Методы диагностики бактериологический метод эшерихиоз
Обновлено: 27.03.2024
Посев кала на патогенные эшерихии – метод микробиологической диагностики инфекций желудочно-кишечного тракта, вызываемых патогенными штаммами кишечной палочки.
Синонимы русские
Посев на энтеропатогенную кишечную палочку.
Синонимы английские
Escherichia coli Detection in Stool Samples, Shiga toxin-producing Escherichia coli.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Кал, ректальный мазок.
Метод исследования
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Кишечные палочки - Escherichia coli - условно-патогенные микроорганизмы, обитающие в том числе в кишечнике человека. Большинство штаммов этой бактерии являются безвредными. Вирулентные кишечные палочки попадают в желудочно-кишечный тракт извне, как и возбудители других кишечных инфекций. Способность отдельных штаммов Е. coli вызывать заболевание связана с их способностью вырабатывать токсины, прикрепляться к стенке кишечника и внедряться в нее. Выделяют пять типов патогенных кишечных палочек, приводящих к развитию острых кишечных инфекций: энтеротоксигенные, энтеропатогенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные.
Токсины энтеротоксигенных кишечных палочек способствуют избыточному выделению в просвет кишки воды и электролитов, развитию диареи и нарушений водно-электролитного баланса. Энтероинвазивные кишечные палочки внедряются в клетки слизистой оболочки толстой кишки, вызывают развитие в ней воспаления и образование эрозий. Энтерогеморрагические Е. coli вырабатывают шигаподобный токсин (токсин похожего действия продуцирует возбудитель дизентерии Shigella dysenteriae), который разрушает стенки мелких сосудов кишечной стенки, что приводит к появлению в кале крови и развитию ишемии и некроза стенки толстого кишечника. Энтероадгезивные кишечные палочки способны прочно прикрепляться к стенке кишечника и приводить к развитию длительной, но сравнительно легко протекающей кишечной инфекции.
Основным методом диагностики эшерихиозов является бактериологическое исследование. Биоматериал используют для посева на специальные питательные среды, и при отсутствии роста колоний микроорганизмов констатируется отрицательный результат посева.
Для чего используется исследование?
- Для верификации возбудителя острой кишечной инфекции.
Когда назначается исследование?
При развитии клинических проявлений острой кишечной инфекции (тошнота, рвота, схваткообразные боли в животе, частый, жидкий (водянистый), обильный стул, иногда с примесью слизи и крови);
при контакте пациента с лицом, у которого подтвержден диагноз "эшерихиоз".
Что означают результаты?
В норме патогенные эшерихии отсутствуют.
Отрицательный результат - нет роста - отсутствие роста микроорганизмов.
Положительный результат - есть рост - рост патогенного штамма Escherichia coli.
При обнаружении микроорганизма указывается серотип (ЭПЭ О 32) и чувствительность к а/б.
Важные замечания
- Интерпретация результатов данного исследования должна производиться исключительно специалистом в области медицины. При выявлении патогенных штаммов кишечной палочки необходимо обязательно проконсультироваться с врачом для решения вопроса о назначении лечения, в том числе при отсутствии выраженных симптомов заболевания.
- В отдельных рекомендациях признается целесообразным исследование как минимум трех образцов фекалий, собранных в разные дни, для верификации отрицательного результата у пациента с клиникой бактериальной кишечной инфекции.
Также рекомендуется
Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифопаратифозная группа) с определением чувствительности к антибиотикам
Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
Определение токсинов A и B Clostridium difficile
Анализ кала на яйца и личинки гельминтов, простейшие и их цисты (Parasep)
Кальпротектин в кале
Кто назначает исследование?
Инфекционист, педиатр, терапевт, врач общей практики, эпидемиолог, гастроэнтеролог.
Среди видов Escherichia coli семейства Enterobacteriaceae, наряду с непатогенными кишечными палочками - представителями нормальной микрофлоры кишечника, имеются их патогенные варианты, в том числе:
· энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП) - возбудители энтерогеморрагического эшерихиоза с гемолитико-уремическим синдромом);
· энтероинвазивные (ЭИКП), вызывающие заболевания, сходные с дизентерией;
· энтеротоксигенные (ЭТКП), вызывающие холероподобный эшерихиоз или диарею путешественников;
· ЭПКП (энтеропатогенные) - возбудители детских колиэнтеритов и других кишечных инфекций, а также уропатогенные эшерихии, поражающие мочевыводящие пути.
Наиболее часто встречающиеся серовары патогенных эшерихий, входящих в состав перечисленных групп, представлены в таблице 11.
Таблица 11. Серовары наиболее часто встречающихся патогенных эшерихий.
Энтеротоксигенные | Энтеропатогенные | Энтероинвазивные | Энтерогеморрагические |
О6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168 | О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142 | О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167 | О157, О126, О111 |
Часть эшерихий относится к условно-патогенным микроорганизмам, способных вызывать оппортунистические инфекции (пневмонии, нагноения ран и полостей, менингиты, сепсис и т.д.). При накоплении в пищевых продуктах эшерихии могут стать причиной пищевого отравления. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов отражены в схеме 11.
Бактериоскопический метод в диагностике эшерихиозов в практике бактериологических лабораторий не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий.
Бактериологический метод является основным методом диагностики эшерихиозов. Для выделения эшерихий используют среды Эндо, Левина и среду Мак-Конки с сорбитом для выделения Escherichia coli 0157 : HI из группы ЭГКП.
Схема 11. Микробиологическая диагностика эшерихиозов
Через 18 —24 ч инкубации при 37 0 С изучают характер колоний (гладкие, выпуклые, с ровными краями колонии, окрашенные в красный цвет в результате разложения лактозы, с характерным металлическим блеском), выросших на плотных питательных средах. Патогенные эшерихии по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам не отличаются от обычных эшерихий, обитающих в кишечнике человека. Исключение составляют лактозоотрицательные ЭПКП. Принадлежность выделенных микроорганизмов к патогенным эшерихиям устанавливают по антигенной структуре с помощью ОРА со смесью специфических эшерихиозных ОК- сывороток и содержимого 10 лактозоположительных колоний. На среде Мак-Конки с сорбитом ЭГКП образуют бесцветные колонии, тогда как другие эшерихии ферментируют сорбит, образуя красные колонии.
При положительном результате РА оставшуюся часть колонии пересевают уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды на комбинированную полускошенную полиуглеводную среду (например, Ресселя) с целью накопления культуры.
На 3-й день учитывают изменения на среде Ресселя. Ферментацию глюкозы с образованием кислоты или кислоты и газа выявляют по изменениям столбика агара (пожелтение и его разрывы среды в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях) и скошенной части (пожелтение в результате ферментации лактозы и сахарозы). При отсутствии ферментации углеводов среда приобретает щелочную реакцию за счет выделения аминов при разложении белка и приобретает красный цвет. Проверяют чистоту выделенной культуры, определяют ее биохимические свойства (посев на среды Гисса); проводят серотипирование путем постановки сначала ориентировочной РА на стекле с поливалентной ОК-сывороткой, а затем — развернутой РА с адсорбированными групповыми сыворотками для определения ОК-серогруппы. Можно использовать латексные диагностикумы, покрытые соответствующими антителами (реакция латексной агглютинации).
Антигенную формулу выделенной культуры определяют по результатам постановки развернутой РА с ОК сывороткой (или диагностическим иммуноглобулином) и живой культурой (типирование по К-антигену), а также развернутой РА с ОК сывороткой и гретой (кипяченой в течение 1-2 ч) культурой с целью определения специфического О-антигена. Кипячение или автоклавирование разрушает поверхностно расположенный К-антиген, мешающий определению специфического О-антигена. Через сутки инкубирования при 37 0 С гомологичные сыворотке штаммы должны агглютинироваться до титра или до половины титра сыворотки.
Культуру, положительно прореагировавшую в развернутой РА с одной из сывороток, засевают на дифференциально-диагностические среды для окончательной идентификации. Для выявления источника инфекции и путей заражения у выделенного штамма определяют фаговар и колициногеновар.
У выделенных культур или в патологическом материале можно определить адгезивность и инвазивность микроскопическим методом с использованием культур ткани Нер-2 или HeLa, а также плазмиды вирулентности с помощью ДНК-зондов или ПЦР.
Для ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямой или непрямая РИФ.
Серологический метод является вспомогательным, направленным на обнаружение антител и их динамики в процессе инфекции (исследование парных сывороток) с помощью РА, РНГА, ИФА.
Клиника и проявления эшерихиозов. Современное лечение эшерихиозов
Инкубационный период при всех эшерихиозах от нескольких часов до 4 суток. Начало заболевания острое с появления симптомов общей интоксикации и диарейного синдрома разной степени выраженности. Накопленные к настоящему времени клинико-лабораторные материалы позволяют рассматривать клинику этих заболеваний в связи с их этиологией.
Эшерихиоз, вызываемый энтеротоксигенными штаммами кишечной палочки (так называемая диарея путешественников), протекает по типу холероподобного заболевания с поражением тонкой кишки, но без выраженного синдрома интоксикации. У больных наблюдается слабость, головокружение; температура тела нормальная или субнормальная; боль в животе разлитая схваткообразная; стул частый, обильный, бескаловый, водянистый без зловонного запаха; тошнота, рвота вначале съеденной пищей, затем белесоватой жидкостью. Живот вздут, при пальпации малоболезненный, выражено урчание. Тяжесть состояния определяется степенью обезвоживания. Иногда стремительно развивается эксикоз, и болезнь характеризуется молниеносным течением.
Эшерихиоз, вызываемый энтероинвазивными кишечными палочками, - протекает как острая кишечная инфекция с симптомами поражения толстой кишки с интоксикацией. Температура может повышаться до 39°С и выше, но у большинства больных остается нормальной. Общее состояние относительно удовлетворительное, несмотря на частый жидкий стул с примесью слизи, иногда крови и боли внизу живота; сигмовидная кишка спазмирована Симптомы болезни стихают к 5-7-му дню.
Эшерихиоз, вызываемые энтеропатогенными кишечными палочками, у детей протекают в форме энтеритов и энтероколитов, а у недоношенных детей - в септической форме с возможным образованием множественных гнойных очагов. Экстраинтестинальные формы эшерихиоза проявляются клинически в форме пиелонефрита, пиелоцистита, цистита, холецистита. Особо тяжелое течение наблюдается при сочетанных формах эшерихиоза со стафилококковой и вирусной инфекциями.
Эшерихиоз, вызванный энтерогеморрагическими штаммами, характеризуется токсикозом и более выраженным поражением проксимальных отделов толстой кишки. Протекает как геморрагический колит без выраженной интоксикации. Обычно у 3-5% больных через 6-8 дней течения колитического синдрома развивается гемолитико-уремический синдром или тромбоцитопеническая пурпура. Летальность в этих случаях достигает 3-7%.
Точная диагностика той или иной формы эшерихиоза возможна только при получении результата бактериологического исследования кала, рвотных масс с учетом преобладающего роста возбудителя, подозреваемого в качестве этиологического агента. Серологические исследования малоинформативны и доказательны только при нарастании титра антител к выделенному возбудителю в динамике болезни.
Современное лечение эшерихиозов
Больных с тяжелым течением эшерихиозов госпитализируют. Лечение проводят как при всех острых кишечных инфекциях, протекающих с интоксикацией и обезвоживанием. Антибактериальные средства при легких формах применяют только по индивидуальным показаниям. При средней тяжести течения назначают: бактрим, бисептол, септрим, ципрофлоксацин в обычных среднетерапевтических дозах 3-5 дней. В тяжелых случаях показано назначение клафорана по 1,0-2,0 г 2 раза в день. При соответствующих показаниях (при рвоте) ципрофлоксацин или офлоксацин - по 0,2 г 2 раза в день вводят внутривенно; возможно их сочетание с внутримышечным введением гентамицина по 0,08 г 3 раза в день или другого аминогликозида. Курс лечения 5-7 дней.
Перехода острых форм эшерихиозов в хронические не наблюдается. Переболевшие эшерихиозами находятся под наблюдением инфекциониста КИЗ поликлиники, так как при несвоевременном лечении гиповолемического (дегидратационного) шока возможно развитие острой почечной недостаточности, а в случаях нерациональной, необоснованно длительной антибиотикотерапии при колитическом синдроме у больных эшерихиозом возможно формирование дисбактериоза кишечника. Эти формы требуют долечивания в условиях поликлиники.
- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки.
Своё название бактерии получили в честь немецкого педиатра Т. Эшериха, впервые выделившего Escherichia coli из содержимого кишечника детей. Род образуют подвижные (перитрихи) прямые палочковидные бактерии размером 1,1-1,5x2,0-6,0 мкм. В мазках они располагаются одиночно или парами. У большинства штаммов существуют капсулы или микрокапсулы.
Температурный оптимум для роста эшерихий 37 °С. Эшерихии ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа, оксидаза-отрицательны и каталаза-положительны.
Эшерихии входят в состав микрофлоры толстой кишки теплокровных, пресмыкающихся, рыб и насекомых. Эшерихии — основная аэробная микрофлора кишечника, вызывающая, однако, обширную группу заболеваний человека, известных как эшерихиозы.
Эшерихиозы характеризуются не только клиническим полиморфизмом, но и создают особую эпидемиологическую ситуацию. Основное медицинское значение имеет кишечная палочка (Escherichia coli). Кишечные палочки рассматривают как санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) при анализе воды и пищевых продуктов.
Кишечная палочка. Escherichia coli
В настоящее время среди прочих энтеробактерии кишечная палочка — основной возбудитель эшерихиозов у человека.
Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки
Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами.
• На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями.
• В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо).
• На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза-отрицательные — бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно-синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные — бесцветные, на среде Плоскирева — соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Молекулярно-генетический анализ, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителей шигеллеза и эшерихиоза в кале.
Синонимы русские
Шигеллы и энтероизвазивные кишечные палочки (ЭИКП) (эшерихии, колибактерии), возбудители шигеллеза (бактериальной дизентерии) и эшерихиоза.
Синонимы английские
Shigella species and enteroinvasive Esherichia coli (EIEC), DNA, PCR, fecal samples.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Shigellaspeciesи Esherichiacoli– грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. В норме шигеллы и энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) отсутствуют в организме. Их выявление указывает на кишечную инфекцию, которая требует лечения пациента и ограничения распространения заболевания.
К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии).
Бактерии рода E. coli различаются между собой по биохимическим и патогенным свойствам. Не все E. coli, а только некоторые биовары и серотипы колибактерий способны вызывать эшерихиоз. Типичные колибактерии являются представителями нормальной микробиоты кишечника человека, участвуют в процессах пищеварения и относятся к условно-патогенной среде. Кишечные палочки, которые синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способствуют развитию эшерихиоза, который протекает по типу инвазивной острой кишечной инфекции (дизентерии). ЭИКП, так же как и шигеллы, могут проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника.
Шигеллы и кишечные палочки распространяются фекально-оральным механизмом передачи, который реализуется пищевым, водным и контактно-бытовым путями.
Инкубационный период составляет от нескольких часов до нескольких дней и зависит от количества бактерий, их патогенных свойств и особенностей защитных механизмов человека. Заболевание может протекать как в легких формах со стертой симптоматикой, так и с развитием тяжелой инфекции. Признаки шигеллеза и энтероинвазивного эшерихиоза схожи: острое начало, резкая боль в животе, многократный стул с примесью слизи и крови, спазм сигмовидной кишки, общая интоксикация.
Около 8 % случаев инвазивного эшерихиоза приводит к гемолитико-уремическому синдрому, который проявляется острой почечной недостаточностью, гемолитической анемией, тромбоцитопенией и пурпурой.
После выздоровления возможно длительное выделение бактерий с калом (характерно для шигеллеза), что способствует распространению инфекции.
Необходимо также учитывать, что существует несколько патологических состояний и кишечных инфекций, которые сопровождаются вышеуказанной симптоматикой, но лечатся по-разному. При обследовании пациента с кровавой диареей необходимо в первую очередь исключить шигеллез, эшерихиоз, амебиаз, отравление химическими веществами, язвенный колит, болезнь Крона, острую кишечную непроходимость и тромбоз сосудов брыжейки.
Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральным методом благодаря быстрому получению результатов и высокой специфичности и чувствительности исследования. Быстрая диагностика острых кишечных инфекций позволяет избежать лишних инвазивных процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.
Читайте также: