Лабораторная диагностика всех нематодозов

Обновлено: 23.04.2024

11 случаев церебральных нематодозов наблюдались в течение 2014–2017 гг. Во всех случаях нематодозов отмечались специфические радиологические симптомы туннеля и визуализации гельминта; в 9 из 11 случаев отмечен ранее не описываемый симптом «клубка в разрез

Церебральные гельминтозы могут быть представлены как цестодами, так и нематодами. У детей за последние годы церебральные гельминтозы диагностируется все чаще, и не только в развивающихся странах [1–4].

Церебральная симптоматика гельминтозов различна, зависит от расположения гельминта (в паренхиме мозга, субарахноидальном пространстве, желудочковой системе) и характера и распространенности травматической или воспалительной иммунной реакции (при гибели паразита).

Из нейровизуализационных симптомов нематод абсолютными диагностическими критериями являются симптомы:

Ниже приводятся критерии валидности параклинической диагностики церебральных гельминтозов, правда, для плоских червей (в данном случае это пристрастие автора к определенному роду паразитов), но это положение справедливо для всего семейства гельминтов (точно так же, как принципы параклинической диагностики справедливы для любой инфекции — вирусной, бактериальной, протозойной и т. д.).

Диагностические критерии и их валидность при нейроцистицеркозе (плоские черви), предложенные Del Brutto [7, 8].

Абсолютные критерии:

А. Гистологическая демонстрация паразита в мозге.
Б. Наличие кисты со сколексом при нейровизуализации.
В. Визуализация паразита при офтальмоскопическом исследовании.

Большие критерии:

А. Наличие высокоподозрительного на паразитарный генез очага поражения мозга при нейровизуализации.
Б. Позитивный серологический анализ (иммуноблот) на антипаразитарные антитела.
В. Разрешение внутричерепного кистозного образования после лечения альбендазолом или празиквантелом.

Малые критерии:

А. Наличие подозрительного на паразитарный генез очага поражения мозга при нейровизуализации.
Б. Наличие клинической симптоматики, подозрительной на цистицеркоз.
В. Позитивный анализ ликвора (ELISA) на паразитарный антиген или антипаразитарные антитела.
Г. Наличие цистицерка вне нервной системы.

Эпидемиологические критерии:

А. Проживание в эндемичном районе.
Б. Частое посещение эндемичного района.
В. Наличие домашнего контакта с паразитарной инфекцией.

Степени диагностической валидности (достоверности) критериев:

А. Наличие одного абсолютного критерия.
Б. Наличие двух больших и одного эпидемиологического критерия.

А. Наличие одного большого и двух малых критериев.
Б. Наличие одного большого, одного малого и эпидемиологического критерия.
В. Наличие трех малых и одного эпидемиологического критерия.

Анализируя приводимые диагностические критерии, несложно сделать вывод, что нейровизуализационное обнаружение характерного для гельминтов симптома является абсолютным критерием для достоверного диагноза и прочих критериев уже не требуется.

Серологическая диагностика гельминтоза осуществляется только методами иммуноблота и ELISA. Чувствительность данных методик достаточно низкая — не более 50% (о банальном иммуноферментном методе речь вообще не идет) [2, 7–10]. Высокую чувствительность и специфичность показал метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) к паразитарным антигенам в ликворе, но в РФ отсутствует ПЦР на гельминты и антигеном служит митохондриальная ДНК только погибшего паразита, но не живого.

Материал и методы исследования

Методы исследования: основной — МРТ (Тoshiba Aquilon 1,5 Т, Mаgnetom Vision 1,5 Т, GENSOV 1,5 Т); дополнительные — ЭЭГ; стандартный анализ ликвора; рентгенография легких; УЗИ внутренних органов; исследование прозрачных сред глаза и глазного дна; общий анализ крови; исследования кала на яйца глист.

Полученные результаты

Пациент Д., 9 лет, находилась в ДКБ № 9 с 27.07.16 по 03.09.16.

Анамнез жизни — без особенностей.

Проводится дифференциальный диагноз между парциальными эпилептическими приступами и преходящими нарушениями мозгового кровообращения.

При поступлении: в соматическом и неврологическом статусе патологии не выявлено. Общий анализ крови, мочи, биохимия крови — патологии не выявляют. Анализ кала на простейшие, яйца глист — без патологии.

Осмотр окулиста — без патологии.

С момента установления (по данным клиники и МРТ) диагноза ОНМК пациенту проводится лечение в соответствии со стандартами медицинского обязательного страхования, в том числе с профилактикой тромбообразования антикоагулянтами.

А что надо делать в действительности? Проводить на фоне парентерального введения кортикостероидов (для профилактики и коррекции воспаления, которое неизбежно возникнет при гибели паразита) антипаразитарную терапию — альбендазол парентерально.

Симптом туннеля (специфический симптом!) вдоль стенки левого бокового желудочка от лобной доли в затылочную трактовки не получает. Очаг корково-подкоркового отека с геморрагией в левой гемисфере, соответствующий некротизирующему васкулиту [11, 12], — ситуация, давно известная при гельминтозах [6], трактовки не получает. На представленных снимках гельминт уже не визуализируется (погиб), но имеется текущее воспаление (в теменной, затылочной областях мозга), на которые можно и должно воздействовать — кортикостероиды парентерально.

Анализ на наиболее частые мутации митохондриальной ДНК (№ 11) при тромбофилиях патологии не выявил.

Через полгода пациент поступает снова для контроля состояния и реабилитации. В статусе — левосторонний грубый гемипарез, сила в руке — 3 балла, в ноге — 3 балла, спастический тонус в левых конечностях, поза Вернике–Манна, ходьба с костылем.

На МРТ головного мозга картина очагов локальной атрофии в лобной, теменной и затылочной долях слева, сохраняется линейная атрофия на месте хода нематоды из лобной доли в затылочную (туннель) (рис. 4, нижний ряд). Имевшееся сегментарное сужение проксимальной части левой средней мозговой артерии сохраняется без динамики. Степень расстройства функции (теперь уже невзирая на данные МРТ) не позволяет надеяться на клиническое восстановление, пациент обречен на инвалидизацию…

Прочие параклинические данные (кроме МРТ) наблюдавшихся 11 пациентов уже не имеют значения для обсуждаемого материала, как не несущие достоверной информации [3, 4].

Паразитарное поражение мозга гельминтами составило неожиданно актуальную проблему детской неврологии. Только за 2014–2017 гг. на двух клинических базах кафедры (многопрофильные детские больницы г. Москвы) выявлен 31 случай заболевания с поражением мозга. Откуда возникло такое количество пациентов — вопрос не к неврологу, а скорее к санитарному врачу; материал наблюдений (наличие у всех абсолютных диагностических критериев церебрального гельминтоза) ставит нас перед фактом.

Клиническая картина была чрезвычайно разнообразной, и ее описание не входит в задачи данной публикации.

Вернемся к публикациям Del Brutto (только потому, что он предложил развернутые критерии диагностики церебральных гельминтозов. Диагностические критерии нейроцистицеркоза — профессиональное увлечение Del Brutto, но, что справедливо для одних гельминтов, справедливо и для других (аналогично методам диагностики различных инфекционных агентов — вирусов или бактерий), и они подчеркивают приоритет методов нейровизуализации перед серологическими исследованиями.

В то же время у клиницистов бытует мнение, что для диагностики паразитоза обязательно серологическое подтверждение.

Следует подчеркнуть, что для серологических исследований рекомендуются методики ELISA и иммуноблота как более чувствительные, чем обычный иммуноферментный анализ. В г. Москве ни в одной лаборатории (как находящейся на бюджетном финансировании, так и коммерческих) методики ELISA и иммуноблота для гельминтов не применяются. Предвидя реакцию инфекционистов по вопросам серологической диагностики, позволительно задать вопрос, насколько достоверным является иммуноферментный анализ (ИФА) при диагностике, скажем, церебрального боррелиоза или туберкулеза [13, 14]. Например, мы в сентябре 2016 г. наблюдали только в одном стационаре 7 случаев классического нейроборрелиоза (острый менингит, поражение черепных нервов и радикулопатия с периферическими парезами конечностей), и ни в одном случае в остром периоде заболевания ИФА не дал положительного результата.

При отсутствии своевременного противоотечного (при живом) и противовоспалительного (при погибающем паразите) лечения высок риск развития стойких морфологических изменений мозговой ткани — атрофии и склероза, соответственно могущих приводить к стойкому дефекту нарушенной в остром периоде функции.

В то же время специфическое лечение назначает паразитолог или инфекционист (по существующим стандартам обязательного медицинского страхования невролог самостоятельно не имеет права как ставить диагноз церебрального нематодоза, так и назначать антипаразитарные препараты), незнакомый с абсолютными диагностическими критериями церебральных гельминтозов и ориентирующийся исключительно на серологическую диагностику. И если паразит погиб, то на имеющееся воспаление невролог может воздействовать, а как быть в том случае, если паразит жив, — воздействовать только на травматический (оставляемый движением паразита по мозговой ткани) отек и оставлять в покое инфекционный агент?

Данная проблема может быть решена только усилением внимания радиологов к нейровизуализационным проявлениям гельминтозов, а также санкцией инфекционистов на проведение антипаразитарной терапии.

Вывод

Литература

Del Brutto O. H. Neurocysticercosis in infants and toddlers: report of seven cases and review of published patients // Pediatr. Neurol. 2013; 48; 6: 432–435.
Del Brutto O. H. Neurocysticercosis // Neurophospitalist. 2014; 4; 4: 2005–2012.
Чучин М. Ю. Церебральные гельминтозы и рассеянный склероз у детей. Дифференциальная диагностика и лечение // Клиническая неврология. 2015; 2: 23–30.
Чучин М. Ю. Нейроцистицеркоз и другие церебральные гельминтозы у детей. Проблемы диагностики и лечения // Современная медицина. 2016; 4: 37–42.
Song W. S., Wang B. R., Zhou W. W. et al. CT and MR characteristics of cerebral spranganosis // Am. J. Neuro Radiology. 2007; 28; 9: 1700–1705.
Xinou E., Lefkopoulos A., Gelagoti M. et al. CT and MR imaging findings in cerebral toxocaral disease // Am. J. Neuroradiology. 2003; 24: 714–716.
Del Brutto O. H. Neurocysticercosis // Continuum (Minneap. Minn.). 2012; 18: 1392–1416.
Del Brutto O. H. Diagnostic criteria for neurocysticercosis, revisited // Pathol. Glob. Health. 2012; 106; 5: 299-30-45.
Zibaci M., Frovech F., Bahrami P., Sadjadi S. M. Investigation of anti-toxocara antibodies in epileptic patients and comparison of two methods: ELISA and Western Blotting // Epilepsy Res. Treat. 2013. PMC 3654325; Pub. Online 2013; Apr. 22. DOI: 10. 1155/2013/156815.
Zibaci M., Sadjadi S. M., Sarcari B., Uga S. Evoluation of Toxocara catis excretory-secretory larval antigens in serodiagnosis of human toxocariasis // J. Clin. Lab. Anal. 2016; 30; 3: 248–253.
Aviv R. I., Benseler S. M., Silverman E. D. et al. MR imaging and angiography of primary CNS vasculities in childhood // Am. Journal Radiology. 2006, 27: 192–199.
Benseler S. M, Silverman E., Aviv R. I. et al. Primary central nervous system vasculitis in children // Arthritis Rheumatology. 2006; 54: 1291–1297.
Sousa V. M., de Carvalho L. I., Nucio S. M., Conceicao C., Silva R., Gouveia C. Meningomyeloradiculitis as an unusual presentation of neuroborreliosis in children // Pediatr. Infect. Des. 2015; 34; 10: 1132–1133.
Ramachandran R., Muniyandi M., Iver V., Sripiya T., Priva B., Gouvindaraja T. G. Dilemmas in the diagnosis and treatment of intracranial tuberculomas // J. Neurol. Sci. 2017; 15; 381: 256–264.

М. Ю. Чучин, кандидат медицинских наук

ФГБОУ ДПО РМАНПО, Москва

К диагностике церебрального поражения нематодами/ М. Ю. Чучин
Для цитирования: Лечащий врач № 10/2018; Номера страниц в выпуске: 63-66
Теги: церебральный нематодоз, поражение мозга, серологический анализ

Нематодозы – это гельминтозы, которые вызваны круглыми червями класса Nematoda. Они возникают при заражении паразитами фекально-оральным или трансмиссивным способом. К самым распространенным представителям этой группы заболеваний относят энтеробиоз, аскаридоз, стронгилоидоз. Симптомы нематодозов включают токсико-аллергический синдром, диспепсические расстройства, органные поражения с учетом мест паразитирования половозрелых особей. Для диагностики глистной инвазии используют микроскопию кала, серологические реакции, инструментальную визуализацию органов грудной и брюшной полости. Лечение проводится этиотропными противогельминтными средствами.

МКБ-10

Общие сведения

В микробиологии описано более 24000 видов нематод, среди которых более половины способны вызывать паразитарные заболевания. Круглые черви поражают практически все отделы тела: внутренние органы, кровеносные и лимфатические сосуды, мышцы и другие соединительные ткани. В развитых странах удельный вес гельминтозов в инфектологии составляет около 4%. По данным Росстата, энтеробиоз и аскаридоз – типичные представители нематодозов – занимают 1-е и 4-е места в структуре паразитарных заболеваний в России. Число ежегодно выявляемых случаев составляет 222,7 тыс. и 18,6 тыс. соответственно.

Причины нематодозов

Представители класса Нематода имеют удлиненное веретеновидное тело с круглым поперечным сечением. Их размеры варьируются от нескольких миллиметров до 6-8 м. Наиболее крупные особи встречаются у паразитических червей, поражающих человека и позвоночных животных. Паразиты покрыты кожно-мускульным мешком, имеют первичную полость тела (схизоцель). Пищеварительная система представлена трубкой, кровеносная и дыхательная системы отсутствует.

Самыми распространенными у человека признаны такие нематодозы:

аскаридоз (Ascaris lumbricoides);
энтеробиоз (Enterobius vermicularis);
стронгилоидоз (Strongyloides stercoralis);
разнообразные филяриатозы (Filariata).

К более редким представителям этой группы гельминтозов относят трихинеллез (Trichinella), дракункулез (Dracunculus medinensis), трихоцефалез (Trichocephalus trichiurus), токсокароз (Toxocara canis).

Группы риска

Наиболее уязвимой группой риска по развитию нематодозов считаются дети дошкольного и младшего школьного возраста. Высокая частота глистных инвазий в этом периоде обусловлена неразвитостью навыков гигиены, играми в песочницах и на земле, привычкой облизывать пальцы и грызть ногти. Также к группам риска относят людей, которые посещают экзотические страны, проживают в условиях скученности и антисанитарии.

Патогенез

Заражение большинством видов нематодозов происходит по фекально-оральному механизму. Факторами передачи выступают загрязненная вода, зараженные продукты питания, немытые руки. Инвазионной стадией для круглых червей являются яйца или личинки, которые после заглатывания попадают в ЖКТ, где начинают паразитировать и/или внедряются через стенку кишечника в кровеносные сосуды, разносятся с током крови к другим органам.

У большой группы филяриатозов наблюдается особый жизненный цикл. Это трансмиссивные паразитозы, которые передаются человеку от мошек, москитов, слепней и других кровососущих насекомых. По системе кровеносных сосудов они достигают лимфатических узлов, подкожной клетчатки и полостей тела, где паразитируют долгие годы. Срок жизни некоторых видов филярий достигает 20 лет.

В патогенезе нематодозов выделяют иммунные реакции организма в ответ на проникновение круглых червей и локальные патоморфологические изменения в месте их паразитирования. При длительной инвазии присоединяется нарушение обменных процессов, поскольку гельминты потребляют питательные вещества хозяина. Ситуация усугубляется на фоне нервно-рефлекторного влияния нематодозов – раздражения нервных окончаний, стимулирующего вегетативные расстройства.

Симптомы нематодозов

Большинство видов гельминтозов имеют раннюю и позднюю клиническую фазу. На начальном этапе симптоматика обусловлена общим аллергическим и токсическим влиянием круглых червей на организм. Поздние стадии характеризуются синдромами поражения желудочно-кишечного тракта, гепатобилиарной системы, ЦНС и других органов. Длительность этих фаз зависит от вида паразитирующего гельминта и согласуется с его жизненным циклом.

Для ранней фазы аскаридоза, стронгилоидоза, филяриатозов и токсокароза характерны кожные высыпания по типу крапивницы, повышение температуры тела, мышечные и суставные боли. Нередко развивается бронхолегочный синдром, который проявляется сухим кашлем, одышкой, болями в груди. При нематодозах возникают головные боли, нарушения сна, повышенная раздражительность и снижение работоспособности. Подобная симптоматика продолжается несколько недель.

При переходе болезни во вторую фазу все нематодозы с фекально-оральным путем передачи проявляются расстройствами ЖКТ. Пациенты жалуются на схваткообразные боли в животе, частый и жидкий стул, урчание в кишечнике. Характерна тошнота, рвота, снижение аппетита. Вследствие мальдигестии и мальабсорбции развиваются авитаминозы, белково-энергетическая недостаточность. При энтеробиозе симптомы сопровождаются мучительным анальным зудом.

Осложнения

Тяжелым формам нематодозов подвержены пациенты с иммуносупрессией. Такая закономерность особенно типична для стронгилоидоза, гиперинвазивные и генерализованные формы которого встречаются в основном у людей с ВИЧ/СПИД. Вероятность тяжелой формы гельминтоза повышается при сочетанном заражении, например, при одновременном паразитировании власоглава и аскарид в кишечнике. Усугубить ситуацию способны присоединившиеся бактериальные кишечные инфекции.

При нелеченых нематодозах с массивной глистной инвазией есть риск развития кишечной непроходимости, механической желтухи, острого панкреатита и перитонита. При аскаридозе возможна дыхательная недостаточность и асфиксия в легочной фазе миграции возбудителя. При длительном существовании болезни наблюдаются поражения нервной системы, бессонница, менингизм и эпилептиформные судороги.

Диагностика

Основой для постановки диагноза служат клинико-анамнестические данные. На первичном приеме инфекциониста уточняется время появления симптомов и возможные факторы риска, собирается информация о недавних путешествиях пациента, выполняется стандартный физикальный осмотр. Чтобы подтвердить паразитирование конкретного вида гельминта, назначаются следующие методы диагностики:

Дифференциальная диагностика

Раннюю фазу нематодозов необходимо дифференцировать с аллергическими бронхитами, пневмонией, обострением легочного туберкулеза. Также исключают острые бактериальные инфекции, новообразования легких и средостения. В поздней фазе проводят дифференциальную диагностику с другими видами паразитозов: амебиазом, балантидиазом, тениозом и тениаринхозом. Обязательно исключают НЯК и болезнь Крона, хронический гепатит, нейроциркуляторную дисфункцию.

Лечение нематодозов

Консервативная терапия

Неосложненные формы глистной инвазии лечат в амбулаторных условиях, остальным пациентам требуется госпитализация в инфекционный стационар. Немедикаментозные меры включают щадящий режим, диету согласно степени нарушения пищеварения, поддержание водного баланса. Основу терапии при нематодозах составляют медикаменты следующих групп:

Этиотропные средства. Для уничтожения и удаления из организма паразитов используются противогельминтные препараты, которые нарушают нервно-мышечную передачу у круглых червей либо негативно влияют на их энергетические процессы. Конкретное лекарство и схема его приема подбираются индивидуально.
Патогенетические препараты. С учетом клинических особенностей нематодоза используют дезинтоксикационные растворы, антигистаминные препараты, глюкокортикостероиды. Для устранения дисфункции ЖКТ в поздней фазе используются энтеросорбенты, спазмолитики, пробиотики и ферментные препараты. При многократной рвоте применяются прокинетики.

При лимфедеме, вызванной филяриатозами, показана комплексная консервативная терапия. Из лекарственных средств пациентам назначают диуретики, лимфокинетики и венотоники, медикаментозную симпатэктомию раствором прокаина. Проводится эластическое бинтование конечности, медицинский лимфодренажный массаж, специальные комплексы ЛФК. Чтобы предупредить фиброзирование тканей, выполняются инъекции фибролитических ферментов.

Хирургическое лечение

Прогноз и профилактика

При своевременном и адекватном лечении у большинства пациентов достигают дегельминтизации, после чего нарушенные функции организма восстанавливаются. За выздоровевшими пациентами устанавливают диспансерное наблюдение сроком до 3 лет. Для профилактики нематодозов необходимо соблюдать стандартные меры: следить за личной гигиеной, избегать употребления воды из неизвестных источников, тщательно мыть и по возможности термически обрабатывать продукты.

ГОСТ Р 54627-2011

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ ЖВАЧНЫЕ

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Agricultural ruminant animals. Methods of laboratory helminthology diagnostics

Дата введения 2013-01-01

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ "ВИГИС" Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 "Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов"

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сельскохозяйственных жвачных животных (далее - животные) и устанавливает методы лабораторной диагностики гельминтозов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

* Текст документа соответствует оригиналу. На территории Российской Федерации документ действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 54001-2010 Удобрения органические. Методы гельминтологического анализа

ГОСТ 2-85 Селитра аммиачная. Технические условия

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.011-89 Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация

ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия

ГОСТ 490-2006 Кислота молочная пищевая. Технические условия

ГОСТ 1625-89 Формалин технический. Технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4236-77 Реактивы. Свинец (II) азотнокислый. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4529-78 Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5789-78 Реактивы. Толуол. Технические условия

ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 14702-79 Селитра аммиачная водоустойчивая. Технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные. Общие технические условия

ГОСТ 19126-2007 Инструменты медицинские металлические. Общие технические условия

ГОСТ 21239-93 Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний

ГОСТ 22867-77 Реактивы. Аммоний азотнокислый. Технические условия

ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 гельминотозы: Паразитарные болезни животных, вызываемые гельминтами - паразитическими червями.

3.2 инвазия: Проникание в организм животного паразитов (гельминтов) с последующим развитием сложного патофизиологического процесса их взаимодействия.

3.3 интенсивность инвазии: Общее число яиц и личинок гельминтов, обнаруженных у обследованного животного, выраженное в экземплярах.

3.4 экстенсивность инвазии: Отношение числа зараженных животных к общему поголовью обследованных животных разного возраста и вида, выраженное в процентах.

3.5 нематодозы: Болезни, вызываемые круглыми гельминтами, относящими к классу нематода (Nematoda).

3.6 цестодозы: Болезни, вызываемые ленточными гельминтами, относящими к классу цестода (Cestoda).

3.7 трематодозы: Болезни, вызываемые плоскими гельминтами, относящими к классу трематода (Trematoda).

3.8 зоонозы: Гельминтозы, возбудители которых паразитируют как у животных, так и у человека.

4 Общие положения

4.1 Лабораторную диагностику гельминтозов животных проводят по показателям:

- числа жизнеспособных яиц и личинок гельминтов определенных видов в количественном или процентном отношении к общему числу обнаруженных.

4.2 Жизнеспособность обнаруженных яиц и личинок гельминтов определяют и подтверждают в соответствии с требованиями настоящего стандарта.

4.3 По числу обнаруженных яиц и личинок гельминтов интенсивность инвазии у животных классифицируют в соответствии с таблицей 1.

Интенсивность инвазии в зависимости от числа обнаруженных яиц и личинок гельминтов, экз./1 г фекалий

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика гельминтозов и протозоозов

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского ГБОУ ВПО Первого Московского государственного медицинского университета (МГМУ) им.И.М.Сеченова (В.П.Сергиев, М.Н.Лебедева, В.Г.Супряга, Ф.П.Коваленко, Е.Н.Морозов, Е.Н.Понировский, Т.В.Продеус, Л.В.Федянина, А.А.Фролова, Е.Н.Жиренкина, К.Ю.Кузнецова, И.В.Кухалева, В.М.Ракова, Н.А.Турбабина, Е.А.Черникова, В.Д.Завойкин, О.П.Зеля, Л.Ф.Морозова, Г.Л.Плющева, Н.Р.Цаава); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева); ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова); кафедрой факультетской хирургии N 1 Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.X.Мусаев); отделом хирургии печени НИЦ Первого МГМУ им.И.М.Сеченова (Г.Г.Ахаладзе); ФБУН "Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии" Роспотребнадзора (Т.И.Твердохлебова, Ю.И.Васерин, Е.П.Хроменкова, С.А.Нагорный, Л.Л.Димидова, А.В.Упырев, Л.В.Шишканова, Е.Ю.Криворотова, А.С.Кожухина); Военно-медицинской академией им.С.М.Кирова (С.С.Козлов); НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи (Д.Б.Гончаров); Российским научным центром хирургии им.Б.В.Петровского РАМН (Г.А.Шатверян); кафедрой молекулярной биологии МГУ им.М.В.Ломоносова (А.А.Колесников); кафедрой тропических и паразитарных болезней Российской медицинской академии последипломного образования (А.Е.Беляев); Управлением Роспотребнадзора по городу Москве (Т.Н.Иванова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве" (Н.И.Тимошенко).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. N 3).

3. Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю.Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены взамен МУК 4.2.735-99 "Паразитологические методы диагностики гельминтозов и протозоозов".

2-е издание, исправленное и дополненное

Область применения

1. Методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода отбора проб и методов лабораторных исследований биологического материала от людей с целью обнаружения возбудителей гельминтозов и протозоозов, определения их видовой принадлежности.

2. Методические указания предназначены для специалистов паразитологических, микробиологических лабораторий санитарно-эпидемиологической службы, медицинских организаций независимо от их организационно-правовых форм, индивидуальных предпринимателей, а также научно-исследовательских институтов, осуществляющих лабораторную диагностику гельминтозов и протозоозов.

3. Методические указания носят рекомендательный характер.

Раздел 1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтозов

1.1. Лабораторная диагностика кишечных гельминтов

Гельминты человека относятся преимущественно к двум типам червей: типу плоских червей Plathelminthes и типу круглых червей Nemathelminthes. Тип плоских червей, поражающих человека, включают два класса: ленточные черви - Cestoda и сосальщики - Trematoda. Тип круглых червей включает в себя один класс, имеющий медицинское значение, собственно класс Nematoda.

Большинство гельминтозов можно диагностировать прямыми методами, то есть по обнаружению в биологическом материале (кал, моча, мокрота, дуоденальное содержимое и пр.) гельминтов на разных стадиях развития (взрослых особей, яиц или личинок). Для этого используют макроскопические и микроскопические методы диагностики.

Отбор проб и условия доставки биологического материала в лабораторию для паразитологического исследования

Материалом для лабораторных паразитологических исследований на гельминтозы служит различный биологический материал: кал, кровь, моча, мокрота, лаважная жидкость, дуоденальное содержимое, содержимое кист, биопсионный или постоперационный материал, гистологические препараты внутренних органов и тканей и другой.

Отбор проб кала

Кал после дефекации отбирают из разных участков в количестве не менее 50 г.

Пробу помещают в чистую сухую, стеклянную или пластмассовую посуду с крышками.

Проба кала доставляется в лабораторию и исследуется в день дефекации.

При невозможности исследования пробы кала сразу после дефекации или в день поступления материала в лабораторию, пробу кала хранят при температуре от 0 до 4°С не более суток или собирают в консервант (прилож.8).

Отбор дуоденального содержимого (желчь )

Материал доставляется в лабораторию в чистых химических или центрифужных пробирках сразу после зондирования пациента натощак.

Доставляют все три фракции (порции "А", "В", "С") и исследуют сразу после поступления в лабораторию.

Порцию "А" доставляют для исследования на наличие возбудителей стронгилоидоза, трихостронгилоидозов, анкилостомидозов.

Порции "В" и "С" доставляют для исследования на яйца гельминтов, паразитирующих в протоках печени и желчном пузыре.

Отбор проб мокроты и лаважной жидкости

В лабораторию доставляется мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки), в стерильной посуде с крышками. Проба мокроты исследуется сразу после поступления в лабораторию.

Лаважная жидкость в лабораторию доставляется в стерильной посуде и исследуется в день доставки.

Отбор проб мочи

В лабораторию доставляется моча, собранная между 10 ч утра и 14 ч дня, или все порции суточной мочи; желательно собрать мочу после физической нагрузки (например, 20-30 приседаний).

1.1.1. Методы исследования кала на яйца гельминтов

1.1.1.1. Макроскопические методы

Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы и/или стереомикроскопа.

На поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; иногда выделяются с калом аскариды; у пациентов с дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца, а у инвазированных свиным цепнем с калом часто отходят членики гельминта. У инвазированных бычьим цепнем также происходит отхождение члеников, однако значительная доля члеников отходит активно вне дефекации. В живом состоянии такие членики пациенты часто сравнивают с лапшой. Пациент может доставить членики в лабораторию, но если они подсохли, то на лапшу они перестают быть похожи, а выглядят скорее как чешуйки размером с ноготь мизинца. Перед исследованием такой членик следует размочить в физиологическом растворе. Кроме того, за отхождением взрослых гельминтов необходимо следить при оценке результатов лечения.

Необходимые реактивы и оборудование

Предметные стекла большие (610; 812 см)

Лупа, микроскоп и бинокулярный стереоскопический микроскоп типа МБС

Подготовка к исследованию

1) Извлекать пинцетом или препаровальной иглой все подозрительные частицы и крупные образования на отдельное предметное стекло или чашку Петри.

2) Образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривать под микроскопом МБС или под лупой между двумя предметными стеклами.

3) Мелких гельминтов рассматривать в капле глицерина или физиологического раствора под микроскопом при увеличении: окуляр 7 или 10, объектив 8 или 10.

4) Членики ленточных гельминтов поместить на предметное стекло, подсушить, закрыть другим предметным стеклом, слегка сдавить и рассмотреть строение матки.

5) Микроскопия всех визуально обнаруженных в кале паразитов или фрагментов обязательна для уточнения морфологических особенностей и идентификации паразита.

Применение. Метод применяется при идентификации зрелых паразитов или их фрагментов, например для дифференциальной диагностики члеников цестод (бычьего, свиного цепня и широкого, чаечного лентеца).

1.1.1.2. Микроскопические методы

1.1.1.2.1. Метод толстого мазка под целлофаном по Като и Миура

Толстый мазок представляет собой тонкий слой пробы кала на предметном стекле под гигроскопическим целлофаном, пропитанным смесью глицерина, фенола и малахитового зеленого.

Примечание. Гидрофильный целлофан горит в отличие от полиэтиленовой пленки, которая плавится и непригодна для исследования.

Необходимые реактивы и оборудование

Раствор фенола 6%-й (100 мл дистиллированной воды + 6 г фенола)

Раствор малахитового зеленого 3%-й (2,5 г малахитовой зелени + 75 мл дистиллированной воды)

Обезжиренные предметные стекла

Палочки стеклянные или деревянные

Валик или резиновая пробка

Подготовка к исследованию

Приготовление рабочего раствора Като: 100 мл 6%-го раствора фенола + 100 мл глицерина + 1,2 мл 3%-го раствора малахитового зеленого (раствор можно хранить длительное время в склянке из темного стекла с притертой крышкой).

При отсутствии фенола и малахитовой зелени можно использовать раствор глицерина (50 мл глицерина + 50 мл дистиллированной воды).

Подготовка целлофановых полосок. Нарезать полоски из гидрофильного целлофана, чтобы их размер соответствовал размеру предметного стекла.

1) Полоски поместить в рабочий раствор Като не менее, чем на 24 ч до проведения анализа. В 200 мл рабочего раствора можно обрабатывать до 5 тыс. новых целлофановых полосок.

2) На предметное стекло нанести пробу кала размером с горошину. Весь объем пробы кала растереть индивидуальной стеклянной палочкой по стеклу.

3) Мазок кала накрыть целлофановой полоской, обработанной в растворе.

4) Целлофан сверху притереть резиновой пробкой или специальным валиком, ширина которого соответствует или немного больше ширины предметного стекла, до получения тонкого, равномерного, прозрачного слоя.

5) Препарат просветляется при комнатной температуре в течение 20-30 мин.

6) Микроскопировать при увеличении: объектив 8 или 10, окуляр 7 или 10 (для уточнения морфологического строения яиц гельминтов - объектив 40).

1) Позволяет просмотреть в 20-30 раз больше препаратов кала, чем в нативном мазке без применения гигроскопических целлофановых полосок.

2) Выявляет яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта при высокой и средней интенсивности инвазии.

1) Рекомендуется при массовых обследованиях населения на кишечные гельминтозы.

2) При обследованиях населения на анкилостомидозы, трихостронгилидозы и гименолепидоз необходимо учитывать, что применение данного метода имеет ограничения во времени, а именно возбудители указанных инвазий разрушаются в течение 1-2 ч.

1.1.1.2.2. Методы седиментации

Метод формалин-эфирной или уксусной седиментации

В основе методов седиментации (осаждения) лежит разность удельного веса используемых химических реактивов и яиц гельминтов: удельный вес яиц высокий, и они концентрируются в осадке.

ГОСТ Р 55457-2013

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Horses. Methods for laboratory helminthosis diagnostics

Дата введения 2014-07-01

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им.К.И.Скрябина" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ "ВИГИС" Россельхозакадемии)

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на лошадей и устанавливает методы лабораторной диагностики гельминтозов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 54001-2010 Удобрения органические. Методы гельминтологического анализа

ГОСТ Р 54627-2011 Животные сельскохозяйственные жвачные. Методы лаборной диагностики гельминтозов

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 244-76 Натрия тиосульфат кристаллический. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 22280-76 Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 54627.

4 Общие положения

Общие положения методов лабораторной диагностики гельминтозов лошадей - по ГОСТ Р 54627 (раздел 4).

5 Требования безопасности

5.1 Сотрудники, выполняющие работу по отбору, доставке и анализу проб, должны иметь рабочую спецодежду: халаты, фартуки, перчатки, резиновую обувь по ГОСТ 12.4.011. Рабочие халаты подлежат обмену на чистые по истечении каждой рабочей недели. Спецодежду и обувь хранят в шкафах.

Сотрудники должны быть обеспечены средствами и условиями для личной гигиены и обязаны соблюдать санитарно-гигиенические требования.

5.2 Требования безопасности при работе с химическими реактивами - по ГОСТ 12.1.007, с электрооборудованием - по ГОСТ Р 12.1.019.

Требования пожарной безопасности - по ГОСТ 12.1.018.

5.3 Помещение, в котором проводят исследования, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Работы необходимо проводить в вытяжном шкафу с применением резиновых перчаток.

6 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы

6.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы и реактивы - по ГОСТ Р 54627 (раздел 6) со следующим дополнением.

Устройство для сбора личинок и мелких нематод из фекалий (звездочка).

Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 3%-ный.

Натрий лимоннокислый по ГОСТ 22280.

Сыворотка крови лошади.

6.2 Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

7 Подготовка к исследованиям

Подготовку к исследованиям проводят по ГОСТ Р 54627 со следующими дополнениями.

7.1 Отбор и подготовка проб фекалий

Точечные пробы отбирают из фекалий лошадей, патологического материала, соскобов объектов внешней среды, промежуточных хозяев гельминтов.

Точечные пробы фекалий от живых лошадей берут из прямой кишки (10 г) или только что выделившегося испражнения.

В сопроводительном документе, направляемом с пробой в лабораторию, также указывают конюшню и число животных в конюшне.

При индивидуальном обследовании жеребцов-производителей, конематок и особо ценных спортивных лошадей номера на упаковке и в описи должны строго соответствовать.

7.2 Отбор и подготовка проб почвы, приготовление растворов по ГОСТ Р 54627.

7.3 Приготовление комбинированного раствора сернокислого магния и тиосульфата натрия плотностью 1,3 г/см

Раствор 1. 1000 г магния сернокислого 7-водного по ГОСТ 4523 растворяют в 1 дм горячей дисстилированной воде по ГОСТ 6709. Через 24 ч раствор фильтруют в чистую стеклянную посуду.

Срок хранения раствора 1 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

Раствор 2. 2000 г натрия тиосульфата натрия по ГОСТ 244 растворяют в 1 дм горячей дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Через 24 ч раствор фильтруют в чистую стеклянную посуду.

Срок хранения раствора 2 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

Раствор 3. Три части раствора 1 смешивают с тремя частями раствора 2, затем к шести частям получившейся смеси растворов добавляют одну часть дистиллированной воды. Ареометром проверяют плотность рабочего раствора, которая должна быть 1,3 г/см.

Срок хранения раствора 3 в стеклянной колбе - не более 30 дней.

8 Флотационные методы определения наличия яиц и личинок гельминтов

8.1 Для определения наличия яиц и личинок гельминтов лошадей применяют флотационные методы по ГОСТ Р 54627 (подразделы 8.1-8.4), а также комбинированный флотационный метод Бреза для диагностики нематодозов и цестодозов.

8.2 Комбинированный флотационный метод Бреза для диагностики нематодозов и цестодозов

Анализируемую пробу массой 3 г в ступке заливают 10-15 см комбинированного раствора сернокислого магния и тиосульфата натрия по 7.2.1, растирают пестиком до гомогенного состояния, доливают комбинированным раствором до 45-50 см, размешивают стеклянной палочкой и процеживают через металлическое сито с ячейкой диаметром 0,3-0,5 мм в чистый стакан и отстаивают в течение 10-15 мин.

Затем снимают капли поверхностной взвеси из разных мест легким прикосновением металлической петли диаметром 0,8 см, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

9 Седиментационные методы диагностики трематодозов

Для диагностики фасциолеза и других гельминтозов лошадей применяют седиментационный метод последовательного промывания по ГОСТ Р 54627 (подразделы 9.1-9.2).

10 Комбинированные (седиментационно-флотационные) методы

Для определения гельминтозов лошадей применяют комбинированные (седиментационно-флотационные) методы Дарлинга, Щербовича и Вишняускаса по ГОСТ Р 54627 (раздел 10), а также метод Бреза со следующим уточнением.

Приготовленную в ступке водную суспензию из 3 г фекалий лошадей процеживают через сито в чистую стеклянную центрифужную пробирку вместимостью 10-15 см и центрифугируют с частотой вращения 2000-3000 об/мин в течение 2-3 мин. После этого надосадочную жидкость осторожно сливают, а к осадку добавляют 10 см одного из флотационных растворов: натрия хлористого (метод Дарлинга), магния сульфата (метод Щербовича), комбинированного раствора магния сульфата и тиосульфата натрия ( метод Бреза), хорошо размешивают и снова центрифугируют в том же режиме. После чего металлической петлей снимают по три капли поверхностной взвеси из каждой пробирки, переносят на предметное стекло и препарат исследуют под микроскопом.

11 Гельминтолярвоскопические методы диагностики нематодозов

Для диагностики диктиокаулеза лошадей применяют гельминтолярвоскопические методы Бермана-Орлова и Шильникова (упрощенный метод Бермана) по ГОСТ Р 54627 (раздел 11) со следующим уточнением.

Для исследования по методу Бермана-Орлова берут 10 г анализируемой пробы фекалий лошадей (ослов, пони).

12 Методы определения количества яиц нематод, цестод и трематод в фекалиях

Определение количества яиц нематод, цестод и трематод в фекалиях лошадей - по ГОСТ Р 54627 (раздел 12).

13 Методы определения жизнеспособности яиц и личинок гельминтов

Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов проводят по ГОСТ Р 54001 (раздел 8) по морфологии, окрашиванию, культивированию и осуществляют биопробу.

14 Исследования павших животных на наличие гельминтов

Исследования павших животных на наличие гельминтов - по ГОСТ Р 54627 (раздел 14).

Читайте также: