Методика исследования на гемолитический стрептококк

Обновлено: 24.04.2024

Микробиологическая диагностика стрептококка. Диагностика стрептококковой инфекции. Выявление стрептококка. Выделение стрептококка.

Основу микробиологической диагностики стрептококковой инфекции составляют выделение и идентификация возбудителя. При этом обычно биохимические характеристики изолятов не изучают. Прочие методы диагностики стрептококковой инфекции имеют различные ограничения.

Через 24 ч на КА стрептококки группы А образуют блестящие вязкие колонии (рис. 2, см. цветную вклейку). В жидких средах бактерии дают придонный, иногда поднимающийся вверх рост. Весьма информативные методы раннего выявления стрептококков — определение чувствительности к антимикробным агентам методом дисков.

Наиболее часто их используют для идентификации стрептококков в мазках из зева. Для дифференцировки стрептококков группы А от прочих b-гемолитических стрептококков применяют тест чувствительности к бацитрацину. Более чем в 99% случаев изоляты стрептококков группы А чувствительны к бацитрацину, тогда как представители других серогрупп обычно устойчивы (рис. 12-8). Также можно применить тест чувствительности к триметоприм-сульфаметоксазолу.

Стрептококки групп А и В обычно чувствительны к действию антимикробного агента.

По сравнению с чувствительностью к бацитрацину более специфичен тест гидролиза пиррол идонил-b-нафтиламида (ПИР-тест). S. pyogenes — единственный стрептококк, дающий положительную реакцию. Для этого в пробирки вносят полоски фильтровальной бумаги, пропитанные ПИР. Под действием бактериальных пептидаз ПИР расщепляется до b-нафтиламида, и после внесения 0,01% раствора p-диметиламиноциннамальальдегида полоски окрашиваются в вишнёво-красный цвет.

Стрептококки группы А легко можно выявить в мазках из зева, используя коммерческие наборы; групповой А-Аг экстрагируют химическими реагентами или ферментами и идентифицируют в реакциях латекс-агглютинации, коагглютинации или ИФА. Для экспресс-диагностики ревматического процесса и гломерулонефрита можно определять AT к стрептолизину О или стрептодорназе; серологические исследования также позволяют выявить носителей. Следует помнить, что AT к стрептолизину О не образуются при кожных инфекциях, вызываемых стрептококками группы А.

Лечение стрептококковой инфекции

Основу лечения стрептококковой инфекции составляет адекватная антибактериальная химиотерапия. Лечение ревматизма проводят пенициллинами короткого действия, профилактику — пенициллинами длительного действия (бициллин-5), причём антибиотикопрофилактику предпочтительно проводить круглогодично.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Бета - гемолитический стрептококк группы А (пиогенный стрептококк, БГСА, S. pyogenes) - грамположительный, неспорообразующий, неподвижный микроорганизм.

Встречается повсеместно, часто колонизирует кожные покровы и слизистые оболочки человека, а в холодный сезон частота носительства в носоглотке у школьников может достигать 25%. Резервуаром служит больной человек или носитель.

Патогенез заболеваний связан с продукцией токсинов: гемолизина, стрептолизина, стрептокиназ А и В, дезоксирибонуклеазы, гиалуронидазы.

Основные нозологические формы заболеваний представлены поверхностными (ангины, фарингит, импетиго, рожа), инвазивными (некротизирующий фасциит, миозит, менингит, эндокардит, пневмония, послеродовой сепсис) и токсинопосредованными (скарлатина, синдром токсического шока) инфекциям.

Со стрептококковой инфекцией связано также возникновение неврологических расстройств у детей, проявляющихся обсессивно-компульсивными расстройствами (PANDAS-синдром). Streptococcus pyogenes сохраняет 100%-ю чувствительность к бета-лактамным антибиотикам (пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам). Они остаются единственным классом антибиотиков, к которым у S.pyogenes не развилась резистентность.

Актуальной проблемой является устойчивость к макролидам, которая в некоторых регионах мира превышает 30%. Почти в 90% случаев резистентность к макролидам была обусловлена метилированием рибосом, в остальных случаях она была связана с активным выведением (эффлюксом) антибиотика из клетки.

Определение чувствительности к антибиотикам показано проводить лицам с наличием аллергических проявлений к пенициллинам или другим бета-лактамным антибиотикам.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.

Посев на бета-гемолитический стрептококк группы А (S. pyogenes) проводится с диагностической целью для подтверждения бактериальной природы острых фарингитов, тонзиллитов, при подозрении на скарлатину, а также с целью подтверждения эрадикации (уничтожения) возбудителя после проведенной антибактериальной терапии.

Учитывая 100% природную чувствительность S. pyogenes к бета-лактамным антибиотикам, может быть выбран тест (№ 466СТРА) без определения чувствительности к антимикробным препаратам.

При необходимости индивидуального подбора лекарственного средства (в случае непереносимости или аллергии на бета-лактамы) может быть заказано исследование с определением чувствительности к антимикробным препаратам (№466СТРА-А).

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

При обнаружении роста указывается наименование возбудителя, дается полуколичественная оценка выросших колоний и данные по чувствительности к антибиотикам. В соответствии с рекомендациями МУК 4.2.1890-04 (Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и стандартами CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) определяется чувствительность к ампициллину, эритромицину, цефотаксиму, клиндамицину, офлоксацинулевофлоксацину, хлорамфениколу.

Метод определения Исследование проводят методом посева на плотные питательные среды. Идентификацию микроорганизмов проводят методом масс-спектрометрии с помощью прибора Microflex Brucker Daltonik MALDI Biotyper, BRUKER, Германия.

Исследуемый материал Мазок из входа во влагалище или аноректальной области; отделяемое влагалища, отделяемое цервикального канала

Стрептококк группы В (СГВ, GBS, Streptococcus agalactiae) вызывает тяжело протекающие заболевания у новорожденных детей и представляет опасность для определенных пациентов других возрастных групп.

В подавляющем большинстве случаев новорожденные инфицируются СГВ во время родов от матери, причем чаще это происходит при вагинальном родоразрешении. СГВ вызывает ранние неонатальные инфекции, такие как сепсис, менингит, пневмония, остеомиелит, артрит и пиелонефрит, частота которых в разных странах колеблется от 0,2 до 5 и более на 1000 живорожденных детей. В акушерской практике со стрептококком группы В связывают бактериемию, инфекции мочевых путей, хориоамнионит, преждевременное излитие околоплодных вод, преждевременные роды, послеродовой эндометрит и др.

СГВ в организме человека могут колонизировать ротоглотку, анальную область прямой кишки, влагалище (чаще преддверие), урогенитальный тракт, кожу.

Установлено, что СГВ у 5-35% женщин можно обнаружить во влагалище и часто в уретре их половых партнеров Показана достоверная связь носительства СГВ во влагалище не только с ранними септицемиями новорожденных, но и с самопроизвольными выкидышами, преждевременными родами, преждевременным излитием околоплодных вод, мочевой инфекцией у беременных, рождением детей с низкой массой тела, развитием хориоамнионита в родах, эндометритом и сепсисом у родильниц. Наиболее высок уровень колонизации у женщин репродуктивного возраста и беременных женщин. У беременных СГВ выделяют из перечисленных областей в 7-30% случаев (чаще у молодых, имеющих высокую половую активность или пользующихся внутриматочными средствами контрацепции). Из них 60-75% остаются СГВ-носителями до конца беременности.

Для выявления колонизации влагалища беременных женщин стрептококком группы В проводится сбор вагинально-ректальных мазков. Во всех остальных случаях биоматериал берется только при наличии клинических признаков инфекции.

СГВ обладает природной чувствительностью к бета-лактамным антибиотикам, включая препараты пенициллинового ряда. Определение чувствительности необходимо в тех случаях, когда у пациентки имеет место индивидуальная непереносимость препаратов данной группы.

Выделяемые микроорганизмы и возбудители:

С какой целью проводят посев на бета-гемолитический стрептококк группы В (Streptococcus group В, S. agalactiae)

Посев на бета-гемолитический стрептококк группы В (S. agalactiae) предназначен для обследования беременных на 35-37-й неделе беременности с целью выявления бактерионосительства и определения необходимости проведения антибиотикопрофилактики в родах, для предупреждения неонатальных осложнений (септицемии, пневмонии и менингита новорожденных).

Исследование для выявления возбудителя стрептококковой инфекции (Streptococcus pyogenes), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени определяется генетический материал (ДНК) стрептококка в образце биоматериала.

Синонимы русские

Пиогенный стрептококк, бета-гемолитический стрептококк группы А, БГСА, β-гемолитический стрептококк группы А, β-ГСА [полимеразная цепная реакция в реальном времени, ПЦР в реальном времени].

Синонимы английские

S. pyogenes, Group A streptococcus, GAS, β-hemolytic streptococcus group A, β-hemolytic streptococcus group A.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки), мазок из носоглотки, соскоб урогенитальный.

Общая информация об исследовании

S. pyogenes – это грамположительная бактерия шаровидной формы, являющаяся возбудителем острого фарингита и импетиго, а также спектра более тяжелых деструктивных заболеваний, таких как пневмония, сепсис и септический артрит, синдром токсического шока, целлюлит и некротизирующий фасциит.

Традиционно для подтверждения диагноза "стрептококковая инфекция" применяют бактериологический посев биоматериала на специальные среды. В качестве биоматериала может выступать отделяемое миндалин или носоглотки (при подозрении на острый фарингит), мокрота (при пневмонии). Как правило, результат может быть получен лишь через несколько суток, что связано с промедлением в постановке точного диагноза и назначении специфического лечения. Однако выявлено, что своевременная диагностика и специфическое лечение не только уменьшают продолжительность болезни и интенсивность симптомов, но также снижают риск развития таких осложнений, как паратонзиллярный абсцесс, средний отит, острая ревматическая лихорадка и постстрептококковый гломерулонефрит (при остром фарингите), стрептококковый сепсис (при пневмонии), деструкция сустава и инвалидизация (при септическом артрите). Эмпирическая терапия антибиотиками пенициллинового ряда основана на предпосылке, что S. pyogenes является основным бактериальным возбудителем острого фарингита (5-15 % случаев у взрослых и 20-30 % у детей). Следует отметить, что острый фарингит может быть вызван другими бактериальными или вирусными агентами, при которых назначение такой эмпирической терапии не только не оправдано, но и опасно развитием резистентных штаммов микроорганизмов. Подобные диагностические трудности могут быть преодолены с помощью РТ-ПЦР – полимеразной цепной реакции – этот метод позволяет получить точный результат в более короткие сроки.

В реакции РТ-ПЦР применяются специфические праймеры к фрагменту ДНК S. pyogenes. Такая особенность позволяет выявлять только пиогенный стрептококк, а не родственные ему другие стрептококки – представители нормальной микрофлоры зева (Streptococcus mutans, Streptococcus viridians). По специфичности РТ-ПЦР не уступает бактериологическому посеву и значительно превосходит другие методы идентификации возбудителя (например, экспресс-тест для определения антигена).

Достаточно часто биоматериал на исследование берется уже на фоне лечения заболевания. В результате чувствительность методов диагностики снижается и вероятность получить ложноотрицательный результат выше. В такой ситуации метод РТ-ПЦР обладает некоторым преимуществом перед другими видами диагностики. Это объясняется тем, что для идентификации возбудителя в реакции используется генетический материал возбудителя – как геномная ДНК живого микроорганизма, так и фрагменты ДНК бактерии, подвергшейся лизису. При этом становится возможным выявление не только живых, активно размножающихся микроорганизмов, но и убитых в результате лечения бактерий. В отличие от РТ-ПЦР, обязательным условием для осуществления других методов диагностики (иммуноферментного анализа или бактериологического посева) является наличие живых микроорганизмов. Поэтому, если биоматериал сдается уже на фоне лечения, метод РТ-ПЦР следует предпочесть другим методам диагностики.

Высокая чувствительность РТ-ПЦР позволяет использовать этот метод при диагностике осложнений острого фарингита: острой ревматической лихорадки и постстрептококкового гломерулонефрита. Осложнения острого фарингита – это аутоиммунные заболевания, при которых S. pyogenes – ассоциированный фарингит является причинным фактором патологического иммунного ответа, но на момент диагностики этих осложнений он уже проходит (самостоятельно или в результате лечения). Поэтому выявить возбудитель при бактериологическом посеве отделяемого миндалин и носоглотки у пациентов с осложнениями острого фарингита удается лишь в небольшом проценте случаев. С другой стороны, доказательство перенесенной S. pyogenes – инфекции является необходимым критерием постановки диагноза, а также значительно облегчает проведение дифференциальной диагностики заболеваний. Метод РТ-ПЦР характеризуется высокой чувствительностью и поэтому может быть использован при диагностике осложнений острого фарингита.

Выявление S. pyogenes в так называемых стерильных средах – это всегда патологический признак. С другой стороны, обнаружение этого микроорганизма в нестерильных средах (мокрота, отделяемое носоглотки) не всегда указывает на наличие заболевания. Выявлено, что около 12-20 % детей школьного возраста и 2,4-3,7 % взрослых людей являются бессимптомными носителями S. pyogenes. В таких случаях трактовку положительного результата исследования следует расценивать с учетом бактериальной нагрузки и в сочетании с некоторыми другими клиническими и лабораторными признаками. Как правило, бессимптомное носительство характеризуется меньшим количеством бактерий по сравнению с активной инфекцией. Поэтому обнаружение высокой бактериальной нагрузки S. pyogenes в мазке из зева у пациента с лихорадкой, болью в горле и болезненным регионарным лимфаденитом подтверждает диагноз "острый стрептококковый фарингит". И, наоборот, обнаружение низкой бактериальной нагрузки этого микроорганизма в мазке из зева при отсутствии жалоб и клинической картины следует расценить как бессимптомное носительство. РТ-ПЦР – это полуколичественный метод, позволяющий косвенно оценить бактериальную нагрузку. Поэтому он оказывается особенно полезным при обследовании "здоровых носителей" стрептококка. Бессимптомное носительство S. pyogenes следует заподозрить у пациента при выявлении стрептококка после адекватного курса антибиотикотерапии, а также у членов семьи пациента с частыми обострениями стрептококкового фарингита.

Для чего используется исследование?

острого фарингита;
острой ревматической лихорадки и постстрептококкового фарингита у пациентов с указанием на перенесенный эпизод острого фарингита в анамнезе или без него;
бессимптомного носительства S. pyogenes у пациента с частыми рецидивами фарингита;
бессимптомного носительства S. pyogenes у членов семьи пациента с частыми рецидивами стрептококкового фарингита;
внебольничной пневмонии;
септического артрита.

Когда назначается исследование?

При симптомах острого фарингита: боль при глотании, отек и эритема слизистой зева, гнойное отделяемое с поверхности миндалин, болезненный регионарный лимфаденит;
при симптомах острой ревматической лихорадки: мигрирующий полиартрит или артралгия, чувство перебоев в работе сердца, боль в области сердца, немотивированная слабость, кольцевидная эритема и подкожные узелки, а также неврологическая симптоматика в виде хореического гиперкинеза;
при симптомах постстрептококкового гломерулонефрита: отек (периорбитальной области или генерализованный), макрогематурия, немотивированная слабость, протеинурия менее 3,5 г/сут., артериальная гипертензия;
при обследовании пациента с рецидивирующим фарингитом;
при обследовании членов семьи пациента с рецидивирующим фарингитом;
при обследовании членов семьи пациента с частыми рецидивами острого стрептококкового фарингита;
при наличии такого фактора риска S . pyogenes (ассоциированной пневмонии), как вирус гриппа H 1 N 1;
при симптомах внебольничной пневмонии: внезапное начало болезни, лихорадка, одышка, боль в грудной клетке, кашель с отхождением гнойной мокроты;
при наличии факторов риска септического артрита: младенческий и старческий возраст, иммуносупрессивная терапия, соматические заболевания, гемодиализ;
при симптомах септического артрита: боли в суставе в покое и при движении, эритема кожных покровов над областью сустава, нарушение подвижности в суставе, повышение температуры тела и немотивированная слабость.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата

В отделяемом носоглотки и миндалин:

острый фарингит;
острая ревматическая лихорадка;
постстрептококковый гломерулонефрит.

пневмония;
острый бронхит, бронхит курильщика.

Что может влиять на результат?

Применение антибактериальных препаратов пенициллинового ряда (амоксиклав, ампициллин), цефалоспоринов (цефиксим, цефтибутен) и макролидов (азитромицин, кларитромицин) до взятия материала на анализ может привести к получению отрицательного результата.

Важные замечания

Около 12-20 % детей школьного возраста и 2,4-3,7 % взрослых людей являются бессимптомными носителями S. pyogenes.
Результат исследования следует оценивать вместе с некоторыми другими лабораторными анализами.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, ЛОР, инфекционист, пульмонолог, эпидемиолог, травматолог.

Комплексное исследование, направленное на выявление и подтверждение инфицирования В-гемолитическим стрептококком группы А (Streptococcus pyogenes).

Синонимы русские

Пиогенный стрептококк, бета-гемолитический стрептококк группы А; бактериологический посев; РТ-ПЦР [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени]; комплексное обследование.

Синонимы английские

Streptococcus pyogenes, group A streptococcus; bacteria identification; RT-PCR [polymerase chain reaction, real-time PCR]; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Бета (β)-гемолитический стрептококк группы А (пиогенный стрептококк, S. pyogenes) является грамположительной неподвижной бактерией, обладающей гемолитической активностью, то есть способностью вызывать разрушение эритроцитов. Патогенетическое действие микроорганизма связано с возможностью продукции токсинов: гемолизина, стрептолизина, стрептокиназы А и В, гиалуронидазы, дезоксирибонуклеазы. Инфекция, вызванная S. рyogenes, передается преимущественно воздушно-капельным, контактным и пищевым путями передачи.

Инфицирование данным возбудителем может приводить к развитию большого спектра заболеваний, таких как тонзиллит, фарингит, тонзиллофарингит (ангина), отит, острая ревматическая лихорадка, ревматическая болезнь сердца, пневмония, острый гломерулонефрит, миокардит, эндокардит, рожистое воспаление, стрептодермия, остеомиелит, целлюлит, сепсис септический артрит.

Диагностика инфицирования S. pyogenes группы А основана на клинических, анамнестических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний микроорганизма; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя.

Бактериологическое обследование представляет собой посев полученного биоматериала на специфические диагностические питательные среды. Он является первым этапом диагностики, используется для подтверждения диагноза "стрептококковая инфекция", позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, также применяется для оценки эффективности проводимой антибактериальной терапии против возбудителя S. рyogenes. Результат данного обследования может быть оценен только спустя несколько суток, после посева, что может задержать своевременную постановку верного диагноза и назначение адекватной терапии.

Метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РТ-ПЦР) является одним из современных методов молекулярной диагностики. Он позволяет выявлять ДНК возбудителя S. pyogenes группы А, а не родственные ему другие стрептококки, являющиеся представителями нормальной микрофлоры ротоглотки (S. mutans, S. viridians). Метод РТ-ПЦР обладает высокой диагностической чувствительностью (теоретически для осуществления этой реакции достаточно всего 1 молекулы ДНК) и высокой диагностической специфичностью, не уступающей другим методам диагностики данного микроорганизма. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов, РТ-ПЦР является эффективным на фоне лечения антибактериальными препаратами. Но данный метод не может быть использован для контроля проведенного лечения, так как результат анализа будет оставаться положительным (ложноположительным) еще в течение некоторого времени после начала лечения, даже если оно эффективно. Метод РТ-ПЦР важен при обследовании "здоровых носителей" стрептококка. Бессимптомное носительство S. pyogenes группы А следует заподозрить у пациента при выявлении стрептококка после адекватного курса антибиотикотерапии, а также у членов семьи пациента с частыми обострениями стрептококкового фарингита.