Метод определения напряженности при ящуре
Обновлено: 18.04.2024
Работа выполнена на кафедре ветеринарной санитарии Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан.
Научный руководитель доктор ветеринарных наук,
Турсункулов Ш. Ж.
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,
Ведущая организация Семипалатинский государственный
университет им. Ш. Шакарима
Ученый секретарь объединенного
доктор ветеринарных наук Абдрахманов Т. Ж.
Ящур – высококонтагиозная и чрезвычайно быстро распространяющаяся вирусная болезнь парнокопытных домашних и диких животных, которая протекает с образованием характерных пузырьков (афт) и эрозий на слизистой оболочке пищеварительного тракта, а также на участках кожи, не покрытых волосами. Иногда ящуром заболевают люди (Куриленко А. Н., Крупальник В. Л., 1985).
Эпизоотии ящура наносят большой экономический ущерб животноводству. Ящур включен в перечень особо опасных болезней сельскохозяйственных животных и птиц, при которых производится обязательное изъятие и уничтожение животных, продуктов и сырья животного происхождения.
Расширение экономических, торговых и туристических связей между государствами, возросшее значение различных транспортных средств, концентрация большого поголовья животных на ограниченной территории в хозяйствах промышленного типа, отсутствие необходимого количества средств дезинфекции и профилактики значительно повышают возможность заноса и распространения данной инфекции, что обуславливает широкое распространение ящура по всему миру (Дудников С. А., 2009).
Территория Республики Казахстан разнообразна по своим природным и географическим условиям, ее фауна насчитывает множество видов животных, через ее пространства проходят пути сезонных миграций диких животных и птиц, кроме того, в последние годы повышается интенсивность взаимных контактов с зарубежными странами. Указанные факторы способствуют значительному усилению циркуляции и увеличению вероятности появления вируса ящура (Хайруллин Б. М., 2007).
В Казахстане вопросами изучения эпизоотического процесса ящура сельскохозяйственных животных занимались Киндяков В. И., Никонова О. С., 1952-1967, Наурызбаев И. Б., 1965, Тасбулатов Э. С.,1971, Мамадалиев С. М., 2001-2006, Абдрахманов С. К, 2008.
При эпизоотиях ящура на территории Казахстана, по данным Казахского научно-исследовательского ветеринарного института, установлена циркуляция вируса ящура типа О с антигенными свойствами типа А и типа А с антигенными свойствами типа О (Киндяков В. И. и др., 1964).
В настоящее время разносторонняя информация, касающаяся особенностей инфекционных заболеваний животных в РК, многочисленные данные эпизоотологических исследований до сих пор не систематизированы, остаются разрозненными и не используются должным образом для моделирования процессов возможного распространения инфекций (Джупина С. И., 2004).
Решение данных задач является в настоящее время насущным, в связи с Программой главы государства, по вхождению страны в число 50-ти наиболее экономически развитых стран мира и вступления во Всемирную торговую организацию.
Ветеринарная служба должна иметь в своем распоряжении необходимые ресурсы, позволяющие ей осуществлять должный надзор на границах, поддерживать клиническое и эпизоотологическое наблюдение и проводить необходимые диагностические исследования. Для установления эффективной системы надзора и наблюдения в целом по стране или в различных зонах необходимо своевременное предоставление сведений обо всех новых вспышках инфекции.
Географическая информационная система – это компьютерная система сбора, хранения, обработки и отображения данных с учетом информации о местоположении. ГИС не только преобразует и сохраняет географическую информацию в цифровой форме для последующего анализа, но и должна агрегировать, индексировать, связывать и извлекать информацию из соответствующих пространственных баз данных (Ш. Шекхар, С. Чаула, 2004).
Современные гео-информационные системы в эпидемиологии – это совершенно новые компьютерные технологии, которые обеспечивают комплексную автоматизацию процессов сбора, хранения, обработки и анализа эпидемиологической информации с ее визуализацией на электронных картах. Современные ГИС предлагают все расширяющиеся функциональные возможности для решения прикладных задач, связанных с оперативным анализом и прогнозом эпидемий и эпизоотий. Эпидемиологам сегодня есть, что выбрать из многочисленных инструментов ГИС, которые приспособлены для обобщения результатов и процедур эпидемиологического анализа конкретных ситуаций, особенно в части визуализации результатов анализа на географических картах (S. Crosier, B. Booth, K. Dalton, 2004).
В настоящее время имеет смысл применять в исследованиях по прикладной эпизоотологии и эпидемиологии функциональные возможности современных ГИС-технологий.
Целью исследований является разработка методов эпизоотологического мониторинга ящура сельскохозяйственных животных в Республике Казахстан с использованием ГИС-технологий.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
1 Оценка масштабов, характера и динамики распространения ящура в Республике Казахстан.
2 Изучение поствакцинального иммунитета против ящура у сельскохозяйственных животных в различных регионах республики на основе серологического мониторинга.
3 Проведение зонирования и районирования территории РК по степени реального и потенциального неблагополучия по ящуру.
4 Пространственный анализ распространения ящура в Республике Казахстан с помощью географической информационной системы.
5 Совершенствование противоэпизоотических мероприятий против ящура с применением ГИС-технологий.
Научная новизна. Проведен анализ эпизоотической ситуации в Республике Казахстан по ящуру за период 1955-2010 гг., с созданием базы данных ГИС. Изучена напряженность иммунитета у вакцинированных против ящура животных. Осуществлено зонирование территории страны по степени потенциального риска возникновения ящура. Определены основные кластеры неблагополучных пунктов по ящуру в РК за период 1955-2010 гг.
Результаты исследований используются в учебном процессе факультета ветеринарии и технологии животноводства Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина и на факультете ветеринарной медицины и биотехнологии Западно-Казахстанского аграрно-технического университета им. Жангир-Хана при подготовке кадров по специальностям 051201 – Ветеринарная медицина, 051202 – Ветеринарная санитария.
Полученные данные по распространенности ящура, поствакцинального иммунитета у сельскохозяйственных животных в различных регионах республики, а также сформированная база данных с использованием ГИС-технологий используется при составлении плана противоэпизоотических мероприятий.
Основные положения исследований, выносимые на защиту.
1. Масштаб, характер и динамика распространенности ящура в мире и РК.
2. Напряженность иммунитета сельскохозяйственных животных против ящура в различных регионах республики на основе серологического мониторинга.
3. Зонирование территории по регионам с учетом степени реального и потенциального неблагополучия по ящуру сельскохозяйственных животных.
4 Пространственный анализ распространения ящура в РК с помощью ГИС технологий.
5.Внедрение системы ГИС и совершенствование ветеринарных мероприятий против ящура.
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 16 научных работ, в том числе 4 рекомендации.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста и состоит из содержания, нормативных ссылок, определения, обозначения и сокращений, введения, основной части, заключения, выводов, практических предложений, списка использованных источников и приложения. Работа иллюстрирована 8 таблицами, 50 рисунками. Список использованных источников включает 179 наименования, в том числе 62 авторов дальнего зарубежья.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалы и методы исследований
Эпизоотическую обстановку по ящуру крупного рогатого скота в РК изучали по материалам официальной ветеринарной статистики, данным ветеринарной отчетности областных и районных отделов ветеринарного надзора территориальных управлений МСХ РК.
Отбор 2004 проб сывороток крови сельскохозяйственных животных для определения титра антител против ящура у вакцинированных животных осуществлялся в 2007 году в Карагандинской, Западно-Казахстанской, Атырауской, Южно-Казахстанской, Жамбылской, Восточно-Казахстанской областях. Отбор 4674 проб сывороток крови сельскохозяйственных животных для определения неструктурных белков ящура осуществлялся в период с 2007 по 2009 гг. в Костанайской, Северо-Казахстанской, Акмолинской, Алматинской, Кзыл-Ординской, Южно-Казахстанской областях. Отбор 19 проб патологического материала с целью выделения вируса ящура в период 2007-2010 гг. проводили в Карагандинской, Атырауской, и Акмолинской областях.. Определение поствакцинального титра антител и выявление неструктурных белков в сыворотках крови у вакцинированных против ящура животных проводилось с помощью иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции, согласно наставлениям.
Методы эпизоотологического исследования. Эпизоотологический мониторинг ящура проводился согласно методу эпизоотологического исследования (Таршис М. Г., 1979, Дудников С. А., 2007).
Для получения географических координат неблагополучных пунктов по ящуру использован спутниковый GPS-приемник.
Для визуализации неблагополучных пунктов по ящуру, геоанализа и прогнозирования данного заболевания использовали географическую информационную систему, состоящую из трех приложений ArcGis – Arc Catalog, Arc Map и Arc Toolbox. Система разработана на базе ГИС – платформа ArcView. Топографическая основа – электронные карты Казахстана, включающая следующие базовые слои: математические элементы, рельеф суши территории Казахстана, населенные пункты, климат.
Результаты исследования
Эпизоотическая ситуации по ящуру в Республике Казахстан. На территории республики с 1955 по 2010 гг. вспышки ящура наблюдались в следующие годы: 1955 – 1978, 1980 – 1982, 1984, 1988 – 1989, 1991, 1996, 1998 – 2001, 2007, 2010 гг.
Рисунок 1 – Неблагополучные пункты по ящуру с./х животных на территории Казахстана за период 1955-2009 гг.
В эпизоотическом отношении самыми неблагополучными по ящуру являются следующие области: Алматинская, Акмолинская, Восточно-Казахстанская, где количество неблагополучных пунктов составило 696, 678, 649 соответственно. Аналогичные показатели в Костанайской, Южно-Казахстанской и Жамбылской области составили 522, 499 и 430 соответственно. Спорадические случаи заболевания отмечаются в Мангистауской области.
Серологический мониторинг ящура в различных регионах республики
В системе эпизоотологического мониторинга важную роль играет изучение напряженности иммунитета у вакцинированных животных (поствакцинальный иммунитет).
Анализ регистрации неблагополучных пунктов по ящуру среди КРС, МРС и свиней по типу А за период 1955-2010 гг. (рисунок 2) показывает инфицированность на большей части РК среди крупного рогатого скота, с наибольшим распространением в северных регионах страны (Костанайская, Северо-Казахстанская, Акмолинская и Павлодарская области).
Рисунок 2 – Неблагополучные пункты по ящуру среди восприимчивых животных за период 1955-2010 гг. (тип А)
Рисунок 3 – Неблагополучные пункты по ящуру среди восприимчивых животных за период 1955-2010 гг. (тип О)
На рисунке 4 отмечена регистрация неблагополучных пунктов по ящуру среди КРС, МРС и свиней по типу Азия-1 за вышеуказанный период в Алматинской, Южно-Казахстанская, Карагандинской, Акмолинской и Павлодарской областях. Единичные пункты также зафиксированы в Восточно-Казахстанской и Западно-Казахстанской областях.
Рисунок 4 – Неблагополучные пункты по ящуру среди восприимчивых животных за период 1955-2010 гг. (тип Азия-1)
Необходимо отметить, среди восприимчивых животных наиболее подвержены ящуру КРС, далее в порядке убывания МРС, свиньи и верблюды. В ходе экспедиционных выездов сотрудников в 2006-2008 гг. в хозяйства Жамбылской, Кзыл-Ординской, Акмолинской, Карагандинской и Северо-Казахстанской областей были выборочно отобраны сыворотки крови животных для определения напряженности поствакцинального иммунитета.
Пробы патологического материала были доставлены непосредственно из очагов вспышек ящура в 2007 и 2010 гг.
Проведение вирусологического и серологического мониторинга ящура сельскохозяйственных животных в различных регионах страны проводилась в трех направлениях:
ГОСТ Р 53734.2.3-2010
(МЭК 61340-2-3:2000)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ ТВЕРДЫХ ПЛОСКИХ МАТЕРИАЛОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ С ЦЕЛЬЮ ПРЕДОТВРАЩЕНИЯ НАКОПЛЕНИЯ ЭЛЕКТРОСТАТИЧЕСКОГО ЗАРЯДА
Electrostatics. Part 2.3. Methods of test for determining the resistance and resistivity of solid planar materials used to avoid electrostatic charge accumulation
Дата введения 2012-01-01
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН Закрытым акционерным обществом "Научно-производственная фирма "Диполь" (ЗАО "Научно-производственная фирма "Диполь") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 072 "Электростатика"
4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту МЭК 61340-2-3:2000* "Электростатика. Часть 2-3. Методы тестирования для определения сопротивления и удельного сопротивления твердых плоских материалов, используемых для предотвращения накопления электростатического заряда" (IEC 61340-2-3:2000 "Electrostatics - Part 2-3: Methods of test for determining the resistance and resistivity of solid planar materials used to avoid electrostatic charge accumulation", MOD).
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
Наименование стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2012 (пункт 3.5).
Раздел "Нормативные ссылки" изложен в соответствии с ГОСТ Р 1.5, и соответствующие ссылки в тексте стандарта выделены курсивом*
* В оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе "Предисловие" приводятся обычным шрифтом, кроме отмеченного знаком "**"; остальные по тексту документа выделены курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.
Введение
Измерение сопротивления и расчет удельного сопротивления наряду с измерением электрического напряжения и тока относятся к фундаментальным задачам электрических измерений.
Удельное сопротивление является электрической величиной, меняющейся более чем на тридцать порядков значений от проводящих металлов до почти абсолютных изоляторов.
Измерения сопротивления материалов основаны на законе Ома для постоянного тока и мгновенных значений переменного тока в проводниках (металлы, углероды и т.д.).
При использовании переменного тока на результаты испытаний могут влиять емкостное и индуктивное реактивное сопротивление, зависящие от частоты, в связи с чем национальные и международные стандарты обычно проводят измерение сопротивления твердых материалов на постоянном токе.
Большинство неметаллов (пластмассы и др.) являются полимерами и проводниками ионов. Перемещение зарядов может зависеть от силы воздействующего электрического поля. Помимо измерительного тока существует зарядный ток, который поляризует и/или электростатически заряжает материал, что проявляется в асимптоматическом снижении измерительного тока со временем и вызывает изменения сопротивления. Если этот эффект имеет место, рекомендуется повторить измерения после истечения времени установления показаний, используя обратную полярность для измерения тока и усредняя полученные значения.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает методы определения электрического сопротивления и удельного сопротивления твердых плоских материалов, используемых для предотвращения накопления электростатического заряда в диапазоне от 10 Ом до 10 Ом.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 50344 (МЭК 167-64) Материалы электроизоляционные твердые. Методы испытаний для определения сопротивления изоляции (МЭК 60167:1964, MOD)
ГОСТ 6433.2 Материалы электроизоляционные твердые. Методы определения электрического сопротивления при постоянном напряжении (МЭК 60093:1980 "Материалы электроизоляционные твердые. Методы измерения удельного объемного и поверхностного сопротивления", NEQ)
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.
3.1 объемное сопротивление (Ом): Отношение электрического напряжения постоянного тока (В) приложенного к двум электродам, расположенным на двух (противоположных) поверхностях образца, к установившемуся току (А) между электродами.
3.2 объемное удельное сопротивление (Ом·м): Отношение напряженности поля постоянного тока (В/м) к плотности установившегося тока (А/м) в материале, которое равно объемному сопротивлению куба образца материала со стороной, равной единице длины.
3.3 поверхностное сопротивление (Ом): Отношение постоянного напряжения (В), приложенного к двум электродам на поверхности образца, к току (А) между электродами.
3.4 поверхностное удельное сопротивление (Ом): Поверхностное удельное сопротивление равно поверхностному сопротивлению квадрата на поверхности образца, со стороной, равной расстоянию между электродами на двух противоположных сторонах этого квадрата.
3.5 измерительный электрод: Проводник определенной формы, размера и конфигурации, контактирующий с испытываемым образцом.
4 Условия испытаний
Испытания электростатических свойств материалов проводят в определенных условиях, характеризуемых температурой и относительной влажностью окружающей среды. Выбор соответствующих условий для испытаний определяют в зависимости от типа материала (технические характеристики) и условий его применения (например, низкая влажность). Образцы подвергают испытаниям в установленных условиях применения.
Предварительное выдерживание может быть необходимо с целью недопущения эффекта коробления, появляющегося после процесса отливки для некоторых пластиковых материалов или при сушке перед испытаниями.
Выдерживание обычно осуществляют в условиях, отличных от условий испытаний.
Для проведения испытаний применяют сушильные печи или климатические камеры, оснащенные системой принудительной циркуляции воздуха. Дополнительные рекомендации содержатся в МЭК 60212 [1].
5 Выбор метода испытаний
При выборе метода испытаний следует руководствоваться следующими рекомендациями:
a) если диапазон электрического сопротивления испытуемого материала известен, то применяют соответствующие методы измерения, приведенные в настоящем стандарте;
b) для материала с заранее неизвестным удельным сопротивлением начинают измерения с применения методов испытаний проводников, указанных в разделе 6. Если проведение измерений невозможно или полученные результаты выходят за рамки допустимого диапазона, результаты измерений признают несоответствующими и их не принимают во внимание. В этом случае измерение твердых электростатически рассеивающих материалов повторяют в соответствии с разделом 8. Если результаты измерений выходят за рамки допустимого диапазона, то проводят повторные измерения в соответствии с разделом 7.
6 Измерение сопротивления твердых проводников
Измерение сопротивления твердых проводников (неметаллов) проводят в соответствии с ИСО 3915 [2] для пластика или ИСО 1853 [3], ИСО 2951 [4] - для резины.
Для сверхпроводящих материалов измерение контактного сопротивления проводят с использованием мостового метода измерения во избежание нелинейного распределения потенциала на образце. Основным измеряемым параметром является ток, протекающий через образец, определяющий рассеиваемую мощность для предотвращения значительного нагрева материала.
7 Измерение сопротивления твердых изоляторов
Измерение сопротивления твердых изоляторов проводят в соответствии с ГОСТ 6433.2 и ГОСТ Р 50344 - для пластика или ИСО 1853 [3] - для резины.
Для некоторых изоляторов значение поверхностного сопротивления может быть значительно меньше сопротивления сквозь материал из-за наличия эффекта адсорбции веществ, например воды, при этом возможно существование нелинейной функциональной корреляции между приложенным напряжением и протекающим током. В связи с этим поверхностное и объемное сопротивления твердых изоляторов измеряют при определенных условиях (при напряжении 500 В и времени установления показаний 1 мин) с использованием защитных электродов.
Для проведения испытаний жидкие, окрашенные или напыленные контактные электроды не применяют. Вместо них в качестве контактного материала рекомендуется использовать проводящую резину.
8 Измерение сопротивления твердых рассеивающих материалов
Измерения сопротивления твердых материалов, используемых для предотвращения накопления электростатического заряда, проводят в соответствии с нижеприведенными указаниями.
8.1 Средства измерения сопротивления
В качестве средств измерения сопротивления применяют измеритель сопротивления (тераомметр) или источник питания и амперметр с параметрами, обеспечивающими измерения сопротивления с погрешностью ±10%.
При проведении испытаний должны быть приняты меры по снижению электрической опасности.
Если в используемом для измерения объемного сопротивления тераомметре не предусмотрена функция считывания тока, то в измерительной схеме применяют амперметр с диапазоном измерений от 10 пкА до 10 мА с точностью ±5%.
Выходное напряжение должно составлять 100 В ±5% для измерений сопротивления 1·10 Ом и более и 10 В ±5% для 1·10 Ом и менее.
Рабочий диапазон должен быть равным (1·10-1·10) Ом.
8.2 Конструкция электродов
Электроды должны состоять из материала, который обеспечивает плотный контакт с поверхностью испытуемого образца и не допускает существенного искажения значений измерений в результате добавления сопротивления самого электрода или загрязнения испытуемой поверхности. Материал электрода должен быть устойчив к коррозии и не вступать в химическую реакцию с материалом образца.
Для проведения измерений используют электроды, конструкция которых приведена в настоящем стандарте. Для определения объемного сопротивления рассеивающих материалов используют кольцевые электроды, имеющие достаточное пространство между центральным (измерительным) и кольцевым (охранным) контактами для минимизации блуждающих паразитных токов.
Промежуток должен быть равен 10 мм (см. рисунок 9).
8.2.1 Электрод для измерения поверхностного сопротивления
Конструкция электрода (датчик 1) представляет собой центральный диск, окруженный кольцом из проводящего материала, который контактирует с испытуемым образцом (см. рисунок 1).
Контактная поверхность материала должна иметь объемное сопротивление менее 10 Ом, при испытании на чистом, нержавеющем, металлическом (не алюминиевом) противоэлектроде при приложении испытательного напряжения 10 В.
Испытуемый материал должен быть помещен на изолирующую подставку (см. 8.2.4).
8.2.2 Электроды для измерения объемного сопротивления
Устройство состоит из двух электродов, расположенных на разных сторонах испытуемого материала (см. рисунок 3). Конструкция верхнего электрода (датчик 1) представлена на рисунке 1.
Нижний электрод (датчик 2) должен быть чистой, нержавеющей, металлической (не алюминиевой) пластиной, достаточного размера для того, чтобы быть подставкой испытуемого образца. Датчик 2 должен быть оборудован постоянно подключенным соединением (например, штепсельное гнездо, клепанное соединение).
ГОСТ 25384-82
(СТ СЭВ 2597-80)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
Методы лабораторной диагностики ящура
Domestic animals. Methods of laboratory diagnostics of foot-and-mouth disease
Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии и сертификации
(ИУС N 2, 1993 год). - Примечание изготовителя базы данных.
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А.Д.Третьяков
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. N 3155
Настоящий стандарт распространяется на крупный и мелкий рогатый скот, свиней, верблюдов, а также на все виды диких парнокопытных и мозоленогих животных, восприимчивых к ящуру, и устанавливает методы лабораторной диагностики ящура.
Стандарт предназначается для научно-исследовательских учреждений, республиканских и областных (краевых) ветеринарных лабораторий.
Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2597-80.
1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ
1.1. Для проведения диагностических исследований на ящур отбирают стенки и содержимое афт (лимфа) на слизистой оболочке языка (у крупного рогатого скота), на пятачке (у свиньи), на коже венчика и межпальцевой щели (у крупного и мелкого рогатого скота, свиней, верблюдов и др.). При отсутствии афт отбирают пробы крови в момент температурной реакции у животных, а из трупов молодняка всех видов животных - лимфатические узлы головы и заглоточного кольца, поджелудочную железу и мышцу сердца.
Для проведения ретроспективных диагностических исследований на ящур отбирают пищеводно-глоточную слизь. Отбор пищеводно-глоточной слизи производят в любое время после предполагаемого заболевания животных.
1.2. Для проведения диагностики серологическим методом отбирают не менее 5 г стенок или содержимого афт. Масса проб остальных материалов, предназначенных для выделения вируса ящура и его последующей идентификации, должна быть не менее 10 г.
При невозможности получения указанных количеств проб допускается отбирать максимально возможное количество патологического материала для проведения последующей расплодки вируса в культурах клеток.
1.3. Пробы патологического материала без признаков разложения помещают во флаконы с завинчивающимися или притертыми пробками и замораживают, а при отсутствии условий замораживания - заливают консервирующей жидкостью. Для консервирования стенок и содержимого афт используют консервирующую жидкость, состоящую из равных объемов нейтрального глицерина и забуференного 0,15 М раствора хлористого натрия или среды для культивирования клеток (без сыворотки). Пробы остального патологического материала консервируют растворами антибиотиков с широким спектром действия или глицерин-фосфатным буфером.
1.4. Флаконы с пробами снабжают этикеткой с указанием вида животных, наименования патологического материала и его количества, консерванта, времени отбора и адреса отправителя. Флаконы с пробами помещают в небьющийся контейнер со льдом или хладоносителем и доставляют на исследование в возможно короткий срок, но не позднее 48 ч с момента отбора. Если пробы могут быть доставлены в течение 6-12 ч с момента отбора, замораживание и консервация проб не обязательны.
1.5. Поступившие на исследование стенки афт освобождают от консервирующей жидкости отмыванием в 2-3 сменах стерильного 0,15 М раствора хлористого натрия или среды для культивирования клеток, взвешивают, измельчают сначала ножницами, а затем в ступке с песком или с помощью гомогенизатора и смешивают в соотношении 1:1 или 1:2 с 0,15 М раствором хлористого натрия. Полученные 50 или 33% суспензии выдерживают в течение 20 мин при температуре 4 °С, а затем очищают 20% (по объему) хлороформа или флюорокарбона в течение 5-7 мин и осветляют центрифугированием с частотой вращения 3000 об/мин в течение 15 мин.
1.6. Содержимое афт (лимфа) разбавляют равным количеством 0,15 М раствора хлористого натрия и подвергают очистке и осветлению в соответствии с п.1.5.
1.7. Пробы лимфоузлов, мышцы сердца, поджелудочной железы и свернувшейся крови сначала обрабатывают в соответствии с п.1.5, а затем разбавляют средой для культивирования клеток.
Полученные суспензии при невозможности немедленно использовать для постановки биопробы замораживают и хранят при температуре минус 20 °С.
1.8. Суспензии, полученные в соответствии с пп.1.5 и 1.6, делят на три неравные части. Меньшую из них (около 1 см), предназначенную для вирусологических исследований (постановки биопробы), консервируют антибиотиками и хранят при температуре минус 20 °С. Другую часть (2-3 см), предназначенную для исследования в РСК, прогревают при температуре 56 °С в течение 40 мин, а оставшуюся (1,5-2 см) - хранят без прогревания. Перед постановкой РСК обе эти пробы центрифугируют в течение 20 мин с частотой вращения 3500-4000 об/мин.
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Серологический метод
Сущность метода заключается в обнаружении специфического антигена того или иного типа и варианта вируса ящура непосредственно в материале, полученном от животных с клиническими признаками заболевания, с помощью реакции связывания комплемента (РСК).
2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы
2.1.1.1. Для проведения исследования применяют:
центрифугу настольную с угловым ротором и частотой вращения до 5000 об/мин;
холодильник с температурой минус 20 °С;
холодильник с температурой от 0 до 8 °С;
баню водяную или термостат;
шкаф сушильный с регулируемой температурой в диапазоне от 100 до 200 °С;
электрофотоколориметр или спектрофотометр;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-75;
пластинки (панели) для микросерологических реакций типа Такачи;
наборы разбавителей и капельниц для микросерологических реакций типа Такачи;
пипетки вместимостью до 10 см с ценой деления 0,01 и 0,1 см по ГОСТ 20292-74*;
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.
колбы мерные вместимостью 50, 100 и 200 см по ГОСТ 1770-74;
комплемент морской свинки с титром не более 2,8% по ГОСТ 16446-78;
гемолизин кроличий к эритроцитам барана с титром 1:8000 по ГОСТ 16446-78;
эритроциты барана в виде дефибринированной крови, смешанной с равным объемом консерванта;
сыворотки морских свинок семи типов и актуальных для стран-членов СЭВ вариантов вируса ящура с титром в РСК не ниже 1:20;
антигены ящурные эталонные семи типов и актуальных для стран-членов СЭВ вариантов вируса с титром в РСК не ниже 1:4;
сыворотки и антигены для лабораторной диагностики везикулярных заболеваний свиней;
кислоту борную дважды перекристаллизованную;
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 975-88. - Примечание изготовителя базы данных.
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
магний хлористый по ГОСТ 4209-77, х.ч.;
кальций хлористый по ГОСТ 4460-77, х.ч.;
среду питательную для культивирования клеток с 0,5% гидролизата лактальбумина (рН 7,4-7,6);
хлороформ по ГОСТ 20015-74* или флюорокарбон-113;
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 20015-88. - Примечание изготовителя базы данных.
консервант для эритроцитов; приготовленный следующим образом: последовательно растворяют в 100 см дистиллированной воды 6 г глюкозы, 4,5 г борной кислоты, дважды перекристаллизованной, и 0,85 г хлористого натрия. Полученный раствор стерилизуют кипячением в течение 3 дней по 30 мин;
раствор буферный веронал-мединаловый концентрированный, приготовленный следующим образом: растворяют в 1000 см кипящей дистиллированной воды 83 г хлористого натрия, 18,4 г веронала, 1,15 г хлористого магния и 0,22 г хлористого кальция. Раствор охлаждают, затем растворяют 0,22 г мединала, стерилизуют автоклавированием и хранят при температуре 4 °С. Рабочий раствор готовят непосредственно перед постановкой РСК разбавлением концентрированного раствора четырьмя объемами дистиллированной воды.
2.1.2. Подготовка к исследованию
2.1.2.1. Суспензии стенок и содержимого афт, полученные в соответствии с пп.1.5, 1.6 и 1.8, разводят с 1:2 до 1:32 0,15 М раствором хлористого натрия, вероналовым буфером или средой для культивирования клеток и разливают в серологические пробирки по 0,1 см или в лунки панелей для микросерологических реакций по 0,025 см. Число пробирок (лунок), заполняемых каждым разведением исследуемой суспензии, должно быть равно числу штаммоспецифических сывороток и контролей на антикомплементарность и гемолитические свойства.
2.1.2.2. Для приготовления гемолитической системы эритроциты барана трехкратно отмывают от консерванта 0,15 М раствором хлористого натрия, каждый раз осаждая их центрифугированием с частотой вращения 600 об/мин в течение 5-7 мин и готовят рабочую суспензию смешиванием 2 см осадка с 98 см разбавителя. К полученной суспензии эритроцитов при постоянном перемешивании приливают постепенно равный объем гемолизина, разведенного 0,15 М раствором хлористого натрия с таким расчетом, чтобы его конечное разведение было в 4 раза концентрированнее предельного гемолитического титра, указанного на этикетке. Затем суспензию выдерживают в течение 15-20 мин в водяной бане при температуре 37 °С или при комнатной температуре.
При постановке РСК на панелях для микрореакций концентрацию эритроцитов в гемсистеме увеличивают в 2 раза.
2.1.2.3. Для приготовления рабочего разведения комплемента содержимое нескольких ампул с сухим препаратом растворяют в первоначальном объеме дистиллированной воды, определяют предельный титр, обусловливающий гемолиз 50% эритроцитов гемсистемы, приготовленной согласно п.2.1.2.2, и разводят 0,15 М раствором хлористого натрия или вероналовым буфером из расчета 5 CH в 0,1 см (если РСК ставят в пробирках) или в 0,025 см (при постановке РСК на панелях для микрореакций).
2.1.2.4. Рабочие разведения типоспецифических ящурных сывороток готовят на 0,15 М растворе хлористого натрия или вероналовом буфере из расчета получения раствора в 2 раза более концентрированного, чем их предельный титр, т.е. они должны содержать 2 сывороточных единицы (СЕ). Вариантноспецифические сыворотки разводят до предельного титра. Вместо типоспецифических сывороток могут быть использованы вариантноспецифические в предельном, двух- и четырехкратном титрах (1, 2 и 4 СЕ).
2.1.2.5. Рабочие разведения эталонных (контрольных) яшурных антигенов готовят на 0,15 М растворе хлористого натрия или вероналовом буфере. Они должны быть в 2 раза концентрированнее, чем их предельный титр, т.е. должны содержать 2 антигенных единицы (АЕ).
2.1.2.6. Рабочие разведения сывороток и антигенов для лабораторной диагностики везикулярных заболеваний сельскохозяйственных животных готовят по пп.2.1.2.4 и 2.1.2.5.
2.1.3. Проведение исследования
2.1.3.1. В пробирки (лунки), заполненные в соответствии с п.2.1.2.1, вносят равные объемы штаммоспецифических сывороток, взятых в рабочем титре, и рабочего разведения комплемента, содержащие 5 CH. В контролях исследуемого патологического материала на антикомплементарность заменяют сыворотки равным объемом разбавителя, а в контроле на гемолитические свойства - разбавителем заменяют и комплемент. Все полученные смеси тщательно встряхивают и помещают в водяную баню пли термостат при 37 °С на 30 мин, после чего к ним добавляют суспензию эритроцитов, сенсибилизированных гемолизином, в объеме 0,2 см (пробирки) или 0,05 см (лунки), энергично встряхивают и выдерживают при 37 °С в течение 20 мин.
Пробирки или панели извлекают из термостата или водяной бани и осаждают эритроциты центрифугированием в течение 5 мин с частотой вращения 600 об/мин или отстаиванием в течение 2-3 ч при комнатной температуре.
При исследовании недоброкачественных афтозных материалов, а также при исследовании сердечной мышцы объем исследуемых суспензий увеличивают в 4 раза при сохранении объема и концентрации остальных компонентов реакции в обычных пределах.
1. БОЛЕЗНИ, ОБЩИЕ ДЛЯ ВСЕХ ИЛИ НЕСКОЛЬКИХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
1.2. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ВЫДЕЛЕНИЮ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИРУСА ЯЩУРА
ОДОБРЕНЫ И РЕКОМЕНДОВАНЫ 15 октября 1973 г., б/н
I. ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА ЯЩУРА
Для выделения вируса из патологического материала необходимо располагать достаточным количеством такого материала, иметь восприимчивых к вирусу ящура сельскохозяйственных или лабораторных животных, а также чувствительные к вирусу культуры клеток; располагать условиями, исключающими возможность выноса вируса за пределы диагностической лаборатории.
1. Правила отбора патологического материала
Для исследования отбирают патологический материал в виде стенок афт от 2. 3 больных животных в количестве не менее 5 г. У крупного рогатого скота берут стенки созревших непрорвавшихся афт с языка, у свиней - с "пятачка" или вымени, у мелкого рогатого скота - с беззубого края верхней челюсти, с кожи межкопытной щели или венчика. Афты должны быть свежими, плотной консистенции, не издавать гнилостного запаха.
Материалом для исследования могут служить и лимфатические узлы или костный мозг, реже другие паренхиматозные органы. Для прижизненного обнаружения вируса ящура можно использовать слюну и кровь больных животных. Для исследования на вирусоносительство у животных специальным зондом берут соскоб слизистой оболочки глотки и пищевода.
При отборе патологического материала пользуются стерильным инструментом или посудой. Патологический материал помещают в стерильные флаконы или банки с навинчивающимися колпачками с плотной резиновой прокладкой, в которые до 1/3 объема наливают консервирующую жидкость, состоящую из смеси равных частей химически чистого глицерина и фосфатно-буферного раствора рН 7,4. 7,6. На флаконы наклеивают этикетку с наименованием вида патологического материала, даты отбора и адреса хозяйства.
Флаконы или банки с отобранным материалом ставят в металлический непроницаемый контейнер, опечатывают и помещают в термос со льдом. К материалу прилагают сопроводительную записку, в которой указывают дату взятия материала, от какого вида животных и какой материал взят, сообщают подробную эпизоотическую обстановку по ящуру в хозяйстве.
2. Подготовка материала к исследованию
При доставке в лабораторию стенок афт от больных животных для определения типа и варианта вируса ящура необходимо в максимально короткий срок провести исследование в РСК. С этой целью из афтозного материала готовят антиген по следующей методике. Стенки афт отмывают физиологическим раствором рН 7,4. 7,6, высушивают фильтровальной бумагой, взвешивают, измельчают и растирают в фарфоровой ступке с битым нейтральным стеклом до получения однородной массы.
Антигены для РСК готовят в виде 33%-ной суспензии (1:3) путем добавления к полученному весу афтозного материала двойного количества физиологического раствора. Полученную взвесь экстрагируют при комнатной температуре в течение 2 ч и промораживают при температуре -6. -20°С в течение 5…18 ч.
После размораживания антиген центрифугируют 10. 15 мин при 6000 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают и инактивируют при 58°С в течение 40 мин. После инактивации надосадочную жидкость повторно центрифугируют и используют в РСК.
Эффективность выделения вируса из патологического материала повышается при очистке и концентрировании вируссодержащих суспензий. Для этой цели в суспензию используемого материала добавляют фреон-113 в равном количестве к ее объему или хлороформ (10% к объему суспензии). После гомогенизации в течение 15. 20 мин и центрифугирования в течение 20 мин проводят концентрирование надосадочной жидкости полиэтиленгликолем с молекулярным весом 6000. К надосадочной жидкости добавляют 7,5% полиэтиленгликоля, встряхивают до растворения и оставляют в холодильнике при температуре 4°С на 2 ч. Затем центрифугируют при 4000. 6000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а образовавшийся осадок разбавляют фосфатным буфером или физиологическим раствором в объеме, в 10. 20 раз меньшем, чем исходное количество взятой суспензии. Подготовленный материал используют для испытания на наличие вируса.
3. Выделение вируса
На основании опыта отечественных и зарубежных исследователей для выделения вируса ящура может быть предложена следующая схема (рис.1).
Лучшим, хотя и дорогостоящим, методом обнаружения вируса ящура в патологическом материале является биопроба на крупном рогатом скоте. 10%-ную суспензию полученного материала вводят телятам в возрасте 3 мес. и старше, по 0,1 мл в слизистую оболочку языка в нескольких точках. Появление афт на месте введения материала с последующим подтверждением специфичности материала в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура. Этот метод применяется в диагностической практике очень редко. Чаще всего для постановки биопроб используют мышат-сосунов 4. 6-дневного возраста и морских свинок весом не менее 500 г. Мышатам-сосунам 10%-ную суспензию испытуемого материала вводят под кожу в дозе 0,2 мл или внутрибрюшинно в дозе 0,1 мл. Появление парезов и параличей конечностей, а затем гибель мышат с подтверждением специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура в испытуемом материале. Морским свинкам 10%-ную суспензию испытуемого материала вводят методом туннелирования внутрикожно в плантарную поверхность лапок. Появление афт на месте введения материала с последующим подтверждением их специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура.
Схема выделения вируса
Высокочувствительным методом выделения вируса является инокуляция культур клеток. В этих целях чаще всего используют однослойную культуру первично-трипсинизированных клеток почек свиней (СП). 10%-ную суспензию испытуемого материала вносят в 4. 6 пробирок с культурой клеток. Для этого удаляют питательную среду и добавляют 0,1. 0,2 мл испытуемого материала. Лучше испытуемый материал инокулировать в увеличенных дозах (20 мл) в большие сосуды типа матрасов Повитской емкостью до 5 л. Пробирки или матрасы оставляют в горизонтальном положении около часа для контакта клеток с испытуемым материалом. После этого добавляют питательную среду. Наблюдение за инфицированными культурами клеток ведут в течение трех дней. При появлении выраженного цитопатического действия (++++) культуральную жидкость собирают и сохраняют в замороженном состоянии. Специфическая дегенерация клеток при подтверждении ее специфичности в РСК свидетельствует о наличии вируса ящура в испытуемом материале.
II. МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА
1. Серологические методы
А. Реакция связывания комплемента по 100%-му гемолизу
Наставление по определению типов и подтипов (вариантов) вируса ящура утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 27 августа 1968 г.
Реакция связывания комплемента применяется для определения типов и подтипов (вариантов) вируса ящура, вызвавших заболевание животных, а также для проверки производственных штаммов вируса ящура при изготовлении вакцин и лабораторных штаммов в научно-исследовательской работе.
Компоненты реакции:
а) гемолизин - сыворотка кроликов, гипериммунизированных эритроцитами барана;
б) эритроциты барана - в виде 2%-ной взвеси (из осадка отмытых эритроцитов) на физиологическом растворе;
в) комплемент - свежая или сухая нормальная сыворотка морских свинок;
г) сыворотки морских свинок, гипериммунизированных стандартными типовыми производственными или эпизоотическими штаммами вируса ящура;
д) антигены контрольные - из эталонов типовых и производственных штаммов вируса ящура, испытуемые - из эпизоотических, производственных или лабораторных штаммов вируса от крупного рогатого скота, овец, свиней, крольчат и животных других видов;
е) физиологический раствор - 0,85%-ный раствор химически чистой поваренной соли на дистиллированной воде.
а) Гемолизин
Для определения титра гемолизина из него готовят серию разведений на физиологическом растворе и затем испытывают его активность в этих разведениях.
Выпускаемый биофабрикой гемолизин консервирован глицерином (1:1), поэтому для приготовления первого разведения 1:100 берут 0,2 мл гемолизина и 9,8 мл физиологического раствора. Затем в отдельной пробирке готовят следующее разведение - 1:1000, для чего к 1 мл гемолизина в разведении 1:100 добавляют 9 мл физиологического раствора. Разведение 1:1000 является основным, из которого готовят все последующие: 1:1500, 1:2000, 1:3000, 1:4000 и т.д.
Приготовление разведений гемолизина
Водяная баня 10 мин при температуре 37. 38°С, после чего проводят учет реакции.
Титром гемолизина считается наивысшее разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов.
Рабочим разведением гемолизина считается четырехкратная концентрация от его предельного титра.
Титрование гемолизина
В дальнейшем перед постановкой реакции гемолизин обычно не титруют, а рабочее разведение готовят, исходя из предельного титра, установленного при его выпуске биофабрикой и указанного на этикетке. Например, если предельный титр гемолизина 1:3000, рабочее разведение будет 1:750. Поскольку гемолизин, выпускаемый биофабрикой, консервирован глицерином (1 часть глицерина на 1 часть гемолизина), для приготовления рабочего разведения гемолизина берут вдвое больше, т.е. 2:750, или 0,2 мл гемолизина и 74,8 мл физиологического раствора.
Для дальнейшей работы гемолизин в рабочем разведении смешивают с равным количеством 2%-ной взвеси эритроцитов. Полученная смесь называется гемолитической системой (гемсистемой).
б) Эритроциты
Полученную кровь барана дефибринируют, фильтруют через марлю в центрифужные пробирки, затем центрифугируют 10 мин при 2000. 3000 об/мин. Сыворотку отсасывают, а к осадку эритроцитов добавляют примерно 8. 10-кратное количество физиологического раствора, все тщательно перемешивают и снова центрифугируют, как указано выше. Затем жидкость над осадком удаляют, а к осадку добавляют свежую порцию физиологического раствора, смешивают и центрифугируют. Эту операцию отмывания эритроцитов от сыворотки повторяют до тех пор, пока жидкость над осадком не станет бесцветной (обычно для этого требуется отмывать 3. 5 раз). По окончании отмывания жидкость над осадком тщательно отсасывают пипеткой, а из осадка эритроцитов готовят 2%-ную взвесь. Для этого берут 2 мл отмытых эритроцитов и 98 мл физиологического раствора. Для удобства дальнейшей работы готовят гемсистему, которую в процессе употребления часто взбалтывают, так как эритроциты быстро оседают на дно сосуда.
в) Комплемент
Комплемент выпускается биофабриками в сухом виде. Его можно получить и самим, приготовив свежую неинактивированную сыворотку крови от здоровых морских свинок. Титруют комплемент в гемолитической системе и обязательно в день постановки реакции.
Титрование комплемента
Комплемент исследуют в разведении 1:20 в следующих дозах: 0,05; 0,10; 0,15 и т.д. с интервалами 0,05 до 0,40 мл. В каждую пробирку недостающее количество до объема 0,5 мл доливают физиологическим раствором (в первую пробирку 0,45 мл физиологического раствора, во вторую - 0,40, в третью - 0,35 и т.д.). Это будет соответствовать 0,5; 1,0; 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 и 4% цельного комплемента, содержащегося в дозе 0,5 мл разведения с физиологическим раствором.
Водяная баня 15 мин при температуре 37. 38°С, после чего проводят учет реакции.
Титром комплемента считается наименьшее его количество, дающее полный гемолиз эритроцитов. Для работы по определению типов вируса ящура пригоден комплемент, дающий при этих условиях титр не ниже 2,5%.
В дальнейшем для постановки главного опыта комплемент берут с постоянным излишком в 2 условные единицы от титра в его гемолитической системе. Например, если титр комплемента в гемолитической системе 1,5% (см. схему титрования комплемента), для получения рабочего разведения комплемента следует взять 2,5%, что составляет 2 единицы. Разведение комплемента делают из нативного цельного комплемента.
г) Сыворотки
Типоспецифические и вариантные гипериммунные ящурные сыворотки готовят на биофабриках (в институтах) и используют для определения типов и подтипов (вариантов) вируса ящура.
Типоспецифические и вариантные ящурные антигены готовят из тканей больных ящуром крольчат на биофабриках и в институтах.
Испытуемый антиген (стенки афт с языка крупного рогатого скота, с "пятачка" или вымени свиней, с венчика, межкопытной щели или беззубого края верхней челюсти мелкого рогатого скота и т.д.) готовят по методике, описанной выше (см. п.2). Присланный на исследование патологический материал в виде стенок афт или других тканей берут в количестве, необходимом для постановки РСК. Остаток патологического материала хранят в холодильнике при температуре -6. -20°С в консерванте и используют для дальнейшего изучения. В случае отрицательных результатов РСК допускается расплодка испытуемого материала на 4. 6-дневных мышатах, морских свинках или культуре ткани.
Определение типов вируса ящура
При определении типов вируса ящура перед проведением главного опыта позитивные ящурные сыворотки и антигены не титруют, а используют их в удвоенных титрах. Например, если предельный титр сыворотки, указанный на этикетке, 1:40, то ее удвоенным титром будет разведение 1:20. Если предельный титр антигена, указанный на этикетке, 1:6, то его удвоенным титром будет разведение 1:3.
Испытуемый антиген в реакции исследуют цельным (33%-ная взвесь) и в разведениях 1:2; 1:4, 1:8.
Читайте также: