Bacteriology , 1994)
и незаразных болезней, д-р ветеринар.наук Гимранов В.В.
Ответственный за выпуск:
зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д-р биол. наук, профессор Андреева А.В.
г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы
Лабораторная работа №7
Лабораторная диагностика эшерихиозов и салъмонеллезов.
Цель занятия: Изучить морфологию, культурально-биохимические свойства возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза, а также лабораторную диагностику и средства специфической профилактики данных заболеваний.
Оборудование и материалы. Культуры Е. coli и сальмонелл на МПА, средах, Левина, Симмонса; пластины ПБДЭ с результатами тестирования ферментативной активности Е. coli; пробирки цветного ряда с культурой Е.coli (лактоза, глюкоза, индол, среда с мочевиной); наборы агглютинирующих антиадгезивных и О - коли-сывороток, биопрепараты; культуры сальмонелл на МПА, МПБ, агаре Эндо, агаре Плоскирева, среде Олькеницкого или Ресселя, ПБДЭ- пластинках; набор сальмонеллезных сывороток, О-комплесных и монорецепторных О- и Н- агглютинирующих для экспресс-идетификации сальмонелл в реакции агглютинации на стекле.
1 Общие сведения
Семейство энтеробактерий (Enterobacteriaceae) включает 12 родов бактерий, имеющих сходство по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам и отличающихся по биохимическим признакам. Наибольшее значение для ветеринарной практики имеют бактерии родов Escherichia и Salmonella, вызывающие у животных заболевания колибактериоз и сальмонеллез.
1.1 Возбудитель колибактериоза (эшерихиоза) - кишечная палочка Escherichai coli. Колибактериоз - остропротекающее инфекционное заболевание молодняка разных видов животных (включая птиц и пушных зверей). Заболевание характеризуется, как правило, диареей (профузным поносом), обезвоживанием, депрессией, нарастающей слабостью и летальным исходом. Колибактериоз протекает в трех формах: септической, энтеротоксемической и энтеритной. Последние две формы не сопровождаются сепсисом. Восприимчивы телята в первые часы и дни после рождения. Поросята заболевают как в период новорожденности, так и после отъема. Ягнята заболевают с первых дней после рождения до 5. 6-месячного возраста. Птицы поражаются в основном в первые 2. 3 мес жизни. Взрослые животные колибактериозом не болеют, но являются бактерионосителями патогенных Е. coli. Кишечная палочка может быть также возбудителем мастита и эндометрита.
Морфология. Микроскопически Е. coli - представляют собой короткие палочки с закругленными краями, грамотрицательные, длиной 1. 3 мкм и шириной 0,8 мкм, споры не образуют. В мазках расположение одиночное. Бактерии подвижны, перитрихи или неподвижны. Капсулу не образуют, за исключением отдельных штаммов серогрупп (08, 09, 0101).
Материал для исследования. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют патологический материал: отрезок кишечника, кусочек печени, селезенки. При вскрытии трупа в лаборатории помимо патматериала исследуют также кровь из сердца и головной мозг. Если в лабораторию не представляется возможным в кратчайший срок доставить материал, его консервируют: фекалии — раствором стерильного глицерина с NaCl (глицерин — 250 мл, поваренная соль — 5 г, дистиллированная вода - 750 мл), кусочки внутренних органов — 30%-м водным раствором глицерина или 10%-м раствором NaCl. При бактериологическом исследовании учитывают особенности возбудителя.
Выделение чистой культуры. Определение культурально-биохимических свойств. Посев производят на среды Эндо (или Левина), МПБ и МПА. По типу дыхания Е.coli - аэроб. Растет на всех обычных питательных средах. Оптимальная температура 37. 38°С, рН среды 7,0. 7,2. На МПА через 18. 20 ч вырастают влажные круглые колонии с ровными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост кишечной палочки проявляется равномерным помутнением с образованием осадка. Некоторые штаммы Е.coli обладают гемолитическими свойствами. Для дифференциации Е.coli от других представителей семейства Enterobacteriaceae определяют ее биохимические свойства. На среде Эндо Е. coli образует три типа колоний:
1) малиновые с металлическим блеском;
2) малиновые с розовым блеском;
На среде Левина дает рост в виде колоний темнофиолетового цвета. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа (некоторые лактозонегативные варианты не сбраживают лактозу, сбраживает маннит, дульцит, арабинозу). Обесцвечивает метиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Реакция с метилротом положительная, проба Фогеса - Проскауэра - отрицательная.
Две последние реакции ставят с двухсуточными культурами на специальной среде Кларка следующего состава: пептон - 5 г, глюкоза - 5 г, К2НРО4 - 5 г, дистиллированная вода - 1000 мл. Среду стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 50 кПа в течение 15 мин. В одну пробирку с культурой после инкубирования в данной среде пипеткой добавляют 5 капель индикатора метилрота (метилрот - 0,01 мл, 96%-й спирт-ректификат - 30 мл, дистиллированная вода - 20 мл), после чего пробирки встряхивают. Розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое окрашивание - как отрицательный, что связано с изменением рН культуры вследствие ферментации глюкозы. В другую пробирку с культурой в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-го раствора КОН и 0,5 мл 6%-го спиртового раствора α-нафтола. Учет производят через 3. 5 мин. При положительном результате появляется розовое окрашивание вследствие реакции индикатора и образовавшегося в среде ацетилметилкарбинола при
расщеплении глюкозы. При отрицательном результате – желтое окрашивание. На средах Козера (жидкая) и Симмонса (агаровая с индикатором бромтимолблау) Е.coli не растет, так как не усваивает цитратно-аммонийные соли. Среда Козера синтетическая бесцветная, состоит из кислого фосфата натрий-аммония (NaNH4HPO4 • 4Н2О) — 1,5 г, однозамещенного фосфата калия (КН2РО4) — 1 г, сульфата магния (MgSO4 • Н2О) — 0,2 г, цитрата натрия (№зС6Н5О7 • 2Н2О) — 3 г, дистиллированной воды — 1000 мл. Раствор этой смеси пропускают через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, стерилизуют при 120°С в течение 15. 20 мин.
Помутнение среды после двухсуточного культивирования в термостате указывает на рост бактерий; при отсутствии роста бактерий среда остается без изменений. На среде Симмонса цитрато-аммонийнопозитивные бактерии растут с изменением цвета среды в ярко-синий. Микроорганизмы, не усваивающие цитратные и аммонийные соли, на среде Симмонса не растут: цвет ее не изменяется.
Основываясь на морфологических и культурально-биохимических свойствах, проводят межродовую дифференциацию. Но биологические свойства бактерий разных штаммов одного и того же вида могут быть неодинаковыми, что объясняется их различной вирулентностью и антигенной структурой, установление которых входит в комплекс микробиологических диагностических исследований. Выделенную чистую культуру типируют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.
Антигенная структура. Клетка кишечной палочки имеет три типа антигенов - О (соматический), К (оболочечный, капсульный) и Н (жгутиковый). О-антиген - термостабильный, расположен в клеточной стенке, состоит из липидо-полисахаридо-протеинового комплекса: липид определяет токсичность (эндотоксин), полисахарид – серологическую специфичность, протеин - носитель антигенного свойства. К-антигены - поверхностные, оболочечные; это кислые полисахариды, редко протеины. По своим свойствам их подразделяют на три типа: В, L, А. Тип В - термолабильный: инактивируется при 100°С в течение 1ч. Тип L - термолабильный: инактивируется при 60°С в течение 1 ч. Тип А - термостабильный, имеется у слизистых капсулообразующих штаммов: разрушается при 120°С в течение 2,5 ч. Н-антиген — белковой природы, термолабильный, представлен несколькими десятками серологических разновидностей. Антигенное строение принято выражать формулой – за буквенным обозначением каждого антигена следуют арабские цифры, отделенные двоеточием, например 0111 : В4 : Н2 или 055 : В5 : НЮ. Цифры обозначают порядковый номер антигена в диагностической антигенной схеме, созданной Кауффманом с сотр. Антигеном каждого типа гипериммунизируют кролика и получают специфические агглютинирующие сыворотки для диагностических целей. Биологическая промышленность выпускает сыворотки к О-антигенам, поэтому в лабораториях проводят
серологическую типизацию серогрупп кишечной палочки. Наиболее частыми возбудителями колибактериоза служат бактерии серогрупп 078, 086, 015, 08, 09, 0119, 0137, 0115, 041, 0141, 0149 и др.
Патогенность (биопроба). В лабораторных условиях определяют внутрибрюшинным заражением белых мышей. В большинстве случаев Е. coli, выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекцией животных, патогенны для мышей. Культуры Е coli, выделенные от здоровых животных, обычно непатогенны. Патогенность для белых мышей зависит от вирулентности штамма, дозы вводимых бактерий, массы (возраста) мышей, метода заражения и индивидуальной иммунологической реактивности, условий их содержания и кормления. Белые крысы мало чувствительны к Е coli, щенки, котята в 2. 3-месячном возрасте восприимчивы при оральном заражении. Для биопробы можно использовать куриные эмбрионы, гибель которых наступает через 24. 48 ч после заражения единичными бактериями Е. coli.
Одним из важных факторов вирулентности кишечной палочки является ее способность продуцировать токсины двух типов: термолабильный экзотоксин и термостабильный эндотоксин (поли-сахаридо-липидо-протеиновый комплекс). Некоторые штаммы Е.coli продуцируют антибиотические вещества - колицины, подавляющие рост отдельных штаммов кишечной палочки и не действующие на бактерии других видов. Колицины термостабильны. Могут продуцироваться как патогенными, так и непатогенными штаммами.
Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагностики. Люминесцентно-серологический метод используют как ориентировочный для определения патогенных серотипов Е. coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот метод позволяет за короткий срок получить предварительные результаты.
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации и реакция нейтрализации - ускоренные методы, позволяющие обнаружить в фекалиях больных животных возбудителя и установить его концентрацию.
Биопрепараты. Вакцина поливалентная гидроксидалюминиевая формолтиомерсаловая против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, вакцина поливалентная против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей; колипротектан ВИЭВ; сыворотка поливалентная против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных; сыворотки О-коли агглютинирующие; колиадгезин-тест: антиадгезивные коли-сыворотки К 88, К 99, 987 Р, А 20, F 41.
Морфология (микроскопия). Из тканей органов готовят препараты-отпечатки и окрашивают их по Граму. Сальмонеллы — грамотрицательные палочки величиной 2. 4 мкм; споры и капсулы не образуют, располагаются одиночно, иногда попарно.
Материал для исследования. Для бактериологического диагноза направляют от абортировавших овцематок и кобыл плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, органы плода. В остальных случаях (при септической форме) посылают труп целиком либо трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лимфоузлы. Для прижизненной диагностики исследуют фекалии больных (редко прибегают к получению гемокультуры). Порядок бактериологического исследования материала от разных видов животных: все виды рода Salmonella обладают многими общими свойствами, поэтому предварительно при исследовании выделенной культуры проводят родовую дифференциацию, а затем - видовую (внутри рода).
Выделение чистой культуры. Определение культурально-биохимических свойств. Из патологического материала делают посевы на дифференциально-диагностические среды. Наиболее часто используют агар Эндо, среду Плоскирева или висмут-сульфит агар (модифицированная среда Вильсона - Блера); оптимальный рН среды 7,2. 7,4. На средах Эндо и Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний; на висмут-сульфит-агаре - черных колоний. При посевах из органов трупа используют МПБ и МПА в пробирках. В МПБ рост диффузный, на МПА сальмонеллы формируют гладкие бесцветные прозрачные колонии с ровными краями. Сальмонеллы ферментируют глюкозу, не сбраживают лактозу, сахарозу, не свертывают молоко, не редуцируют метиленовую синь в молоке. Не образуют индола. Отдельные виды образуют сероводород. Реакция с метил-ротом положительная, а Фогес - Проскауэра — отрицательная.
При дифференциации видов сальмонелл внутри рода используют среды Биттера и Штерна. В состав среды Биттера входят: рамноза — 5г, двухосновный фосфат натрия — 0,5г, сульфат аммония — 1г, цитрат натрия (трехосновный) — 2г, NaCl — 0,5г пептон—0,05г и дистиллированная вода— 1000 мл. Глицерин-фуксиновый бульон Штерна состоит из МПВ (100 мл) с насыщенным раствором основного фуксина (5. 6 капель), глицерина (1 мл) и 10 %-го водного раствора сульфита натрия (2 мл). Среды стерилизуют текучим паром 10. 15 мин. Положительный результат на средах Биттера и Штерна проявляется покраснением; при отрицательном результате — желтое окрашивание.
Серологическую типизацию выделенной культуры проводят с культурой, выросшей на скошенном агаре с конденсатом. Применяют пластинчатый метод РА. У сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген. Поскольку по О-антигену, общему для нескольких видов сальмонелл, последние подразделяют на группы (обозначенные заглавными буквами латинского алфавита), то вначале исследуемую культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытание той же культуры с монорецепторными О-сыворотками тех рецепторов, которые входят в данную группу. Кроме того, эти культуры еще испытывают с монорецепторными Н-сыворотками. Если культура типична по биохимическим свойствам, но не агглютинирует с О- и Н-сыворотками, следует испытать ее отношение к сальмонеллезному бактериофагу, чувствительность к которому свидетельствует о принадлежности к роду сальмонелл.
Возбудитель салъмонеллеза телят (S. enteritidis) открыт Гертнером в 1888 г. Реже сальмонеллез телят может быть обусловлен S.typhimurium, по антигенной структуре входящего в группу В. Этот микроб часто вызывает сальмонеллез у водоплавающей птицы, а варианты S.enteritidis dublin, rostock - заболевание у человека в виде гастроэнтерита вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенному строению S.enteritidis (и варианты) относятся к группе D. В эту же группу входит и возбудитель пуллороза (тифа кур) S.Pullorum, gallinarum. Пуллороз протекает остро, септически, с большой смертностью (до 100 %). В лабораторию направляют свежий труп. Взрослая птица болеет бессимптомно, хронически. Для выявления таких курбактерионосителей обследуют взрослую птицу в условиях хозяйства серологическим методом — кровяно-капельной РА с пуллорным антигеном.
Возбудители сальмонеллеза поросят (S. lyphisuis или S. choleraesuis) помимо заболевания у свиней могут вызвать пищевые токсикоинфекции у людей. Данная группа сальмонелл патогенна для белых мышей. По антигенной структуре принадлежит к группе С. Возбудителем сальмонеллеза у свиней может быть S.typhimurium. По О-антигену относят к группе В.
Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл (S. abortus eqvi) открыт в 1893г. Сбраживает маннит, глюкозу, арабинозу, дульцит; среду Штерна не изменяет. По О-антигену входит в группу В. Для бактериологической диагностики посылают абортированный плод от больного животного, остальное поголовье лошадей обследуют серологически (РА), фекалии исследуют для выявления бактерионосителей. Показателем развития инфекционного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1:400.
Лабораторный диагноз на сальмонеллез разных видов животных ставят на основании результатов бактериологического исследования патологического материала с обязательным изучением у выделенных бактерий морфологических, культурально-биохимических и антигенных свойств.
Биопрепараты. Концентрированная формолквасцовая вакцина против сальмонеллеза телят; вакцина против сальмонеллеза поросят. Готовят из трех штаммов в следующем соотношении: S. choleraesuis —50 %, S.typhimurium -25% S.dublin - 25%. Активность вакцины проверяют на голубях; ассоциированную (поливалентную) вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят готовят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четырех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины проверяют на голубях и белых мышах; формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и сальмонеллеза пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет собой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмокалиевые квасцы и хлорид кальция; сухую живую вакцину против сальмонеллеза свиней из штамма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S.choleraesuis ТС-177, зависимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках; вакцина против Сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S.dublin № 6; вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы; вакцина против сальмонеллеза свиней из супрессорного ревертанта; вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против сальмонеллеза овец; поливалентная антитоксическая сыворотка против сальмонеллеза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, состоящим из четырех серотипов сальмонелл: S.dublin, S.typhimurium, S. abortus ovis, S. сholeraesuis.
Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность и активность. Бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоза телят и бактериофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, выделенных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных. Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 109/мл). Применяют для серологической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.
Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10 %-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией S.gallinanim-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.
Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представляет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формалином и окрашенных кристаллвиолетом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц.
Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формапинизированными антигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом аммония глобулины и проводят люминесцентное мечение очищенных глобулинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыворотку.
Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для экспресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмонелл, выделяемых от животных, из продуктов животного происхождения и объектов внешней среды.
Читайте также: