Лецитиназная активность стафилококков выявляется на агаре

Обновлено: 27.03.2024

В препарате из чистой культуры видны грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде “виноградных гроздьев”. Могут встречаться единичные кокки или маленькие кучки.

2. Изучение мазков из гноя, окрашенных по Граму (зарисовать)

В мазке, на фоне клеточного детрита, окрашенного в розовый цвет, видны лейкоциты и грамположительные кокки, расположенные одиночно или небольшими кучками, не образующие капсул. Расположение кокков позволяет предположить длительность заболевания. Если заболевание свежее, то микробы располагаются внеклеточно, в более поздние сроки болезни можно наблюдать кокки, фагоцитированные лейкоцитами.

3. Изучение характера роста стафилококков на кровяном агаре (зарисовать)

Посев на кровяном агаре позволяет определить тип гемолизина, выделяемого стафилококками. Гемолитическая активность является одним из признаков патогенности стафилококков. Для приготовления кровяного агара, к 1,8 % МПА расплавленного и остуженного до 45–50 градусов добавляют 5% дефибринированной или свежевзятой крови животного (кролика, барана, крупного рогатого скота) или человека. После тщательного перемешивания агар разливают по чашкам. Гемолизин стафилококков вызывает растворение стромы эритроцитов, поэтому вокруг колоний стафилококков, обладающих гемолитической активностью, образуются светлые зоны гемолиза. Штаммы, образующие альфа-гемолизин, вызывают гемолиз кроличьих и бараньих эритроцитов, бета-гемолизин вызывает тепло-холодовой гемолиз только бараньих эритроцитов. Вокруг колоний стафилококков без гемолитической активности кровяной агар не изменен.

4. Изучение характера роста стафилококков на желточно-солевом агаре (ЖСА) (зарисовать)

Посев на желточно-солевом агаре проводят для определения лецитовителлазы (лецитиназы). Для приготовления ЖСА к 10% солевому агару, расплавленному и остуженному до 60 градусов, добавляют 10% желточной взвеси (1 желток асептично взбалтывают в 200 мл физиологического раствора), агар тщательно смешивают и разливают в чашки.

St.aureus образует на желточно-солевом агаре непрозрачные круглые, слегка выпуклые колонии золотистого или желтого цвета. Среда вокруг колоний мутнеет за счет расщепления липовителлина (комплекс жира и белка), содержащегося в желтке ферментом лецитиназой. В результате действия фермента от липовителлина отрываются жирные кислоты, степень дисперсности белка уменьшается, происходит преципитация его, что приводит к помутнению среды. Освобождение жирных кислот сопровождается образованием “радужного” ореола вокруг колоний (лецитиназоположительные стафилококки).

St.epidermidis на желточно-солевом агаре образует колонии белого цвета или лимонно-желтые с ровным краем, среднего размера. Среда вокруг колоний не изменена (лецитиназоотрицательные стафилококки).

5. Изучение характера роста стафилококков на молочно-солевом агаре (зарисовать)

St.aureus образует колонии золотистого цвета средних размеров, блестящие, выпуклые. St.epidermidis образует подобные колонии белого цвета. St. citreus (только как образующий пигмент) образует подобные колонии лимонно-желтого цвета.

6. Изучение лабораторной диагностики стафилококковых инфекций по схеме (зарисовать)

Основные методы микробиологического исследования:

Микроскопический метод. Метод основан на обнаружении стафилококков при микроскопическом исследовании мазков из материала, которые окрашивают по Граму. Под микроскопом изучают гной, отделяемое ран, слизь и налеты с миндалин и другой материал, содержащий большое количество микробов. Микроскопическое исследование крови не производят, так как кокки в мазках обнаружить не удается. Жидкий материал наносят на предметное стекло пипеткой или петлей. Густой материал растирают на стекле в капле воды, материал с тампона размазывают по стерильному предметному стеклу. В мазках обнаруживают грамположительные кокки среди лейкоцитов или внутри них. Отмечают степень обсемененности. Определить вид кокков в мазке не всегда удается, поэтому микроскопическое исследование носит ориентировочный характер. Но даже обнаружение в материале типичных по морфологии стафилококков не позволяет поставить диагноз инфекции, потому что присутствие стафилококков в исследуемом материале не всегда является доказательством его этиологической роли, по морфологии невозможно отдифференцировать патогенные стафилококки от непатогенных. Поэтому наряду с микроскопическим исследованием обязательно проводят бактериологическое исследование.




Бактериологический метод. Бактериологический диагноз основан на выделении чистой культуры стафилококка путем посева и определения его патогенных свойств. Этот метод используется также для установления источника инфекции факторов передачи инфекции, определения схемы антибактериальной терапии, ее эффективности, контроля за лечением и эпидемическим режимом в лечебных учреждениях. Важным условием бактериологической диагностики является определение качественных и количественных критериев содержания патогенного стафилококка.

Исследование гноя (слизи из носа или зева, налета)

Для посева материала выбирают необходимые питательные среды. Стафилококки к питательным средам неприхотливы и способны расти на МПА. Но для повышения высеваемости и возможности провести количественный учет и надежно отличить патогенные стафилококки от непатогенных используют элективные питательные среды. В качестве элективных сред используют молочно-солевой, желточно-солевой агар или молочно-желточно-солевой агар. Элективность этих сред обеспечивается высоким содержанием хлорида натрия (6,5–10%), добавленное молоко позволяет определить цвет образуемого пигмента, а яичный желток – выявить лецитовителлазную (лецитиназную) активность, которая является одним из факторов патогенности стафилококков.

Для посева материала используют также кровяной агар, который дает возможность определить наличие пигмента и гемолитическую активность. Однако нужно помнить, что результат исследования (наличие гемолитической активности) зависит от вида крови, ее концентрации, густоты крови, присутствия и характера сопутствующей флоры. Поэтому использование кровяного агара рекомендуется для первичного посева материала, не содержащего другой микрофлоры.

Для оценки обсемененности производят количественный посев материала, готовя из него разведения, и высевают по 0,1 мл из разведений десять во второй, десять в четвертой и десять в шестой степенях. С тампона засевают цельный материал. Посевы на ЖСА инкубируют в течение 2 суток, а на кровяном агаре – 18–20 часов.

Так как ЖСА является элективной средой, то на нем вырастают только колонии стафилококков. Обращают внимание на наличие лецитиназоположительных колоний, подсчитывают их, отбирают 2-3 колонии для дальнейшего исследования. Если на ЖСА вырастают только лецитиназоотрицательные стафилококки, то из посева тоже отбирают не менее 2 колоний. И лецитиназоположительные и лецитиназоотрицательные стафилококки отсевают на скошенный мясопептонный агар. После суточного инкубирования выделенную культуру изучают в мазках, окрашенных по Граму, определяя морфологию микробов и чистоту культуры. При наличии в мазке грамположительных кокков, расположенных характерными гроздьями, проводят исследование для идентификации стафилококков. Согласно генотипической классификации род Staphylococcus относится к семейству Staphylococcасеае, класс Bacilli, в которое входят также роды: Jeotgalicoccus, Macrococcocus, Nosocomiicoccus, Salinicoccus. Общими признаками для представителей этого семейства является то, что все они грамположительные кокки. Для установления принадлежности к роду Staphylococcus проводится первичная идентификация по наличию каталазы и способности ферментировать глюкозу в анаэробных условиях.

Стафилококки ферментируют маннит в анаэробных условиях (табл.10). Микрококки не ферментируют глюкозу в анаэробных условиях, так как они облигатные аэробы.

1. Потатуркина-Нестерова Н.И., Немова И.С., Магомедова А.М., Нестеров А.С. Патогенный потенциал микоплазм, эпидемиологически ассоциированных с воспалительными заболеваниями урогенитального тракта // Фундаментальные исследования. - 2012. - № 1. – С. 89-92.

Адаптация микроорганизмов к условиям жизни в организме хозяина предполагает различные способы приспособления к факторам естественной резистентности последнего, что необходимо патогенам для инициации инфекционного процесса [1]. Факторы патогенности самих микроорганизмов разнообразны по своей природе и оказывают различное действие на клетки и ткани хозяина. Так лецитиназа нарушает гомеостаз клеток и тканей, приводя к их повреждению, определяя инвазивность микробов. Сведения об изменении лецитиназной активности стафилококков при некоторых хронических дерматозах отсутствуют.

Исследованы смывы с кожи 270 лиц с хроническими дерматозами: псориаз, экзема, атопический дерматит, в возрасте от 18 до 80 лет. Родовую и видовую идентификацию микроорганизмов осуществляли стандартными методами. Модификацию лецитиназной активности изучали по методу сокультивирования симбионтов (Хуснутдинова, 2006).

Изменение лецитиназной активности (ЛецА) в виде усиления выраженности данного свойства у S.aureus стафилококка в ассоциации с непатогенными видами Staphylococcus spp. отмечено в 33,3 % случаев, подавление ЛецА S. aureus – в 21,4 % случаев. В 45,2 % случаев изменений данного признака не наблюдалось. На пораженных и интактных участках кожи чаще выявляли S. epidermidis – 24,7 % и 37,1 % случаев соответственно, и S. haemolyticus – 13,3 % и 8,98 % соответственно от всех выделенных культур. Анализ изменения ЛецА выявленных патогенов в зависимости от сокультивирования с непатогенными сочленами показал, что S. haemolyticus усиливал ЛецА S.aureus в 81,25 % по сравнению с S. epidermidis, который обладал данным свойством только в 24 % случаев.

Таким образом, условно-патогенные представители стафилококков изменяют биологические свойства S. aureus, повышая его лецитиназную активность, что способствует усилению персистентного потенциала S. aureus и всего сообщества в целом.

Основой для дифференциации стафилококков многие годы являлось пигментообразование.

Однако позже работами ряда исследователей было установлено, что пигмент не является критерием для определения патогенности стафилококка, а ферментация Сахаров — вариабельный признак (Выгодчиков, Тампсон,. Коразо). В 1942—1943 гг. Г. В. Выгодчиков получил расщепление золотистого стафилококка на белый, кремовый и палевый варианты. Известно также, что среди белых стафилококков имеется немало штаммов, превышающих по своей токсигенности штаммы с золотистым и желтым пигментом.

В инструкции Министерства здравоохранения СССР о порядке расследования и учета пищевых отравлений (1962), в методических указаниях по лабораторной диагностике стафилококковых инфекций (1963), в руководстве по микробиологической диагностике инфекционных болезней под редакцией К. И. Матвеева и М. И. Соколова (1964) рекомендуется считать патогенными штаммы, коагулирующие плазму.

Однако, по данным А. И. Столмаковой (1959) энтеротоксические стафилококки, выделяемые при пищевых отравлениях, обладают коагулазой только в 87%, а остальные лишены этого фермента, и в 13% всех случаев не давали коагулазной реакции.

Серологические свойства

Исследованиями ряда авторов доказана мозаичность антигенной структуры стафилококков и невозможность причисления большого количества выделяемых штаммов ни к одной серологической группе. Однако, по данным Б. М. Световидовой (1966), серологическая диагностика стафилококковой инфекции возможна по уровню антитоксина в крови, если эта реакция (при низких титрах у тяжело больных) дополняется определением свободного стафилококкового токсина в крови. В случаях пищевых…

Методика определения стафилококкового антитоксина

Перенесенные стафилококковые заболевания, носительство (стафилококков, иммунизация препаратами, содержащими стафилококковые антигены, вызывают в организме человека и животных образование специфических антител, одним из которых является (стафилококковый антитоксин. Стафилококковый антитоксин нейтрализует гемолитические и некоторые другие свойства стафилококкового токсина. Для установления наличия специфического антитоксина в иммунной сыворотке (для определения титра) пользуются способностью стафилококкового антитоксина нейтрализовать гемолитическое действие стафилококкового токсина.Определение…

Титрование сывороток, содержащих более 1 АЕ в 1 мл

Сыворотку разводят физиологическим раствором хлористого натрия. В каждую пробирку добавить 1 мл разведенного (из расчета лН/5) токсина и по одной капле промытых и разведенных (1+2) эритроцитов. Ставят контроль эритроцитов: 2 мл физиологического раствора + одна капля эритроцитов не должны давать гемолиза. Пробирки со смесью выдерживают в термостате при 37° один час и еще один час…

Биологическое исследование

Биологическое исследование проводят для выявления наличия стафилококкового энтеротоксина в продуктах и для изучения способности культуры стафилококков образовывать энтеротоксин на питательных средах. В качестве экспериментальных животных могут быть использованы котята (1,5— 2-месячные) и взрослые кошки.Биопроба на котятах В опыт берут двух-трех котят. Котятам натощак скармливают пятисуточную молочную культуру выделенного стафилококка (15—20 мл) или исследуемый продукт. Наблюдение…

Гемолитическая активность

Гемолитические (свойства стафилококка выявляются в виде зоны гемолиза (просветления) вокруг колонии, при выращивании культуры на МПА с 5/0 дефибринированной крови. После посева культуры (или материала) на чашки Петри с 5% кроличьей крови посевы помещают в термостат при температуре 37° на 18—20 часов. Стафилококки довольно интенсивно гемолизируют эритроциты кролика. Чтобы зоны гемолиза не сливались (это затрудняет выделение…

Лецитиназная активность

Лецитиназная активность проявляется в расщеплении яичного желтка. Определяется лецитиназная реакция при посеве патогенных стафилококков на желточный агар в виде образования вокруг колоний зоны помутнения среды и радужного венчика на ее поверхности. Принадлежность к фаготипу. Довольно стабильным признаком является чувствительность патогенного стафилококка к одному или нескольким фагам. Метод типирования дает возможность установить источник возникновения стафилококковой инфекции…

Методика определения фаготипа

С помощью метода фаготипирования стафилококков, применение которого было начато Fisk в 1942 году, можно установить источник и пути распространения инфекции. Фаготипированию подвергают коагулоположительные штаммы. Международным набором, состоящим из 22 фаготипов, удается типировать около 80% патогенных стафилококков.Набор типовых стафилококковых фагов разделен на 4 группы: № группы Номера фагов I 29, 52, 52А, 79, 80 II ЗА, ЗВ,…

Типирование штаммов

Степень лизиса культуры

Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрируют по схеме: + + + + — сливной (полный) лизис; + + Н полусливной лизис (в зоне лизиса незначительный рост культуры); + Н наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса); + — менее 20 колоний фага; полное отсутствие лизиса. Фаготип записывают в форме (перечня обозначений…

Дополнительные признаки патогенности

Дополнительные признаки патогенности необходимо изучать при идентификации стафилококка в случаях, когда основные функции понижены или результаты какой-либо из проб выражены нечетко. Ферментация маннита не является постоянным признаком патогенности стафилококков и может встречаться у непатогенных, что позволяет считать его малоспецифичным, нестабильным признаком патогенности. Пигментообразование Большинство патогенных штаммов стафилококков образуют золотистый пигмент. Однако следует учитывать, что есть…

Во второй половине XX века патогенные стафилококки, вытеснив многие микроорганизмы, стали ведущими возбудителями разнообразных, тяжело протекающих заболеваний.

К ним относятся пневмонии, абсцессы легких, менингиты, перитониты, сепсис, эндокардиты, токсические энтериты, воспаление мочевого тракта, гинекологические заболевания, гнойные осложнения после ранений и операций, отиты, послеродовые маститы и другие. Патогенный стафилококк может вызывать и пищевые отравления, проявляющиеся в виде эпидемических вспышек.

Актуальность изучения стафилококковых инфекций трудно переоценить. В связи с повсеместным ростом стафилококковых инфекций ознакомление широких врачебных кругов с современными методами лабораторной диагностики и профилактики стафилококковых заболеваний приобретает определенное практическое значение.

Базой для рациональных лечебно-профилактических мероприятий служит своевременная диагностика стафилококковых заболеваний. Основным методом лабораторной диагностики стафилококковых инфекций является бактериологическое исследование с выделением возбудителя.

Учитывая затруднения, нередко возникающие при бактериологической диагностике стафилококковой инфекции, вызванной патогенным стафилококком, мы сочли целесообразным предпослать разделу лабораторной диагностики «современные данные о микробиологической характеристике стафилококков с выявленными отклонениями от типичных свойств.

Некоторые вопросы иммунитета к стафилококкам

Врожденного иммунитета к стафилококку у людей не существует. Иммунитет после перенесенных стафилококковых заболеваний является мало-напряженным и непродолжительным. .Животные, иммунизированные вакциной, не обнаруживают иммунитета ни к токсину, ни к живой культуре. Иммунизация стафилококковым антитоксином создает у животных анти токсический и антимикробный иммунитет. Изучение роли стафилококкового токсина в патогенезе стафилококковых заболеваний и иммунитете позволило создать рациональные методы…

Коагулаза — профермент, образуемый патогенными стафилококками и активируемый фактором, содержащимся в плазме. Этот активатор содержится в плазме людей, обезьян, лошадей, кошек, свиней, кроликов, но отсутствует или находится лишь в ничтожных количествах в крови коров, баранов, морских свинок, крыс и мышей. Под действием активатора стафилокоагулаза переходит в тромбиноподобное вещество, действующее на фибриноген и вызывающее образование фибрина. …

К вопросу о серологической классификации

Стафилококковые токсины и продукты жизнедеятельности стафилококков вызывают в организме образование агглютининов, преципитинов, комплементсвязывающих антител опсонинов, бактериолизинов и специфического антитоксина. Значение антитоксина в противостафилококковом иммунитете признает большинство иммунологов. Дифференциация стафилококков с помощью реакции агглютинации указывает на мозаичность их антигенной структуры. Исследования с применением реакции агглютинации показали большую трудность получения адсорбированные сывороток, малую типовую стабильность и существование…

Микробиология и физиология стафилококков

В природе — в живом мире, окружающей среде, воздухе — очень широко распространены болезнетворные (патогенные) и безвредные (непатогенные) разновидности стафилококков. Стафилококки имеют шарообразную форму с диаметром от 0,6 до 1мм. В мазке из чистой культуры характерно гроздевидное расположение стафилококков; в гное и другом патологическом материале можно встретить единичных кокков, парных и короткие цепочки. Стафилококк красится…

Дифференциально-диагностическая среда

Дифференциально-диагностическими средами являются желточно-солевой и молочно-солевой агар; 5—10% поваренная соль губительно действует на сапрофитные микробы и поэтому на солевом агаре стафилококк хорошо растет при посеве даже значительно загрязненного материала. На желточно-солевом агаре (ЖСА) вокруг колоний патогенных стафилококков образуются мутная зона и радужный венчик, чем и выявляется лецитиназная (желточная) реакция. На молочно-солевом агаре выявляется пигмент (из…

Биохимические свойства

Стафилококки ферментируют (без газа) лактоэу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, ксилозу, фруктозу, глицерин; не образуют кислоты из рафинозы, дульцита, салицина, инулина. Способность расщеплять маннит обычно характеризует патогенные штаммы стафилококка. Стафилококки быстро сбраживают молоко, но не гидролизуют крахмал. При посеве уколом в желатину на 2—3-й день роста заметна зона разжижения. Стафилококки выделяют сероводород и не образуют индола,…

Продукты жизнедеятельности стафилококков

Патогенные свойства стафилококков обусловлены способностью вырабатывать токсины. Стафилококковые токсины отличаются большим разнообразием, и для удобства их можно разделить на токсические вещества, действующие на животный организм (токсины общего действия) и ферментативные вещества (токсины частного приложения). Токсины общего действия Стафилококковый токсин обладает антигенными и имунно генными свойствами: иммунизируя животных, можно получить антисыворотку, которая содержит антитоксин и нейтрализует…

Лейкоцидин - Энтеротоксин

В фильтратах культур часто обнаруживается яд лейкоцидин, разрушающий лейкоциты, но не обладающий гемолитической активностью. Лейкоцитолитическая активность штаммов стафилококка может являться критерием степени патогенности. Энтеротоксин Некоторые патогенные стафилококки способны продуцировать различные энтеротоксины, отличающиеся антигенными свойствами. Эти токсины удалось получить в относительно чистом виде, изготовить нейтрализующие их сыворотки и с их помощью осуществлять достоверную диагностику. Энтеротоксин вызывает…

Лецитиназа.Фермент бактерий, расщепляющий лецитин, выявляют пу­тем посева культуры стафилококков на желточный агар. Готовят желточный агар: пептон — 20 г, гидрофосфат натрия — 2,5 г, натрий — 1 г, 0,5%-й раствор сульфата магния — 0,1 мл, глюкоза — 1 г, агар — 12,5 г, вода дистиллированная — 500 мл. Устанавливают рН 7,2-7,4, стерилизуют при 121°С 15 мин, охлаждают до 55 °С, добавляют один стерильный желток на 500 мл среды, компоненты перемешивают и смесь разливают в чашки Петри. Исследуемую культуру засевают дробно на желточный агар, культивируют при 37-38 °С 24-48 ч. Положительный результат — появление зоны помутнения вокруг колоний.

Таблица 2 - Свойства основных патогенных видов стафилококков

Грамположительных кокков

Таблица 1 - Дифференциация стафилококков от других

Признаки Стафилококки Микрококки Энтерококки Стрептококки
Ферментация глюкозы (ОФ-тест) + - + +
Каталаза + + - -
Оксидаза - + - -
Коагулаза + - - -
Чувствительность к бацитрацину (0,04 ЕД/диск) - + - -

Определение патогенных свойств стафилококков, идентификация на уровне вида. Достаточно подробное изучение патогенных свойств стафилококка позво­ляет отнести выделенную культуру к одному из трех основных патогенных видов (табл.2). Исследование дополнительных ферментативных, культуральных и прочих свойств дает возможность идентифицировать другие виды ста­филококков, достаточно часто выделяемые от животных (табл. 3). О присут­ствии патогенных свойств у выделенных культур судят, кроме того, по резуль­татам биопроб, позволяющих, в том числе, доказать наличие энтеротоксина. Определение факторов патогенности проводят следующими методами.

Коагулаза.Фермент, вызывающий свертывание плазмы, на фибриноген непосредственно не действует. Для этой цели наиболее подходит цитрированная плазма кролика (1 объем 4%-ного раствора натрия цитрата + 9 объемов крови). При исследовании штаммов, выделенных от определенных видов жи­вотных, может быть использована их кровь (свиньи, КРС, собаки).

* — Анаэробный подвид S. aureus (S. subsp. anaerobicis) образует коагулазу, ДНК-азу, гемолизин, ферментирует мальтозу, не синтезирует пигмент (±) — 90% или более штаммов слабо позитивные d — 11-89% штаммов позитивные.

Фактор скучивания (Сhumping factог-СF). СF -фактор в отличие от коагула­зы действует на фибриноген, что приводит к агрегированию стафилококков. Для выявленияСF-фактора на предметном стекле в капле неразведенной цитратной плазмы суспендируют бактериальную массу стафилококков из агаро­вой культуры при помощи бактериологической петли. В положительных слу­чаях агрегирование наступает в течение 1-2минут. Контролем служит взвесь стафилококков в физиологическом растворе. Результаты СF-теста хорошо коррелируют с результатами пробирочной пробы на коагулазу.





Гемолизины.Гемолитическую активность исследуют посевом на кро­вяной агар. Гемолизины стафилококков отличаются биохимическими, ан­тигенными свойствами и литической активностью по отношению к эритро­цитам различных видов животных. Известны четыре типа гемолизинов ста­филококков (табл. 4).

Конкретный штамм стафилококков может синтезировать один тип ге­молизина или несколько в различных комбинациях. При тестировании ге­молитической активности у штаммов, особенно от КРС, необходимо учи­тывать наличие β-гемолизина и целесообразность дополнительного выдер­живания посевов после инкубирования также при 4-15° С.

S. aureus, S. intermedius могут синтезировать одновременно α- и β -гемолизин, что при­водит к образованию двойной зоны гемолиза: вблизи колонии — типа α, далее — β.

Таблица 4 -Спектр активности гемолизинов стафилококков


Гиалуронидаза (фактор проникновения).Обнаружение этого фермен­та у стафилококков практически наиболее легко осуществимо в тесте декапсуляции. Берут штаммы капсулообразующих видов бактерий, имею­щих в составе капсулы гиалуроновую кислоту (субстрат для гиалуронидазы): Str. equi, Раsterella multocida (серовар А). На кровяной МПА в чашке Петри крестообразно засевают штрихом Str. equi или Р. multocida (тип А) и под углом 90° аналогично в виде линии культуру испы­туемого стафилококка. Посевы инкубируют при 37° С в течение 24 часов. При наличии гиалуронидазы колонии тест-микроба вблизи штриха ста­филококков образуются более мелкие и тусклые за счет разрушения кап­сулы ферментом, который диффундирует в толщу агара (результат поло­жительный).

ДНК-аза.Нуклеаза обычно выявляется у S. aureus, S. intermedius,
S. hyicus
. Исследуемую культуру бактерий засевают на питательный агар с ДНК и культивируют при 37 °С 24 ч. Затем на поверхность среды с бактериальной культурой наливают 1 н. раствор соляной кислоты. Положительный результат — при гидролизе ДНК вокруг выросшей культуры видна светлая зона.

Биопроба. Проводят для выявления патогенных свойств штаммов по летальному эф­фекту (биопроба на цыплятах), положительной дермонекротической реак­ции (некротоксин), а также на котятах для обнаружения способности про­дуцировать энтеротоксин. Известно шесть антигенноразличных энтеротоксинов (А, В, С, D, Е, F).

Дермонекротическая проба.У кролика-альбиноса массой 2-2,5 кг за сутки до опыта на боку выстригают два участка размером 2x2 см. 24-часо­вую бульонную испытуемую культуру вводят внутрикожно в дозе 0,2 мл на обоих участках. Положительный результат: через 24 часа на месте инъек­ции появляется гиперемия кожи, через 48 часов - некроз. Наблюдение про­должают 4 суток.

Биопроба на цыплятах.Проводят при изучении штаммов, выделенных от птиц. Суточную бульонную культуру в объеме 0,1 мл вводят во внешний угол глазницы двум 1-2-дневным цыплятам. Наблюдение ведут в течение 5 суток. Положительный результат: гибель цыплят на 3-5 сутки при выде­лении культуры стафилококков из паренхиматозных органов и костного мозга цыплят.

В специализированных лабораториях, при наличии соответствующих реактивов, энтеротоксин выявляют серологическими методами. Испытуе­мый штамм выращивают на подходящей среде, например сердечно-мозго­вом бульоне, и супернатант исследуют.

Серологически энтеротоксин обнаруживают в РДП или при помощи иммуноферментного метода. Возможно об­наружение токсинообразования следующим способом. К расплавленному и остуженному до 45°С МПА добавляют антитоксическую стафилококко­вую сыворотку
(S. аureus) до содержания в 1 мл среды 14-15 АЕ. Агар разливают по чашкам Петри и засевают дробно изучаемую культуру для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37° С 24-48 часов. Вокруг колоний токсигенных стафилококков формируются кольца преципитации.

Штаммы стафилококков чаще лизируются несколькими фагами. В зависимо­сти от спектра фагочувствительности стафилококк относят к какой-либо одной фагогруппе, например I, II и т. д., или к смешанной группе (I и III и т.д.).

Читайте также: