Лабораторный практикум микозы пчел

Обновлено: 19.04.2024

В указаниях разбираются наиболее сложные для самостоятельного изучения вопросы пчеловодства – правила работы и диагностирования патологических семей.

Медоносная пчела подвержена различным заболеваниям, многие из которых наносят значительный ущерб пчеловодству, приводя к снижению продуктивности и гибели пчелиных семей.

Успешное развитие пчеловодства немыслимо без знаний патологии медоносных пчѐл. Концентрация семей пчѐл на крупных пасеках, массовые передвижения (кочѐвки) пасек, обмен племенной продукцией, трудности изолирования пчѐл на местности и карантин могут приводить к широкому распространению возбудителей различных болезней среди этих насекомых. Распространению возбудителей способствуют также биологические особенности пчѐл: перелѐты пчѐл и трутней, слѐты роѐв, нападения на слабые семьи. Некоторые возбудители болезней других видов насекомых могут передаваться и пчѐлам. За последнее время установлены новые нозологические единицы: более десяти вирусов, спироплазмы (микоплазмы), заставившие по иному оценить причины возникновения пыльцевого токсикоза. Возникшая панзоотия варрооза вызывает необходимость изучать роль клещей в патологии пчѐл, и здесь тоже выявлен ряд новых заболеваний.

Многие заболевания пчѐл трудно дифференцировать. Механическое отделение расплода от взрослых пчѐл не даѐт целостного представления о роли той или иной группы этиологических агентов в патологи пчѐл.

Профилактика инфекционных заболеваний пчѐл в нашей стране в основном строится на применении лечебных препаратов. Без уничтожения возбудителей эти меры не могут привести к оздоровлению пасек, а только ослабляют заболеваемость и приводят к накоплению в мѐде и других продуктах пчеловодства антибиотиков и сульфаниламидных препаратов, что создаѐт опасность для здоровья людей и пчѐл.

Успех профилактики и лечения заболеваний пчѐл во многом зависит от правильного диагностирования болезни и выявления возбудителя. Профилактика инфекционных и паразитарных болезней зависит от санитарного состояния ульев, сотов, инвентаря, пасечных построек и самой территории точка. Важным этапом противоэпизоотических мероприятий является дезинфекция, эффективность которой зависит от того, насколько полно и своевременно будут обеззаражены все инфицированные объекты на неблагопо-

лучной пасеке и, следовательно, разорвана эпизоотическая цепь в звене передачи возбудителя инфекции.

ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИОЗОВ

ПРАВИЛА ОТБОРА И ПЕРЕСЫЛКИ ПАТМАТЕРИАЛА.

Для бактериологического, микроскопического, серологического, биологического, химического и других видов исследований берут пробы патматериала: живых пчел и их трупы; соты с расплодом, медом, пергой; засохшие корочки пчелиных личинок; испражнения или соскобы каловых масс; мазки гемолимфы и отпечатки мышц на предметных стеклах; воскоперговую крошку со дна ульев; насекомых паразитов и вредителей пчел.

Для установления причин заболевания пчел в ветеринарную лабораторию посылают:

а) при гнильцовых болезнях — образцы сотов (сота) размером не менее 10*15 см с больными и погибшими личинками и куколками (в случае гибели незапечатанных личинок образец должен содержать неразложившиеся личинки); при подозрении на мешотчатый расплод образцы сотов с пораженным расплодом консервируют 50 %-ным раствором глицерина;

б) при подозрении на болезни, проявляющиеся септицемией (септицемия, сальмонеллез, гафниоз, колибактериоз) — по 50 живых пчел от каждой больной пчелиной семьи;

в) при подозрении на вирозы и спироплазмоз — по 50 законсервированных в 50%-ном глицерине пчел, проявлявших признаки заболевания;

г) при подозрении на варрооз: зимой — трупы пчел и сор со дна ульев в количестве не менее 200 г с пасеки; весной — пчелиный расплод на соте с нижнего края размером З*15 см и сор со дна улья в указанном выше количестве; летом и осенью — запечатанный расплод (пчелиный и трутневый) в указанном количестве или 50—100 экземпляров живых внутриульевых пчел от 10 % подозреваемых в заболевании пчелосемей пасеки;

д) при других болезнях — по 50 живых пчел с признаками или столько же трупов свежего подмора из подозреваемых семей; при обследовании (паспортизации) пасек берут такое же количество пчел от 10 % семей пасеки; е) при подозрении на отравление — 400—500 трупов пчел, 200 г откаченного незапечатанного меда и 50 г перги в соте от 10 % пчелиных семей с характерными признаками поражения, а также 100—200 г зеленой массы

растений с участка, посещаемого пчелами; ж) для обнаружения в меде пади или возбудителей болезней — 100 г,

пестицидов — 200 г меда; воска и вощины — от каждой партии не менее 100 г.

Патологический материал упаковывают и пересылают:

живых пчел в стеклянной банке, которую обвязывают двумя слоями марли или ткани;

образцы сотов с расплодом и сотовые рамки — в фанерном или деревянном ящике без обертывания сотов бумагой, отделяя их друг от друга и от стенок ящика деревянными планками;

больных живых пчел на закрепленных сотовых рамках с кормом в количестве, достаточном на время пересылки, в фанерном или деревянном ящике;

погибших пчел и крошку со дна ульев—в бумажных пакетах; мед — в стеклянной посуде, плотно закрытой крышкой; воск и вощину— в целлофановом пакете.

При консервации материала в глицерине пчел и образцы сотов помещают в чистые стеклянные банки с плотно закрывающейся крышкой и заливают 50 %-ным глицерином; банки обертывают мягкой тканью, помещают в деревянный ящик.

Подмор пчел, зеленую массу для исследования на отравление упаковывают в чистые мешочки из целлофана, полиэтилена, бумаги, материи и помещают вместе с сотами в ящик.

Вредителей и паразитов пчел, имеющих жесткий покров, отправляют в картонной коробке на вате; имеющих мягкий покров — во флаконе с 10 %- ным раствором формалина, 80 %-ном спирте или меде. Картонные коробки или флаконы упаковывают в фанерный или деревянный ящик.

Отправляемый патматериал сопровождают письмом ветеринарного специалиста, производившего отбор и упаковку проб. В нем указывают наименование хозяйства (фамилию, имя, отчество владельца пасеки), адрес, номер улья, количество проб, характерные признаки заболевания и цель исследования. При подозрении на отравление прилагают акт или копию акта комиссии, обследовавшей пасеку и отобравшей материал, в сопроводительном письме конкретно указывают, на какой ядохимикат следует провести исследование. Сопроводительное письмо должно иметь штамп ветеринарного учреждения.

Срок доставки проб на исследование в лабораторию не должен превышать 1 суток с момента отбора материала.

Ветеринарная лаборатория регистрирует поступивший материал в соответствующем журнале, а результаты исследований сообщает в хозяйство. При установлении возбудителя болезни определяют чувствительность выделенного микроорганизма к антибиотикам и рекомендуют применение наиболее активного антибиотика. После исследования патматериал сжигают.

ПОРЯДОК ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТМАТЕРИАЛА.

Каждый образец патматериала обрабатывают по следующей схеме:

а) наружный (визуальный) осмотр сотов и подмора пчел; б) осмотр и отбор больных личинок и пчел под лупой; в) вскрытие личинок и взрослых пчел; г) микроскопия нативных мазков; д) посевы на питательные среды; е) изучение культурально-биохимических свойств; ж) в сомнительных случаях изучают серологические и патогенные свойства некоторых изолированных культур.

Результаты исследований регистрируют в специальном журнале.

АМЕРИКАНСКИЙ ГНИЛЕЦ . Диагноз на американский гнилец ставят на основании характерных признаков поражения расплода и результатов микроскопических, бактериологических и серологических исследований. Предварительно заключение дают в первый день исследования на основании осмотра сота и обнаружения характерных спор Вас. larvae в мазках из патма-

териала. Окончательный диагноз ставят на 3—5 день исследования после получения чистой культуры Вас. larvae.

При микроскопии мазков (увеличение 900) обнаруживают грамположительные палочки Вас. larvae длиной 1,5—6 мкм и шириной 0,5—0,8 мкм; они располагаются цепочками в виде стрептобацилл.

Для выращивания возбудителя американского гнильца пчел используют следующие среды.

1. Среда Томашеца (или мясо-пептонный сывороточный агар): ее готовят добавлением к расплавленному и охлажденному до 45—50 °С мясопептонному агару (рн 6,8—7,0) 10 % стерильной лошадиной сыворотки. Агар-агар используют только растительный (нельзя брать для этой цели агар с рыбьим гидролизатом, так как на нем Вас. larvae не растет).

2. Мясо-пептонный сывороточный бульон: к обычному (лучше приготовленному из отвара конского мяса) мясо-пептонному бульону (рН 6,8— 7,2) добавляют 10 % стерильной лошадиной сыворотки.

3. Яичный агар и бульон Уайта: свежее яйцо протирают ватным тампоном, смоченным этиловым спиртом, и обжигают на огне, затем стерильно вскрывают; отделяют белок, желток выливают в колбочку с 70 мл стерильной воды и тщательно смешивают. К 5 мл расплавленного и охлажденного (45—50 °С) МПА, или МПБ, в пробирке добавляют стерильно по 1 мл эмульсии желтка и круговыми движениями пробирки между ладонями рук тщательно смешивают агар или бульон с желтком. Перед посевом среды выдерживают двое суток в термостате для определения стерильности.

4. Кровяной агар Цейслера: 3 %-ный мясо-пептонный агар (рН 7,2— 7,4), приготовленный из растительного агар-агара, разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют в автоклаве 20 мин при 120 °С; по мере необходимости агар в колбе расплавляют в водяной бане, а затем охлаждают до 42—45 °С. К агару добавляют 10 мл 20 %-ного стерильного раствора глюкозы и 15— 20 мл стерильной свежевзятой или дефибринированной крови овцы (лучше лошади). Смесь осторожно перемешивают (избегать образования пены!) и разливают в стерильные чашки. Для подсушивания среды чашки выдерживают

в термостате 4—6 ч. Дефибринированную кровь можно заготавливать впрок (на 10—15 дней), сохраняя еѐ в стерильных условиях по 20—25 мл в колбочках.

5. Кровяная среда Тошкова: к обычному или содержащему желточную эмульсию мясо-пептонному агару или бульону добавляют стерильно 5—10 % дефибринированной крови лошади или овцы.

6. Среда Майкла: дрожжевой экстракт — 10 см3, пептон — 10 г, растительный агар-агар — 15 г, тиамин — 0,1 мг, дистиллированная вода — 1 л, рН — 6,8. Экстракт дрожжей готовят из 100 г измельченных хлебных дрожжей в 1 л водопроводной воды, смесь тщательно перемешивают и кипятят 30 мин, затем отстаивают, фильтруют в горячем состоянии через 3 слоя марли и оставляют до просветления. Экстракт в этот же день употребляют для приготовления среды или добавляют к нему 1 % хлороформа, что позволяет сохранять его в холодильнике до месяца.

Получить чистую культуру Вас. larvae на плотной питательной среде из отдельных клеток возбудителя трудно. Поэтому на поверхность плотной питательной среды необходимо вносить как можно больше гнильцовой массы.

Через 48—74 ч на дне пробирки заметен хлопьевидный осадок в виде ваты, легко разбивающийся при встряхивании в равномерную муть.

Наряду с типичными R-формами колоний встречаются и диссоциированные от действия бактериофага и других факторов атипичные RSформы (переходные) с гладкими краями, с единичными нитевидными отростками или колонии S-формы круглые, выпуклые, с ровными краями и гладкой поверхностью.

При просмотре мазков из атипичных колоний палочки Вас. larvae бывают короткими и толстыми, они утрачивают способность располагаться цепочками, иногда встречаются уродливые формы палочек — извитые, вздутые и др.

Биохимические свойства выделенных штаммов Вас. larvae изучают путем выращивания на обычных питательных средах пестрого ряда, к которым добавляют 10 % стерильной лошадиной сыворотки. Все типичные штаммы Вас. larvae медленно (6—10 дней) расщепляют глюкозу и левулезу с образованием кислоты, но без газа, не сбраживают арабинозу, ксилозу, лактозу, рамнозу, мальтозу, сахарозу, галактозу, маннит, дульцит, сорбит, инозит. Не образуют индола, аммиака, сероводорода (отдельные штаммы слабо выделяют сероводород и аммиак). Разжижают желатину, вызывают свертывание и пептонизацию молока, не гидролизуют крахмал, нитраты восстанавливают, не обладают гемолитическими свойствами, каталазный тест — отрицательный.

Серологическую диагностику проводят с помощью реакции преципитации, используя ларвейную преципити-рующую сыворотку или реакцию капельной агглютинации.

Антиген для реакции преципитации готовят из десяти погибших от гнильца личинок, которых помещают в ступку, добавляя десятикратное количество физраствора (15 мл для взрослых и 7 мл для 3—4-дневных личинок), тщательно растирают, суспензию нагревают на кипящей водяной бане 15 мин и фильтруют через асбестовую вату до получения прозрачного экстракта. Антигеном для реакции преципитации может служить и прозрачный фильтрат выросшей культуры, профильтрованной через асбестовую вату. Фильтрат разливают по 0,1—0,2 мл в уленгутовские пробирки и подслаивают такое же количество сыворотки (сыворотки и фильтраты должны быть

прозрачными). Реакция преципитации протекает при комнатной температуре в течение 15 мин. При положительной реакции через 0,5—2 мин образуется тонкое, нежное, голубовато-матовое кольцо.

Реакцию агглютинации ставят на предметном стекле: на один его конец пастеровской пипеткой наносят каплю агглютинирующей сыворотки, разведенной физраствором (0,1 мл сыворотки + 7,9 мл физраствора), а на другой конец — каплю физраствора. В обе капли вносят такое же количество антигена и хорошо смешивают. При положительном результате в течение 10—20 мин в капле с ларвейной сывороткой жидкость просветляется и наблюдается мелкозернистая агглютинация (появляются белые крупинки). В контрольной капле жидкость остается мутной. Агглютинация в капле с ларвейной сывороткой свидетельствует об американском гнильце.

Фагодиагностику осуществляют с применением ларвейного бактериофага. На поверхность чашки Петри с мясопептонным сывороточным агаром шпателем засевают две капли суточной бульонной культуры и наносят в центр каплю бактериофага. Чашку наклоняют для стока бактериофага, а затем переворачивают ее кверху дном и ставят в термостат на 24—48 ч. В положительном случае на месте протекания капли фага образуется полоса, свободная от роста микробов.

Патогенные свойства устанавливают при заражении пчелиного расплода или кроликов. В стерильные бактериологические чашки, на дне которых уложен слой ваты, покрытой двумя слоями стерильной марли, вносят по 10 мл теплого корма: приготовленного из перги — 50 г, пекарских дрожжей — 5 г, воды водопроводной — 100 мл. Смесь нагревают в водяной бане 45 мин при температуре 100 °С и после охлаждения добавляют равный объем не-

Микотические заболевания пчел наносят определенный ущерб пчеловодству в результате заболевания взрослых особей расплода и инфицирования ульев. Особую опасность представляют микотические заболевания при неудовлетворительных условиях содержания пчелиных семей и снижении устойчивости организма пчел к воздействиям внешних факторов. В этих случаях заболевает большое количество особей и отмечается значительный отход пчел. Наиболее распространенными являются следующие микозы: аспергиллез, меланоз и перецистисмикоз. Несомненно, что и другие грибы способны поражать пчел. Этот вопрос требует дальнейшего изучения.

АСПЕРГИЛЛЕЗ ПЧЕЛ

Аспергиллез (каменный расплод, аспергилломикоз, каменная черва) — грибковое заболевание личинок пчел всех возрастов, куколок, а иногда и взрослых особей, вызванное аспергиллами. Поражение расплода пчел регистрируется во многих странах. Болезнь опасна для человека (рис. 58).

Этиология. Основным возбудителем болезни является широко распро-страненный в природе гриб Aspergillius flavus, а также и другие разновидности Aspergillius niger, Aspergillius fumigatus. A. flavus в естественных условиях развивается на растениях и различных органических мертвых субстратах.

В улей споры A. flavus заносят пчелы вместе с пыльцой и нектаром. В сотах при благоприятных условиях температуры (25-45*С) и влажности (25-100%) они прорастают и развивается гриб. В организм расплода пчел гриб попадает с кормом. Образующийся токсин оказывает патогенное действие на нервную и мышечную ткань личинок, куколок пчел и вызывает их быструю гибель.

Аспергиллез пчел в основном проявляется в конце зимы или весной. Отдельные вспышки заболевания возможны летом и осенью. Распространение болезней и частота заражений зависит от патогенности и токсичности гриба, наличия оптимальных условий в ульях для его развития и резистентности насекомых. Чаще всего ас- пергиллезом болеют слабые пчелиные семьи, как следствие недостаточного кормления и плохого утепления ульев на зиму.

Личинки пчел.

пораженные грибом A. flavus. в момент образования спорипошении (по A. Brocket)


Больные личинки приобретают желтовато-красноватый цвет и в течение 10-12 дней погибают. После гибели сморщиваются, становятся тусклыми и твердыми. На поверхности тела гриб образует споры, и в зависимости от его вида личинки становятся желтовато-зелеными или черноватыми. Они плотно прикрепляются к стенкам ячейки сот.

Диагноз устанавливают на основании клиническо-эпи- зоотологических данных и результатов микологического исследования. При этом обращают внимание на условия, способствующие возникновению заболевания (высокая влажность в ульях, сырость, прохладная погода). Если погибшие пчелы и расплод твердые, вытянутые в длину ячеек сот и с поверхности покрыты желтовато-зеленым пылящим налетом, то это дает основание подозревать аспергиллез.

Для подтверждения диагноза в ветеринарную лабораторию посылают соты с больным и погибшим расплодом, пчелами. В лаборатории соскобы с трупов личинок и пчел подвергают микроскопии для выявления спороно- шений соответствующих видов Aspergillius. Затем кусочки трупов, а также кишечника высевают в бактериологические чашки на агар Чапека. Посевы выдерживают в термостате при 27-28TJ. Через 3-4 дня на агаре заметны желто-зеленые зернистые колонии с воздушным мицелием по периферии. Многочисленные канидиеносцы имеют округлые конечные головки размером 10-30 мкм, на вершине которых расположены стеригмы с бесцветными округлыми конидиями.

Лечение аспергиллеза пчел не разработано.

Профилактика и меры борьбы. С целью профилактики аспергиллеза ульи со здоровыми семьями размещают в сухих местах с солнечной стороны и на период отсут ствия медосбора обеспечивают доброкачественным кормом. Не следует допускать влажности в зимовнике. На зиму семьи обеспечивают доброкачественным и полноценным кормом. Гнезда сокращают и хорошо утепляют.

При возникновении аспергиллеза соты с пораженным расплодом удаляют, а потом перетапливают. Пчел переселяют в сухие, чистые, продезинфицированные ульи и подкармливают доброкачественным медом или сахарным сиропом с содержанием 17-19% воды. Ульи, рамки, инвентарь дезинфицируют огнем паяльной лампы после механической очистки и удаления прополиса и воска. Соты можно обеззараживать парами и 3-5%-ми растворами формальдегида. Почву на неблагополучных пасеках обжигают огнем паяльной лампы и дезинфицируют осветленными растворами хлорной извести.

Осуществляя меры борьбы с аспергиллезом пчел, необходимо защищать глаза специальными очками, а нос и рот прикрывать влажной повязкой.

пчелы

Микозы наносят значительный экономический ущерб пасекам, снижая продуктивность пчелиных семей на 50–60%. Их значительное распространение, по мнению большинства исследователей, связано с нарушением равновесия нормальной микрофлоры в пчелиной семье, которое вызвано бесконтрольным применением антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов. Факторы, способствующие развитию этих заболеваний, — резкие колебания температуры и повышенная влажность воздуха.

Как правило, оздоровить семьи пчел за один сезон не удается. Целесообразно после второго-третьего курса лечения заменить лекарственные средства другими, еще не используемыми на пасеке.

Наиболее часто встречаются такие заболевания, как аскосфероз и аспергиллез. Инфекционное заболевание пчелиных семей — аскосфероз (известковый расплод) сопровождается поражением трутневых, пчелиных и маточных личинок и куколок; снижается на 20–40% продуктивность пчелиных семей. В течение последних 20–25 лет аскосфероз широко распространился на пасеках ряда стран.

Давно замечено, что от этой болезни особенно страдают отводки, слабые семьи и нуклеусы. Известно также, что деление сильной здоровой семьи на две может привести к заболеванию обеих семей аскосферозом.

Болезнь чаще всего появляется в весенне-летний период, но может возникать на протяжении всего лета. Максимума своего развития она достигает в июне—августе. Развитию способствуют охлаждение гнезда, холодная влажная погода, чрезмерная влажность в ульях, недостаточная вентиляция. Одна из причин возникновения аскосфероза — бесконтрольное применение антибиотиков и акарицидных препаратов, вызывающих дисбактериоз, нарушение обмена веществ в организме и ослабление естественной резистентности пчел.

Щавелевая и в меньшей степени молочная кислота за счет увеличения влажности и кислотности, обработанных ими субстратов, при определенных условиях могут оказывать стимулирующее действие на рост и развитие гриба, а также изменять чувствительность расплода пчел к заражению. В связи с этим на неблагополучных по аскосферозу пасеках не следует применять щавелевую, молочную кислоты, и прежде всего, для борьбы с варроатозом.

К появлению аскосфероза приводит использование цветочной пыльцы или перги, полученных на пораженных аскосферозом пасеках. При этом не было ни одного случая массового поражения пчел этим заболеванием там, где нет варроатоза.

Самки клеща варроа, питаясь гемолимфой личинки, травмируют ее кожные покровы, ослабляют и значительно снижают ее устойчивость, а также способствуют проникновению спор гриба через ранки. Клещ способен сохранять в своем теле и активно переносить болезнетворные для пчел вирусы и бактерии. Есть сведения, что семьи, содержащиеся преимущественно на темных сотах, примерно в 7 раз чаще поражаются аскосферозом, чем на светлых.

К заболеванию особенно восприимчивы 3–4-дневные личинки. Вначале они располагаются вдоль ячеек, в то время как в норме до запечатывания имеют форму кольца на дне. Трутневый расплод поражается в первую очередь. Взрослые особи чувствуют себя угнетенными.

Заражение личинок спорами происходит в основном через внешние покровы и реже при попадании спор с кормом в кишечник. В первом случае на теле личинки они прорастают, образующийся мицелий через кутикулу проникает в глубь личинки, во втором — мицелий проникает через кишечник наружу. Прорастая через ткани и органы личинки, мицелий активно растет, разрушает их, вызывая гибель личинок, которые превращаются в плотную сухую обызвествленную массу белого или грязно-белого цвета — мумию.

Если личинку поразил однополый мицелий, то мумия будет белая, а если мицелий обоеполый и он образовал плодовое тело, то цвет ее грязно-коричневый или грязно-серый.

Ячейки с личинками 3–4-дневного возраста не запечатываются. Если заражение произошло позднее этого возраста, то они могут быть запечатаны. В этом случае мицелий прорастает через крышечки.

Болезнь встречается в острой и скрытой формах. При скрытой возбудитель находится в меду, перге, сотах, кишечнике личинок. Большой гибели трутневого или пчелиного расплода при этой форме не бывает. Нередко аскосфероз отмечают как вторичную инфекцию при европейском гнильце, мешотчатом или застуженном расплоде.

Переходу скрытой формы в острую способствуют продолжительная влажная погода, ослабление семьи, большое количество трутневого расплода, плохо обогреваемого пчелами, недостаточное утепление гнезд.

Возбудитель аскосфероза обладает значительной устойчивостью во внешней среде. Споры могут длительное время сохраняться в семье, не теряя жизнеспособности в течение 4–15 лет. В пустых ульях, на сотах, пчеловодном инвентаре, а также в меду и перге при хранении их в пасечных условиях возбудитель остается жизнеспособным в течение четырех лет. При температуре –27°С гриб сохраняется в течение года. Его споры устойчивы к действию химических веществ: 1%-ный раствор формальдегида убивает их спустя 20 мин, 1%-ный раствор перекиси водорода — через 30 мин, 3%-ный раствор хлорной извести — через 10 мин.

Споры аскосфероза устойчивы к воздействию сернистого ангидрида и паров формалина.

Мед и пергу больных семей нельзя использовать для подкормки пчел. Исключена возможность получения от них пыльцы, так как она может служить источником распространения возбудителя в благополучных регионах.

Взрослые пчелы, извлекая погибших личинок из ячеек, выгрызают их из сотов, в результате чего на поверхности отстроенной вощины образуются углубления диаметром 3–5 мм и более. На соседнем соте пчелы начинают оттягивать ячейки с целью сокращения расстояния между ними. На поверхности таких сотовых рамок наблюдаются чередования возвышений и углублений, что придает сотам холмистую поверхность.

Взрослые особи аскосферозом не болеют, однако могут быть носителями возбудителя. В их пищеварительном тракте обнаруживают споры и мицелий гриба, которые при кормовых связях пчел распространяются внутри семьи. Очищая ячейки от погибших личинок, пчелы загрязняют части своего тела спорами гриба и механически распространяют возбудителя как внутри своего гнезда, так и в другие семьи. Заражение идет через мед, расплод, соты, пчел и трутней, маток больных семей, а также вредителей и паразитов. Пчеловод, не соблюдающий правила гигиены, также может служить переносчиком болезни.

Диагноз устанавливают на основании клинических исследований и по результатам микроскопии мицелия, взятого с больных и погибших личинок. Для исследований в лабораторию направляют кусочки сотов размером 10x15 см или 10–15 личинок с признаками заболевания.

Аспергиллез (каменный расплод) — болезнь, вызывающая гибель и высыхание расплода и взрослых пчел. Опасен для человека и животных.

Грибы-аспергиллы — строгие аэробы, свет на их рост влияния не оказывает. Они имеют ферменты, разлагающие белки, полисахариды (крахмал, гликоген), дисахариды (лактоза, сахароза, мальтоза) и моносахариды (глюкоза, фруктоза, галактоза), а также алкоголь, образуя в большом количестве кислоты.

Аспергиллы выделяют стойкие к нагреванию токсины, действующие на нервную и мышечную ткани; введение их в кровь теплокровных животных и насекомых вызывает судороги, а затем смерть.

Возбудитель болезни погибает при нагревании до 60°С в течение 30 мин. Быстро разрушается сулемой в разведении 1:1000; 2–5%-ным раствором фенола и 5%-ным раствором формалина.

Аспергиллы широко распространены в природе. Естественным местом их обитания является почва. Они живут и размножаются на различных органических мертвых субстратах, а также на растениях, в том числе в тычинках цветов и нектарниках. В улей аспергилл заносят пчелы с нектаром и пыльцой, где при наличии повышенной влажности они развиваются на сотах, в перге и в погибших насекомых. Способствуют возникновению болезни высокая влажность, сырая, дождливая погода. Наиболее часто заболевание встречается на пасеках, находящихся в затененных местах и на сырой почве. Болезнь протекает преимущественно весной в отдельных семьях и развивается при обильном приносе пчелами пыльцы в улей. Взрослые особи, пораженные грибом, становятся возбужденными, быстро двигаются, затем гибнут.

Аспергиллез поражает расплод всех возрастов, в том числе и куколок. Они и куколки сморщиваются, твердеют, их сегментация исчезает, окраска тела тускнеет, приобретая желтоватый оттенок, а затем они становятся желтовато-зелеными или черными в зависимости от вида грибов. У взрослых личинок раньше высыхает обращенная кверху боковая поверхность, и в результате труп приобретает изогнутую форму. Мицелий гриба прорастает через кожицу личинки в виде кольца позади головы, образуя своеобразный воротник. В течение 1–2 дней гриб распространяется по хитиновому покрову и формирует белую оболочку, состоящую из мицелия. При удалении пчелами плесени с высохших личинок (мумий) они становятся более светлыми, а если они покрывают ее прополисом, она становится бурой. При сдавливании брюшка больной пчелы между пальцами ощущается затвердение. Брюшко становится еще более твердым через несколько часов после смерти.

Поскольку аспергиллез опасен для человека и животных, при работе с больными семьями необходимо защищать глаза специальными очками, а рот и нос — влажной марлевой повязкой, чтобы споры не попали на слизистые оболочки. Пораженные соты из гнезда следует вынимать осторожно, лучше в тихую безветренную погоду.

Аскосфероз (перицистоз, перицистизмикоз, известковый расплод, меловой расплод) – инфекционная болезнь медоносных пчел, пчел-листорезов и шмелей.

Возбудители – сумчатые грибы рода Ascosphaera. Ascosphaera apis имеет септированный разнополый мицелий. Мицелий в местах соприкосновения выпускает короткие боковые гифы, на которых образуются половые органы. Размножается гриб путем слияния ядер мужского и женского мицелиев с последующим делением и образованием многочисленных спор, объединенных в споровые шары, которые заключены в цисту. Циста со споровыми шарами и спорами внутри их называется плодовым телом. В споровых шарах содержится по 50% мужских и женских спор. Споры сильно преломляют свет, имеют тонкую оболочку, почти бесцветны, в массе имеют слабо-коричневый цвет, несколько эллипсовидны. Размер (1—2) х (2—3,5) мкм.

Размер плодовых тел 49,6—82,1 мкм (в среднем 65,9 мкм). Температурный оптимум для образования плодовых тел 30 °С. Гриб растет на сусле-агаре, картофельно-глюкозном агаре и сре­де Сабуро.

Споры возбудителя отличаются большой устойчивостью во внешней среде. В пустых ульях, на сотах, инвентаре, в меде и пер­ге возбудитель сохраняет жизнеспособность в условиях пасеки 4 года. Устойчив он и к действию дезинфицирующих веществ.

Возбудители аскосфероза пчел-листорезов слабо изучены в биологическом и таксономическом отношении. Некоторые иссле­дователи склонны считать основным возбудителем аскосфероза пчел-листорезов гриб Ascosphaera aggregata: споровые шары у это­го вида гриба имеют размер 12—22 мкм, а споры —(1,5— 2,5) х (4,5—6 мкм).

Ascosphaera major относится к гетероталличным грибам, то есть при своем росте образует мужской и женский мицелий. Оболочка спороцист у Asc. major с нечеткими пятнами, размер цист 60— 280 мкм, споровых шаров 9-24 мкм, спор чичевидных или пузыреобразных (1 —1,5) х (3—4) мкм. Грибы растут при 25-28 °С на обычных, используемых в микологии средах с добавлением глюкозы. Оптимальный рост Asc. apis происходит при 10—20% глю­козы, a Asc. major — при 20—30 %.

Эпизоотологические данные. Впервые заболевание было описано в 1878 г. В настоящее вр емя оно встречается почти на всех континентах земного шара.

Источником заболевания служат больные пчелиные семьи. За­болевание чаще регистрируют на пасеках, размещенных в сырых низких местах с бедной кормовой базой, при купле-продаже ма­ток, пчелопакетов и пчелиных семей. Часто заболевание возника­ет на пасеках тепличных хозяйств. Это связано с использованием для подкормки инфицированной возбудителем пыльцы и благо­приятными условиями для развития возбудителя: высокая темпе­ратура и влажность, ослабленные пчелиные семьи.

Быстрому развитию возбудителя в пчелиных семьях способ­ствует необоснованное применение различных антибиотиков, что приводит к нарушению обмена веществ в организме пчел и резко­му снижению их резистентности.

Широкое распространение варрооза на пасеках приводит к снижению резистентности пчелиных семей. Применение раствора кислот часто создает благоприятные условия для развития возбу­дителя аскосфероза в пчелиных семьях.

Патогенез. Пчелы заражаются спорами гриба Ascosphaera apis через поверхность тела или с кормом. В первом случае на теле личинки из спор образуется мицелий и проникает через кутикулу. Во втором случае мицелий разрушает перитрофическую мембра­ну, эпителиальные клетки кишечника, лизируя ядра и цитоплаз­му. В дальнейшем отмечают поражение эноцитов и жирового тела. В организме личинки резко увеличивается количество эноцитов. В ядрах жировых клеток идет некробиоз с дальнейшим разруше­нием их. Наблюдается гипертрофия мальпигиевых сосудов. Мице­лий гриба поражает все ткани, пронизывает тело личинки и ин­тенсивно размножается на ее поверхности. Личинки высыхают и превращаются в плотную сухую массу белого или грязно-белого цвета. Основная масса расплода гибнет после запечатывания яче­ек в период начала прядения кокона и последней личиночной линьки.

Клинические признаки. Инфицированные Asc. apis личинки в начале заболевания становятся желто-белыми, потом светло-желтыми, мягкими, тестообразными, блестящими. В даль­нейшем они покрываются белым грибным мицелием, который заполняет свободное пространство ячеек. Мицелий толстым слоем нижнюю часть личинок, слабее – спереди, и остается свободной от него подсохшая головная часть. Мумии личинок, объем которых уменьшается, становятся твердыми.

Вследствие разнополости гриба различают две картины заболевания. Если в ячейке имеется один из полов с проросшим мицелием, то плодовые тела не образуются и цвет личинки остается белым или желто-белым.

В случаях попадания в ячейку женского и мужскою мицелия на поверхности и внутри личинки образуются цисты, которые придают мертвой личинке, обычно погибающей в стадии предкуколки, грязно-коричневый цвет. Возбудитель поражает в первую очередь трутневый расплод предположительно в связи с тем, что влажность и температура на краю гнезда (30 °С) благоприятнее для развития гриба, чем в расплодной части. Инфицированные ли­чинки размешаются беспорядочно между заболевшим расплодом и создают впечатление здоровых. Больные предкуколки лежат му­мифицированными в открытых, распечатанных пчелами ячейках или еще не распечатанных, крышечки которых в большинстве нормальные, однако иногда пятнистые или несколько провален­ные.

На стационарно-неблагополучных пасеках расплод может по­ражаться на 60—70 %. На дне улья и предлетковой площадке скап­ливается большое количество выброшенных пчелами трупов, в ре­зультате пчелиная семья резко слабеет.

При аскосферозе пчел-листорезов в ячейке может присутство­вать или отсутствовать корм. Между кормом и мумифицирован­ной твердой личинкой сероватого цвета образуется пространство, часто заросшее мицелием гриба. На ранней стадии поражения на теле погибшей личинки имеются коричневые или черные пятна.

При появлении заболевания у шмелей отмечают плохое разви­тие семей, снижение активности по опылению растений. При об­следовании гнезд шмелей обнаруживают поражение расплода и мумии куколок серовато-белого цвета. Гибель куколок рабочих особей, трутней шмелей, а также маток составляет 20 % и более. Из погибших куколок до 80 % оказываются мумифицированными. Мумии находятся на различных уровнях гнезда, но ближе к по­верхности их количество увеличивается. При искусственном раз­ведении было отмечено наличие мумий в нижних слоях гнезда. Это говорит о том, что болезнь появляется и до выноса гнезд в теплицы. Большая вероятность поступления возбудителя в гнезда шмелей с пыльцой, используемой для подкормки шмелей.

Диагноз. При диагностике заболевания у медоносных пчел учитывают эпизоотологические данные, клинические и патоморфологические признаки. Надежную диагностику можно провести только при микроскопическом исследовании мумий личинок, об­наружив там плодовые тела гриба Asc. apis. В поле зрения микро­скопа эти тела хорошо видны при исследовании свежего патоло­гического материала. У старых мумий оболочка цист большей частью лопнувшая и не содержит или содержит очень мало споровых шаров, которые также могут быть повреждены. В сомнительных случаях используют метод выделения чистой культуры посевом патологического материала на питательные среды.

Лабораторное исследование на аскосфероз у пчел-листорезов включает микроскопию патологического материала и выделение гриба Asc. aggregata в чистую культуру на специальных средах.

Для микроскопического исследования с поверхности тела по­раженной личинки берут небольшое количество грибного налета, помещают его на предметное стекло в каплю 50%-ного водного раствора глицерина и просматривают при малом увеличении мик­роскопа.

Для подтверждения диагноза выделяют чистую культуру гриба. Для этого используют 2%-ный сусловый агар или картофельно-декстрозный агар (200 г очищенного картофеля, 15 г декстрозы, 4 г дрожжей, 25 г агар-агара, 1 л воды).

Дифференциальный диагноз. При постановке дифференциального диагноза у пчел исключают аспергиллез и по­ражения перги. Необходимо отличать Asc. major от возбудителя аскосфероза медоносных пчел Asc. apis.

Профилактика. Пчелиные семьи размещают в сухих, хо­рошо защищенных от господствующих ветров местах, гнезда тща­тельно утепляют. Для повышения сопротивляемости пчелиной семьи аскосферозу и снижения обсемененности гнезда пчел и продуктов пчеловодства различными микроорганизмами на пасеках необходимо проводить ежегодное обновление сотов (не менее, а то и более 1/3 за сезон) за счет отстройки вощины. Исключают применение антибиотиков для стиму­ляции развития пчелиных семей. в соответствии с силой пчелиных семей следует поддерживать, особенно весной, зоогигиенические нормы в расширении гнезда; в зависимости от внешней температуры обеспечивать пчел хорошим утеплением, так как колебания температуры, особенно ее снижение, благоприятствуют развитию аскосфероза. Необходимо поддерживать в гнездах определенный запас кормов, не допуская его снижения до критического уровня. На течение аскосфероза оказывают положительное действие не только температура (особенно ее низкие значения) и влажность, но и отсутствие кормовых запасов, в частности прекращение или спад медосбора. При подкормке пчелиных семей используют пыльцу высокого качества.

При промышленном разведении шмелей для профилактики за­болевания следует:

тщательно подбирать хозяйства-поставщики пыльцы и контролировать все партии пыльцы на наличие гриба Asc. major;

хранить пыльцу в сухих помещениях, исключая ее загрязнение;

соблюдать ветеринарно-санитарные требования к помещени­ям, где разводят шмелей, особенно к термокамерам, и правила личной гигиены;

своевременно выявлять неблагополучные семьи (вскрытие и осмотр гнезд шмелей проводить в отдельном помещении).

Пыльцу, полученную из неблагополучных пасек, обеззаражи­вают раствором, содержащим 1 % тимола, 98,85 % ацетона, 0,1 % кипяченой воды и 0,05 % диметилсульфоксида. На 1 часть раствора берут 2 части пыльцы, перемешивают в плотно закрывающейся емкости и оставляют на 10 суток под вытяжной системой. После этого жидкость сливают, пыльцу помещают на противни, перемешивают до испарения раствора. Пыльцу используют для подкормки пчел.

Лечение. Приступать к лечению аскосфероза следует сразу же при появлении первых признаков заболевания, так как результативность принимаемых мер зависит от степени поражения расплода. Прогноз лечения при одновременном выполнении других ветеринарно-санитарных мероприятий (дезинфекция, замена маток и т.д.) может быть благоприятным для пчелиных семей со слабым поражением. Прогноз сомнительный и неблагоприятный при оздоровлении пчелиных семей со средней и сильной степенями проявления инфекции. При двух последних стадиях течения (иногда и при слабом поражении) рекомендуется провести (при наличии в природе поддерживающего медосбора) перегон пчел на вощину или продезинфицированные соты.

Установлено, что от длительного применения одного препарата на пасеке появляются популяции возбудителя аскосфероза, устойчивые к микоциду.

В связи с массовым распространением аскосфероза разработано большое количество препаратов, состоящих в ос­новном из полиеновых антибиотиков и имидолсодержащих со­единений, объединенных в группу азолов, а также растительных. Из антибиотиков заслуживают внимания препараты, в которые он входит: нистатин, аскопол, аскостат (комплексный препарат) и полисот. Для лечения пчел, больных аскосферозом, применяют нистатин. Лечебный корм дают из расчета 50 г теста (меда) на одну рамку или 0,5 л сахарного сиропа (1:1) на одну семью пчел, со­держащих 100 тыс. ME нистатина на одну рамку с пчелами. Хоро­шие результаты получают при использовании 10 г смеси, состоя­щей из 100 г сахарной пудры и 0,5—1 г нистатина. Ею опыляют рамки с пораженным расплодом трехкратно через 5 дней.

Аскопол представляет собой картонные пластины, содержащие в качестве действующего вещества нистатин. Препарат применя­ют в весенне-летний период из расчета 2 пластины на 10—12 ра­мок. Пластины на пчеловодной проволоке помещают в улей меж­ду расплодной и кормовой рамками с двух сторон и оставляют до полного разрушения их пчелами.

Препараты упакованы в герметические пакеты по 4 пластины в каждом.

Аскостат применяют в весенне-летний период. Его добавляют в медово-сахарное тесто из расчета 10 мл на 1 кг. После тщательного перемешивания его укладывают в гнездо сверху рамок из расчета 0,5 кг лечебного теста на одну семью пчел. Лечебные подкормки проводят 1—2 раза в зависимости от тяжести заболевания. Для по­вышения эффективности лечения и попадания препарата в рас­плод необходимо в лечебное тесто добавлять 10—20 % цветочной пыльцы (перги).

Полисот состоит из нистатина, пыльцы и ПАН (аминокислоты, микроэлементы, ферменты, витамины и другие биологически активные вещества). Его рекомендуют для стимулирования развития пчелиных семей, повышения их резистентности и лечения аскосфероза. Перед применением к 100 г препарата добавляют 50 мл кипяченой охлажденной воды и полученную лепешку размещают сверху рамок (для семьи силой 10—12 улочек). Через лечебную лепешку дают еще раз.

Из группы азолов в настоящее время используют апиаск, аскозол, микосан, аскоцин, унисан.

Апиаск применяют при появлении первых клинических признаков аскосфероза. Для этого 2,5 г препарата добавляют в теплого (35—40 °С) сахарного сиропа (1:4). Полученным раствором опрыскивают рамки с пчелами с обеих сторон из мелкодисперсионного опрыскивателя при расходе 10—12 мл на одну рамку. лечебные обработки повторяют 3—4 раза с интервалом в 6—7 дней до исчезновения клинических признаков.

Аскозол используют в весенний и раннелетний периоды. Для приготовления лечебного сиропа 1 мл препарата смешивают с 1 л теплого (35—40 °С) сахарного сиропа (1:1). Лечебный корм дают по 250—300 мл на одну семью пчел в течение 1—2 недель через день.

Летом аскозол применяют для опрыскивания пчел. Для приго­товления раствора смешивают 1 мл препарата с 500 мл теплого са­харного сиропа (1:4). Рамки с пчелами опрыскивают с обеих сто­рон из мелкодисперсионного опрыскивателя из расчета 10—12 мл на одну рамку. В зависимости от тяжести болезни обработки по­вторяют 3—5 раз через 2—3 дня.

Микосан и ларвасан представляют собой бумажные пластины, пропитанные лечебным составом и помещенные в полимерную упаковку. Препараты обладают широким спектром фунгицидного действия.

Для лечения пчелиных семей пластины со специальным кре­пежным устройством (можно использовать проволоку для навешивания рамок) помещают между рамками с расплодом из расче­та 1 полоска на 6 гнездовых рамок, занятых пчелами. Обработку повторяют 2—3 раза через 7 дней до исчезновения клинических признаков заболевания.

В отличие от других препаратов для лечения пчелиных семей использование пластин ведет к меньшему накоплению их в меде и других продуктах пчеловодства.

Аскоцин представляет собой прозрачную жидкость желтовато-коричневого цвета. Выпускают его в виде эмульсии.

Препарат применяют в весенне-летний период. Предваритель­но готовят рабочий раствор: содержимое одной ампулы (0,048 мл) растворяют в 30 мл теплой кипяченой воды. При лечении скарм­ливанием этот раствор добавляют в 2 л сахарного сиропа (1:1) и полученный лечебный сироп заливают в 1/3 ячеек нижней части рамок или в кормушки из расчета 60—70 мл на одну рамку, заня­тую пчелами. Препарат можно применять с медовым тестом или пыльцевыми лепешками.

При орошении рабочий раствор добавляют в 1,5 л сахарного сиропа (1:5), тщательно перемешивают и опрыскивают рамки с пчелами и расплодом из расчета 10—15 мл на одну рамку.

Унисан представляет собой эмульгируемый в воде концентрат препарата. Перед обработкой концентрат смешивают с теплой ки­пяченой водой или молочной сывороткой до получения равно­мерной эмульсии бледно-молочного цвета. Этой эмульсией обра­батывают всю пчелиную семью путем равномерного опрыскивания пчел и расплода при расходе 10—12 мл на одну рамку.

Норма расхода концентрата при опрыскивании 1-1,5 мл на 0,5 воды, при скармливании с сахарным сиропом 1 мл на 1 л сиропа (1:1) по 250 мл на одну семью. В зависимости от стадии заболевания проводят 2 -4 обработки через 7 дней.

ПАГП относят к хлорсодержащим препаратам широкого спектра действия. Ранней весной дают лечебный корм, состоящий из 2 мл препарата и 0,3 л теплого сиропа или 0,5 кг медового теста на одну пчелиную семью.

В теплое время пчел опрыскивают раствором. Для этого 2 мл препарата растворяют в 150 мл теплой кипяченой воде. Рамки в пчелами и расплодом опрыскивают из мелкодисперсионного оп­рыскивателя при расходе 10—12 мл раствора на одну рамку. Лечебные обработки проводят через 6—7 дней до исчезновения кли­нических признаков заболевания.

Дикобин Б представляет собой синтетическое антигрибковое средство. Препарат считается экологически чистым как для человека, так и для пчел. Его применяют в весенне-летний период при температуре 13—14 °С. Перед обработкой содержимое ампулы (1 мл) растворяют в 250 мл кипяченой воды и полученной смесью опрыскивают все рамки с расплодом и пчелами, расходуя 5-7 мл на одну рамку. Опрыскивают и стенки ульев. Лечебные обработки проводят 2—3 раза через 7 дней.

Используют препарат в весенне-летний период. Для этого к 1 л сахарного сиропа (1:1) добавляют 10 мл препарата и скармлива­ют, внося лечебный раствор в пустые соты или внутриульевые кормушки по 100—150 мл на одну улочку. Обработку проводят трехкратно с интервалом в 3 сут.

Для опрыскивания (аэрозольный метод) лечебный раствор го­товят перед обработкой, добавляя 6 мл препарата на 100 мл кипя­ченой воды. Приготовленным раствором опрыскивают все рамки улья с обеих сторон из мелкодисперсионного опрыскивателя, на­правляя факел аэрозоля под углом 45° и расходуя 10— 15 мл лечеб­ного раствора на одну рамку. Проводят три обработки через 3 сут.

При обработке пчелиных семей необходимо соблюдать меры предосторожности и не допускать попадания препаратов на тело и в организм лиц, проводящих обработку.

Перед лечением пчелиных семей рамки с сильно пораженным расплодом удаляют, больные семьи перегоняют в чистые, проде­зинфицированные ульи. Гнезда сокращают, утепляют; заменяют маток на здоровых молодых плодных. Одновременно дезинфици­руют освободившиеся ульи, рамки и пчеловодный инвентарь раз­решенным к применению дезинфектантом. Подмор и ульевый му­сор сжигают.

Список используемой литературы:

Читайте также: