Лабораторная диагностика при сальмонеллезе ветеринария

Обновлено: 19.04.2024

В основу классификации сальмонелл положена их антигенная структура, установленная Кауфманом и Уайтом (1940), по которой определяют группу и серотип возбудителя. Антигены сальмонелл представлены соматическими 0-антигенами, расположенными на поверхности клетки, жгутиковыми Н-антигенами и поверхностны­ми К-антигенами. Для серологической дифференциации многочисленных вариантов сальмонелл используют реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сыворотками. Клинически выраженную болезнь у животных вызыва­ют сравнительно немногие серовары сальмонелл.

Устойчивость—в почве, навозе сальмонеллы сохраняются 9—10 мес., в питьевой воде 10—120 дней, в комнатной пыли — 8—18 мес. Переносят заморажи­вание более 4—5 мес, при нагревании до 70—75 С погибают за 15—20 мин; 20 %-ная взвесь свежегашеной извести, 3 %-ный раствор едкого натра, 2 %-ный раствор формальдегида, хлорная известь, содержащая 2% активного хлора, надежно обезза­раживают помещения от сальмонелл при экспозиции не менее 1 ч.

Засол и копчение не обеспечивают обеззараживание мяса; проваркой мяса в кус­ках весом 1 кг в течение 3 ч достигается надежное обеззараживание.

Эпизоотологические данные. Сальмонеллы патогенны для животных многих видов, в том числе и птиц, но клинически выражен­ную болезнь вызывают отдельные серологические варианты, адап­тировавшиеся к конкретным видам. В неблагополучном по сальмонеллезу хозяйстве заболевает только часть молодняка. Большинст­во же инфицированных молодых и взрослых животных переболевают бессимптомно и остаются длительное время сальмонеллоносителями.

Источник возбудителя инфекции — больные и переболевшие животные, в том числе и грызуны, которые выделяют его в боль­шом количестве с фекалиями, мочой, а также и молоком.

Больные и переболевшие животные своими выделениями загряз­няют окружающие предметы, корма, воду и т. д., которые стано­вятся факторами передачи возбудителя. Заражение происходит главным образом алиментарным путем, реже — аэрогенно. Возмож­но внутриутробное заражение, вследствие чего животные рождают­ся больными и часто погибают в первые дни жизни. Переносчика­ми сальмонелл могут быть грызуны (мыши, крысы), мухи, тараканы.

К сальмонеллезу восприимчивы телята с 10 дней до 2—3-месяч-иого возраста, поросята с первых дней жизни до 4 мес, ягнята в первые дни жизни (реже .в более старшем возрасте), жеребята в первые 8—10 дней после рождения и реже — до 3 мес, цыплята до 20-дневного возраста, а также 1—2-месячные щенки серебристо-черных лисиц, песцов и нутрий.

Эпизоотическое значение различных видов сальмонелл неодина­ково. Сальмонеллы, адаптированные к конкретным видам живо­тных (S. dablin — к крупному рогатому скоту, S. cholera suis и S; typhi suis—K свиньям, S. abortus equi—K лошадям, S. abortus ovis — к овцам, S. enteritidis — к уткам, S. gallinarum — pullorum — к курам, S. typhimurium — ко всем видам животных), вызывают первичные сальмонеллезы, тогда как неадаптированные сальмонеллы обусловливают возникновение так называемых вторичных сальмонеллезов. Хотя адаптированные сальмонеллы и имеют сравнительно высокую вирулентность среди животных соответствующего вида, однако характер эпизоотической вспышки и в таком случае находится в большой зависимости от групповой устойчивости животных.

Кроме того, в возникновении сальмонеллеза среди молодняка, наряду с вирулентностью и количеством (дозой) возбудителя, cyщественное значение имеет действие различных неблагоприятных факторов внешней среды, отрицательно влияющих на резистентность организма животных (скученное содержание, антисанитарные условия, неудовлетворительное кормление, параметры микрокли­мата, переохлаждение, перегревание). Эти факторы выступают не;

только в роли предрасполагающих к заболеванию, они влияют на интенсивность и тяжесть течения сальмонеллеза.

У кобыл, овцематок и реже у коров, инфицированных сальмонеллами определенных серовариантов, наблюдают аборты. Аборти­ровавшие животные остаются сальмонеллоносителями и являются опасными как источники возбудителя.

Из лабораторных животных восприимчивы белые мыши, в мень­шей степени — морские свинки и кролики. Патогенез. Сальмонеллы, попадая с кормом водой, размножа­ются в тонком кишечнике, заселяют толстый, проникают в фолли­кулы, и пейеровые бляшки, из которых попадают в кровь и зано­сятся во все органы и ткани. В этот период микроб размножается в крови и органах (септицемия), многие из них разрушаются с осво­бождением эндотоксина. В местах размножения развивается воспа­ление (слизистая кишечника, желчный пузырь, печень), а эндоток­син обусловливает экссудативные процессы и диапедез эритроцитов с последующим появлением кровоизлияний на слизистых и серо­зных оболочках, очаговые некрозы клеток печени, селезенки и по­чек. Возможны поражения легких, суставов, головного мозга, мат­ки и плода.В некоторых случаях с момента заражения или после затухания септицемии процесс ограничивается воспалением слизистой оболочки и лимфатических фолликулов кишечника с образованием изъяз­влений и некроза (хронический сальмонеллез). Гибель животного наступает от обезвоживания, многочисленных кровоизлияний, ин­токсикации и сепсиса. У переболевших животных возбудитель может локализоваться в желчном пузыре, мезентериальных лимфоузлах и печени, откуда он попадает в просвет кишечника и выделяется во внешнюю среду. У многих клинически выздоровевших животных, вследствие посто­янного раздражения слизистой оболочки кишечника, часто отмеча­ют расстройство пищеварения.

Течение и симптомы. Сальмонеллез у молодняка протекает остро, подостро, хронически и атипично (у телят). Инкубационный период колеблется от 1—3 до 7 сут., а его продолжительность зави­сит от резистентности организма, вирулентности и дозы возбуди­теля, а также способа заражения и условий, в которых находится восприимчивое животное.

При остром течении у телят, поросят, ягнят и жеребят наблюдается вялость, температура тела повышается на 1—2 °С. За­болевшие больше лежат, дыхание учащенное. Аппетит изменчив, появляется жажда. В день повышения температуры тела, как пра­вило, отмечают диарею (понос). Фекалии становятся жидкими, серо-желтоватого цвета с примесью слизи, пузырьков газа, неред­ко — крови. В дальнейшем диарея усиливается, и жидкие массы вытекают из ануса непроизвольно. При тяжелом течении поража­ются почки: моча становится мутной, иногда с примесью эритроци­тов, мочеиспускание частое, болезненное. Наблюдаются артриты, чаще поражаются запястные и заплюсневые суставы (рис. 33).

У поросят в дополнение к указанным признакам развивается конъюнктивит с выделением экссудата, который, засыхая в виде желто-грязных корочек, склеивает веки. На коже области живота, пахов, кончиков ушных раковин появляются очаге от темно-синего до фиолетового цвета. У жеребят, заразившихся в период внутри­утробного развития, клинические признаки острого сальмонеллеза проявляются сразу после рождения.

Подострое течение характеризуется менее выраженными симптомами, с появлением признаков пневмонии (истечения из но­совых ходов, кашель, хрипы в легких, лихорадка перемежающегося типа), При хроническом сальмонеллезе, который чаще развивается после острой или подострой стадии, наряду с упорными диареями начинают преобладать признаки воспаления легких. Больные-хроники резко отстают в росте, упитанность у них снижа­ется; поражаются запястные, коленные, заплюсневые суставы. У поросят, кроме того, кожа утрачивает эластичность, на ней появля­ется струпьевидная экзема, кожа ушных раковин темно-фиолетовая с очагами некроза. Иногда у телят старших возрастных групп (2—4 мес.) наблюда­ют легкое переболевание сальмонеллезом (атипичиая, или абортив­ная, форма). У них уменьшается аппетит, незначительно повыша­ется температура тела. У отдельных появляется понос, и через 3—6 дней животные выздоравливают. У пушных зверей, заразившихся сальмонеллами, повышается температура тела, отмечают понос и нередко рвоту. При остром течении больные погибают на 2—3-й день, при подостром—на 7—14-й день. У самок, заболевших в период гона или беременно­сти, наблюдают бесплодие (14—20%), аборты (до 15%) и большой падеж (до 20%) молодняка в первые 10 дней после щенения.

Патологоанатомические изменения. Трупы животных, павших от острого сальмонеллеза, как правило, нормальной упитанности. При вскрытии обнаруживают многочисленные точечные и полосчатые кровоизлияния под серозными оболочками кишечника, пери­карда и. эпикарда, гиперплазию лимфатических узлов и селезенки, дегенеративные изменения в печени и почках, а также катаральное или геморрагическое воспаление слизистых оболочек желудка и ки­шечника. Лимфатические узлы, особенно мезентериальные пор­тальные и почечные, увеличены, гиперемированы, на разрезе соч­ные с очагами гиперемии. Селезенка значительно увеличена, края закруглены, капсула напряжена, под ней имеются мелкоточечные кровоизлияния. Печень полнокровна, незначительна увеличена, ок­рашена неравномерно; под серозной оболочкой печени иногда вид­ны кровоизлияния. Под капсулой и в корковом слое почек у неко­торых трупов обнаруживают кровоизлияния.

Слизистая оболочка желудка (сычуга у жвачных) отечная, гиперемирована, с кровоизлияниями. Слизистая оболочка тонкого ки­шечника гиперемирована, покрыта слизью, часто усеяна мелкото­чечными или полостчатыми кровоизлияниями. Аналогичные изме­нения находят и в толстом кишечнике.

При подостром и хроническом сальмонеллезе патологоанатомические изменения выражены более четко. В этих случаях труп, как правило, истощен, а поражения находят не только в желудочно-ки-шечном тракте, но и в легких. Участки легких уплотнены, бугри­стые, серо-красного или вишнево-красного цвета, на разрезе гной­но-некротические очаги; из бронхов при надавливании выделяется слизисто-гнойный экссудат. Средостенные и бронхиальные лимфа­тические узлы увеличены, на разрезе видны некротические очажки желтоватого цвета. Легочная плевра покрыта фибринозными плен­ками, которые распространяются и на костальную плевру. Сердеч­ная мышца дряблая, серо-глинистого цвета; под эпикардом и эндо­кардом точечные и пятнистые кровоизлияния.

При хроническом сальмонеллезе более выражены изменения в печени и толстом кишечнике. Печень у большинства трупов с жел­товатым оттенком, в паренхиме сероватые очаги дегенерации, Желчный пузырь переполнен густой желчью, иногда перемешанной с кровью, слизистая оболочка гиперемирована с полосчатыми кро­воизлияниями.

Слизистая оболочка толстого кишечника, особенно слепой кишки и илео-цекального клапана, воспалена с многочисленными некротическими участками. Некротизированная ткань покрывает сли­зистую оболочку в виде отрубьевидного налета, перемешанного со слизью. Солитарные фолликулы кишечника выступают над поверх­ностью слизистой оболочки, некротизированы и покрыты пленками фибрина. Под пленками фибрина видны язвы с плоскими или валикообразными краями (цв. табл. Vl-Б). Лимфатические узлы толсто­го кишечника увеличены, на разрезе сочные, в паренхиме имеются желтоватые очажки некроза. Наиболее выражены описанные изменения в толстом кишечнике у поросят, у которых, кроме того, нередко обнаруживают гнойный перитонит и перикардит, а также темно-фиолетовые пятна на коже ушных раковин, нижней стенки живота, промежности. При сальмонеллезе овец и кобыл, сопровождающемся абортами, патологоанатомические изменения обнаруживают у абортирован­ных плодов. Отмечают отечность плодных оболочек и подкожной i соединительной ткани, многочисленные точечные и полосчатые кровоизлияния под серозными оболочками, очажки некроза в пече­ни, размягчение паренхимы почек, увеличенные селезенку и лимфатические узлы. Диагноз. Ставят на основании анализа эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также результа­тов бактериологических и серологических исследований. Для бакте­риологического исследования в ветеринарную лабораторию направляют желчный пузырь с прилегающей частью ткани печени, мезентериальные лимфатические узлы, кровь из сердца, кусочки пораженного легкого размером 5х5 см, трубчатую кость, а от абортиро­ванных животных—плод, а также сыворотку крови абортировав­шей матки. Появление заболевания среди молодняка, чаще содержащегося скученно, с нарушениями, зооветеринарных правил, клинически проявляющийся диареей, повышением температуры тела, пневмо­ниями с характерной патологоанатомической картиной (кровоизлияния под серозными оболочками, некротические очаги в печени, селезенке и лимфоузлах, а также солитарных фолликулах толстого кишечника и др.), дает основание для подозрения на сальмонеллез. Окончательный диагноз устанавливают на основании результатов бактериологического исследования.

В ветеринарной лаборатории делают высевы из патологического материала с целью выделения чистой культуры, которые затем идентифицируют в реакции агглютинации до серологического варианта. Прижизненную диагностику осуществляют путем исследования сыворотки крови с антигенами из сальмонелл с целью обнаружения специфических агглютининов.

Дифференциальный диагноз. У телят исключают колибактериоз, рота- и коронавирусную и стрептококковую инфекции; у поросят — чуму, вирусный гастроэнтерит, стрептококкоз, дизентерию; у животных всех видов — неспецифические гастроэнтериты, пневмо­нии, аборты другой природы, а также пастереллез. Дифференциру­ют эти болезни от сальмонеллеза на основании бактериологиче­ских, вирусологических и серологических исследований.

Лечение. Больных животных изолируют в отдельное помещение, где им создают оптимальные условия содержания и организуют ди­етическое кормление. Лечение должно быть комплексным, направ­ленным на уничтожение возбудителя в организме, устранение интоксикации и на восстановление функции пищеварения и дыхания. Больным назначают голодную диету, а также антибиотики (кроме препаратов пенициллинового ряда), сульфаниламиды и нитрофураны. Антибактериальные средства применяют с таким расчетом, чтобы подавить размножение сальмонелл в крови и в кишечнике. Назначают препараты внутрь и в виде инъекций.

При сальмонеллезе молодняка в качестве специфических средств используют поливалентную антитоксическую сыворотку против паратифа и колибактериоза, а также бактериофаг. Антиток­сическую сыворотку вводят внутримышечно 2-З раза с интерва­лом 3-4 ч телятам, до 30-дневного возраста по 10—20 мл, старше 30 дней—по 20—30 мл на одну инъекцию; поросятам до 2 мес — 30—60 мл, старше 2 мес — 60—80 мл. Антитоксическую сыворотку можно давать больным телятам и поросятам перорально в дозе 30—50 мл. Бактериофаг выпаивают им по 30—50 мл не менее 3 раз с интервалом 3—4 ч.

Из антибактериальных средств рекомендуются комплексные неомициновый и полимиксиновый препараты. В состав неомицинового лечебного премикса входят (на 1 кг массы тела животного):

неомицин 10 тыс. ЕД, хлортетрациклин 20 мг, фуразолидон 7 мг, аскорбиновая кислота 5 мг; полимиксинового—полимиксин М сульфат 20 тыс. БД, хлортетрациклин 20 мг, фуразолидон 7 мг, ас­корбиновая кислота 5 мг. Нужное количество препарата готовят в виде смеси, в разовой дозе добавляют 100—150 мл кипяченой воды и эту смесь выпаивают телятам перед кормлением 2 раза в день (утром и вечером) в течение 6 сут.

Хороший лечебный эффект получен при применении гентамицина-сульфата, который, вводят внутримышечно по 0,08 г 2 раза в день в течение 5 сут, трибриссена (с молоком 2 раза в день по 7,5 мг в течение 5 дней), витабиомицина.

Из антибиотиков эффективны синтомицин, левомицетин, тетрациклины; из сульфаниламидов — норсульфазол, дисульфан, этазол, сульцимид, сульфадимезин, сульфидин; из нитрофуранов — фуразолидон, фурацин, фуразолин. Все эти препараты применяют в со­ответствии с наставлением, где указаны дозы, кратность и метод введения.

Иммунитет. У переболевшего сальмонеллезом молодняка формируется напряженный иммунитет длительностью до 8—9 мес. Но­ворожденные телята, поросята, ягнята при рождений не содержат в крови гамма-глобулинов (основных защитных белков); они получа­ют их с молозивом матери. Матки, в крови которых содержатся специфические к сальмонеллам антитела, через молозиво передают их новорожденным, обеспечивая создание колострального иммунитета длительностью до 25—35 дней. Поэтому для создания колост-рального иммунитета у новорожденных животных проводят вакци­нацию беременных маток, а затем вакцинируют молодняк.

В неблагополучных по сальмонеллезу хозяйствах коров вакци­нируют концентрированной формолквасцовой вакциной первый раз за 40 дней (доза 10 мл), второй — за 30 дней до ожидаемого отела (доза 15 мл). Телята, полученные от вакцинированных коров и по­лучившие молозиво, приобретают колостральный (пассивный) им­мунитет; но в 20—30-дневном возрасте их вакцинируют этой же ..вакциной двукратно с интервалом 7—10 дней (доза вакцины 1,5 для первой и 2 мл для второй инъекции). Телятам от невакциниро­ванных коров вакцину вводят подкожно в 1—2-дневном возрасте в дозе 1мл, затем в 5—7-дневном (2 мл) и в 2-месячном возрасте (доза 2 мл). Для вакцинации коров и телят используют также формолтиомерсаловую вакцину против колибактериоза и паратифа.

Ягнят прививают поливалентной формолтиомерсаловой вакциной внутримышечно двукратно с интервалом 7—10 дней. Овцематкам для профилактики абортов вакцину вводят внутримышечно перед первой случкой двукратно и затем ревакцинируют однократно; за 30—15 дней до окота.

Формолтиомерсаловую вакцину используют также для профилактики сальмонеллеза пушных зверей. Щенков серебристо-черных лисиц, песцов и нутрий вакцинируют с 30—45-дневного возраста, а взрослых — однократно перед гоном за 15—20 дней до покрытия. Профилактика и меры борьбы. Наряду с вакцинами строго соблюдают ветеринарно-санитарные и зоогигиенические правила подготовки маточного поголовья к отелу, опоросам, охотам, молозивного кормления и содержания новорожденных и молодняка более старшего возраста.

При появлении заболевания больных изолируют в отдельное по­мещение и лечат. Выздоровевших животных содержат обособленными группами, откармливают и сдают на убой. Клинически здо­ровых животных, подозреваемых в заражении, вакцинируют. По­мещения, предметы ухода дезинфицируют раствором хлорной изве­сти, содержащим 2% активного хлора, 2 %-ным раствором фор­мальдегида, горячим 4 %-ным раствором едкого натра, 3 %-ным раствором однохлористого йода, 20; %-ной взвесью свежегашеной извести.

Абортировавших по причине сальмонеллеза животных изолиру­ют и лечат (антитоксическая сыворотка, антибиотики, сульфаниламидные и нитрофурановые препараты); плоды утилизируют.


ДИАГНОСТИКА САЛЬМОНЕЛЛЕЗА У ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке "Файлы работы" в формате PDF

Актуальность обусловлена высокой заболеваемостью , антибиотикорезистентностью возбудителей, тяжестью течения локализованных форм и высокой летальностью при генерализованных формах. В Башкирии по статистики стали чаще болеть сальмонеллезом, у людей было зафиксировано 644 случая этой острой кишечной инфекции. В прошлом году таких случаев было на 33,4% меньше. Специалисты предупреждают: основной источник сальмонеллы – яйца, мясо и молоко.

Возбудители — бактерии рода Salmonella отнесены к семейству Enterobacteriaceae. Этот род состоит из 2017 серологических вариантов, объединенных по степени антигенного родства в 52 серогруппы, большинство из которых имеют самостоятельные названия [1].

Независимо от серологического варианта сальмонеллы представляют собой мелкие (1—4 х 0,5 мкм) палочки с закругленными концами, по Граму окрашиваются отрицательно, спор и капсул не образуют, подвижные (за исключением S gallinarum — pullorum).

Большинство сальмонелл растет на обычных питательных, средах с рН 7,2—7,6 при температуре 37°С. В жидкой среде (МПБ) они образуют интенсивное помутнение с обильным серо-белым слизистым осадком; на поверхности среды формируется нежная, разбивающаяся при встряхивании пленка [1].

Ферментативные свойства сальмонелл разнообразны, что зависит от серологического варианта [1]. Общие для них свойства - образование сероводорода, утилизация цитратов; они не разжижают желатин, не ферментируют лактозу.

Распространение болезни происходит алиментарным путем, попадая в организм, сальмонеллы поселяются в тонком кишечнике и выделяют токсин, способствующий потере воды через кишечник, нарушению тонуса сосудов и повреждению нервной системы. Болезнь развивается через 6 ‑ 72 часа после попадания сальмонелл в организм. Различают несколько клинических форм сальмонеллеза. [1]

1) гастроинтестинальная (локализованная), протекающая в гастритическом, гастроэнтеритическом, гастроэнтероколитическом и энтероколитическом вариантах;

2) генерализованная форма в виде тифоподобного и септического вариантов;

3) бактерионосительство: острое, хроническое и транзиторное;

4) субклиническая форма [1].

Симптомы сальмонеллёза: высокая температура (до 41-42 градусов) тела, при низкой температуре конечностей и ушей; лихорадка, вялость, снижение аппетита, болезненность в брюшной полости, вынужденная поза, учащение дыхания и сердцебиения, аритмия, развивается конъюнктивит. Начинается диарея, фекалии приобретают грязно-серый цвет, имеют зловонный запах, у птиц дополнительный симптом увеличение зоба и живота, летальность достигает 50-80%.[4]

Одним из главных факторов, затрудняющих профилактику, диагностику и лечение сальмонеллезной инфекции принято считать большую устойчивость и изменчивость сальмонелл во внешней среде, ее огромную адаптивную способность к неблагоприятным факторам. В литературе данные по поводу устойчивости сальмонелл весьма противоречивые, но они позволяют констатировать, что при высушивании погибает 99 % бактерий, остальные выживают. Низкие температуры сальмонеллы переносят хорошо и сохраняют жизнеспособность при температуре -76-100°С, размножаются при 5-47°С, оптимум роста составляет 35-37°С.

Большинство сальмонелл проявляют высокую терморезистентность и хорошо переносят присутствие высоких концентраций NaCl, солей висмута, магния. Необходимо учитывать, что наиболее эффективно и полно можно уничтожить сальмонелл во внешней среде, только применяя дезинфицирующие препараты. [3]

В условиях ветеринарных клиник и лабораторий сальмонеллез индицируют методами бактериологического и серологического исследований [2]. Используют микрокопирование мазков крови, окрашивают по Граму, обрабатывают сальмонеллезными люминесцирующими сыворотками и микроскопируют (рисунок 1).


Рисунок 1-Возбудитель Salmonella окрашена по Граму

Но более эффективным способом является реакция агглютинации. Агглютинины в крови больных животных появляются на 7—10-й сутки болезни. Наличие агглютинационных титров 1:100 и выше дает основание подозревать сальмонеллез.[2]

Диагноз сальмонеллёза считается подтверждённым в том случае если учтены все методы диагностики и анализы анамнеза и дефферинцированы другие диагнозы такие как: от колибактериоза и диплококковой инфекции; у поросят — от чумы, вирусного гастроэнтерита и дизентерии [1].

Список использованных источников.

1. Антонова, Т.В. Инфекционные болезни / Т.В. Антонова, М.М. Антонов, В.Б. Барановская, и др.. - М.: СПб: СпецЛит, 2004

3. Богомолов, Б. П. Инфекционные болезни / Б.П. Богомолов. - М.: Издательство МГУ, 2006

4.Роудер, Дж. Ветеринарная токсикология / Дж. Роудер. - М.: Аквариум, 2008.


Сальмонеллезы (лат., англ. – Salmonellosis ; паратиф) – большая группа зоонозных болезней преимущественно сельскохозяйственных животных и промысловых животных, характеризующихся у молодняка при остром течении лихорадкой, септицемией, токсикозом и диареей, а при подростковом и хроническом – пневмонией и артритами; у взрослых самок – абортами; у людей протекает в виде пищевых токсикоинфекций.

Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением диагноза лабораторными исследованиями.

Для исследования на наличие сальмонелл отбирают испражнения, рвотные массы, кровь, мочу. Исследуемый материал следует доставлять в лабораторию в возможно короткий срок, но не позднее 12 ч после отбора, испражнения (фекалии) — не позднее 3—4 ч. В случае невозможности доставки в установленные сроки материал посылают в консерванте или в транспортной среде. Такой материал до исследования хранят при 4—6°С не более 24 ч. При отборе проб необходимо исключить возможность контаминации их за счет смежных областей кожи, других органов, внешней среды и т. п.

Кровь для серологического исследования берут в количестве 5-10 мл.

Мочу собирают при естественном мочеиспускании в чистые пробирки. Мочу микроскопируют непосредственно в хозяйствах.

Взятые пробы помещают в ящик, опечатывают и направляют в лабораторию с нарочным (курьером).

В сопроводительном документе к пробам патологического материала указывают время гибели животного или время взятия проб при жизни.

Материал для исследования:

При жизни- кал, сыворотка крови

Посмертно - трупы мелких животных, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.

Методы окраски: простой метод, по Граму;

Микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно;

Спор не образуют;

Капсулу не образуют;

Подвижные (за исключением S . pullorum ).

Посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др. накопительные.

Особенности выделения возбудителя:

Оптимальная температура 37°С

Культуральные свойства: все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихам:

На МПА образуют прозрачные с голубоватым оттенком колонии диаметром 2-4 мм. У некоторых видов сальмонелл по краю колоний заметен выпуклый слизистый вал.

На агаре Эндо колонии бледно-розовые прозрачные

На агаре Плоскирева – бесцветные, непрозрачные

На среде Левина - прозрачные с фиолетовым оттенком.

Наиболее характерный рост отмечается на селективной для сальмонелл среде висмут-сульфит-агаре: образуют черные колонии с металлическим блеском.

В МПБ - слабое помутнение, на дне пробирки осадок серо-белого цвета, на поверхности среды в старых культурах иногда тонкая пленка или пристеночное кольцо.

Список использованных источников

Бессарабов Б. Ф. "Инфекционные болезни животных" [Текст] : Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений/ Б. Ф. Бессарабов - М. : КолосС, 2007.-78с.

Госманов Р.Г., Колычев Н.М. "Практикум по ветеринарной микробиологии и микологии" [Текст] : учеб. пособие/ Госманов Р.Г. – Спб.: Лань, 2014-221с.

Сидоров М.А, Скородумов Д.И, Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. – М.: Колос, 2007.

Сальмонеллезы — группа инфекционных бактериальных болезней, преимущественно мо­лодняка сельскохозяйственных животных, в том числе и птиц, промысло­вых и мелких домашних животных.

У животных сальмонеллезы могут проявляться в виде трех основных форм: первичные, вторичные и бактерионосительство.

Первичные сальмонеллезы при остром течении характеризуются лихо­радкой, явлениями септицемии, токсикоза и поражением кишечника, а при хроническом — воспалением легких. У взрослых животных (кобыл, овец и реже у коров) могут наблюдаться аборты.

Вторичные сальмонеллезы осложняют течение основного заболевания (чума свиней, пастереллез и др.), при этом характерные для сальмонеллезов признаки обычно слабо выражены или отсутствуют.

Бактерионосительство сальмонелл характеризуется тем, что животные, будучи внешне здоровыми, выделяют бактерии во внешнюю среду с фека­лиями и мочой. У таких животных возбудителя обнаруживают главным об­разом в печени (в желчи, в слизистой желчного пузыря, в лимфатических узлах печени), в мезентериальных лимфатических узлах, в содержимом сле­пой кишки.

У человека сальмонеллез протекает в виде пищевых токсикоинфекций (острых кишечных инфекций).

Возбудители сальмонеллезов относятся к роду Salmonella семейства Е nterobacteriaceae. В настоящее время все сальмонеллы разделяют на два вида. Вид S . bongori содержит менее 10 очень редких сероваров. Все ос­тальные 2500 сероваров выделены внутри вида S . choleraesuis , который по фенотипическим и генетическим критериям разделен на 6 подвидов: S . choleraesuis subsp . arizonae ; S . choleraesuis subsp . choleraesuis ; S . choleraesuis subsp . diarizonae ; S . choleraesuis subsp . houtenae ; S . choleraesuis subsp . indica и S . choleraesuis subsp . salamae . Все серовары внутри подвида choleraesuis имеют названия, тогда как в других подвидах серовары (за ис­ключением некоторых в подвидах salamae и houtenae) не имеют названий.

Диагностическим лабораториям рекомендовано для имеющих названия сероваров бактерий рода Salmonella использовать эти названия, а не имею­щие названий серовары обозначать с помощью антигенной формулы и ука­занием подвида.

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным свойствам.

Бактериологическое исследование

Материал для исследования. Для посмертной диагностики в лабораторию направляют свежий труп мел­ких животных, в том числе и птиц, целиком, от трупов крупных живот­ных — трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, почку, селезен­ку, брыжеечные лимфоузлы, пораженные участки легких, слепую кишку с содержимым; в случае аборта — свежий плод.

Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют фекалии, носовую слизь, истечения из родовых путей.

Для получения гемокультуры на 1-4-й день болезни (не позже, т.к. пе­риод бактериемии при сальмонеллезах короткий) от животных может быть взята кровь, а для серологического исследования по РА — сыворотка кро­ви. От птиц берут кровь для постановки кровекапельной реакции агглюти­нации или кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации для диаг­ностики пуллороза-тифа.

Микроскопическое исследование исходного материала. Изпоступившего материала готовят мазки, окрашивают по Граму. Саль­монеллы являются грамотрицательными, мелкими палочками с закруглен­ными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. Не образуют спор и капсул.

Выделение и идентификация культур сальмонелл. Сальмонеллы — факультативные анаэробы. Хемоорганотрофы; обла­дают и дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная тем­пература культивирования 37° С, рН среды 7,2-7,4, хорошо растут на обычных питательных средах.

Исследуемый материал высевают на обычные МПА и МПБ, на плот­ные селективные среды, а в ряде случаев (главным образом при исследова­нии фекалий и при получении гемокультуры) в среды накопления (см. табл. 12). Из селективных наиболее часто используют среды Плоскирева, Эндо, Левина, висмут-сульфит агар, а из сред накопления — Мюллера, Кауфма­на, Киллиана.

Характер роста сальмонелл на питательных средах. В МПБсальмонеллы дают рост в виде равномерного помутнения сре­ды, на МПА образуют небольшие, диаметром 2-4 мм, гладкие выпуклые прозрачные или серо-голубоватые колонии с ровными краями. Некото­рые серовары ( S . abortus equi , S . abortus ovis , S . typhisuis ) образуют более мелкие колонии диаметром около 1 мм. На среде Эндо колонии сальмо­нелл слегка розовые, прозрачные, на средах Плоскирева и Мак-Конки — бесцветные, но выглядят более плотными и мутноватыми, чем на МПА. На агаре Левина сальмонеллы растут в виде прозрачных колоний, иног­да с фиолетовым оттенком. На висмут-сульфит агаре почти все сальмо­неллы образуют черные колонии с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание участка среды под колонией в чер­ный цвет. Отдельные немногочисленные серовары составляют исключе­ние, и на висмут-сульфит агаре образуют светлые или светло-зеленова­тые колонии.

Морфология клеток сальмонелл в культуре. В мазках, приготовленных с питательных сред, сальмонеллы обнару­живают в виде грамотрицательных, мелких палочек с закругленными концами, от 1 до 4 мкм длиной и 0,5-0,8 мкм шириной. В мазках распо­лагаются одиночно, беспорядочно, иногда попарно. Не образуют спор и капсул. Обладают, как правило, выраженной подвижностью за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Некоторые серовары ( S . gallinarum pullorum ) всегда неподвижны, могут встречаться непод­вижные мутанты и среди других сероваров.

Идентификация сальмонелл по ферментативным признакам. Чистые культуры бактерий с характерными для сальмонелл культуральными свойствами с целью установления родовой принадлежности засева­ют в дифференциально-диагностические среды для определения фермента­тивных свойств. Критерии для родовой идентификации сальмонелл приве­дены в таблице 14.

К роду Salmonella относят бактерии: оксидазоотрицательные; катала-зоположительные; не образующие индол; дающие отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра (желтое окрашивание среды); положительную пробу с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет); способ­ные расти на среде Симмонса с цитратом; лизин- и орнитиндекарбоксилазо-положительные; образующие H2S; не сбраживающие лактозу, сахарозу; не расщепляющие мочевину; не разжижающие желатину. По аргининдегидрогеназе, способности расти в присутствии KCN и использованию малона-та сальмонеллы различаются. Как правило, сбраживаемые ими углеводы включают L-арабинозу, D-ксилозу, мальтозу, D-маннитол, D-маннозу, L-рамнозу, D-сорбитол, трегалозу и глюкозу.

Частота выявления позитивных реакций при изучении некоторых био­химических характеристик сальмонелл представлена в таблице 8.

Таблица 8 - Биохимические свойства рода Salmonella

Признаки % позитивных реакций
Ферментация глюкозы 100%
Образование газа на среде с глюкозой 91,9%
H2S 91,6%
Индол 1,1%
Арабиноза 89,2%
Сорбит 94,1%
Дульцит 86,5%
Маннит 99,7%
Рост на среде Симмонса 80,1%

На основании биохимических характеристик возможна не только родо­вая идентификация сальмонелл, но и определение их видовой и подвидовой принадлежности (таблица 9).

Наибольшее значение для ветеринарии имеют сальмонеллы подвидов choleraesuis и arizonae, объединяющие более 80% всех сальмонелл.

Таблица 9 -Дифференциация видов и подвидов бактерий рода

Salmonella , первоначальные источники их выделения

Подвиды вида S. choleraesuis

Примечания: Данные по подвиду Indica приведены по Bergeys Manual of

Determinative Bacteriology (1994).

Учитывая возможность отклонений отдельных из перечисленных при­знаков, следует отметить, что биохимическая идентификация сальмонелл является лишь первым этапом работы в этом направлении. Окончательную идентификацию выделенных штаммов осуществляют с учетом последую­щего изучения их антигенной структуры.

Серологическая идентификация сальмонелл. Сальмонеллы имеют сложное антигенное строение. Основными антигена­ми, имеющими значение для идентификации сальмонелл на уровне рода, опре деления их видовой, серогрупповой и серовариантной принадлежности, явля­ются соматический или О-антиген и жгутиковый или Н-антиген.

О-антиген расположен на поверхности бактериальной клетки ипред­ставляет собой термостабильный (не разрушается при кипячении в течение 2 часов) фосфолипидо-полисахаридный комплекс. Он не однороден исо­держит различные антигенные факторы (дидезоксигексозы, или иначе полиозиды) на концах полисахаридных цепей, что обуславливает специфич­ность О-антигена в серологических реакциях.

В соответствии с содержанием тех или иных О-антигенов сальмонеллы делят на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латин­ского алфавита. Отдельные антигенные факторы О-антигена обозначаются арабскими цифрами. Некоторые антигенные факторы О-антигена (далее про­сто О-антигены) называют главными О-антигенами, т.к. они встречаются только в одной из групп сальмонелл и именно они определяют групповую принадлежность бактерий. Другие О-антигены называют малыми, т.к. они встречаются в нескольких или даже многих группах сальмонелл и, следова­тельно, не могут определять их групповую принадлежность. В настоящее время выделено более 50 О-групп сальмонелл.

Одним из компонентов О-антигена является Vi-антиген — полимер N-ацетиламино-гексуроновой кислоты. Он обнаруживается у отдельных сероваров сальмонелл (S. dublin , S . paratyphi и др.) и некоторых других бакте­рий семейства энтеробактерий (Escherichia, Citrobacter). Vi-антиген затруд­няет серологическую идентификацию сальмонелл в РА, т.к. препятствует агглютинации бактерий в О-сыворотках.

Vi-антиген термолабилен. Он полностью разрушается при кипячении в течение 10 минут, частично инактивируется при нагревании при 60° С в течение часа и под действием фенола, чувствителен к действию соляной кислоты и этанола. Наиболее полное его развитие у соответствующих се-роваров происходит при температуре 37° С.

Антигенные факторы 1-й фазы обозначаются прописными буквами ла­тинского алфавита, антигены 2-й фазы - арабскими цифрами или прописны­ми буквами латинского алфавита с арабскими цифрами. Сальмонеллы, у которых Н-антиген представлен двумя фазами, называются двухфазными, а имеющие антигенные факторы 1-й фазы-монофазными.

Помимо перечисленных основных антигенов, у сальмонелл обнаруже­ны и другие антигены. Среди них — М-антиген (слизистый). Он выявляется у некоторых слизистых штаммов сальмонелл сероваров S . choleraesuis , S . dublin , S . anatum и др. М-антиген — кислый полисахарид. Он нераство­рим в воде, разрушается под действием кислоты и этанола, обладает сла­быми антигенными свойствами.

У ряда сероваров сальмонелл ( S . typhimurium , S . choleraesuis , S . stanley , S . anatum и др.) показано наличие белково-полисахаридного комплекса, отнесенного к К-антигену. Он устойчив к действию кислоты, этанола и обладает выраженными антигенными свойствами.

У сальмонелл имеется несколько видов антигенных вариаций, знание которых необходимо для получения однородных результатов идентифика­ции и правильной их интерпретации.

Н-О-вариации — переход из жгутиковой НО-формы в безжгутиковую О-форму. Встречается редко, но такой переход почти всегда необратим. Некоторые серовары сальмонелл ( S . gallinarum - pullorum ) существуют только в О-форме.

S-R-вариации — переход от гладких S-форм к шероховатым R-формам, сопровождающийся качественными и количественными изменениями О-антигена.

О-вариации — количественные изменения О-антигена. Наиболее часто изменениям подвергаются О-антигены 1,6, и 12. Этот тип вариаций антиге­нов связывают с фаговой конверсией сальмонелл.

V-W-вариации (или Vi-вариации) — количественные изменения Vi-антигена, влияющие на агглютинабельность культур, содержащих этот анти­ген (V-форма — О — инагглютинабельна из-за большого количества Vi-антигена, W-форма не содержит Vi-антиген и агглютинируется О-сыворотками, VW — форма является промежуточной, т.е. содержит Vi-антиген, но является О-агглютинабельной).

Н-вариации — качественные изменения жгутиковых антигенов, в ре­зультате чего отдельные антигенные комплексы, входящие в 1-ю и 2-ю фазы, могут присутствовать или отсутствовать.

При идентификации сальмонелл следует помнить и то, что они могут иметь общие антигены не только в пределах их отдельных О-групп, но и с представителями других родов семейства энтеробактерий (Escherichia , Shigella , Klebsiella , Citrobacter и др.). Несмотря на мозаичность и вариабельность антигенной структуры сальмонелл, при их серологической идентификации во внимание принимаются лишь два ос­новных антигена (О и Н). Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. В этой схеме, в соответствии со струк­турой О-антигенов, сальмонеллы распределены по О-группам с различным числом сероваров, расположенных в пределах этих О-групп в алфавитном порядке в соответствии с обозначением их Н-антигенов 1-й фазы. Факти­чески схема Кауфмана-Уайта представляет собой каталог антигенов саль­монелл, имеющих первостепенную диагностическую ценность. Краткая схема Кауфмана-Уайта, касающаяся антигенной структуры групп саль­монелл, в которые входят патогенные сероварианты бактерий, представ­лена в таблице 10.

Таблица 10 - Антигенная структура групп сальмонелл, в которые входят патогенные для животных сероварианты ( Bergey - s Manual of Determinative Bacteriology , 1994)

и незаразных болезней, д-р ветеринар.наук Гимранов В.В.

Ответственный за выпуск:

зав. кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, д-р биол. наук, профессор Андреева А.В.

г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,

зоогигиены и ветсанэкспертизы

Лабораторная работа №7

Лабораторная диагностика эшерихиозов и салъмонеллезов.

Цель занятия: Изучить морфологию, культурально-биохимические свойства возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза, а также лабораторную диагностику и средства специфической профилактики данных заболеваний.

Оборудование и материалы. Культуры Е. coli и сальмонелл на МПА, средах, Левина, Симмонса; пластины ПБДЭ с результатами тестирования ферментативной активности Е. coli; пробирки цветного ряда с культурой Е.coli (лактоза, глюкоза, индол, среда с мочевиной); наборы агглютинирующих антиадгезивных и О - коли-сывороток, биопрепараты; культуры сальмонелл на МПА, МПБ, агаре Эндо, агаре Плоскирева, среде Олькеницкого или Ресселя, ПБДЭ- пластинках; набор сальмонеллезных сывороток, О-комплесных и монорецепторных О- и Н- агглютинирующих для экспресс-идетификации сальмонелл в реакции агглютинации на стекле.

1 Общие сведения

Семейство энтеробактерий (Enterobacteriaceae) включает 12 родов бактерий, имеющих сходство по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам и отличающихся по биохимическим признакам. Наибольшее значение для ветеринарной практики имеют бактерии родов Escherichia и Salmonella, вызывающие у животных заболевания колибактериоз и сальмонеллез.

1.1 Возбудитель колибактериоза (эшерихиоза) - кишечная палочка Escherichai coli. Колибактериоз - остропротекающее инфекционное заболевание молодняка разных видов животных (включая птиц и пушных зверей). Заболевание характеризуется, как правило, диареей (профузным поносом), обезвоживанием, депрессией, нарастающей слабостью и летальным исходом. Колибактериоз протекает в трех формах: септической, энтеротоксемической и энтеритной. Последние две формы не сопровождаются сепсисом. Восприимчивы телята в первые часы и дни после рождения. Поросята заболевают как в период новорожденности, так и после отъема. Ягнята заболевают с первых дней после рождения до 5. 6-месячного возраста. Птицы поражаются в основном в первые 2. 3 мес жизни. Взрослые животные колибактериозом не болеют, но являются бактерионосителями патогенных Е. coli. Кишечная палочка может быть также возбудителем мастита и эндометрита.

Морфология. Микроскопически Е. coli - представляют собой короткие палочки с закругленными краями, грамотрицательные, длиной 1. 3 мкм и шириной 0,8 мкм, споры не образуют. В мазках расположение одиночное. Бактерии подвижны, перитрихи или неподвижны. Капсулу не образуют, за исключением отдельных штаммов серогрупп (08, 09, 0101).

Материал для исследования. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют патологический материал: отрезок кишечника, кусочек печени, селезенки. При вскрытии трупа в лаборатории помимо патматериала исследуют также кровь из сердца и головной мозг. Если в лабораторию не представляется возможным в кратчайший срок доставить материал, его консервируют: фекалии — раствором стерильного глицерина с NaCl (глицерин — 250 мл, поваренная соль — 5 г, дистиллированная вода - 750 мл), кусочки внутренних органов — 30%-м водным раствором глицерина или 10%-м раствором NaCl. При бактериологическом исследовании учитывают особенности возбудителя.

Выделение чистой культуры. Определение культурально-биохимических свойств. Посев производят на среды Эндо (или Левина), МПБ и МПА. По типу дыхания Е.coli - аэроб. Растет на всех обычных питательных средах. Оптимальная температура 37. 38°С, рН среды 7,0. 7,2. На МПА через 18. 20 ч вырастают влажные круглые колонии с ровными краями и гладкой поверхностью. В жидкой среде рост кишечной палочки проявляется равномерным помутнением с образованием осадка. Некоторые штаммы Е.coli обладают гемолитическими свойствами. Для дифференциации Е.coli от других представителей семейства Enterobacteriaceae определяют ее биохимические свойства. На среде Эндо Е. coli образует три типа колоний:

1) малиновые с металлическим блеском;

2) малиновые с розовым блеском;

На среде Левина дает рост в виде колоний темнофиолетового цвета. Глюкозу и лактозу сбраживает с образованием кислоты и газа (некоторые лактозонегативные варианты не сбраживают лактозу, сбраживает маннит, дульцит, арабинозу). Обесцвечивает метиленовую синь в молоке, молоко свертывает, образует индол. Реакция с метилротом положительная, проба Фогеса - Проскауэра - отрицательная.

Две последние реакции ставят с двухсуточными культурами на специальной среде Кларка следующего состава: пептон - 5 г, глюкоза - 5 г, К2НРО4 - 5 г, дистиллированная вода - 1000 мл. Среду стерилизуют текучим паром или автоклавируют при 50 кПа в течение 15 мин. В одну пробирку с культурой после инкубирования в данной среде пипеткой добавляют 5 капель индикатора метилрота (метилрот - 0,01 мл, 96%-й спирт-ректификат - 30 мл, дистиллированная вода - 20 мл), после чего пробирки встряхивают. Розово-красное окрашивание учитывают как положительный результат, желтое окрашивание - как отрицательный, что связано с изменением рН культуры вследствие ферментации глюкозы. В другую пробирку с культурой в среде Кларка добавляют 0,2 мл 40%-го раствора КОН и 0,5 мл 6%-го спиртового раствора α-нафтола. Учет производят через 3. 5 мин. При положительном результате появляется розовое окрашивание вследствие реакции индикатора и образовавшегося в среде ацетилметилкарбинола при

расщеплении глюкозы. При отрицательном результате – желтое окрашивание. На средах Козера (жидкая) и Симмонса (агаровая с индикатором бромтимолблау) Е.coli не растет, так как не усваивает цитратно-аммонийные соли. Среда Козера синтетическая бесцветная, состоит из кислого фосфата натрий-аммония (NaNH4HPO4 • 4Н2О) — 1,5 г, однозамещенного фосфата калия (КН2РО4) — 1 г, сульфата магния (MgSO4 • Н2О) — 0,2 г, цитрата натрия (№зС6Н5О7 • 2Н2О) — 3 г, дистиллированной воды — 1000 мл. Раствор этой смеси пропускают через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, стерилизуют при 120°С в течение 15. 20 мин.

Помутнение среды после двухсуточного культивирования в термостате указывает на рост бактерий; при отсутствии роста бактерий среда остается без изменений. На среде Симмонса цитрато-аммонийнопозитивные бактерии растут с изменением цвета среды в ярко-синий. Микроорганизмы, не усваивающие цитратные и аммонийные соли, на среде Симмонса не растут: цвет ее не изменяется.

Основываясь на морфологических и культурально-биохимических свойствах, проводят межродовую дифференциацию. Но биологические свойства бактерий разных штаммов одного и того же вида могут быть неодинаковыми, что объясняется их различной вирулентностью и антигенной структурой, установление которых входит в комплекс микробиологических диагностических исследований. Выделенную чистую культуру типируют в РА, используя типоспецифические агглютинирующие коли-сыворотки.

Антигенная структура. Клетка кишечной палочки имеет три типа антигенов - О (соматический), К (оболочечный, капсульный) и Н (жгутиковый). О-антиген - термостабильный, расположен в клеточной стенке, состоит из липидо-полисахаридо-протеинового комплекса: липид определяет токсичность (эндотоксин), полисахарид – серологическую специфичность, протеин - носитель антигенного свойства. К-антигены - поверхностные, оболочечные; это кислые полисахариды, редко протеины. По своим свойствам их подразделяют на три типа: В, L, А. Тип В - термолабильный: инактивируется при 100°С в течение 1ч. Тип L - термолабильный: инактивируется при 60°С в течение 1 ч. Тип А - термостабильный, имеется у слизистых капсулообразующих штаммов: разрушается при 120°С в течение 2,5 ч. Н-антиген — белковой природы, термолабильный, представлен несколькими десятками серологических разновидностей. Антигенное строение принято выражать формулой – за буквенным обозначением каждого антигена следуют арабские цифры, отделенные двоеточием, например 0111 : В4 : Н2 или 055 : В5 : НЮ. Цифры обозначают порядковый номер антигена в диагностической антигенной схеме, созданной Кауффманом с сотр. Антигеном каждого типа гипериммунизируют кролика и получают специфические агглютинирующие сыворотки для диагностических целей. Биологическая промышленность выпускает сыворотки к О-антигенам, поэтому в лабораториях проводят

серологическую типизацию серогрупп кишечной палочки. Наиболее частыми возбудителями колибактериоза служат бактерии серогрупп 078, 086, 015, 08, 09, 0119, 0137, 0115, 041, 0141, 0149 и др.

Патогенность (биопроба). В лабораторных условиях определяют внутрибрюшинным заражением белых мышей. В большинстве случаев Е. coli, выделенные из трупа или фекалий больных коли-инфекцией животных, патогенны для мышей. Культуры Е coli, выделенные от здоровых животных, обычно непатогенны. Патогенность для белых мышей зависит от вирулентности штамма, дозы вводимых бактерий, массы (возраста) мышей, метода заражения и индивидуальной иммунологической реактивности, условий их содержания и кормления. Белые крысы мало чувствительны к Е coli, щенки, котята в 2. 3-месячном возрасте восприимчивы при оральном заражении. Для биопробы можно использовать куриные эмбрионы, гибель которых наступает через 24. 48 ч после заражения единичными бактериями Е. coli.

Одним из важных факторов вирулентности кишечной палочки является ее способность продуцировать токсины двух типов: термолабильный экзотоксин и термостабильный эндотоксин (поли-сахаридо-липидо-протеиновый комплекс). Некоторые штаммы Е.coli продуцируют антибиотические вещества - колицины, подавляющие рост отдельных штаммов кишечной палочки и не действующие на бактерии других видов. Колицины термостабильны. Могут продуцироваться как патогенными, так и непатогенными штаммами.

Помимо общепринятого микробиологического исследования существуют также дополнительные методы диагностики. Люминесцентно-серологический метод используют как ориентировочный для определения патогенных серотипов Е. coli при массовых вспышках желудочно-кишечных заболеваний. Этот метод позволяет за короткий срок получить предварительные результаты.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации и реакция нейтрализации - ускоренные методы, позволяющие обнаружить в фекалиях больных животных возбудителя и установить его концентрацию.

Биопрепараты. Вакцина поливалентная гидроксидалюминиевая формолтиомерсаловая против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, вакцина поливалентная против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей; колипротектан ВИЭВ; сыворотка поливалентная против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных; сыворотки О-коли агглютинирующие; колиадгезин-тест: антиадгезивные коли-сыворотки К 88, К 99, 987 Р, А 20, F 41.

Морфология (микроскопия). Из тканей органов готовят препараты-отпечатки и окрашивают их по Граму. Сальмонеллы — грамотрицательные палочки величиной 2. 4 мкм; споры и капсулы не образуют, располагаются одиночно, иногда попарно.

Материал для исследования. Для бактериологического диагноза направляют от абортировавших овцематок и кобыл плод или плодовые оболочки, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей, желудок плода, органы плода. В остальных случаях (при септической форме) посылают труп целиком либо трубчатую кость, долю печени с желчным пузырем, селезенку, почку, брыжеечные лимфоузлы. Для прижизненной диагностики исследуют фекалии больных (редко прибегают к получению гемокультуры). Порядок бактериологического исследования материала от разных видов животных: все виды рода Salmonella обладают многими общими свойствами, поэтому предварительно при исследовании выделенной культуры проводят родовую дифференциацию, а затем - видовую (внутри рода).

Выделение чистой культуры. Определение культурально-биохимических свойств. Из патологического материала делают посевы на дифференциально-диагностические среды. Наиболее часто используют агар Эндо, среду Плоскирева или висмут-сульфит агар (модифицированная среда Вильсона - Блера); оптимальный рН среды 7,2. 7,4. На средах Эндо и Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний; на висмут-сульфит-агаре - черных колоний. При посевах из органов трупа используют МПБ и МПА в пробирках. В МПБ рост диффузный, на МПА сальмонеллы формируют гладкие бесцветные прозрачные колонии с ровными краями. Сальмонеллы ферментируют глюкозу, не сбраживают лактозу, сахарозу, не свертывают молоко, не редуцируют метиленовую синь в молоке. Не образуют индола. Отдельные виды образуют сероводород. Реакция с метил-ротом положительная, а Фогес - Проскауэра — отрицательная.

При дифференциации видов сальмонелл внутри рода используют среды Биттера и Штерна. В состав среды Биттера входят: рамноза — 5г, двухосновный фосфат натрия — 0,5г, сульфат аммония — 1г, цитрат натрия (трехосновный) — 2г, NaCl — 0,5г пептон—0,05г и дистиллированная вода— 1000 мл. Глицерин-фуксиновый бульон Штерна состоит из МПВ (100 мл) с насыщенным раствором основного фуксина (5. 6 капель), глицерина (1 мл) и 10 %-го водного раствора сульфита натрия (2 мл). Среды стерилизуют текучим паром 10. 15 мин. Положительный результат на средах Биттера и Штерна проявляется покраснением; при отрицательном результате — желтое окрашивание.

Серологическую типизацию выделенной культуры проводят с культурой, выросшей на скошенном агаре с конденсатом. Применяют пластинчатый метод РА. У сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген. Поскольку по О-антигену, общему для нескольких видов сальмонелл, последние подразделяют на группы (обозначенные заглавными буквами латинского алфавита), то вначале исследуемую культуру проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими сыворотками в РА на стекле. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытание той же культуры с монорецепторными О-сыворотками тех рецепторов, которые входят в данную группу. Кроме того, эти культуры еще испытывают с монорецепторными Н-сыворотками. Если культура типична по биохимическим свойствам, но не агглютинирует с О- и Н-сыворотками, следует испытать ее отношение к сальмонеллезному бактериофагу, чувствительность к которому свидетельствует о принадлежности к роду сальмонелл.

Возбудитель салъмонеллеза телят (S. enteritidis) открыт Гертнером в 1888 г. Реже сальмонеллез телят может быть обусловлен S.typhimurium, по антигенной структуре входящего в группу В. Этот микроб часто вызывает сальмонеллез у водоплавающей птицы, а варианты S.enteritidis dublin, rostock - заболевание у человека в виде гастроэнтерита вследствие пищевой токсикоинфекции. По антигенному строению S.enteritidis (и варианты) относятся к группе D. В эту же группу входит и возбудитель пуллороза (тифа кур) S.Pullorum, gallinarum. Пуллороз протекает остро, септически, с большой смертностью (до 100 %). В лабораторию направляют свежий труп. Взрослая птица болеет бессимптомно, хронически. Для выявления таких курбактерионосителей обследуют взрослую птицу в условиях хозяйства серологическим методом — кровяно-капельной РА с пуллорным антигеном.

Возбудители сальмонеллеза поросят (S. lyphisuis или S. choleraesuis) помимо заболевания у свиней могут вызвать пищевые токсикоинфекции у людей. Данная группа сальмонелл патогенна для белых мышей. По антигенной структуре принадлежит к группе С. Возбудителем сальмонеллеза у свиней может быть S.typhimurium. По О-антигену относят к группе В.

Возбудитель сальмонеллезного аборта кобыл (S. abortus eqvi) открыт в 1893г. Сбраживает маннит, глюкозу, арабинозу, дульцит; среду Штерна не изменяет. По О-антигену входит в группу В. Для бактериологической диагностики посылают абортированный плод от больного животного, остальное поголовье лошадей обследуют серологически (РА), фекалии исследуют для выявления бактерионосителей. Показателем развития инфекционного процесса у взрослых лошадей служит титр сыворотки в РА выше 1:400.

Лабораторный диагноз на сальмонеллез разных видов животных ставят на основании результатов бактериологического исследования патологического материала с обязательным изучением у выделенных бактерий морфологических, культурально-биохимических и антигенных свойств.

Биопрепараты. Концентрированная формолквасцовая вакцина против сальмонеллеза телят; вакцина против сальмонеллеза поросят. Готовят из трех штаммов в следующем соотношении: S. choleraesuis —50 %, S.typhimurium -25% S.dublin - 25%. Активность вакцины проверяют на голубях; ассоциированную (поливалентную) вакцину против сальмонеллеза, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят готовят из штамма S. choleraesuis, четырех штаммов P. multocida и четырех штаммов диплококка. Иммуногенные свойства вакцины проверяют на голубях и белых мышах; формолтиомерсаловая вакцина против колибактериоза и сальмонеллеза пушных зверей, птиц, телят и поросят представляет собой инактивированную формалином и тиомерсалом суспензию эшерихий и сальмонелл. В качестве адъюванта применяют алюмокалиевые квасцы и хлорид кальция; сухую живую вакцину против сальмонеллеза свиней из штамма ТС-177 готовят из аттенуированного штамма S.choleraesuis ТС-177, зависимого по тиамину, с пониженной вирулентностью для белых мышей и морских свинок. Вакцину проверяют на чистоту роста, безвредность на белых мышах и морских свинках; вакцина против Сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма S.dublin № 6; вакцина живая сухая против сальмонеллеза водоплавающей птицы; вакцина против сальмонеллеза свиней из супрессорного ревертанта; вакцина формолтиомерсаловая поливалентная против сальмонеллеза овец; поливалентная антитоксическая сыворотка против сальмонеллеза телят, поросят, ягнят, овец и птиц. Получают из крови волов-продуцентов, иммунизированных поливалентным антигеном, состоящим из четырех серотипов сальмонелл: S.dublin, S.typhimurium, S. abortus ovis, S. сholeraesuis.

Сыворотку проверяют на стерильность, безвредность и активность. Бактериофаг против сальмонеллеза и колибактериоза телят и бактериофаг против пуллороза (тифа птиц) готовят из фагов, выделенных от переболевших сальмонеллезом или колибактериозом животных. Сальмонеллезный антиген для серологической диагностики представляет собой гомогенную инактивированную суспензию сальмонелл (концентрация клеток 109/мл). Применяют для серологической диагностики сальмонеллезов в пробирочной РА.

Пуллорозный эритроцитарный антиген представляет собой 10 %-ю суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией S.gallinanim-pullorum. Применяют для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц реакцией непрямой гемагглютинации на стекле с каплей крови.

Цветной антиген для диагностики пуллороза птиц представляет собой гомогенную суспензию сальмонелл, убитых формалином и окрашенных кристаллвиолетом. Применяют в кровекапельной реакции агглютинации на стекле для прижизненной диагностики сальмонеллеза птиц.

Флуоресцирующие сальмонеллезы О-сыворотки получают из крови кроликов, иммунизированных формапинизированными антигенами. Сыворотки адсорбируют, осаждают сульфатом аммония глобулины и проводят люминесцентное мечение очищенных глобулинов флуоресцеинизотиоционатом. Выпускают сыворотки к сальмонеллам 5 серогрупп и комплексную сыворотку.

Наборы сывороток сальмонеллезных О-комплексных и моно-рецепторных О- и Н-агглютинирующих предназначены для экспресс-диагностики в РА на предметном стекле 33 групп сальмонелл, выделяемых от животных, из продуктов животного происхождения и объектов внешней среды.

Читайте также: