Методика исследования на трихинеллез утвержденная департаментом ветеринарии

Обновлено: 22.04.2024

1.1.Лабораторная диагностика трихинеллеза основана на растворении в искусственном желудочном соке (ИЖС) измельченных образцов исследуемой мышечной ткани и обнаружении в осадке личинок трихинелл.

1.2.Указанный метод применяют в лабораторной практике:

для исследования на трихинеллез мяса свиней, кабанов, медведей, пушных зверей, морских млекопитающих и других животных, восприимчивых к названной инвазии, а также продуктов, изготовленных из этого мяса;

с целью уточнения диагноза в случае поражения мышечной ткани образованиями, имитирующими личинок трихинелл;

при определении эпизоотической ситуации по трихинеллезу в животноводческих хозяйствах.

1.3. Лаборатория должна быть оснащена термостатом; коническими стеклянными колбами емкостью 0,5-1,0 л; стеклянными воронками емкостью0,5 л, соединенными резиновой трубкой с пробиркой-отстойником емкостью5 мл; штативом для воронок; капроновым ситом полусферической формы с диаметром ячей 300-400 мкм, диаметр сита по верхней окружности должен быть на 2-3 мм больше диаметра воронки.

1.4. Для приготовления ИЖС на 1 л теплой водопроводной воды (40-42° С) берут 10 мл концентрированной соляной кислоты и 2 г пепсина пищевого свиного (по ОСТ 49-53-84) или 20 г пепсина медицинского (по Временной фармакопейной статье 42-1000-80).

Срок годности ИЖС не более 8 ч с момента изготовления.

1.5. Мышечную пробу, подлежащую исследованию на трихинеллез, отбирают из правой и левой ножек диафрагмы, а при их отсутствии из наружной жевательной мышцы или языка. Масса пробы должна быть не менее 5 г от каждой группы мышц, а общая масса проб не превышать 50 г на 1 л ИЖС.

4 1.6. Отобранную пробу измельчают на мясорубке с диаметром решетки 3-мм, закладывают в колбу и заливают теплым (40—4 2° С) ИЖС. Колбу с исследуемой пробой (пробами) помещают в термостат при температуре 40-42° С на

5 ч, периодически (через 30 мин) перемешивая. Перемешивание прекращают за30 мин до исследования осадка.

1.7. По окончании переваривания проб (что определяется по наличию на дне колбы легких, темно-коричневых хлопьев) осторожно сливают 2/3 отработанного ИЖС, а оставшуюся часть через сито и воронку выливают в пробирку-отстойники выдерживают при комнатной температуре 20 мин, при этом сито не должно соприкасаться со стенками воронки. После этого перекрывают резиновую трубку зажимом, отсоединяют пробирку — отстойник и весь осадок исследуют в часовом или на предметном стекле под микроскопом, в трихинном микропроекторе или под бинокулярной лупой на наличие личинок трихинелл.

1.8. При выявлении личинок трихинелл с инвазированным мясом или мясными продуктами поступают в соответствии с утвержденными Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов.

1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: Trichinella spiralis и Trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.

1.2. Трихинеллезом болеют свиньи, кабаны, медведи, другие всеядные и плотоядные (собаки, волки, лисы), морские млекопитающие (киты, тюлени, моржи), насекомоядные, грызуны и другие животные.

1.3. Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят до 3-недельного возраста), кабанов, барсуков, медведей, всеядных и плотоядных животных, а также нутрий.

Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами.

Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом.

Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом.

Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

2.1. Для исследования отбираются пробы из ножек диафрагмы (на границе перехода мышечной ткани в сухожилие), при их отсутствии - части межреберных, шейных, жевательных, поясничных, икроножных мышц, сгибателей и разгибателей пясти, а также мышцы языка, пищевода и гортани; от туш морских млекопитающих - мышцы кончика языка и глаза.

Масса пробы от каждой группы мышц должна быть не менее 5 г, а общая масса пробы от одного животного должна составлять не менее 25 г.

2.2. Пробы шпига соленого, копченого (при наличии прирези или прослоек мышечной ткани) отбирают от каждого куска, масса пробы должна быть не менее 25 г.

2.3. Пробы копченостей отбирают от 3 % упаковочных единиц, делая по 10 - 15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3 % упаковочных единиц берут по 10 - 15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.

2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10 % от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.

2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1 % от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.

2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

3.1. При исследовании мяса и мясопродуктов количество срезов мышечной ткани (от 24 до 96) определяют в зависимости от эпизоотической и эпидемиологической ситуаций территории в соответствии с Методическими указаниями "Профилактика гельминтозов, передающихся через мясо и мясные продукты", утвержденными Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 23.09.96 № 13-7-37 (включенными в СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", утвержденные Госкомсанэпиднадзором России 31.10.96 № 43).

3.2. Из кусочков мышц изогнутыми ножницами по ходу мышечных волокон делают 24 среза величиной с овсяное зерно, которые помещают в середину клеточки компрессориума, накрывают вторым стеклом и завинчивают винты, раздавливая срезы так, чтобы они стали прозрачными и удобными для их качественного просмотра.

3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8×10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (Приложение 1).

3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см 3 раствора (1 %-ный раствор фуксина в 5 %-ном растворе едкого натра) на 5 - 8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах, и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей среды.

Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5 - 10 %-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 20 - 30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно пп. 3.3.

4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41 - 42 °С - 1000 см 3 ; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см 3 ; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига - 10,0 г.

При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.

4.2. При исследовании мяса в тушах, полутушах, четвертинах, блоках, а также копченостей (при выборочном контроле) и других видов продукции количество срезов (массу навески) определяют согласно пп. 3.1.

4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3 - 4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41 - 42 °С и выдерживают 5 - 7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин. до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90 - 120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см 3 .

Залитый осадок отстаивают 15 - 20 мин., затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8×10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.

4.5. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (Приложение 1) согласно действующей инструкции.

5.1. Результаты считают положительными, если в образцах исследованной продукции обнаружена хотя бы одна личинка капсульных или бескапсульных трихинелл.

6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2 - не приводится). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:

6.1.1. Трихинеллы имеют капсулу лимоновидной, округлой формы, внутри спирально свернутая личинка (или несколько личинок).

6.1.2. Саркоцисты имеют собственную оболочку цилиндрической или неправильной формы; циста заключена в собственную тонкую оболочку и состоит из камер, внутри которых находятся мерозоиты.

6.1.3. Микрофинны располагаются в отличие от трихинелл между мышечными волокнами, имеют овальную форму и окружены слоистой соединительнотканной оболочкой.

Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных разработаны Всероссийским НИИ гельминтологии имени К.И. Скрябина (А.С. Бессонов, А.В. Успенский, Н.В. Шеховцов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станцией (А.Я. Сапунов, О.А. Митникова), Кубанским агроуниверситетом (Б.Л. Гаркави), Управлением ветеринарии г. Краснодара (А.А. Иващенко).

1. Компрессорная трихинеллоскопия

- стационарные и лабораторные проекционные устройства типа ТМП, "Стейк", микроскопы, бинокулярные лупы, устройства для полевой трихинеллоскопии и соответствующее импортное оборудование, прошедшее испытания во Всероссийском НИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина;

2. Метод переваривания мышечной ткани

2.1. Автоматизированная диагностика

- аппараты для выделения личинок трихинелл методом переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке АВТ-Л2, АВТ-Л3 и др.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ МЯСА И МЯСНОЙ ПРОДУКЦИИ

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ: ФГУН "Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии" Роспотребнадзора (Т.И.Твердохлебова, Ю.И.Васерин, Е.П.Хроменкова, О.С.Думбадзе, С.А.Нагорный, Л.Л.Димидова, Л.В.Упырев, Л.B.Шишканова, Ю.Г.Бескровная, А.С.Кожухина), ФГУН "Тюменский НИИ краевой инфекционной патологии" Роспотребнадзора (Т.Ф.Степанова), ФГУН "Хабаровский НИИ эпидемиологии и микробиологии" Роспотребнадзора (О.Е.Троценко), Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.М.Гузеева), ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.Г.Сыскова), Институтом медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского ММА им. И.М.Сеченова (А.А.Фролова, О.Г.Полетаева, В.Д.Завойкин, О.П.Зеля, А.И.Чернышенко), ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москва" (Н.И.Тимошенко, М.В.Гузеева, Л.В.Аляутдинова), ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области" (Г.Т.Айдинов, Г.В.Стрельникова), ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Северная Осетия-Алания" (Л.М.Каравай), ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Адыгея" (Н.Д.Труфанов), ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Тюменской области" (М.И.Беляева), Всероссийский НИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина (А.В.Успенский, В.В.Горохов), Курский государственный университет (Н.С.Малышева, Ю.В.Комиссарова, Н.В.Вагин, Евсюкова С.С, Чуваков С.М.), ГНУ "Северо-Кавказский научно-исследовательский ветеринарный институт" (М.А.Попов), Управление Роспотребнадзора по Липецкой области (Е.П.Сиротина).

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г.Онищенко 11 октября 2010 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека (далее Роспотребнадзора), осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, в том числе импортируемых в Российскую Федерацию, а также лабораторную диагностику заболеваний с пищевым путем передачи. Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.1. Трихинеллез - опасный антропозоогельминтоз, вызываемый трихинеллами двух видов: trichinella spiralis и trichinella pseudospiralis, протекает остро и хронически. Весь цикл развития обоих видов проходит в организме одного хозяина - половозрелая стадия локализуется в кишечнике, личиночная - в мышечной ткани.

1.4. При послеубойной диагностике трихинеллеза используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания), прижизненную диагностику осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА). Мясо и субпродукты животных (имеющие мышечную ткань) исследуют микроскопическим или биохимическим методами. Шпиг (с наличием мышечных прослоек) исследуют только микроскопическим методом. Исследование копченостей, импортной свинины в блоках (при выборочном контроле) и других видов продукции проводят только биохимическим методом. Диагноз на трихинеллез ставят на основании результатов лабораторных исследований.

2. Взятие и пересылка материала для исследования

2.3. Пробы копченостей отбирают от 3% упаковочных единиц, делая по 10-15 выемок из каждой упаковочной единицы, из которых составляют объединенную пробу.

2.4. Субпродукты свиные (языки, головы, ножки, хвосты) при отсутствии ветеринарного подтверждения об их происхождении от туш, подвергнутых трихинеллоскопии, исследуют следующим образом: от 3% упаковочных единиц берут по 10-15 выемок из каждой и делают объединенную пробу массой не менее 25 г.

2.5. Импортную свинину (в тушах, полутушах) исследуют не менее 10% от партии мяса, пробы берут из остатков ножек диафрагмы или межреберных мышц. Масса пробы мышц от туши, полутуши должна составлять не менее 1 г, общая масса пробы для исследования - не менее 25 г.

2.6. Импортную свинину в блоках исследуют не менее 1% от партии мясных блоков, пробы отбирают по 25 выемок (1 г каждая) от блока общей массой не менее 25 г.

2.7. Пробы упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора.

3. Микроскопическое исследование (компрессорная трихинеллоскопия)

3.1. При исследовании мяса и мясопродуктов количество срезов мышечной ткани (от 24 до 96) определяют в зависимости от эпизоотической и эпидемиологической ситуаций территории в соответствии с методическими указаниями "Профилактика гельминтозов, передающихся через мясо и мясные продукты", утвержденными Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 23.09.96 13-7-37 (включенными в СанПиН 3.2.569-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации", утвержденные Госкомсанэпиднадзором России 31.10.96 43).

3.3. Срезы исследуют под малым увеличением (8:10) с помощью соответствующих приборов для трихинеллоскопии (приложение 1).

3.4. При исследовании шпига из прослоек мышечной ткани (каждого куска) делают 24 среза, помещают в чашку Петри с 0,5 см3 раствора (1%-ный раствор фуксина в 5%-ном растворе едкого натра) на 5-8 мин. Затем срезы размещают в компрессориум и просматривают согласно п.п. 3.3.

3.5. При просмотре срезов обнаруживают капсулы с личинками трихинелл, которые могут иметь лимоновидную или округлую формы, внутри капсул расположены одна или несколько спирально свернутых личинок. Личинки бескапсульных трихинелл имеют специфическую конфигурацию расположения в мышечных волокнах и их легче обнаружить по краям срезов мышц и в тканевой жидкости, окружающей срезы.

Могут встречаться обызвествленные капсулы. Для их просветления срезы мышц помещают в чашку Петри с 5-10%-ным раствором соляной кислоты. Чашку ставят в термостат при температуре на 20-30 мин. Затем срезы переносят на компрессориум и просматривают согласно п.п. 3.3.

4. Биохимическое исследование (трихинеллоскопия после искусственного переваривания мышц)

4.1. При проведении исследования используют искусственный желудочный сок (ИЖС), который готовят по следующей прописи: вода водопроводная температуры 41-42°С - 1000 см3; кислота соляная концентрированная (уд. масса 1,2) - 10 см3; пепсин пищевой свиной (ТУ 10.02.01.111-89) при исследовании свежего мяса и мясопродуктов - 2,0 г, при исследовании соленого, копченого мяса и мясопродуктов, шпига - 10,0 г.

При использовании пепсина медицинского (Временная фармакопейная статья 42-1000-80) дозу увеличивают до 20,0 г.

Искусственный желудочный сок годен для применения в течение 8 ч с момента приготовления.

4.3. Навеску измельчают в мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм, переносят в коническую колбу соответствующей вместимости и заливают ИЖС в соотношении 1:15. Колбу помещают в термостат при температуре 41-42°С и выдерживают 5-7 ч, периодически перемешивая. За 10 мин до окончания переваривания перемешивание прекращают. После окончания переваривания в осадке остаются хлопья коричневого или темно-коричневого цвета.

4.4. Из колбы сливают (осторожно) 2/3 надосадочной жидкости, осадок выливают на капроновое сито (полусферической формы с диаметром ячеек 400 мкм), установленное в стеклянной воронке диаметром 90-120 мм, соединенной резиновой трубкой с пробиркой вместимостью 5 см3.

Залитый осадок отстаивают 15-20 мин, затем резиновую трубку перекрывают зажимом и пробирку отсоединяют. Содержимое пробирки (осадок) переносят по частям на часовое стекло и исследуют под малым (8:10) увеличением микроскопа или трихинеллоскопа на наличие личинок трихинелл.

4.5. Для выделения личинок трихинелл может быть использован метод группового переваривания в аппаратах типа АВТ (приложение 1) согласно действующей инструкции.

5. Оценка результатов

6. Дифференциальная диагностика

6.1. Капсулообразующих трихинелл необходимо дифференцировать от наиболее часто встречаемых в мясе и мясопродуктах саркоцист (мишеровы мешочки) и микрофинн (приложение 2). Дифференциация основана на морфологии возбудителя и строении капсулы:

С утверждением настоящих методических указаний на территории Российской Федерации утрачивают силу "Методические указания по лабораторной диагностике трихинеллеза животных", одобренные Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 29.12.85 и "Методика лабораторной диагностики трихинеллеза", утвержденные Главветупром Госагропрома СССР 16.10.86.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Разработана методика лабораторной диагностики трихинеллеза животных.

Трихинеллез является опасным антропозоогельминтозом, вызываемым трихинеллами trichinella spiralis и trichinella pseudospiralis. Он протекает остро и хронически.

Обязательному исследованию на трихинеллез подлежат: туши, полутуши, четвертины свиней (кроме поросят возрастом до 3 недель), кабанов, барсуков, медведей, нутрий, всеядных и плотоядных животных.

При послеубойной диагностике используют два метода исследования: микроскопический (компрессорный) и биохимический (метод переваривания). Прижизненную диагностику осуществляют способом иммуноферментного анализа.