Методы диагностики бактериологический метод эшерихиоз

Обновлено: 27.03.2024

Посев кала на патогенные эшерихии – метод микробиологической диагностики инфекций желудочно-кишечного тракта, вызываемых патогенными штаммами кишечной палочки.

Синонимы русские

Посев на энтеропатогенную кишечную палочку.

Синонимы английские

Escherichia coli Detection in Stool Samples, Shiga toxin-producing Escherichia coli.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал, ректальный мазок.

Метод исследования

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Кишечные палочки - Escherichia coli - условно-патогенные микроорганизмы, обитающие в том числе в кишечнике человека. Большинство штаммов этой бактерии являются безвредными. Вирулентные кишечные палочки попадают в желудочно-кишечный тракт извне, как и возбудители других кишечных инфекций. Способность отдельных штаммов Е. coli вызывать заболевание связана с их способностью вырабатывать токсины, прикрепляться к стенке кишечника и внедряться в нее. Выделяют пять типов патогенных кишечных палочек, приводящих к развитию острых кишечных инфекций: энтеротоксигенные, энтеропатогенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные.

Токсины энтеротоксигенных кишечных палочек способствуют избыточному выделению в просвет кишки воды и электролитов, развитию диареи и нарушений водно-электролитного баланса. Энтероинвазивные кишечные палочки внедряются в клетки слизистой оболочки толстой кишки, вызывают развитие в ней воспаления и образование эрозий. Энтерогеморрагические Е. coli вырабатывают шигаподобный токсин (токсин похожего действия продуцирует возбудитель дизентерии Shigella dysenteriae), который разрушает стенки мелких сосудов кишечной стенки, что приводит к появлению в кале крови и развитию ишемии и некроза стенки толстого кишечника. Энтероадгезивные кишечные палочки способны прочно прикрепляться к стенке кишечника и приводить к развитию длительной, но сравнительно легко протекающей кишечной инфекции.

Основным методом диагностики эшерихиозов является бактериологическое исследование. Биоматериал используют для посева на специальные питательные среды, и при отсутствии роста колоний микроорганизмов констатируется отрицательный результат посева.

Для чего используется исследование?

  • Для верификации возбудителя острой кишечной инфекции.

Когда назначается исследование?

При развитии клинических проявлений острой кишечной инфекции (тошнота, рвота, схваткообразные боли в животе, частый, жидкий (водянистый), обильный стул, иногда с примесью слизи и крови);

при контакте пациента с лицом, у которого подтвержден диагноз "эшерихиоз".

Что означают результаты?

В норме патогенные эшерихии отсутствуют.

Отрицательный результат - нет роста - отсутствие роста микроорганизмов.

Положительный результат - есть рост - рост патогенного штамма Escherichia coli.

При обнаружении микроорганизма указывается серотип (ЭПЭ О 32) и чувствительность к а/б.

Важные замечания

  • Интерпретация результатов данного исследования должна производиться исключительно специалистом в области медицины. При выявлении патогенных штаммов кишечной палочки необходимо обязательно проконсультироваться с врачом для решения вопроса о назначении лечения, в том числе при отсутствии выраженных симптомов заболевания.
  • В отдельных рекомендациях признается целесообразным исследование как минимум трех образцов фекалий, собранных в разные дни, для верификации отрицательного результата у пациента с клиникой бактериальной кишечной инфекции.

Также рекомендуется

Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифопаратифозная группа) с определением чувствительности к антибиотикам

Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам

Определение токсинов A и B Clostridium difficile

Анализ кала на яйца и личинки гельминтов, простейшие и их цисты (Parasep)

Кальпротектин в кале

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, терапевт, врач общей практики, эпидемиолог, гастроэнтеролог.

Среди видов Escherichia coli семейства Enterobacteriaceae, наряду с непатогенными кишечны­ми палочками - представителями нормальной микрофлоры кишечника, имеются их патогенные варианты, в том числе:

· энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП) - возбудители энтерогеморрагического эшерихиоза с гемолитико-уремическим синдромом);

· энтероинвазивные (ЭИКП), вызывающие заболева­ния, сходные с дизентерией;

· энтеротоксигенные (ЭТКП), вызывающие холероподобный эшерихиоз или диарею путешественников;

· ЭПКП (энтеропатогенные) - возбудители детских колиэнтеритов и других кишечных инфекций, а также уропатогенные эшерихии, поражающие мочевыводящие пути.

Наиболее часто встречающиеся серовары патогенных эшерихий, входящих в состав перечисленных групп, представлены в таблице 11.

Таблица 11. Серовары наиболее часто встречающихся патогенных эшерихий.

Энтеротоксигенные Энтеропатогенные Энтероинвазивные Энтерогеморрагические
О6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168 О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142 О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167 О157, О126, О111

Часть эшерихий относится к условно-патогенным микроорганизмам, способных вызывать оппортуни­стические инфекции (пневмонии, нагноения ран и полостей, ме­нингиты, сепсис и т.д.). При накоплении в пищевых продуктах эшерихии могут стать причиной пищевого отравления. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов отражены в схеме 11.

Бактериоскопический метод в диа­гностике эшерихиозов в практике бактериологических лабораторий не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий.

Бактериологический метод является основным методом диагностики эшерихиозов. Для выделения эшерихий используют среды Эндо, Левина и среду Мак-Конки с сорбитом для выделения Escherichia coli 0157 : HI из группы ЭГКП.

Схема 11. Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Через 18 —24 ч инкубации при 37 0 С изучают характер колоний (гладкие, выпуклые, с ровными краями колонии, окрашенные в красный цвет в результате разложения лактозы, с характерным металлическим блеском), выросших на плотных питательных средах. Патоген­ные эшерихии по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам не отличаются от обычных эшерихий, обитающих в кишечнике человека. Исключение составляют лактозоотрицательные ЭПКП. Принадлежность выделенных микро­организмов к патогенным эшерихиям устанавливают по ан­тигенной структуре с помощью ОРА со смесью специфических эшерихиозных ОК- сывороток и содержимого 10 лактозоположительных колоний. На среде Мак-Конки с сорбитом ЭГКП образуют бесцветные колонии, тогда как другие эшерихии фер­ментируют сорбит, образуя красные колонии.

При положительном результате РА оставшуюся часть колонии пересевают уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды на комбинированную полуско­шенную полиуглеводную среду (например, Ресселя) с целью накопления культуры.

На 3-й день учитывают изменения на среде Ресселя. Ферментацию глюкозы с образованием кислоты или кислоты и газа выявляют по изменениям стол­бика агара (пожелтение и его разрывы среды в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях) и скошенной части (пожелтение в результате фер­ментации лактозы и сахарозы). При отсутствии ферментации углеводов среда приобретает щелочную реакцию за счет выделения аминов при разложении бел­ка и приобретает красный цвет. Проверяют чистоту выделенной культуры, опре­деляют ее биохимические свойства (посев на среды Гисса); проводят серотипирование путем постановки сначала ориентировочной РА на стекле с поливалентной ОК-сывороткой, а затем — развернутой РА с адсорбированными групповыми сы­воротками для определения ОК-серогруппы. Можно использовать латексные диагностикумы, покрытые соответствующи­ми антителами (реакция латексной агглютинации).

Антигенную формулу выделенной культуры определяют по результатам постановки развернутой РА с ОК сывороткой (или диагностическим иммуноглобулином) и жи­вой культурой (типирование по К-антигену), а также развернутой РА с ОК сывороткой и гретой (кипяченой в течение 1-2 ч) культурой с целью определения специфического О-антигена. Кипячение или автоклавирование разрушает поверхно­стно расположенный К-антиген, мешающий определению специфического О-антигена. Через сутки инкубирования при 37 0 С гомологичные сыворотке штаммы должны агглютинироваться до титра или до половины титра сыворотки.




Культуру, положительно прореагировавшую в развернутой РА с одной из сывороток, засевают на дифференциально-диагностические среды для окончательной иден­тификации. Для выявления источника инфекции и путей заражения у вы­деленного штамма определяют фаговар и колициногеновар.

У вы­деленных культур или в патологическом мате­риале можно определить адгезивность и инвазивность микроскопическим методом с использованием культур ткани Нер-2 или HeLa, а также плазмиды вирулентности с помощью ДНК-зондов или ПЦР.

Для ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямой или непрямая РИФ.

Серологический метод является вспо­могательным, направленным на обнаружение антител и их динамики в процессе инфекции (исследование парных сывороток) с помощью РА, РНГА, ИФА.

Клиника и проявления эшерихиозов. Современное лечение эшерихиозов

Инкубационный период при всех эшерихиозах от нескольких часов до 4 суток. Начало заболевания острое с появления симптомов общей интоксикации и диарейного синдрома разной степени выраженности. Накопленные к настоящему времени клинико-лабораторные материалы позволяют рассматривать клинику этих заболеваний в связи с их этиологией.

Эшерихиоз, вызываемый энтеротоксигенными штаммами кишечной палочки (так называемая диарея путешественников), протекает по типу холероподобного заболевания с поражением тонкой кишки, но без выраженного синдрома интоксикации. У больных наблюдается слабость, головокружение; температура тела нормальная или субнормальная; боль в животе разлитая схваткообразная; стул частый, обильный, бескаловый, водянистый без зловонного запаха; тошнота, рвота вначале съеденной пищей, затем белесоватой жидкостью. Живот вздут, при пальпации малоболезненный, выражено урчание. Тяжесть состояния определяется степенью обезвоживания. Иногда стремительно развивается эксикоз, и болезнь характеризуется молниеносным течением.

Эшерихиоз, вызываемый энтероинвазивными кишечными палочками, - протекает как острая кишечная инфекция с симптомами поражения толстой кишки с интоксикацией. Температура может повышаться до 39°С и выше, но у большинства больных остается нормальной. Общее состояние относительно удовлетворительное, несмотря на частый жидкий стул с примесью слизи, иногда крови и боли внизу живота; сигмовидная кишка спазмирована Симптомы болезни стихают к 5-7-му дню.

Эшерихиоз, вызываемые энтеропатогенными кишечными палочками, у детей протекают в форме энтеритов и энтероколитов, а у недоношенных детей - в септической форме с возможным образованием множественных гнойных очагов. Экстраинтестинальные формы эшерихиоза проявляются клинически в форме пиелонефрита, пиелоцистита, цистита, холецистита. Особо тяжелое течение наблюдается при сочетанных формах эшерихиоза со стафилококковой и вирусной инфекциями.

эшерихиоз

Эшерихиоз, вызванный энтерогеморрагическими штаммами, характеризуется токсикозом и более выраженным поражением проксимальных отделов толстой кишки. Протекает как геморрагический колит без выраженной интоксикации. Обычно у 3-5% больных через 6-8 дней течения колитического синдрома развивается гемолитико-уремический синдром или тромбоцитопеническая пурпура. Летальность в этих случаях достигает 3-7%.

Точная диагностика той или иной формы эшерихиоза возможна только при получении результата бактериологического исследования кала, рвотных масс с учетом преобладающего роста возбудителя, подозреваемого в качестве этиологического агента. Серологические исследования малоинформативны и доказательны только при нарастании титра антител к выделенному возбудителю в динамике болезни.

Современное лечение эшерихиозов

Больных с тяжелым течением эшерихиозов госпитализируют. Лечение проводят как при всех острых кишечных инфекциях, протекающих с интоксикацией и обезвоживанием. Антибактериальные средства при легких формах применяют только по индивидуальным показаниям. При средней тяжести течения назначают: бактрим, бисептол, септрим, ципрофлоксацин в обычных среднетерапевтических дозах 3-5 дней. В тяжелых случаях показано назначение клафорана по 1,0-2,0 г 2 раза в день. При соответствующих показаниях (при рвоте) ципрофлоксацин или офлоксацин - по 0,2 г 2 раза в день вводят внутривенно; возможно их сочетание с внутримышечным введением гентамицина по 0,08 г 3 раза в день или другого аминогликозида. Курс лечения 5-7 дней.

Перехода острых форм эшерихиозов в хронические не наблюдается. Переболевшие эшерихиозами находятся под наблюдением инфекциониста КИЗ поликлиники, так как при несвоевременном лечении гиповолемического (дегидратационного) шока возможно развитие острой почечной недостаточности, а в случаях нерациональной, необоснованно длительной антибиотикотерапии при колитическом синдроме у больных эшерихиозом возможно формирование дисбактериоза кишечника. Эти формы требуют долечивания в условиях поликлиники.

- Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки.

Своё название бактерии получили в честь немецкого педиатра Т. Эшериха, впервые выделившего Escherichia coli из содержимого кишечника детей. Род образуют подвижные (перитрихи) прямые палочковидные бактерии размером 1,1-1,5x2,0-6,0 мкм. В мазках они располагаются одиночно или парами. У большинства штаммов существуют капсулы или микрокапсулы.

Температурный оптимум для роста эшерихий 37 °С. Эшерихии ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа, оксидаза-отрицательны и каталаза-положительны.

Эшерихии входят в состав микрофлоры толстой кишки теплокровных, пресмыкающихся, рыб и насекомых. Эшерихии — основная аэробная микрофлора кишечника, вызывающая, однако, обширную группу заболеваний человека, известных как эшерихиозы.

Эшерихиозы характеризуются не только клиническим полиморфизмом, но и создают особую эпидемиологическую ситуацию. Основное медицинское значение имеет кишечная палочка (Escherichia coli). Кишечные палочки рассматривают как санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) при анализе воды и пищевых продуктов.

Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки

Кишечная палочка. Escherichia coli

В настоящее время среди прочих энтеробактерии кишечная палочка — основной возбудитель эшерихиозов у человека.

Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки

Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами.

• На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями.

• В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо).

• На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза-отрицательные — бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно-синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные — бесцветные, на среде Плоскирева — соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Молекулярно-генетический анализ, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителей шигеллеза и эшерихиоза в кале.

Синонимы русские

Шигеллы и энтероизвазивные кишечные палочки (ЭИКП) (эшерихии, колибактерии), возбудители шигеллеза (бактериальной дизентерии) и эшерихиоза.

Синонимы английские

Shigella species and enteroinvasive Esherichia coli (EIEC), DNA, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Shigellaspeciesи Esherichiacoli– грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. В норме шигеллы и энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) отсутствуют в организме. Их выявление указывает на кишечную инфекцию, которая требует лечения пациента и ограничения распространения заболевания.

К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии).

Бактерии рода E. coli различаются между собой по биохимическим и патогенным свойствам. Не все E. coli, а только некоторые биовары и серотипы колибактерий способны вызывать эшерихиоз. Типичные колибактерии являются представителями нормальной микробиоты кишечника человека, участвуют в процессах пищеварения и относятся к условно-патогенной среде. Кишечные палочки, которые синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способствуют развитию эшерихиоза, который протекает по типу инвазивной острой кишечной инфекции (дизентерии). ЭИКП, так же как и шигеллы, могут проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника.

Шигеллы и кишечные палочки распространяются фекально-оральным механизмом передачи, который реализуется пищевым, водным и контактно-бытовым путями.

Инкубационный период составляет от нескольких часов до нескольких дней и зависит от количества бактерий, их патогенных свойств и особенностей защитных механизмов человека. Заболевание может протекать как в легких формах со стертой симптоматикой, так и с развитием тяжелой инфекции. Признаки шигеллеза и энтероинвазивного эшерихиоза схожи: острое начало, резкая боль в животе, многократный стул с примесью слизи и крови, спазм сигмовидной кишки, общая интоксикация.

Около 8 % случаев инвазивного эшерихиоза приводит к гемолитико-уремическому синдрому, который проявляется острой почечной недостаточностью, гемолитической анемией, тромбоцитопенией и пурпурой.

После выздоровления возможно длительное выделение бактерий с калом (характерно для шигеллеза), что способствует распространению инфекции.

Необходимо также учитывать, что существует несколько патологических состояний и кишечных инфекций, которые сопровождаются вышеуказанной симптоматикой, но лечатся по-разному. При обследовании пациента с кровавой диареей необходимо в первую очередь исключить шигеллез, эшерихиоз, амебиаз, отравление химическими веществами, язвенный колит, болезнь Крона, острую кишечную непроходимость и тромбоз сосудов брыжейки.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральным методом благодаря быстрому получению результатов и высокой специфичности и чувствительности исследования. Быстрая диагностика острых кишечных инфекций позволяет избежать лишних инвазивных процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Читайте также: