Му по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных

Обновлено: 24.04.2024

1.1. Лабораторные методы исследования на хламидийные инфекции животных включают:

- выявление специфических антител в сыворотке крови больных животных в РСК (РДСК) или ИФА;

- обнаружение хламидий и их антигенов в патологическом материале методом световой или люминесцентной микроскопии;

- выделение хламидий на куриных эмбрионах, в культуре клеток или лабораторных животных с последующей их идентификацией;

- выявление ДНК хламидий в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

1.2. В лабораторию для исследования на хламидийные инфекции направляют:

- сыворотку крови в количестве 3-5 куб. см от абортировавших или подозрительных по заболеванию животных, а также во всех случаях, предусмотренных действующей инструкцией. Кровь от абортировавших животных берут дважды: в период клинического проявления болезни и повторно, от них же, через 14-21 день. Сыворотки направляют в лабораторию в количестве 1-2 куб. см. Сыворотки хранят при температуре минус 20°С и исследуют одномоментно. Сыворотки гемолизированные или контаминированные бактериальной и грибковой флорой не пригодны;

- патологический материал (соскобы с конъюнктивы, гениталий, фекалии) берут только одноразовыми или стерильными инструментами в одноразовые пластиковые пробирки с крышками или в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками с физраствором в количестве 1 куб. см и доставляют в лабораторию в емкости со льдом в течение 24 часов. Хранить материал можно не более 7 суток при 4°С и 10-12 мес. при температуре минус 20°С;

- пробы эякулята или замороженной спермы, полученные от производителей, подозрительных по заболеванию. Пробы эякулята направляют для исследования в количестве 1 куб. см; замороженную сперму в количестве не менее 2 гранул доставляют в лабораторию в контейнере с жидким азотом или в пробирке с сухим льдом;

- патологический материал от павших или убитых больных животных (кусочки паренхиматозных органов, лимфатических узлов и семенников), от абортировавших животных (кусочки плаценты);

- абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы и сычуг плода.

Патологический материал отбирают в стерильные, герметически закрывающиеся флаконы не позднее двух часов после гибели, убоя животного или аборта.

Флаконы с патматериалом помещают в термос со льдом, а абортированные плоды во влагонепроницаемую тару и в тот же день, но не позже 24 часов, доставляют в лабораторию с соблюдением мер, исключающих распространение возбудителя инфекции.

2. Серологические исследования

2.1. Серологические исследования на хламидийные инфекции основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови животных в реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и методом иммуноферментного анализа (ИФА); у абортировавших животных - на установлении нарастания титра антител в 4 и более раз.

Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, серологически не исследуют в течение 1 года после вакцинации.

2.2. В РСК, РДСК используют следующие компоненты:

- комплементсвязывающий группоспецифический хламидийный антиген;

- позитивную (иммунную) сыворотку крови овец, содержащую группо-специфические хламидийные антитела;

- негативную (отрицательную) сыворотку крови овец;

- комплемент (свежая, консервированная или лиофильно высушенная сыворотка крови морской свинки);

- гемолизин (сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана);

- физиологический раствор, рН 7,0-7,2.

Специфический и контрольный антигены, позитивную и негативную сыворотки изготавливают биофабрики, выпускающие их в специальных наборах.

Антиген разводят в дистиллированной воде и применяют в РСК, РДСК в рабочих титрах, указанных на этикетке.

2.3. Гемолизин в РСК и РДСК используют в удвоенном титре (например, при титре гемолизина 1:1000 его берут 2:1000).

2.4. Эритроциты барана отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об/мин. в течение 10-15 мин. до полной прозрачности над осад очной жидкости.

Для РСК применяют 2,5%-ную, для РДСК - 3%-ную взвесь эритроцитов из осадка.

Перед работой взвесь эритроцитов и гемолитическую сыворотку в рабочем разведении смешивают в равных объемах, полученную гемолитическую систему ставят в термостат при 37°С на 20-30 мин. для сенсибилизации. Во время работы гемолитическую систему хранят при комнатной температуре или в холодильнике при 2-4°С.

2.5. Для серологического исследования пригодны лишь свежие испытуемые сыворотки. Допускаются к исследованию и однократно замороженные, а также сыворотки, консервированные борной кислотой (2% к объему) или мертиолятом (1:10000).

Мутные, проросшие или гемолизированные сыворотки для исследования непригодны.

2.6. Физиологический раствор для разведения компонентов (0,85% раствор химически чистого хлорида натрия в дистиллированной воде, рН 7,2-7,4) готовят и кипятят в течение 5 минут за день или в день постановки реакции.

2.7. Постановка реакции связывания комплемента (РСК).

2.7.1. Реакцию ставят в объеме 1 куб. см (по 0,2 куб. см каждого компонента). Комплемент титруют каждый раз перед постановкой главного опыта на позитивной и 1-2 испытуемых сыворотках.

2.7.2. Титрование комплемента. Сухой биофабричный комплемент растворяют физиологическим раствором до первоначального объема, указанного на этикетке, и готовят основное разведение 1:20.

Затем во все пробирки разливают гемолитическую систему по 0,4 куб. см, встряхивают и ставят в водяную баню на 20 мин при 37-38°С (схему титрования комплемента см. в таблице 1).

Титром (единицей) комплемента считают наименьшую дозу его, которая дает полный гемолиз эритроцитов с испытуемыми сыворотками в пробирках первого и второго рядов и позитивной сывороткой - в пробирках второго ряда (без антигена).

В примере, приведенном в таблице 2, титр комплемента, разведенного 1:20, равен 0,1 куб. см, что и будет является его рабочей дозой.

Примечание : если в первом ряду пробирок с сыворотками из опыта получена ясно выраженная задержка гемолиза эритроцитов более, чем на два интервала по сравнению с безантигенным рядом, это значит, что испытуемые сыворотки содержат специфические к данному антигену антитела и, в таком случае, рабочую дозу комплемента определяют по безантигенным рядам позитивной и испытуемых сывороток.

Расчет количества чистого комплемента необходимого для постановки главного опыта, делают по формуле:

где А - рабочая доза комплемента;

В - количество пробирок, занятых в реакции;

С - основное разведение комплемента.

Пример : (0,1 х 100):20 = 0,5.

Количество разведенного комплемента, требуемое для всей реакции (в данном примере 100 пробирок), равно 20 куб. см (0,2 х 100), поэтому к 0,5 куб. см чистого комплемента следует добавить 19,5 куб. см физиологического раствора.

2.7.3. Главный опыт РСК. Испытуемые сыворотки исследуют в разведении 1:5 и 1:10 (доза сыворотки 0,04 куб. см и 0,02 куб. см со специфическим антигеном, в разведении 1:5 с контрольным антигеном (на специфичность) и без антигена (на антикомплементарность).

Испытуемые и контрольные сыворотки инактивируют в день постановки реакции в разведенном виде при 56-65 °С (в зависимости от вида животных) в течение 30 мин. (также в РДСК).

Оба этапа реакции проводят в водяной бане при 37-38°С, бактериолитическую систему выдерживают 60 мин, второй этап реакции (с гемолитической системой) - 20 мин.

Контроли главного опыта РСК:

- позитивная сыворотка в разведении 1:5 без антигена и с контрольным антигеном; в разведениях от 1:5 до ее титра со специфическим антигеном;

- негативная сыворотка в разведениях 1:5 и 1:10 со специфическим антигеном, в разведении 1:5 с контрольным антигеном и без антигена - антигены специфический и контрольный в двойной дозе - на антикомплементарность (комплемент +) и на гемотоксичность (комплемент -);

- гемолитическая система на гемотоксичность (комплемент -).

Схема постановки главного опыта представлена в таблице 3.

2.8. Постановка реакции длительного связывания комплемента (РДСК).

2.8.1. Первую фазу реакции проводят в холодильнике при 2-6°С в течение 16-18 час., вторую фазу в водяной бане 20 мин при 37-38°С.

Комплемент применяют в рабочем разведении 1:25 или 1:30 (при определении его рабочего разведения). Если рабочий титр комплемента неизвестен или вызывает сомнение, перед титрованием гемолитической системы для РДСК определяют его рабочее разведение по схеме, представленной в таблице 4.

2.8.2. Титрование гемолитической системы. Дозу гемолитической системы для главного опыта РДСК определяют путем титрования ее на 3-4 сыворотках: позитивной и 1-2 испытуемых из партии, поступившей на исследование.

Инактивированные сыворотки (позитивную и испытуемые) в разведении 1:5 разливают каждую в два ряда пробирок штатива Флоринского по 0,2 куб. см.

Затем в первые ряды пробирок каждой сыворотки вносят по 0,2 куб. см антигена в рабочем разведении, а во вторые ряды - 0,2 куб. см физиологического раствора; во все пробирки разливают по 0,2 куб. см комплемента в зависимости от его рабочего разведения, встряхивают и помещают в холодильник на 16-18 час. при температуре 2-6°С.

На следующий день штативы вынимают из холодильника и выдерживают в течение 20-30 мин. при комнатной температуре.

Затем в первые пробирки с позитивной и испытуемыми сыворотками разливают гемолитическую систему (приготовленную согласно пунктам 2.3 и 2.4) по 0,1 куб. см, во вторые пробирки - по 0,2 куб. см, в третьи - по 0,3 куб. см и т.д. до 1 куб. см.

Пробирки встряхивают, ставят в водяную баню на 20 мин. при 37-38°С, после чего определяют титр гемолитической системы.

Схема титрования гемолитической системы представлена в таблице 5.

Титром гемолитической системы считают наибольшее ее количество, в котором получен полный гемолиз эритроцитов в обоих рядах пробирок с негативной и испытуемой сыворотками и в безантигенном ряду с позитивной сывороткой, при полной задержке гемолиза в ряду с позитивной сывороткой и антигеном. В приведенном примере (таблица 5) титр гемолитической системы равен 0,6 куб. см.

2.8.3. Главный опыт РДСК. В первый день одновременно с разливом сывороток для титрования гемолитической системы, разливают сыворотки и антиген для главного опыта, как указано в пункте 2.7.3.

Затем во все пробирки главного опыта и соответствующих контролей разливают комплемент по 0,2 куб. см в зависимости от его рабочего разведения, пробирки встряхивают и помещают в холодильник на 16-18 час. при 2-6°С.

На следующий день штативы с первой фазой вынимают из холодильника и после выдерживания в течение 20-30 мин. при комнатной температуре во все пробирки разливают гемолитическую систему в дозе, полученной при титровании (в приведенном примере - 0,6 куб. см). Штативы встряхивают и помещают в водяную баню на 20 мин. при 37-38°С.

Схема главного опыта РДСК представлена в таблице 6.

2.9. При массовых постановках РДСК испытуемые сыворотки исследуют только со специфическим антигеном в разведении сыворотки 1:5 (0,05 куб. см сыворотки + 0,2 куб. см физиологического раствора), с последующей перестановкой сомнительно и положительно реагирующих проб, как указано в п. 2.7 и 2.8.

- при работе с аппаратом Флоринского для разведения сыворотки 1:5 к 0,05 куб. см сыворотки добавлять 0,2 куб. см физраствора;

- перед разливом компонентов в РСК и РДСК - смешивание равных объемов антигена и комплемента в рабочих разведениях.

2.10. Учет результатов РСК, РДСК проводят дважды: первый раз - сразу после водяной бани, второй - после оседания эритроцитов на дно пробирки (через 3-4 часа после водяной бани) или на следующий день при хранении в холодильнике от 2° до 6°С.

Для объективного определения результатов реакции оценку рекомендуется проводить в процентах гемолиза. Для этого из реакции выбирают 5 пробирок с полным (100%) гемолизом и жидкость из них сливают в одну пробирку. Из нее готовят разведения с меньшим процентом гемолиза по следующей схеме:

1.1. Смешанная кишечная инфекция - остропротекающая инфекционная болезнь молодняка разных видов сельскохозяйственных животных, которая имеет полиэтиологическую природу и вызывается двумя-тремя и более видами патогенных энтеробактерий, относящимся к родам Escherichia, Citrobacter, Proteus, Morganella, Klebsiella, Salmonella. Помимо указанных микроорганизмов возбудителями болезни могут быть также бактерии других родов и семейств - Yersinia, Pseudomonas, Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium и пр. Наряду с бактериальными агентами нередко (особенно на крупных фермах) болезнь обусловливают корона- и ротавирусы.

1.2. Болезнь возникает в первые дни и недели жизни животных и проявляется чаще в виде энзоотической вспышки, развитию которой способствуют различные факторы, связанные с несоблюдением технологических и ветеринарно-санитарных требований воспроизводства стада, а также нарушением режимов содержания и кормления молодняка.

1.3. Смешанная кишечная инфекция может протекать в кишечной (энтеритной) и септической формах. При кишечной форме возбудители болезни локализуются только в желудочно-кишечном тракте и брыжеечных лимфоузлах, регионарных поражённым участкам кишечника; при септической форме - в паренхиматозных органах, различных тканях, а также в кишечнике и брыжеечных лимфоузлах. Основными клиническими признаками болезни являются: потеря аппетита, понос, переходящий в профузный, нарастающая слабость, депрессия, учащенное дыхание и сердцебиение, обезвоживание организма (при затяжном течении); нередко наблюдается поражение центральной нервной системы (возбуждение, судороги), иногда пневмония, артриты; температура тела в пределах нормы, в отдельных случаях повышена на 0,5 - 1 °С, в предагональном состоянии она снижается ниже нормы.

1.4. Патологоанатомические изменения у погибших животных имеют картину катарального или катарально-геморрагического гастроэнтерита, на слизистой желудка, тонкого отдела кишечника и слепой кишки могут встречаться язвы, нередко отмечаются множественные точечные, полосчатые и пятнистые кровоизлияния на слизистой желудка, толстого и тонкого отделов кишечника, под капсулой селезенки, эпи- и эндокарде (клапанах); иногда отмечается очаговая катаральная пневмония и отек легких, дистрофия печени; регионарные брыжеечные лимфатические узлы как правило увеличены, отечны, на разрезе розового или красно-вишневого цвета; при вскрытии черепной коробки - гиперемия кровеносных сосудов и отек ткани головного мозга. Указанные изменения могут быть в отдельных или одновременно в нескольких органах.

1.5. Диагноз на смешанную кишечную инфекцию в хозяйствах устанавливают на основании совокупности эпизоотологических данных (возраст заболевших животных, массовость поражения, стационарность и др.), клинических признаков болезни, патологоанатомической картины и результатов бактериологического (при необходимости еще и вирусологического) исследования патологического материала от больных или погибших животных.

2.1. Для посмертной бактериологической диагностики в лабораторию направляют 2 - 4 свежих трупа погибших или убитых с диагностической целью больных животных (желательно не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами). В случае невозможности доставки целого трупа посылают следующий патологический материал: голову, трубчатую кость, сердце, перевязанное лигатурой вблизи разреза сосудов и аорты, селезенку, долю печени с желчным пузырем, брыжеечные лимфатические узлы, регионарные воспаленному участку кишечника, а также пораженный отрезок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой (в отдельной таре или полиэтиленовом пакете). Указанный патологический материал исследуют в день поступления его в лабораторию.

2.2. Для прижизненной бактериологической диагностики в лабораторию направляют фекалии больных диареей животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами. Пробы фекалий берут от 5 - 6 больных животных одной фермы в стерильные пробирки по 2 - 3 г непосредственно из прямой кишки с помощью прокипяченного резинового катетера. Пробирки вместе с сопроводительной запиской упаковывают в полиэтиленовый пакет или картонную коробку.

При невозможности быстрой доставки проб фекалий в лабораторию (через 3 - 4 часа после взятия) их консервируют стерильным 30 %-ным глицериновым раствором в соотношении 1:2 (см. приложение).

2.3. Пробы фекалий и содержимого тонкого отдела кишечника (в количестве не более 0,5 г) разводят в 10 см 3 стерильного 0,85 %-ного раствора хлорида натрия, тщательно размешивают и затем выдерживают 10 - 15 минут при комнатной температуре для осаждения крупных частиц. Надосадочную жидкость используют для посева на питательные среды не позднее 1 - 2 часов после приготовления взвесей. При исследовании консервированных фекалий, их тщательно размешивают, после чего разводят физиологическим раствором в 5 - 10 раз.

3.1. Патологический материал (за исключением содержимого тонкого отдела кишечника и фекалий) засевают в пробирки с МПБ и на плотные дифференциально-диагностические среды в чашках: Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит агар). Содержимое тонкого отдела кишечника и фекалий засевают только на указанные выше плотные среды в чашках. Кроме того для выделения из фекалий сальмонелл неразведенные пробы фекалий засевают еще в одну из сред обогащения (селенитовый бульон, магниевую, Мюллера или др.) в соотношении 1:5.

3.1.1. Посев материала в МПБ проводят пастеровской пипеткой. Посевы на плотные среды в чашках из внутренних органов и тканей, указанных в п. 2.3, делают путем отпечатков разрезанной поверхностью кусочка органа из предварительно профламбированного участка на подсушенную питательную среду или вносят материал пастеровской пипеткой на поверхность среды, а затем равномерно растирают его стеклянным шпателем.

3.1.2. Содержимое тонкого отдела кишечника, взятое путем соскоба с пораженного участка слизистой оболочки, суспендируют в 10 см 3 стерильного 0,85 %-ного раствора хлорида натрия, затем засевают суспензию бактериологической петлей на подсушенные в термостате плотные дифференциально-диагностические среды в чашках широким частым штрихом по всей поверхности среды. Аналогичным образом проводят посев разведенных фекалий.

3.2. Пробирки с посевами в МПБ из внутренних органов и тканей инкубируют при температуре 37 - 38 °С в течение 18 - 24 часов. При наличии в МПБ помутнения среды культуру микроскопируют и в случае обнаружения мелких грамотрицательных палочек пересевают ее на агар Эндо (или Левина) и среду Плоскирева (или висмут-сульфит агар) в чашках, которые помещают в термостат (37 - 38 °С ) на 18 - 24 часа.

Пересев культур, полученных в МПБ, на плотные селективные среды проводят в том случае, если отсутствует рост колоний на этих средах в первичных посевах из соответствующих органов и тканей.

При наличии на агаре Эндо (или Левина) роящегося налета, характерного для протея, пересевают его на скошенный МПА (культуры из двух-трех внутренних органов, тканей или фекалий). Чашки и пробирки с посевами инкубируют 18 - 20 часов при той же температуре.

3.4. Чашки с первичными посевами на агаре Плоскирева инкубируют при температуре 37 - 38 °С в течение 24 - 36 часов. После просмотра культур пересевают мелкие круглые колонии S-формы полупрозрачные, сероватого цвета с голубым оттенком в пробирки со скошенным МПА (по 1 - 2 колонии с культур из двух-трех внутренних органов, тканей или фекалий, каждую колонию в отдельную пробирку), которые помещают в термостат на 18 - 24 часа.

В том случае, если пересев проводят на комбинированную среду (Олькеницкого, Клиглера), то каждую колонию пересевают в одну пробирку с этой средой и в одну пробирку со скошенным МПА.

3.5. Суточные культуры бактерий на скошенном МПА или комбинированной среде, выделенные из внутренних органов, тканей или фекалий, микроскопируют (окраска по Граму) и при наличии в мазках однородных мелких грамотрицательных палочек, не образующих спор и капсул (бактерии вида Klebsiella pneumoniae образуют капсулу), используют для изучения ферментативных, патогенных, антигенных свойств, а также (при необходимости) определения подвижности в полужидком МПА. Для выявления у культур клебсиелл капсулы окраску мазков проводят по методу Гинса (тушью).

3.6. Ферментативные свойства изучают у 2 - 6 агаровых (в порядке исключения у бульонных) культур бактерий, выделенных из одного патологического материала, на наборе сред с углеводами и индикатором Андреде или полужидких средах с индикатором ВР, куда входят среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом, мальтозой, а также на средах с мочевиной, сернокислым железом (определение сероводорода), агаре Симонса, в бульоне Хоттингера или МПБ (определение индола), мясопептонной желатине, среде с фенилаланином.

При использовании комбинированной среды Олькеницкого или Клиглера учитывают изменения, вызываемые представителями разных родов энтеробактерий в этой среде, после чего данную культуру изучают по другим необходимым биохимическим тестам.

Засеянные пробирки инкубируют при температуре 37 - 38 °С.

Предварительные результаты изучения ферментативных свойств культур учитывают через 24 часа, окончательные результаты - через 48 часов. Изучение ферментативных свойств культур энтеробактерий можно проводить также с помощью тест-системы для биохимической идентификации энтеробактерий. Родовую и видовую принадлежность культур устанавливают по показателям таблицы.

Следует учитывать, что у бактерий рода Proteus встречаются нероящиеся штаммы, образующие при росте на плотных питательных средах мелкие круглые колонии S-формы сероватого цвета. Важными признаками родовой идентификации таких штаммов является их способность дезаминировать фенилаланин и разжижать желатин.

При наличии у культур отклонений от основных показателей таблицы используют дополнительные тесты: реакции с метилротом и Фогес-Проскауэра, наличия образования оксидазы, определение подвижности и др.

СХЕМА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО
МАТЕРИАЛА НА СМЕШАННУЮ КИШЕЧНУЮ ИНФЕКЦИЮ

Дифференциальные признаки энтеробактерий по ферментативным свойствам

1.1. Лабораторные методы исследования на хламидийные инфекции животных включают:

- выявление специфических антител в сыворотке крови больных животных в РСК (РДСК) или ИФА;

- выявление ДНК хламидий в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

1.2. В лабораторию для исследования на хламидийные инфекции направляют:

- абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы и сычуг плода.

2. Серологические исследования

2.2. В РСК, РДСК используют следующие компоненты:

- комплементсвязывающий группоспецифический хламидийный антиген;

- позитивную (иммунную) сыворотку крови овец, содержащую группо-специфические хламидийные антитела;

- негативную (отрицательную) сыворотку крови овец;

- комплемент (свежая, консервированная или лиофильно высушенная сыворотка крови морской свинки);

- гемолизин (сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана);

- физиологический раствор, рН 7,0-7,2.

Антиген разводят в дистиллированной воде и применяют в РСК, РДСК в рабочих титрах, указанных на этикетке.

2.3. Гемолизин в РСК и РДСК используют в удвоенном титре (например, при титре гемолизина 1:1000 его берут 2:1000).

Для РСК применяют 2,5%-ную, для РДСК - 3%-ную взвесь эритроцитов из осадка.

Мутные, проросшие или гемолизированные сыворотки для исследования непригодны.

2.7. Постановка реакции связывания комплемента (РСК).

Расчет количества чистого комплемента необходимого для постановки главного опыта, делают по формуле:

где А - рабочая доза комплемента;

В - количество пробирок, занятых в реакции;

С - основное разведение комплемента.

Пример : (0,1 х 100):20 = 0,5.

Контроли главного опыта РСК:

- гемолитическая система на гемотоксичность (комплемент -).

Схема постановки главного опыта представлена в таблице 3.

2.8. Постановка реакции длительного связывания комплемента (РДСК).

Схема титрования гемолитической системы представлена в таблице 5.

Схема главного опыта РДСК представлена в таблице 6.

Постановка окончательного диагноза на инфекционные болезни невозможна без обнаружения ее возбудителя.

Лабораторная диагностика хламидиоза

сыворотку крови в количестве 3-5 см3 от абортировавших или подозрительных по заболеванию животных, а также во всех случаях, предусмотренных действующей инструкцией. Кровь от абортировавших животных берут дважды: в период клинического проявления болезни и повторно, от них же, через 14-21 день. Сыворотки направляют в лабораторию в количестве 1-2 см3;
патологический материал (соскобы с конъюнктивы, гениталий, фекалии берут только одноразовыми или стерильными инструментами в одноразовые пластиковые пробирки с крышками или в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками с физраствором в количестве 1 см3 и доставляют в лабораторию в емкости со льдом в течение 24 часов. Хранить материал можно не более 7 суток при 4 оС и 10-12 мес при температуре минус 20 оС;
пробы эякулята или замороженной спермы, полученные от производителей, подозрительных по заболеванию. Пробы эякулята направляют для исследования в количестве 1 см3; замороженную сперму в количестве не менее 2 гранул доставляют в лабораторию в контейнере с жидким азотом или в пробирке с сухим льдом;
патологический материал от павших или убитых больных животных (кусочки паренхиматозных органов, лимфатических узлов и семенников), от абортировавших животных (кусочки плаценты);
абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы и сычуг плода.

Данные о существующих методах диагностики хламидиозов, используемом материале и продолжительности исследования приведены в таблице.

Методы лабораторной диагностики хламидиозов

Диагноз на хламидийные инфекции считают предварительным при выявлении специфических антител в сыворотке крови в РСК (РДСК) или ИФА. Диагноз на хламидийные инфекции считают окончательным при применении любого прямого метода диагностики, который выявляет хламидии, антигены хламидий или ДНК хламидий в исследуемом материале.
Не рекомендуем применять световую микроскопия хламидиоза в связи с высоким процентом ложноположительных результатов, причиной которых является наличие другой микрофлоры. Эта методика обладает недостаточной специфичностью, особенно в случаях малой распространенности возбудителя в слизистых.

быстрота – вся диагностическая процедура с использованием моноклональных антител в среднем от момента забора материала до постановки диагноза занимает не более 40 мин.;
возможность интерпретации результатов на основе регистрации элементарных и ретикулярных телец, расположенных внутри- и внеклеточно при сохранении высокой степени чувствительности и специфичности;
относительная проста техники проведения анализа.

Однако этот метод дает в ряде случаев ложноотрицательные результаты, связанные с неправильной техникой забора образцов для исследования и с диагностикой хронических и вялотекущих форм хламидиоза, когда возбудитель, прячась от антител и антибиотиков уходит в подслизистый слой, где вокруг него начинает формироваться воспалительный вал из нейтрофилов и возбудитель оказывается внутри инкапсулированного пространства.

Ложноположительные результаты возможны при наличии в образце нежизнеспособных возбудителей или их антигенных структур, а также других бактерий, имеющих перекрестно-реагирующие антигены с антигенами хламидий. Следующей причиной, которая может привести к ошибке, является наличие острого воспалительного процесса на слизистой, когда за счет большого количества лейкоцитов и белка ИФА дает ложноположительные результаты.

Сегодня одним из наиболее перспективных подходов к прямой диагностике инфекций считают специфическую амплификацию нуклеиновых кислот in vitro и, в частности, наиболее разработанный вариант такой амплификации – метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий в пробирке всего за несколько часов произвести изолированное умножение (амплификацию) любого гена или его фрагмента во много миллионов раз (Обухов И.Л. и др., 1996).

ПЦР, являясь самым чувствительным на сегодняшний день методом прямого обнаружения хламидий, не требует иммунологического ответа на проникновение возбудителя в организм хозяина, что дает возможность следить за ранними стадиями развития инфекции.

Для выявления патогенных микроорганизмов методом ПЦР не требуется их размножения, следовательно, так можно диагностировать инфекцию в латентной стадии. Необходимо также отметить простоту отбора материала для проведения ПЦР-диагностики на хламидиоз, т.к. можно достоверно судить об инфицированности животного по исследованию соскобов с конъюнктивы или слизистых урогенитального тракта. Клинический материал для ПЦР отбирают в пробирки с буферным раствором.

На сегодняшний день производятся тест-системы для выявления хламидий методом ПЦР, которые обладают 100% специфичностью и чувствительностью 10 копий ДНК на 1 мл образца (Обухов И.Л., 1994). Таким образом, ПЦР превосходит все биохимические и иммуноферментные методы лабораторной диагностики инфекций, в частности хламидиоза, т.к. позволяет определять единичные копии инфекционного возбудителя в исследуемом образце клинического материала.

Высокая чувствительность ПЦР становится недостатком, когда при исследовании животных после курса лечения появляются ложноположительные результаты в связи с невозможностью оценить жизнеспособность и патогенность клетки только на основании выявления фрагмента ее генома.

В связи с вышеизложенным, рекомендуем для лабораторной диагностики хламидиозов отбирать материал и направлять его для исследования, используя ИФА + ПЦР, а для контроля результатов лечения после курса терапии – ИФА.

Засеянные пробирки инкубируют при температуре 37 - 38 °С.

СХЕМА
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО
МАТЕРИАЛА НА СМЕШАННУЮ КИШЕЧНУЮ ИНФЕКЦИЮ

Дифференциальные признаки энтеробактерий по ферментативным свойствам

Читайте также: