Лабораторный контроль за внутрибольничными инфекциями
Обновлено: 19.04.2024
Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях. Методы
Отбор проб для анализа при инфекционных заболеваниях. Для микробиологического исследования может быть отобрана любая ткань или физиологическая жидкость организма.
Выделение чистой культуры способствует увеличению количества бактерий и их точной идентификации. Для этого используют питательные среды. Если в образце присутствует нормальная микрофлора, то применяют избирательные (селективные) среды, позволяющие создать условия, неблагоприятные для роста непатогенных микроорганизмов и способствующие росту патогенной микрофлоры.
Для получения точных результатов следует выбрать оптимальный метод отбора проб и подойти к этому процессу с должной аккуратностью. При несоблюдении правил асептики контаминация проб крови микроорганизмами извне может привести к назначению неправильного лечения.
Большинство бактерий не способны существовать вне организма хозяина: облигатные анаэробы погибают под действием кислорода воздуха, а некоторые возбудители очень чувствительны к высыханию (Neisseria gonorrhoeae). Именно поэтому анализируемые образцы сразу после отбора должны быть помещены на подходящие среды или посеяны на среды для транспортировки.
Лабораторные методы исследования при инфекционных заболеваниях
Образцы могут быть проанализированы невооружённым глазом (например, для определения взрослых гельминтов в фекалиях или крови в мокроте). Микроскопия — быстрый и недорогой метод исследования, но требует высокого технического мастерства, характеризуется низкой чувствительностью: для точного определения необходимо присутствие большого количества возбудителей.
Кроме того, очень часто условно-патогенные микроорганизмы принимают за патогенные, что связано с недостаточной специфичностью метода.
Для определения возбудителя могут быть использованы различные красители (например, аурамин или окрашивание по Цилю—Нильсену для идентификации микобактерий). Уротропиновый серебряный окрашивает хитин клеточной стенки грибов и Pneumocystis jiroveci. Краситель Гимза применяют для окрашивания возбудителей малярии, лейшманий и других паразитов.
В основе иммунофлюоресцентного метода лежит применение специфических антител, помеченных флюоресцентными маркёрами. Микроскопию осуществляют в ультрафиолетовом свете, при этом возбудитель и связанные с ним антитела светятся ярко-зелёным цветом.
Лабораторные исследования при инфекционных заболеваниях
Выделение чистой культуры возбудителя при инфекционных заболеваниях
Иногда, даже при выраженных клинических симптомах, возбудитель может присутствовать в очаге инфекции в количестве, недостаточном для микроскопического определения. В этом случае выделение чистой культуры позволяет увеличить численность микроорганизмов в исследуемом субстрате.
Существует два способа выращивания микроорганизмов: на жидких (увеличивается количество возбудителей) и твёрдых (исследуют отдельные колонии, в том числе и на чувствительность к антибиотикам) питательных средах. Большинство возбудителей инфекций человека достаточно требовательны к условиям культивирования. Именно поэтому питательные среды для их выращивания должны содержать белки, сахарозу и нуклеиновые кислоты (присутствующие в крови и сыворотке).
Кроме того, необходимо поддерживать соответствующий газовый состав: для культивирования анаэробов необходимо отсутствие кислорода, в то время как для облигатных аэробов (Bordetella pertussis) — наоборот. Оптимальная температура выращивания большинства патогенных микроорганизмов составляет 37 °С; культивирование некоторых фибов осуществляют при 30 С.
Идентификация возбудителя инфекционного заболевания
Симптомы заболеваний зависят от вида возбудителей, вызвавших их. Именно поэтому идентификация микроорганизма позволяет предположить клиническую картину вызываемого им заболевания (например, симптомы инфекции, вызванной Vibrio cholerae, отличны от таковых при заражении Shigella sonnei). Большое значение имеет выделение Neisseria meningitidis именно из спинномозговой жидкости. Идентификация микроорганизмов основана на:
• изучении морфологических свойств их колоний в агаре;
• различной окраске по Граму;
• способности возбудителей к образованию спор;
• изучении биохимических свойств (каталазный или коагулазный тесты).
Точное определение штамма обычно зависит от результатов биохимического анализа (например, уреазный тест) или обнаружения продуктов жизнедеятельности бактерий (индол). Возбудителей, которые не могут быть выращены на питательных средах, идентифицируют при помощи молекулярно-генетического метода ДНК и секвенирования (например, Trophyrema whippelii).
Определение чувствительности возбудителя инфекционного заболевания к антибиотикам
Если для эрадикации микроорганизмов достаточно стандартной дозы антимикробного препарата, то их считают чувствительными, если необходимо увеличение дозы лекарственного средства — относительно устойчивыми. Абсолютно устойчивыми (резистентными) называют возбудителей, в отношении которых антибиотикотерапия неэффективна. Существует широкий спектр различных методов определения чувствительности к антимикробным препаратам.
Методы Британской ассоциации антимикробной химиотерапии (British Society of Antimicrobial Chemotherapy — BSAQ и Института клинических лабораторных стандартов (Clinical Laboratory Standards Institute — С LSI) основаны на определении диаметра зоны слабого роста микроорганизмов на твёрдой питательной среде при применении антимикробного препарата.
Минимальную подавляющую концентрацию антибиотика измеряют с помощью Е-теста, растворения препарата в питательном бульоне или нанесения его на плотный агар. В последнем случае на засеянный исследуемыми микроорганизмами агар наносят бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками (метод бумажных дисков).
Уровень чувствительности зависит от диаметра зоны пониженного роста бактерий. Однако тестирование in vitro предоставляет лишь приблизительные данные, так как в клинической практике многое зависит от состояния больного.
Серологический анализ при инфекционном заболевании
Различные виды инфекций можно идентифицировать с помощью определения иммунного ответа, возникающего при внедрении возбудителя. Для этого существует большое количество различных методов: реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК), реакция нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ (ИФА). Диагноз устанавливают на основании:
• определения уровня антител (IgM) в ответ на попадание в организм чужеродного белка (антигена);
• определения антигена.
Молекулярный анализ при инфекционном заболевании
Южный блоттинг и метод гибридизации нуклеиновых кислот. Методы основаны на связывании меченой ДНК с анализируемым образцом, при условии, что он имеет определённую последовательность аминокислот. Связанный комплекс определяют по активности метки. Это достаточно быстрый и надёжный способ, который, тем не менее, уступает по чувствительности молекулярно-генетическим методам.
Метод молекулярно-генетический (NAAT)
Для диагностики инфекционных заболеваний используют несколько молекулярно-генетических методов. Механизм выделения патогенной ДНК или РНК в количестве, достаточном для постановки диагноза, для каждого метода индивидуален. Так, при молекулярно-генетическом методе ДНК возбудителя разделяют на отдельные цепи, затем синтезируют праймеры для связывания с целевыми последовательностями. Образование новой ДНК катализирует полимераза.
Основное преимущество — достижение результата даже при наличии всего лишь одной копии ДНК. Благодаря автоматизированным системам и большому выбору специальных наборов эти методы стали доступны большинству диагностических лабораторий. Новые аппараты способны выдавать результат в режиме реального времени. Генетические методы позволяют идентифицировать микроорганизмы, выращивание которых отличается сложностью или сопряжено с риском для человека (например, Mycobacterium tuberculosis и Chlamydia trachomatis).
Кроме того, их можно использовать для определения генов, кодирующих устойчивость к действию антибиотиков (например, мутационный ген rpoВ, обеспечивающий устойчивость М. tuberculosis к рифампицину). Это позволяет заранее выбрать альтернативный путь лечения инфекционных заболеваний.
Иногда необходимо проводить типирование микроорганизмов в случае их распространения в больницах или в окружающей (внебольничной) среде.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Любое, клинически распознаваемое заболевание микробного происхождения у пациента или медицинского работника, связанное с его пребыванием, лечением, обследованием или обращением за медицинской помощью в лечебно-профилактическое учреждение - является внутрибольничной инфекцией (ВБИ)
Ежегодно в Курской области регистрируется около 150 случаев ВБИ. ВБИ преимущественно регистрируются в родовспомогательных учреждениях (51,7%) и хирургических стационарах (20,5%).
Заразиться инфекцией в стационаре возможно традиционными для эпидемиологии механизмами передачи, а именно: при контакте с больным или через объекты, которыми пользовался больной; через пищевые продукты и воду, в которые предварительно от больного могли попасть инфекционные агенты; заражение может произойти и воздушно-капельным путем, например, при вирусных инфекциях (корь, краснуха, ветряная оспа и др.) персонал, ухаживающий за больными, рискует заразиться именно таким способом. Кроме того, существует еще способ заражения, связанный с лечебно-диагностическим процессом в ЛПУ - искусственный способ передачи инфекции. Очевидным примером является заражение инфекциями при переливании крови - гемотрансфузиях (ВИЧ, вирусные гепатиты В, С, D, малярия и др.) или при инъекциях.
Основной прогресс в области профилактики ВБИ во многом зависит от организации работы медицинского учреждения. В ЛПУ независимо от профиля, должны выполняться три важнейших требования: — свести к минимуму возможность заноса инфекции; — исключить внутригоспитальные заражения; — исключить вынос инфекции за пределы лечебного учреждения. Говоря о важности профилактики ВБИ, следует отметить, что проблема эта, безусловно, комплексная и многогранная. Каждое из направлений профилактики ВБИ предусматривает ряд целенаправленных санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий. К таким направлениям относятся общие требования к санитарному содержанию помещений, оборудования, инвентаря, личная гигиена больных и медицинского персонала, организация дезинфекционного дела, противоэпидемические требования к предстерилизационной обработке и стерилизации изделий медицинского назначения.
Все помещения, оборудование, медицинский и другой инвентарь должны содержаться в чистоте. Влажная уборка помещений (мытье полов, мебели, оборудования, подоконников, дверей и т.д.) должны осуществляться не менее 2 раз в сутки, а при необходимости и чаще, с применением моющих и дезинфицирующих средств. Весь уборочный инвентарь (ведра, тазы, ветошь, швабры и др.) должен иметь четкую маркировку с указанием помещений и видов уборочных работ, использоваться строго по назначению и храниться раздельно. Генеральная уборка помещений палатных отделений и других функциональных помещений и кабинетов должна проводиться по утвержденному графику не реже 1 раза в месяц с тщательным мытьем и дезинфекцией стен, полов, всего оборудования; а также протиранием мебели светильников, защитных жалюзей и т.п. от пыли. Генеральная уборка (мойка и дезинфекция) операционного блока, перевязочных, родильных залов проводится 1 раз в неделю, с освобождением помещений от оборудования, мебели и др. инвентаря.
Помещения, требующие соблюдения особого режима стерильности, асептики и антисептики (операционные, перевязочные, родзалы, палаты реанимации, процедурные, инфекционные боксы, боксы бактериологических и вирусологических лабораторий и др.) следует после уборки, а также в процессе текущей эксплуатации периодически облучать ультрафиолетовыми стационарными или передвижными бактерицидными лампами из расчета 1 Ватт мощности на 1 кубический метр помещения. Проветривание палат и других помещений, нуждающихся в доступе свежего воздуха, через форточки, фрамуги, створки необходимо осуществлять не менее 4х раз в сутки. По причине особой важности стоит отдельно остановиться на вопросах бельевого режима.
Стационары должны быть обеспечены бельем в соответствии с табелем оснащения в достаточном количестве. Смена белья больным должна проводиться по мере загрязнения, регулярно, но не реже 1 раза в 7 дней. Загрязненное выделениями больных белье подлежит замене незамедлительно. Весьма важным направлением профилактики ВБИ является дезинфекция, целью которой является уничтожение патогенных микроорганизмов на объектах внешней среды палат и функциональных помещений отделений стационара, медицинском инструментарии и оборудовании.
В целях профилактики ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов В, С и других внутригоспитальных инфекций все изделия медицинского назначения, применяемые при манипуляциях с нарушением целостности кожных покровов и слизистых или соприкасающиеся с поверхностью слизистых оболочек, а также при проведении гнойных операций или оперативных манипуляций у инфекционного больного после каждого использования должны подвергаться предстерилизационной обработке и стерилизации. Важно подчеркнуть, что очаги ВБИ возникающие в стационарах, существуют и поддерживаются за счет вовлечения в них медицинского персонала. Поэтому, необходимо ежегодное диспансерное обследование медицинского персонала, с исследованием крови на ВИЧ-инфекцию, сифилис, маркеры вирусных гепатитов (В и С), флюорографией органов грудной клетки, осмотром врачей-специалистов. В этой связи также важны и используемые эффективных методы специфической иммунопрофилактики ряда инфекций (дифтерия, гепатит В).
В заключении хочется отметить, что во главе всей этой многогранной работы по профилактике ВБИ в ЛПУ стоит сознательное отношение и тщательное выполнение медицинским персоналом требований противоэпидемического режима, которое в итоге позволит в значительной степени снизить риск заболевания ВБИ и сохранить здоровье больным.
1. Производственный контроль, в том числе проведение лабораторных исследований и испытаний, за соблюдением санитарно-эпидемиологических требований и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий в процессе производства, хранения, транспортировки и реализации продукции, выполнения работ и оказания услуг, а также условиями труда осуществляется индивидуальными предпринимателями и юридическими лицами в целях обеспечения безопасности и (или) безвредности для человека и среды обитания таких продукции, работ и услуг.
Производственный контроль осуществляется в порядке, установленном техническими регламентами или применяемыми до дня вступления в силу соответствующих технических регламентов санитарными правилами, а также стандартами безопасности труда, если иное не предусмотрено федеральным законом.
2. Лица, осуществляющие производственный контроль, несут ответственность за своевременность, полноту и достоверность его осуществления. Администрация медицинских организаций обязана организовать производственный контроль за соблюдением санитарно-гигиенического и противоэпидемического режимов с проведением лабораторно-инструментальных исследований и измерений в соответствии с действующими нормативными документам.
согласно гл. 1. п. 1.7. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
3. Производственный контроль включает:
наличие в организации официально изданных санитарно-эпидемиологических правил и нормативов;
назначение лиц, ответственных за организацию и осуществление производственного контроля;
организацию лабораторно-инструментальных исследований;
контроль наличия в организации документов, подтверждающих безопасность и безвредность продукции, работ и услуг;
визуальный контроль уполномоченными должностными лицами за выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий, соблюдением санитарно-эпидемиологических правил, разработкой и реализацией мер, направленных на устранение выявленных нарушений.
согласно гл 2. п.3.2. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
4. Лабораторное исследование объектов окружающей среды в медицинских организациях проводят в соответствии с санитарными правилами по организации и проведению производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий по разработанному плану производственного контроля, обращая особое внимание на контроль стерильности инструментов, инъекционных растворов, перевязочного и шовного материала
согласно гл 3. п.2.22. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
5. Объем санитарно-бактериологических исследований определяется эпидемиологической необходимостью. В плановом порядке проводят: исследования лекарственных форм, контроль стерильности изделий медицинского назначения, в том числе расходных материалов для аппаратов ИВЛ, за исключением лекарственных форм и стерильных изделий промышленного изготовления; контроль микробиологической чистоты воздуха в операционных и других помещениях классов чистоты А, В и С; контроль качества текущей дезинфекции (кувезы, предметы и изделия медицинского назначения, подготовленные к использованию у пациентов); выборочный контроль гигиены рук медицинского персонала
согласно гл 4. п.5.4.3. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
6. Санитарно-паразитологические исследования объектов внешней среды: смывы в пищеблоках, раздаточных, в кабинетах инфекционных заболеваний, в клинико-диагностических лабораториях, в палатах, туалетных комнатах
7. Стерилизаторы подлежат бактериологическому контролю после их установки (ремонта), а также в ходе эксплуатации не реже двух раз в год в порядке производственного контроля
согласно гл. 2. п. 2.36. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
8. Критериями оценки качества проведения дезинфекционных и стерилизационных мероприятий в МО являются:
отрицательные результаты посевов проб со всех объектов внутрибольничной среды (в том числе контроль стерильности);
показатели обсемененности воздуха, не превышающие установленные нормативы;
отсутствие в помещениях МО грызунов, подтвержденное с применением субъективной оценки и объективных методов обнаружения;
отсутствие в помещениях МО членистоногих, подтвержденное с применением субъективной оценки и объективных методов обнаружения.
согласно гл. 2. п. 3.4. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".
Профилактика внутрибольничных инфекций. Принципы
В каждом лечебном учреждении необходимо проводить мероприятия, препятствующие возникновению и распространению инфекции. В них принимает участие весь персонал. Группа контроля за инфекционной заболеваемостью должна состоять из микробиолога (врача-инфекциониста) и квалифицированной медицинской сестры. Организация противоэпидемических мероприятий возложена на руководство учреждения. Группой будет проводиться особый контроль за распространением специфических микроорганизмов (например, МРЗС).
Группа должна осуществлять надзор за состоянием внутренней среды учреждения, принимать участие в планировании, размещении и перепланировке зданий.
При обнаружении инфекционного заболевания больного немедленно изолируют для предотвращения его распространения. Необходимо установить источник инфекции и пути её передачи, организовать проведение бактериологических исследований пациентам и медперсоналу, контактирующему с больным. Пациентов, особенно восприимчивых к инфекции, также следует размещать в отдельных палатах. При несоблюдении персоналом санитарно-гигиенических норм поддерживать противоэпидемический режим в больнице достаточно сложно. Например, значительно усложнить ситуацию может пренебрежение таким простым правилом, как обязательное мытьё рук.
Изоляция больных с открытыми ранами и после выполнения полостных операций для профилактики внутрибольничной инфекции. Пациента помещают в изолированную палату с отдельной уборной. При проведении лечебных и гигиенических процедур необходимо надевать одноразовые перчатки и стерильную одежду. После выполнения всех манипуляций их выбрасывают, а руки тщательно моют с мылом и вытирают одноразовым полотенцем. Для снижения микробной контаминации окружающей среды применяют специальные дезинфицирующие вещества, например хлорсодержащие растворы для борьбы с Clostridium difficile.
Профилактика внутрибольничных респираторных инфекций
Помимо соблюдения вышеперечисленных мер предосторожности медперсонал больницы обязан носить маски. При транспортировке из одного отделения в другое маску должен иметь и сам пациент. Строгие меры респираторной изоляции необходимы для предупреждения распространения инфекций, вызываемых мультирезистентными штаммами возбудителей туберкулёза, и тяжёлого острого респираторного синдрома. Они предполагают размещение в комнатах с отрицательным давлением и использование специальных индивидуальных респираторов.
Соблюдение мер предосторожности особенно важно во время процедур, сопровождающихся высоким риском воздушно-капельного заражения (например, при выполнении бронхоальвеолярного лаважа).
Строгая изоляция для профилактики внутрибольничной инфекции. Этот метод изоляции направлен на предупреждение распространения таких инфекций, как вирусные геморрагические лихорадки. Пациента помещают в специальный изоляционный бокс с отрицательным давлением, снабжённый собственной закрытой системой вентиляции, что позволяет избежать воздушно-капельного распространения инфекции. При работе в боксе соблюдают строгий противоэпидемический режим.
Защитная изоляция для профилактики внутрибольничной инфекции. Защитная изоляция необходима больным с повышенной восприимчивостью к инфекционным заболеваниям (например, пациентам с нейтропенией). Больного помещают в одноместную палату (бокс) с приточно-вытяжной вентиляцией и обязательной фильтрацией и дезинфекцией воздуха для предотвращения инфицирования пищи (устойчивыми грамо-трицательными бактериями — овощей или Listeria — мягких сыров).
Типирование при внутрибольничной инфекции
Типирование применяют после определения вида возбудителей, а также для диагностики перекрёстной инфекции. Выбранный метод должен быть достаточно прост и воспроизводим, дающий схожие результаты, когда используется в других лабораториях. Различают следующие виды типирования:
• простое лабораторное типирование, проводимое при помощи фенотипических маркёров;
• серологическое типирование, основанное на определении антигенной структуры возбудителя (применяют для идентификации различных штаммов шигелл, сальмонелл и др.);
• фаготипирование — установление принадлежности выделенного бактериального штамма к определённому фаготипу, основанное на различной чувствительности к бактериофагам (различные бактериофаги лизируют определённые виды бактерий). Этот принцип лежит в основе фаготипирования стафилококков, некоторых штаммов возбудителей рода Salmonella и др.;
• колицинотипирование — некоторые бактерии продуцируют белковые антибиотики, такие как колицин, которые тормозят рост родственных микроорганизмов; этот метод может быть использован для типирования штаммов родов: Shigella и Pseudomonas;
• молекулярное типирование — применение различных рестриктаз, приобретающих характерную окраску при взаимодействии с геномной или плазмидной ДНК, а также с рибосомальной РНК. Одинаковые микроорганизмы будут иметь одинаковую окраску. Кроме того, возможно определение последовательности нуклеиновых кислот. Например, при мультилокусном секвенировании-типировании используют набор из семи облигатных генов, не кодирующих факторы вирулентности или патогенности, но являющихся маркёрами филогенетического родства.
В настоящее время молекулярное типирование приобретает всё большую популярность, вытесняя другие методы.
Стерилизация для профилактики внутрибольничной инфекции
Во время стерилизации (методом автоклавирования или облучения) происходит инактивация всех патогенных микроорганизмов. В автоклаве различные предметы (например, хирургический инструментарий и др.) обрабатывают горячим паром под высоким давлением, в результате чего происходит обеззараживание любого инфицированного материала. Для обработки хрупких и чувствительных материалов используют стерилизацию в специальных автоклавах с более низким давлением и температурой, в которые пар подают в смеси с формальдегидом.
Предметы одноразового использования (пластиковые катетеры, шприцы, протезы и др.) подвергают стерилизации у-излучением во время промышленного производства. Кроме того, при условии соблюдения временных нормативов для стерилизации инструментов используют альдегиды (глутаральдегид и формальдегид). Растворы, содержащие хлор (диоксид хлора), применяют вместо глутаральдегида для снижения токсического воздействия на людей, проводящих стерилизацию.
Дезинфекция для профилактики внутрибольничной инфекции
Дезинфекция — комплекс мероприятий, направленных на уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее важный этап дезинфекции — мытьё рук с мылом или очищающим средством. Дезинфицирующими называют химические средства, уничтожающие микробы или замедляющие их рост. Их используют в случаях, когда невозможно обеспечить полную стерильность (например, при обработке рук хирурга перед операцией) или после попадания биологических жидкостей (мочи, крови, кала) на различные предметы. Растворы, содержащие гипохлориты (гипохлорит натрия), эффективны в отношении вирусов. Кроме того, их применяют для обработки поверхностей.
Следует помнить, что гипохлориты обладают выраженными коррозийными свойствами. Растворы, содержащие йод и другие галогены, эффективно уничтожают бактерии (в том числе и спорообразующие), но отличаются сравнительно медленным действием. Обычно их используют для дезинфекции кожного покрова. Дезинфицирующие средства на основе фенола обладают выраженным антибактериальным эффектом. Их применяют для обработки поверхностей в больницах, лабораториях и др. Спирт (70% раствор) быстро уничтожает бактерии, грибы и вирусы. Его применяют для дезинфекции кожного покрова перед хирургическими операциями. Эффективным противобактериальным средством (особенно против стафилококков) считают хлоргексидин, который также применяют для обработки кожи.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Читайте также: