Методические рекомендации 3 1 2 0072-13 диагностика коклюша и паракоклюша

Обновлено: 26.04.2024

Исследование, направленное на выявление специфических антител класса IgА к возбудителю коклюша (Bordetella pertussis), для диагностики острой и текущей инфекции.

Синонимы русские

Антитела класса IgА к возбудителю коклюша; Антитела класса IgА к Bordetella pertussis; иммуноглобулины класса А к Bordetella pertussis; Антитела класса IgА к бактерии Борде – Жангу.

Синонимы английские

Bordetella pertussis Antibodies, IgА; Bordetella pertussis Specific IgА; Anti-Bordetella pertussis IgА.

Метод исследования

Единицы измерения

МЕ/мл (международная единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию, одним из характерных признаков которой является продолжительный приступообразный спастический кашель. Возбудителем является Bordetella pertussis, палочка Борде – Жангу, неподвижная мелкая грамотрицательная коккобацилла, относящаяся к строгим аэробам. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

Микроорганизм B. pertussis имеет сложную антигенную структуру. Основными антигенными мишенями для специфичных антител являются коклюшный токсин, поверхностный белок – филаментозный гемагглютинин, белок наружной мембраны пертактин, липополисахарид, поверхностные белки – агглютининогены. В зависимости от присутствия в бактериальной клетке агглютиногенов 2-го и 3-го класса выделяют четыре серотипа B. рertussis. Кроме описанных, в антигенную структуру B. pertussis входят гемагглютинины, аденилатциклаза-гемолизин.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный (длительностью от 3 до 14 дней, в среднем 7-8 дней), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (от 2-3 до 6-8 недель и более), период обратного развития, или ранней реконвалесценции (от 2 до 8 недель), и реконвалесценции (от 2 до 6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, имеющий приступообразное течение, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, слабость, температура тела преимущественно нормальная. В клиническом анализе крови может отмечаться лейкоцитоз, относительный и абсолютный лимфоцитоз. При тяжелом течении заболевания возможно развитие осложнений: нарушение мозгового кровообращения, потеря сознания, судороги, эмфизема легких и средостения, ателектазы, кровотечения, грыжи, присоединение вторичной инфекции с развитием бронхита, пневмонии, плеврита, отита, медиастинита. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста. Оно характеризуется более коротким инкубационным, длительным пароксизмальным периодами, развитием тяжелых последствий и осложнений. У взрослых людей и лиц после предшествующей вакцинации коклюш может протекать в легкой, атипичной или стертой форме.

Диагностика коклюша основана на эпидемиологических, клинических данных и результатах изменений лабораторных показателей. В клинической лабораторной диагностике коклюша применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителя; серологический метод, направленный на определение антител к антигенам B. pertussis; метод полимеразной цепной реакции – для выявления генетического материала возбудителя коклюша. Диагноз ставится при подтверждении клинического диагноза "коклюш" хотя бы одним из указанных методов.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. рertussis. Обнаружение данных антител возможно с помощью реакции непрямой гемагглютинации или методом иммуноферментного анализа (ИФА). Метод ИФА позволяет выявлять антитела классов IgA, IgM и IgG к антигенам B. рertussis, чаще всего к коклюшному токсину – филаментозному гемагглютинину. Серологическую диагностику коклюша целесообразно применять не раньше второй недели заболевания, оптимальными являются сроки с 3-й по 6-ю неделю заболевания.

Для чего используется исследование?

Для серологической лабораторной диагностики коклюша, вызванного возбудителем Bordetella pertussis.
Для диагностики острой и текущей инфекции, вызванной Bordetella pertussis, начиная со второй недели от появления первых клинических симптомов заболевания.
Для диагностики острой и текущей инфекции у детей, не вакцинированных против коклюша.
Для диагностики острой и текущей инфекции у вакцинированных детей и взрослых при признаках выраженной сероконверсии.

Когда назначается исследование?

При клинических проявлениях коклюша: сухой спастический кашель, имеющий приступообразное течение, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, слабость, насморк, слезотечение, температура тела преимущественно нормальная, возможна лихорадка, в клиническом анализе крови – лейкоцитоз.
При подозрении на коклюш, вызванный Bordetella pertussis, начиная со второй недели от появления первых клинических симптомов заболевания.
При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем.
При дифференциальной диагностике с острыми респираторными вирусными заболеваниями, корью, бронхитом, пневмонией, бронхиальной астмой.

Что означают результаты?

Результат: 0 - 8 МЕ/мл (отрицательный).

отсутствие коклюша;
отсутствие или снижение иммунного ответа;
ранние сроки инфицирования вирусом и отсутствие синтеза специфических антител;
ложноотрицательные или неспецифические результаты.

коклюш;
острая и текущая инфекция, вызванная возбудителем Bordetella pertussis;
легкие, стертые или атипичные формы коклюша при отсутствии типичных клинических проявлений.

Что может влиять на результат?

Клинический период заболевания, возраст пациента, предшествующая вакцинация.
Особенности иммунного ответа у новорождённых детей.

Важные замечания

У детей младше шести месяцев, а также у лиц с иммунодефицитными состояниями может отсутствовать выработка антител класса IgA на инфекцию, вызванную B. рertussis. Поэтому отрицательный результат теста на IgA у детей данного возраста не означает отсутствие коклюша.
При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

Bordetella pertussis, IgM
Bordetella pertussis, IgG
Anti-Bordetella pertussis, anti-Bordetella parapertussis
Bordetella pertussis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша
Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
Лейкоцитарная формула

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

3.1.2. ИНФЕКЦИИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ

Диагностика коклюша и паракоклюша

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); Федеральным бюджетным учреждением науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Пастера" (Г.Я.Ценева, Н.Н.Курова); Федеральным бюджетным учреждением науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (С.Б.Яцышина, Т.С.Селезнева, М.Н.Прадед); Федеральным государственным бюджетным учреждением "Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства" (Ю.В.Лобзин, И.В.Бабаченко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 мая 2013 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

Термины и сокращения

АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ГОСТ - Государственный стандарт

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

КУА - казеиново-угольный агар

ME - международные единицы

МУ - методические указания

ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция

ПСК - период судорожного кашля

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РА - реакция агглютинации

РИФ - реакция иммунофлуоресценции

РНК - рибонуклеиновая кислота

СанПиН - санитарно-эпидемиологические правила и нормы

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СП - санитарно-эпидемиологические правила

ТЕ - буфер Трис-ЭДТА

ТУ - технические условия

ФС - фармакопейная статья

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay (разновидность ИФА)

FHA - filamentous haemagglutinin (филаментозный гемагглютинин)

NASBA - nucleic acid sequence-based amplification (метод амплификации РНК)

PT - pertussis toxin (коклюшный токсин)

RS-инфекция - инфекция, вызванная респираторно-синцитиальным вирусом

1. Область применения

В методических рекомендациях представлена современная микробиологическая характеристика коклюша в условиях массовой вакцинопрофилактики. В них содержится краткое описание рода Bordetella, включая новые виды, открытые в последнее десятилетие, более детальная характеристика биологических свойств В. pertussis, В. parapertussis и В. bronchiseptica, описание бактериологического метода исследования с использованием приемов, повышающих его информативность, современных методов лабораторной диагностики ПЦР и ИФА. Представлены алгоритмы диагностики коклюша в зависимости от вакцинального статуса, возраста и сроков заболевания пациентов. Цель настоящих методических рекомендаций - унифицировать подходы к лабораторной диагностике коклюшной инфекции.

Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и организаций Роспотребнадзора (микробиологов, эпидемиологов), специалистов по клинической лабораторной диагностике, инфекционистов, педиатров, семейных врачей и врачей общей практики.

2. Введение

В довакцинальную эру коклюш занимал второе место среди детских капельных инфекций по уровню заболеваемости и первое по уровню смертности. В настоящее время в мире ежегодно заболевает несколько миллионов человек, умирает около 200 тыс. (в 2008 г. - 16 млн заболевших, 195 тыс. смертей).

Специфическая профилактика коклюша, проводимая в нашей стране с 1959 года, отчетливо повлияла на эпидемический процесс, биологические свойства возбудителя и клинику. Этапы массовой иммунизации характеризовались различным уровнем охвата детей прививками против коклюша и, в соответствии с этим, менялась эпидемиологическая обстановка. Низкий уровень иммунизации в 90-е годы привел к росту заболеваемости коклюшем. Достижение охвата прививками детей первого года жизни (более 95%) в последующие годы и поддержание его на этом уровне обеспечило не только снижение заболеваемости коклюшем, но и с 2001 г. стабилизацию показателей на минимальном уровне (3,2-5,7 на 100 тыс. населения). Особенностью эпидемического процесса коклюша на фоне высокого охвата прививками детей раннего возраста является возникновение периодических подъемов. Это объясняется недостаточной напряженностью и длительностью поствакцинального иммунитета, создаваемого в условиях нередкого нарушения календаря прививок, в частности, несоблюдения сроков вакцинации и интервалов между введениями доз вакцины и проведением ревакцинации, что способствует накоплению значительного числа неиммунных лиц. Увеличение охвата прививками привело в настоящее время к изменению возрастной структуры лиц, заболевших коклюшем. Большинство заболевших составляют школьники 7-14 лет - до 50,0%, дети 3-6 лет - до 25,0%, наименьшую долю - дети в возрасте 1-2 лет - 11,0% и дети до 1 года - 14,0%. В периоды подъема заболеваемости коклюшем интенсивность эпидемического процесса определяется заболеваемостью детей школьного возраста. Темпы роста в этой группе увеличиваются в 2-3 раза. Из числа лиц, заболевших коклюшем, 65% составляют привитые.

Поствакцинальный иммунитет не предохраняет от заболевания. Коклюш в этих случаях протекает в виде легких и стертых форм инфекции, которые диагностируются, в основном, ретроспективно (серологически). После перенесенного заболевания остается более длительный иммунитет.

Истинная заболеваемость коклюшем значительно выше за счет недиагностированной коклюшной инфекции (легких и стертых клинических форм). Трудности клинической диагностики коклюша на ранних стадиях заболевания, отсутствие обследования всех длительно (свыше 7 дней) кашляющих или его проведение на поздних сроках заболевания, а также после продолжительного лечения антибактериальными препаратами приводит к низкому проценту выявляемости возбудителя инфекции. Уровень бактериологического подтверждения диагноза составляет 10-20%. Современные методы исследования позволяют проводить раннюю диагностику заболевания (ПЦР) и существенно облегчают постановку диагноза (ПЦР, ИФА).

Таким образом, коклюш в нашей стране требует пристального внимания со стороны врачей различных специальностей. Своевременная и качественная лабораторная диагностика коклюшной инфекции позволит избежать ошибок в постановке диагноза и будет способствовать эффективной терапии.

3. Характеристика рода Bordetella*, биологические свойства возбудителей коклюша и паракоклюша

* Слово "Bordetella" в наименовании раздела 3 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

Род Bordetella относится к семейству Alcaligenaceae и включает 9 видов: В. ansorpii, В. avium, В. bronchiseptica, В. hinzii, В. holmesii, В. parapertussis, В. pertussis, В. petrii, В. trematum. Первой (в 1908 г.) была описана В. pertussis, бактерия патогенна для человека и является возбудителем коклюша. В. parapertussis была описана в 1938 г., вызывает у людей паракоклюш (коклюшеподобное заболевание), она также была выделена от овец. В. bronchiseptica была описана в 1911 г., является возбудителем заболеваний дыхательных путей у многих млекопитающих (кашля у собак, атрофического ринита у свиней и др.), но встречается также бессимптомное носительство. У человека редко вызывает заболевание, однако описаны случаи, когда у пожилых людей, заразившихся от домашних животных (кроликов), В. bronchiseptica вызывала длительный кашель. В. avium описана в 1984 г., является возбудителем ринотрахеита у птиц. Описано несколько случаев выделения B. avium от пожилых пациентов с отягощенным анамнезом, с клинической картиной пневмонии. В 1995 г. были описаны сразу два новых вида: В. hinzii и В. holmesii. В. hinzii колонизирует дыхательные пути домашней птицы, была выделена от иммуноскомпрометированных пациентов, описан случай летальной септицемии. В. holmesii выделялась только от людей, обнаруживалась в мокроте, несколько раз в крови, этиологическая роль в развитии инфекций не доказана. В 1996 г. выделена В. trematum, возбудитель вызывает раневые и ушные инфекции. В 2001 г. была описана В. petrii, единственный представитель рода, выделенный из окружающей среды и способный жить в анаэробных условиях. В 2005 г. была выделена В. ansorpii, описано несколько случаев выделения от пациентов с онкологическими заболеваниями (из гнойного содержимого эпидермальной кисты, из крови).

Морфологические и культуральные свойства

Бактерии рода Bordetellae - мелкие (0,2-0,5 мкм0,5-2,0 мкм) грамотрицательные коккобациллы. В мазках - часто биполярно окрашенные, одиночные или в парах, реже в цепочках, имеют нежную капсулу. Все, за исключением В. petrii, - строгие аэробы. Температура выращивания бордетелл +35-37 °С (оптимально +35 °С). Бордетеллы требовательны к условиям роста: 130-150 мг %аминного азота, кровь, дрожжевой экстракт, никотиновая кислота, аминокислоты (цистин, пролин, метионин, серин, глютамин и др.); наиболее требователен возбудитель коклюша, он растет только на специальных средах, в то время как остальные представители рода растут на кровяном агаре. Классической средой для первичного выделения В. pertussis является среда Борде-Жангу (картофельно-глицериновый агар), позднее были предложены синтетические и полусинтетические среды, в частности, казеиново-угольный агар (КУА). На указанных средах бордетеллы вырастают в виде характерных колоний: на среде Борде-Жангу - выпуклые, гладкие, блестящие, серебряного цвета, напоминающие капли ртути, окруженные зоной гемолиза; на КУА - выпуклые, гладкие, серого цвета с жемчужным, желтоватым или беловатым оттенком. Колонии маслянистые, легко снимаются петлей. В. parapertussis и В. holmesii за счет образования пигмента вызывают потемнение сред с кровью, образуют бурую подложку.

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с АО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Программа разработана совместно с АО "Сбербанк-АСТ". Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Продукты и услуги Информационно-правовое обеспечение ПРАЙМ Документы ленты ПРАЙМ Письмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 29 февраля 2016 г. N 01/2360-16-27 "О результатах проведения внешнего контроля качества исследований по диагностике коклюша и качества питательных сред в Российской Федерации"

Обзор документа

Письмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 29 февраля 2016 г. N 01/2360-16-27 "О результатах проведения внешнего контроля качества исследований по диагностике коклюша и качества питательных сред в Российской Федерации"

Во исполнение письма Роспотребнадзора от 14.05.2015 N 01/5190-15-27 "Об организации проведения внешнего контроля качества исследований по диагностике коклюша" лабораторией диагностики дифтерийной и коклюшной инфекций референс-центра по мониторингу за коклюшем ФБУН "МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского" Роспотребнадзора (далее - референс-центр) проведен внешний контроль качества бактериологических исследований при коклюшной инфекции, осуществляемых лабораториями федеральных бюджетных учреждений здравоохранения в субъектах Северо-Западного, Южного и Северо-Кавказского федеральных округов.

Результаты идентификации возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза двух бактериологических культур, направленных из референс-центра в территории, представлены из 24 субъектов Российской Федерации, из них правильно проведена идентификация двух контрольных задач по коклюшу в 20 субъектах страны (83,3%).

В Республике Дагестан неправильно идентифицированы обе культуры бордетелл.

В Республике Калмыкия, Кабардино-Балкарской Республике и Псковской области неправильно идентифицирована одна культура - возбудителя паракоклюша.

В республиках Карелия, Коми, Адыгея, Ингушетия, Ненецком автономном округе, Архангельской, Вологодской и Мурманской областях обе культуры идентифицированы правильно. Однако при правильной идентификации поставлен не полный биохимический ряд: отсутствовали тесты - рост на простом агаре (республики Карелия, Коми, Адыгея); на тирозиназу (Архангельская область, Ненецкий автономный округ), на подвижность и тирозиназу (Вологодская область), на тирозиназу и рост на простом агаре (Мурманская область), на подвижность и рост на простом агаре (Республика Ингушетия), что не позволяет дифференцировать штаммы различных видов бордетелл - возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза.

Анализ качества проведения исследований показал, что контрольные штаммы всех видов бордетелл для проведения контроля качества питательных сред и биохимической идентификации возбудителя коклюша имеют только 20,8% из представленных субъектов.

Полностью отсутствуют контрольные коклюшные штаммы в Карачаево-Черкесской Республике, республиках Карелия, Дагестан, Северная Осетия-Алания, Ненецком автономном округе, Вологодской, Архангельской, Новгородской, Псковской областях.

В Республике Дагестан и Псковской области используют не действующую в настоящее время нормативную и методическую документацию.

Для взятия патологического материала для бактериологического исследования на коклюш в Мурманской области используют коммерческие транспортные среды, в Ненецком автономном округе - сухие коммерческие прямые тампоны, что противоречит требованиям действующего законодательства.

При диагностическом исследовании патологического материала биохимическая идентификация возбудителя коклюшной инфекции проводится не в полном объеме в республиках Коми, Адыгея, Калмыкия, Ненецком автономном округе, Архангельской, Псковской, Мурманской, Новгородской, Астраханской областях: отсутствует тест рост на МПА (республика Адыгея, Калмыкия, Коми, Архангельская, Псковская области); отсутствует тест на тирозиназу (Архангельская, Мурманская, Новгородская, Астраханская области, Ненецкий автономный округ); нет теста на подвижность (Псковская область, республики Калмыкия и Ингушетия). Вологодская область и Республика Дагестан данные не представили.

Неполноценно проводится контроль качества питательных сред при проведении исследований в Ненецком автономном округе, республиках Карелия, Дагестан, Северная Осетия-Алания, Кабардино-Балкарской, Карачаево-Черкесской республиках, Архангельской, Псковской, Вологодской, Новгородской областях вследствие отсутствия контрольных коклюшных штаммов.

При проведении сравнительных испытаний качества выборочных серий питательных сред, используемых на территории Российской Федерации, все они соответствовали требованиям методических рекомендаций МР 3.1.2.0072-13 "Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша" - обладали высокой ростовой ценностью.

Учитывая вышеизложенное, в целях обеспечения качественной диагностики коклюша в Российской Федерации, предлагаю:

1. Руководителям управлений Роспотребнадзора по субъектам Российской Федерации, главным врачам ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в субъектах Российской Федерации" Роспотребнадзора совместно с органами исполнительной власти субъектов Российской Федерации в сфере охраны здоровья обеспечить контроль за соблюдением профилактических мероприятий против коклюша и бактериологической диагностикой этой инфекции в соответствии с требованиями действующих нормативных и методических документов, в т.ч. санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.2.3162-14 "Профилактика коклюша", методических рекомендаций МР 3.1.2.0072-13 "Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша".

3. Главному врачу ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в Ростовской области (Айдинов Г.Т.) в срок до 30.03.2016 организовать и провести практический семинар по вопросам диагностики коклюша и повторный внешний контроль качества исследований на базе регионального центра по мониторингу за возбудителем коклюша для специалистов лабораторной сети республик Калмыкия и Адыгея с привлечением специалистов референс-центра по мониторингу за коклюшем.

4. Главному врачу ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в Калининградской области (Михеенко О.П.) в срок до 30.06.2016 организовать практический семинар по вопросам диагностики коклюша и провести повторный внешний контроль качества исследований на базе регионального центра по мониторингу за возбудителем коклюша для специалистов лабораторной сети Калининградской и Псковской областей, с привлечением специалистов референс-центра по мониторингу за коклюшем.

5. Главному врачу ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в Ставропольском крае (Соломащенко Н.И.) в срок до 30.05.2016 организовать практический семинар по вопросам диагностики коклюша и провести повторный внешний контроль качества исследований на базе регионального центра по мониторингу за возбудителем коклюша для специалистов лабораторной сети Кабардино-Балкарской Республики и Республики Дагестан, с привлечением специалистов референс-центра по мониторингу за коклюшем.

6. Главным врачам ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в Мурманской области (Ершова С.М.) и Ненецком автономном округе (Шепеткина Т.В.) обеспечить взятие патологического материала для бактериологического исследования на коклюш в соответствии с требованиями действующих санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.2.3162-14 "Профилактика коклюша".

7. Главным врачам ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в республиках Коми, Адыгея, Дагестан, Ингушетия, Калмыкия, Карелия, Карачаево-Черкесской, Северная Осетия-Алания, Кабардино-Балкарской, Вологодской, Мурманской, Архангельской, Вологодской, Астраханской, Новгородской, Псковской областях, Ненецком автономном округе исследования на коклюш проводить в полном объеме согласно действующим методическим рекомендациям МР 3.1.2.0072-13 "Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша".

8. Главным врачам ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора в Ненецком автономном округе, Вологодской области, Архангельской области, Республике Карелия, Новгородской области, Псковской области, Республике Дагестан, Карачаево-Черкесской Республике, Республике Северная Осетия-Алания обеспечить использование контрольных штаммов бордетелл при проведении исследований на коклюш.

Руководитель

А.Ю. Попова

Обзор документа

Сообщается о проведении внешнего контроля качества бактериологических исследований при коклюшной инфекции, выполняемых лабораториями федеральных бюджетных учреждений здравоохранения в субъектах Северо-Западного, Южного и Северо-Кавказского федеральных округов. Подведены итоги.

В связи с этим решено усилить контроль за соблюдением профилактических мероприятий против коклюша и бактериологической диагностикой этой инфекции. Запланировано проведение ряда тематических семинаров.

Даны конкретные поручения главным врачам ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора.

Для просмотра актуального текста документа и получения полной информации о вступлении в силу, изменениях и порядке применения документа, воспользуйтесь поиском в Интернет-версии системы ГАРАНТ:

Процедуру рекомендуется проводить в случае получения положительных сигналов при амплификации отрицательных контролей этапов экстракции и ПЦР или планово с необходимой периодичностью в зависимости от интенсивности работы (например, 1 раз в неделю - при ежедневном проведении исследований, но не реже, чем 1 раз в месяц). Взятие смывов проводят в первой половине рабочего дня.

- среда для взятия смывов - ТЕ-буфер (или деионизованная вода),

- палочки с ватными наконечниками (зонды с ватным тампоном),

- наборы реагентов для ПЦР, с которыми работает лаборатория.

Контрольные точки для смывов:

- рабочие и контактные поверхности лабораторного оборудования (автоматические пипетки, центрифуги, микроцентрифуги/встряхиватели, амплификаторы, термостаты, холодильники);

- поверхности лабораторных материалов (штативы, пакеты с реактивами, упаковки расходных материалов, ножницы, пинцеты, маркеры и др.);

- рабочие и контактные поверхности лабораторных столов, боксов, ламинарных шкафов;

- прочие контактные поверхности (ручки дверей, кнопки компьютеров, компьютерные мыши, телефоны, компьютерные столы, прочая лабораторная мебель).

Процедура взятия смывов

1) Надеть перчатки, протереть их салфеткой, смоченной 70% этиловым спиртом.

2) Отобрать необходимое количество стерильных пробирок, в стерильных условиях в каждую пробирку внести 300 мкл ТЕ-буфера (или деионизованной воды).

3) Промаркировать пробирки в соответствии с названиями контрольных точек.

4) Для взятия смыва с каждой контрольной точки выполнить следующее:

- открыть пробирку, смочить зонд с ватным тампоном в ТЕ-буфере (или деионизованной воде), после чего пробирку закрыть;

- вращательными движениями провести зондом по поверхности объекта (из списка контрольных точек);

- тщательно прополоскать рабочую часть зонда в ТЕ-буфере (или деионизованной воде), отжимая его о стенки пробирки и избегая разбрызгивания раствора;

- удалить зонд в контейнер для отходов.

5) Для взятия смывов с каждой новой контрольной точки использовать отдельный зонд.

6) При взятии смывов с ламинарного шкафа: первоначально открыть переднее стекло, взять смывы с пипеток, оборудования, штативов для наконечников и пробирок, с рабочих поверхностей, затем с ручек и кнопок. Далее закрыть переднее стекло и включить ультрафиолетовое облучение.

7) Пробирки со смывами перенести в зону постановки ПЦР.

ПЦР-исследование полученных смывов с контрольных точек проводится в обычном порядке по инструкции к набору реагентов, начиная с этапа амплификации ДНК.

- Результаты анализа смывов считаются достоверными только в случае получения корректных результатов для положительных и отрицательных контролей амплификации в соответствии с инструкцией к набору реагентов.

Контрольные точки, в которых выявлены положительные результаты ПЦР, необходимо подвергнуть обработке веществами, деградирующими ДНК (препараты, содержащие активный хлор, см. МУ 1.3.2569-09), и облучению в ультрафиолетовом спектре.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде - Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

1. anti-Bordetella pertussis

Титр: 1:80 – условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Титр: Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

коклюш;
паракоклюш;
транзиторное носительство;
иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

отсутствие коклюша/паракоклюша;
неэффективная вакцинация против коклюша;
снижение иммунологического ответа после вакцинации;
ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
предшествующая вакцинация.

Важные замечания

При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Читайте также: