Мук 4 2 2410-08 организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом

Обновлено: 19.04.2024

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП)

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова, О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и предложений ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в г.Москве, Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях; Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 28 июля 2008 г.

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 сентября 2008 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (далее - Роспотребнадзор), осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор за полиомиелитом, острыми вялыми параличами в рамках Национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения, сотрудниками научно-исследовательских институтов и других заинтересованных организаций.

1.2. В методических указаниях определены требования к порядку сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (ОВП) в целях установления этиологических агентов заболеваний, а также изучения циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов среди населения.

2. Общие положения

2.1. Вирусологические исследования материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича (далее - ПОЛИО/ОВП) на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее - НПЭВ) являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

2.2. Все процедуры по сбору, транспортированию, подготовке к вирусологическому исследованию материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляются в соответствии с требованиями нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение требований настоящих методических указаний направлено на совершенствование эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

3. Организация вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Забор материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом ОВП проводят в лечебно-профилактических организациях (далее - ЛПО) в установленном порядке в соответствии с нормативными и методическими документами.

3.2. Вирусологические исследования материалов от больных ПОЛИО/ОВП осуществляют: Национальный центр по лабораторной диагностике полиомиелита в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (далее - НЦ), вирусологические лаборатории региональных центров эпидемиологического надзора за полиомиелитом и ОВП в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях, Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им. Пастера (далее - РЦ).

3.3. Вирусологическому исследованию в РЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего (после 14 дня с момента выявления паралича), неполного (1 проба стула) обследования больного (по одной пробе, не более 5 детей);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП (по одной пробе, не более 5 контактных);

парные сыворотки крови больных с подозрением на полиомиелит или больных, отнесенных к приоритетным "горячим" случаям ОВП (прилож.2). Сыворотки могут быть доставлены и исследованы в НЦ (по согласованию).

3.4. Вирусологическому исследованию в НЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание независимо от возраста (две пробы);

пробы фекалий от больных детей, отнесенных к приоритетным ("горячим") случаям ОВП (две пробы);

пробы фекалий от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к приоритетному ("горячему") случаю (одна проба);

пробы фекалий лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, отнесенным к "горячему" случаю (по одной пробе, не более 5 контактных);

пробы фекалий от больных вакциноассоциированным полиомиелитом, собранные повторно на 60-й и 90-й день от начала заболевания (по две пробы). В случае получения положительного вирусологического результата проводят повторный отбор проб для последующего исследования (по согласованию с НЦ);

материалы от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от детей в возрасте до 5 лет, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, в случае позднего, неполного обследования больного, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты);

материалы от лиц, прибывших из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран/территорий, общавшихся с больным ПОЛИО/ОВП, исследованные в РЦ, из которых выделены полиовирусы, НПЭВ (пробы фекалий и изоляты).

3.5. Результаты вирусологических исследований, идентификации и внутритиповой дифференциации сообщаются в организации здравоохранения, органы и учреждения Роспотребнадзора, направившие материалы, а также в установленном порядке в НЦ, РЦ, Координационный центр ликвидации полиомиелита Роспотребнадзора.

4. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования

4.1. Клинические материалы

4.1.1. Отбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник ЛПО в установленном порядке.

4.1.3. В тех случаях, когда получить фекалии от больного невозможно, можно получить фекальную пробу с помощью ректальной "соломинки" или ректального тампона. Ректальную "соломинку" (натуральную или пластиковую, твердую, с внутренним диаметром 5 мм) осторожно вводят в прямую кишку и медленными движениями набирают достаточное количество фекальной массы. После выведения из прямой кишки соломинку сгибают или переламывают и помещают в стерильный флакон/пробирку. При использовании ректального тампона стерильный ватный тампон на деревянной палочке вводят в прямую кишку и протирают слизистую оболочку так, чтобы захватить фекальный материал. Тампон извлекают и, отломив палочку, помещают в стерильную пробирку/флакон с 1-2 мл транспортировочной среды (прилож.3).

4.1.4. В летальных случаях берут пробы (кусочки ткани) из шейного и поясничного отделов спинного мозга, продолговатого мозга, Варолиева моста, нисходящего отдела толстой кишки. Пробы отбирают как можно раньше после наступления смерти. Ткани иссекают стерильными инструментами, помещают в отдельные стерильные пластиковые или стеклянные емкости с транспортировочной средой, добавленной в таком количестве, чтобы сохранить их влажными. Объем каждой пробы (кусочка тканей ЦНС) должен составлять примерно 1 см; из толстой кишки иссекают сегмент длиной 3-5 см, содержащий фекальные массы.

4.1.5. Для диагностических серологических исследований у больных ПОЛИО/ОВП отбирают две пробы крови. Первая должна быть взята в первые семь дней от начала заболевания, вторая - спустя 2-3 нед. Оптимальный объем пробы - 3-5 мл. Если взятие крови из вены по каким-либо причинам невозможно, берут кровь уколом пальца, что позволяет взять 0,3-0,4 мл крови. Пробы крови помещают в стерильные емкости (пробирки, флакончики) без антикоагулянтов или консервантов. Пробы оставляют при комнатной температуре на 2 ч для свертывания крови. После образования сгустка его отделяют от стенки сосуда, пробу помещают в холодильник при температуре от 2 до 8 °С и спустя 24 ч отбирают сыворотку. Центрифугированием при 1500 g в течение 5-10 мин сыворотку осветляют, переносят стерильной пипеткой в стерильную емкость. Если нельзя воспользоваться центрифугой или обработке подлежит сразу большое количество проб, с помощью стерильной пипетки можно осторожно отсосать сыворотку от сгустка так, чтобы в нее не попали выпавшие в осадок эритроциты. Во всех случаях следует предотвращать попадание в сыворотку эритроцитов, т.к. при хранении они подвергаются гемолизу, что может повлиять на результаты серологических исследований.

4.1.6. Пробы фекалий должны быть доставлены в РЦ или в НЦ в течение 72 ч с момента отбора. До отправки их хранят в холодильнике при температуре от 2 до 8 °С. Транспортирование проб осуществляют при температуре от 2 до 8 °С (обратная "холодовая" цепь). Если доставка проб по какой-либо причине задерживается, пробы хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.1.7. Пробы крови (сыворотки) доставляют в лабораторию в течение 72 ч от момента отбора. До отправки пробы хранят при температуре от 2 до 8 °С. Эту же температуру обеспечивают при транспортировании проб. Если доставка по какой-либо причине задерживается, сыворотки хранят при температуре -20 °С. Условия транспортирования должны обеспечивать их сохранение.

4.2. Изоляты полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов

Изоляты полиовирусов, НПЭВ, выделенные в РЦ из материалов от больных ПОЛИО/ОВП, должны быть отправлены для подтверждения и внутритиповой дифференциации (далее - ВТД) в НЦ в течение 7 дней от момента идентификации вируса в РЦ. Для доставки изолятов используют пластиковые пробирки с завинчивающимися крышками с наружной резьбой объемом 2,0 мл. Вместе с изолятами доставляются образцы фекалий, из которых они были выделены; До отправки изоляты хранят при температуре -20 °С. Транспортирование проб осуществляют в условиях "холодовой цепи", обеспечивающих их сохранение.

4.3. Маркировка материалов

Все vатериалы должны быть снабжены этикеткой, на которой четко обозначают фамилию и инициалы больного, идентификационный номер, тип пробы, дату отбора. Пробы доставляются с направлением (в 2 экз.) на лабораторное исследование (прилож.4).

4.4. Упаковка и транспортирование материалов для исследования

При транспортировании материалов в лабораторию необходимо соблюдать принцип "тройной упаковки", которая включает следующие компоненты:

1) первичная емкость - маркированный контейнер/пробирка/флакон с пробой, надежно закрытые крышкой, герметизированной лабораторной пленкой или парафином;

2) вторичная емкость - прочный водонепроницаемый, непротекающий контейнер (или полиэтиленовый пакет) с адсорбирующим материалом в количестве, достаточном для адсорбции всего образца в случае его протечки. Во вторичную емкость помещают контейнер/пробирку/флакон с пробой. Образцы от одного пациента упаковываются отдельно. Также во вторичную емкость помещают направление на исследование, вложенное в полиэтиленовый пакет;

3) внешняя упаковка - прочный термоизолирующий контейнер или термос, предназначенные для транспортирования биологических материалов. Для обеспечения температурных условий транспортирования, в термоконтейнеры помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. На внешней поверхности термоконтейнера или термоса укрепляют этикетку с указанием адреса, телефона, факса, электронной почты отправителя, адреса, телефона, факса, электронной почты получателя, условий транспортирования.

Перед отправкой материалов отправитель должен проинформировать получателя о планируемой отправке и ее сроках. Недопустимо отправлять материалы без предварительной договоренности с получателем.

Транспортирование проб осуществляется в соответствии с требованиями нормативных и методических документов. Упаковка и материалы, которые использовались для транспортирования, могут быть контаминированы инфекционными агентами, поэтому первичная и вторичная упаковки должны быть уничтожены.

Органы и учреждения Роспотребнадзора обеспечивают выполнение всех необходимых требований по доставке проб в установленном порядке.

5. Порядок проведения вирусологических исследований

5.1. Получение и подготовка проб для исследования

5.1.1. Получение и регистрация проб

Немедленно после доставки материалов в лабораторию упаковочную коробку/термоконтейнер/термос распаковывают в отведенной для этого зоне, соблюдая при этом требования нормативных и методических документов.

В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое защитное укрытие (далее - БЗУ) 2-го класса безопасности (или рабочий стол с покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными дезинфектантами). Распаковка и регистрация материалов осуществляется двумя сотрудниками - один регистрирует поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку, проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек, полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется состояние присланных проб ("хорошее" или "плохое").

Проверяют соответствие сведений на этикетке присланной пробы и в направлении на исследование. В случае несовпадения или неполноты сведений, делают запрос в организацию, направившую материал для исследования. Каждой пробе присваивают идентификационный номер, под которым она регистрируется в лабораторном журнале. Этим номером помечают направление на исследование, а также все емкости (центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в данной лаборатории. Если исследование будет начато в течение 48 ч, пробы для выделения вируса помещают в холодильник (от 2 до 8 °С), если исследование будет начато позже, пробы хранят при температуре -20 °С.

Все процедуры во время получения, распаковки и регистрации материалов осуществляют в защитной одежде и резиновых перчатках. Все работы по подготовке проб фекалий, фекальных суспензий, секционных материалов для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса безопасности.

Лаборатория может получать много проб из разных источников в течение рабочего дня, поэтому следует проявлять особую тщательность и осторожность при обращении с пробами не только для защиты персонала, но и для избежания перекрестной контаминации между пробами.

5.1.2. Подготовка фекальных проб для исследования в культуре клеток

До приготовления фекальной суспензии присланную в лабораторию "исходную" пробу делят пополам, одну часть используют для приготовления суспензии, другую хранят при -20 °С (для отправки в НЦ, для повторного исследования пробы в случае необходимости).

Для исследования в культуре клеток фекальные пробы обрабатывают хлороформом для удаления бактерий, грибков, цитотоксических липидов, для разъединения вирусных агрегатов.

Для приготовления 20% фекальной суспензии устойчивые к хлороформу полиэтиленовые центрифужные пробирки емкостью 50 мл маркируют в соответствии с номером пробы. В каждую пробирку вносят 10 мл фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ) с антибиотиками (прилож.3), 1 г стеклянных бусин и 1 мл хлороформа. В пробирку вносят 2 г фекальной пробы. Плотно закрывают центрифужную пробирку и тщательно встряхивают в течение 20 мин в механическом шейкере или вручную. Центрифугируют 20 мин при 1500 g в центрифуге с охлаждением. Надосадочную жидкость каждой пробы переносят в два маркированных флакона с винтовой крышкой. Если жидкость непрозрачна, обработку хлороформом повторяют. Суспензию из одного флакона используют для исследования, второй флакон хранят при -20 °С для отправки в НЦ, если это будет необходимо.

Пробы, отобранные с помощью ректальных "соломинок", готовят для исследования так же, как и фекальные пробы.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Организация и проведение вирусологических исследований материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

1. РАЗРАБОТАНЫ ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, С.Г.Дроздов, М.И.Михайлов, О.Ю.Байкова, О.В.Юрашко); Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Ф.Лазикова, Е.Б.Ежлова); ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (Т.В.Воронцова, А.А.Ясинский, О.П.Чернявская) с учетом замечаний и предложений ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в г.Москве, Ставропольском, Хабаровском краях, Омской, Свердловской областях; Санкт-Петербургского НИИЭМ им.Пастера.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственного санитарно-эпидемиологического надзора при реализации национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации.

1.2. В методических указаниях определены требования к организации сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения лабораторных исследований материалов из объектов окружающей среды, выполняемых в целях выявления циркуляции полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов, а также для установления причин, факторов передачи инфекции при повышенной заболеваемости или при эпидемических вспышках заболеваний энтеровирусной этиологии.

1.3. Методические указания также могут быть использованы специалистами организаций, эксплуатирующих системы централизованного хозяйственно-бытового водоснабжения, системы канализования, в рамках осуществления производственного контроля.

2. Общие положения

2.1. Вирусологические исследования материалов из объектов окружающей среды (далее - ООС) на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы (далее - ПОЛИО/НПЭВ) являются одним из важнейших элементов системы эпидемиологического надзора за полиомиелитом и острыми вялыми параличами (далее - ПОЛИО/ОВП), другими энтеровирусными инфекциями, осуществляемого в рамках реализации национального плана действий по поддержанию свободного от полиомиелита статуса Российской Федерации.

2.2. Все процедуры по сбору, транспортированию, подготовке к исследованию и лабораторному исследованию материалов из ООС на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы осуществляется в строгом соответствии с требованиями нормативных и методических документов (прилож.1).

2.3. Выполнение требований методических указаний направлено на совершенствование эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями.

3. Организация вирусологических исследований материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.1. Вирусологические исследования материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, другие НПЭВ проводят вирусологические лаборатории ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации, вирусологические лаборатории региональных центров эпидемиологического надзора за полиомиелитом и острыми вялыми параличами (в г.Москве, Хабаровском, Ставропольском краях, Свердловской, Омской областях, Санкт-Петербургском НИИЭМ им.Пастера (далее - РЦ), Приволжском и Дальневосточном региональных центрах по изучению энтеровирусных инфекций (Нижегородский, Хабаровский НИИЭМ), Национальном центре по лабораторной диагностике полиомиелита (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН) (далее - НЦ).

3.2. Указанные учреждения проводят отбор проб из ООС, подготовку их к исследованию, лабораторное исследование.

3.3. При выделении полиовирусов изоляты направляются для идентификации и внутритиповой дифференциации (далее - ВТД) в НЦ.

3.6. При обнаружении в исследуемом образце РНК энтеровирусов методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (далее - ОТ-ПЦР) следует провести идентификацию вируса.

3.7. Результаты исследования материалов из ООС передаются в учреждения, направившие их.

4. Показания к проведению вирусологических исследований материалов из объектов окружающей среды на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

4.1. Планирование организации вирусологических исследований.

Вирусологические исследования материалов из ООС на полиовирусы, НПЭВ проводят в плановом порядке, внепланово и в рамках производственного контроля.

Плановые вирусологические исследования материалов из ООС осуществляют в течение определенного времени для получения информации о циркуляции полиовирусов, НПЭВ среди населения, если предполагается, что эффективность эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП недостаточна (или требуются дополнительные данные) и группа населения, в отношении которой предпринимается надзор, обладает одной из нижеперечисленных или несколькими особенностями:

недостаточный охват иммунизацией;

наличие сведений о недавней (или возможной) циркуляции в обследуемой группе населения дикого или вакцинородственного полиовируса;

существование риска заноса дикого полиовируса из эндемичных (неблагополучных) по полиомиелиту стран (территорий).

Плановые исследования осуществляются в рамках эпидемиологического надзора за ПОЛИО/ОВП, энтеровирусными инфекциями, с научными целями.

Внеплановые вирусологические исследования материалов из ООС проводятся в случае непредвиденных изменений санитарно-эпидемиологической ситуации на определенной территории. Ими могут быть:

установленный факт заноса дикого полиовируса или циркуляция вакцинородственного полиовируса;

подъем заболеваемости населения энтеровирусными инфекциями;

возникновение эпидемической вспышки энтеровирусной инфекции;

авария или нарушения в системах водоснабжения или канализации, в результате которых может произойти интенсивное биологическое загрязнение поверхностных и подземных водоисточников, а также питьевой воды.

Для проведения плановых и внеплановых исследований на полиовирусы, НПЭВ составляется план проведения этих исследований, который должен включать:

продолжительность и сроки отбора проб из ООС;

характеристику группы населения, в отношении которой предпринимается исследование (численность населения, сведения об иммунизации против полиомиелита);

распределение ответственности за сбор, обработку, исследование проб из ООС;

наличие нормативных и методических документов, материального обеспечения для проведения исследований, протоколов проведения исследований;

наличие обученного персонала и контроля качественного проведения исследований;

определение порядка отчетности о результатах исследования;

определение возможностей для своевременной пересылки выделенных штаммов вирусов (или РНК-позитивных материалов) для дальнейшего изучения в установленном порядке.

Исследования материалов ООС в рамках производственного контроля проводится постоянно с целью санитарно-вирусологической оценки производственных (технологических) процессов.

4.2. Объекты вирусологических исследований, места отбора, продолжительность исследований.

При проведении плановых исследований объектами исследований являются сточные воды, происходящие от той группы населения, в отношении которой предпринимается надзор. Места отбора проб выбираются вместе с представителями инженерной службы. В соответствии с целями исследования исследуют неочищенные сточные воды, при этом следует исключить стоки, которые могут быть загрязнены производственными отходами.

Большой объем сточных вод, поступающих на очистные сооружения или в канализационный коллектор, может снизить чувствительность обследования вследствие фактора разбавления. Поэтому в больших городах можно разбить обследуемое население на группы и обследовать небольшие фрагменты этих групп.

При проведении плановых исследований в соответствии с целями исследования также могут быть обследованы:

сточные воды на этапах очистки и обеззараживания;

вода поверхностных водоемов, которые используются для целей рекреации, в качестве источников хозяйственно-питьевого водоснабжения;

вода плавательных бассейнов;

питьевая вода на различных этапах водоподготовки.

Продолжительность плановых исследований обычно составляет не менее 1 года, оптимальным сроком следует считать 3 года. Кратность сбора - 4 пробы в месяц, но не менее 2 проб.

При проведении внеплановых исследований продолжительность исследования может быть более короткой, но кратность сбора проб должна быть увеличена, а выбор обследуемой группы населения - максимально точный.

Если исследования сточных вод обусловлены известной или подозреваемой реинтродукцией дикого полиовируса или появлением случаев полиомиелита, вызванных вакцинородственным полиовирусом (или случайной его детекцией), продолжительность исследования должна быть не менее 1 года, кратность отбора проб - не менее 4 раз в месяц, а выбор целевой группы - максимально "прицельный".

Исследования в рамках производственного контроля проводятся в соответствии с рабочей программой и нормативными документами.

При планировании и организации любых исследований следует руководствоваться нормативными и методическими документами (прилож.1).

5. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования

Существуют два принципа отбора проб материалов из ООС для исследований на полиовирусы, НПЭВ:

одномоментный, при котором отбирают определенный объем воды в определенное время, или, что предпочтительнее, серию проб определенного объема отбирают в разное, заранее намеченное время, чтобы затем составить смешанную пробу. Пробы, отобранные одномоментным способом подвергают последующему концентрированию с использованием фильтрующих мембран, ионообменных смол, с помощью метода двухфазного разделения (прилож.2);

"адсорбционный", при котором в ток воды на определенное время помещают адсорбирующий материал, а затем проводят элюцию вирусных частиц с адсорбента (метод Риордана, концентрирование на макропористом стекле) (прилож.3).

Сотрудник, производящий отбор проб сточной воды, должен быть иммунизирован против полиомиелита. Если по техническим соображениям отбор проб выполняет сотрудник инженерно-технических служб, он также должен быть иммунизирован против полиомиелита.

Отбор проб производят только в защитной одежде - халате, закрытой обуви, резиновых перчатках. Для отбора проб воды одномоментным способом используют предназначенную для этих целей стерильную одноразовую посуду или стерильные емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не оказывающих инактивирующего действия на вирусы. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками или, что более предпочтительно, навинчивающимися крышками. Крышки должны надежно предохранять содержимое емкости от протечек. При отборе проб адсорбционным методом пакет с адсорбентом помещают в плотный пластиковый мешок, не допускающий протечек.

Немедленно после отбора поверхность емкости, в которую была отобрана проба, протирают дезинфектантом, маркируют, помещают в термоконтейнеры/термосы, обеспечивающие температурный режим 4-8 °С и доставляют в лабораторию. Пробу сопровождают актом отбора проб с указанием места отбора, даты и времени отбора.

После доставки проб в лабораторию термоконтейнер (термос) распаковывают в отведенной для этого зоне, соблюдая правила биологической безопасности. В зоне, где происходит распаковка, должны иметься емкость для мусора, тампоны, смоченные 70%-м раствором этилового спирта, биологическое защитное укрытие (далее - БЗУ) 2 класса защиты (или рабочий стол с покрытием, которое легко подвергается обработке лабораторными дезинфектантами).

Распаковка и регистрация материалов осуществляется двумя сотрудниками - один регистрирует поступившие материалы в рабочем журнале, другой открывает упаковку, проверяет целость емкостей с материалом, отсутствие протечек, полноту сопроводительных документов. В этот момент фиксируется состояние присланных проб - отсутствие протечек, соблюдение температурного режима, полнота документации.

Каждой пробе присваивают идентификационный номер, под которым она регистрируется в лабораторном журнале. Далее этим номером помечают все емкости (центрифужные пробирки, флаконы/пробирки с культурой клеток и пр.), относящиеся к данной пробе в процессе ее исследования и хранения в данной лаборатории.

Обработку проб следует начать незамедлительно после доставки в лабораторию. Если обработка будет начата в течение 48 ч, пробы можно поместить в холодильник (0-8 °С). Если исследование будет начато позже, пробы, отобранные одномоментным методом, хранят при температуре -20 °С. Пробы, собранные адсорбционным методом, рекомендуется подготовить для исследования в течение 48 ч. В любом случае следует помнить, что исследование ООС предпринимается для получения оперативной информации и последующего оперативного реагирования, поэтому пробы не должны накапливаться в лаборатории для ретроспективного исследования.

Все процедуры во время получения, распаковки и регистрации проб осуществляют в защитной одежде и резиновых перчатках.

6. Обработка проб из объектов окружающей среды в лаборатории

При обработке проб могут образовываться аэрозоли. Поэтому все работы по подготовке проб воды для исследования проводятся в БЗУ 2-го класса защиты. Для исключения перекрестной контаминации проб все манипуляции по подготовке к исследованию не следует совмещать с работой с материалами, полученными от случаев ПОЛИО/ОВП. Оптимально работа с пробами из ООС и с материалами, полученными от случаев ПОЛИО/ОВП, должна выполняться в разных помещениях и разными группами персонала.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 сентября 2008 г.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

2. Общие положения

3. Организация вирусологических исследований материалов от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание, с синдромом острого вялого паралича на полиовирусы, другие (неполио) энтеровирусы

3.3. Вирусологическому исследованию в РЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных детей в возрасте до 15 лет с явлениями ОВП (две пробы);

3.4. Вирусологическому исследованию в НЦ подлежат материалы:

пробы фекалий от больных полиомиелитом, с подозрением на это заболевание независимо от возраста (две пробы);

пробы фекалий от больных детей, отнесенных к приоритетным ("горячим") случаям ОВП (две пробы);

4. Правила сбора, маркировки, хранения и транспортирования материалов для исследования

4.1. Клинические материалы

4.2. Изоляты полиовирусов, других (неполио) энтеровирусов

4.3. Маркировка материалов

4.4. Упаковка и транспортирование материалов для исследования

5. Порядок проведения вирусологических исследований

5.1. Получение и подготовка проб для исследования

5.1.1. Получение и регистрация проб

5.1.2. Подготовка фекальных проб для исследования в культуре клеток

Пробы, отобранные с помощью ректальных "соломинок", готовят для исследования так же, как и фекальные пробы.

Составлено:

- Е.П. Деконенко - Руководителем клинического отдела ГУ ИПиВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, председателем комиссии по диагностике полиомиелита и ОВП, доктором медицинских наук, профессором;

- В.П.Грачевым - Главным научным сотрудником ГУ ИПиВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, доктором биологических наук, профессором ;

- Шакаряном А.К. - Научным сотрудником клинического отдела ГУ ИПиВЭ им. М.П. Чумакова РАМН,

- Чернявской О.П. - Заведующей отделом обеспечения эпидемиологического надзора ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора,

- Морозовой Н.С. - Заведующей отделением кишечных инфекций ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора,

- Петиной В.С. - Заместителем начальника отдела эпидемиологического надзора Управления Роспотребнадзора по г. Москве.

Общие сведения об остром полиомиелите

Острый полиомиелит относится к инфекционным заболеваниям вирусной этиологии и характеризуется разнообразием клинических форм - от абортивных до паралитических. Паралитические формы возникают при поражении вирусом серого вещества, расположенного в передних рогах спинного мозга и двигательных ядрах черепно-мозговых нервов. Клинически это выражается развитием вялых или периферических парезов и параличей. Наиболее часто острый полиомиелит возникает в результате инфицирования одним из трёх типов вируса полиомиелита.

Резервуаром и источником возбудителя является человек, больной или носитель. Полиовирус появляется в отделяемом носоглотки через 36 ч., а в испражнениях 72 ч. после заражения и продолжает обнаруживаться в носоглотке в течение одной, а в испражнениях - в течении 3-6 нед. Наибольшее выделение вируса происходит в течение первой недели заболевания.

Механизм передачи возбудителя фекально-оральный, пути передачи -водный, пищевой и бытовой. Важное значение имеет и аспирационный механизм с воздушно-капельным и воздушно-пылевым путями передачи.

Естественная восприимчивость людей высокая, однако клинически выраженная инфекция встречается гораздо реже носительства: на один манифестный случай приходится от 100 до 1000 случаев бессимптомного носительства полиовируса. Поэтому, с точки зрения эпидемиологической значимости, случаи бессимптомного носительства или бессимптомной инфекции представляют большую опасность.

Постинфекционный иммунитет типоспецифический пожизненный.

Основные эпидемиологические признаки.

В довакцинальный период распространение заболевания носило повсеместный и выраженный эпидемический характер. В условиях умеренного климата наблюдалась летне-осенняя сезонность.

Поствакцинальный период характеризуется резким снижением заболеваемости. Заболевание регистрируется в основном у детей, не привитых против полиомиелита или привитых с нарушением календаря профилактических прививок.

Длительность инкубационного периода при остром полиомиелите колеблется от 4 до 30 дней. Наиболее часто этот период длится от 6 до 21 дня. Первичное размножение и накопление вируса происходит в глотке и кишечнике. В последующем, вирус попадает в лимфатическую систему и затем в кровь. Следующим за вирусемией этапом развития болезни является проникновение вируса в центральную нервную систему. Это происходит через эндотелий мелких сосудов или по перефирическим нервам.

Типичным для острого полиомиелита является поражение вирусом крупных двигательных клеток - мотонейронов, расположенных в сером веществе передних рогов спинного мозга и ядрах двигательных черепно-мозговых нервов в стволе головного мозга. Частичное повреждение мотонейронов или полная гибель их приводит к развитию вялых парезов или парличей мышц лица, туловища, конечностей. Воспалительный процесс по типу серозного менингита развивается и в оболочках мозга. Мозаичность поражения нервных клеток находит своё клиническое отражение в ассиметричном беспорядочном распределении парезов и относится к типичным признакам острого полиомиелита.

Профилактические мероприятия.

Улучшение санитарно-гигиенических условий способствует ограничению распространения полиовируса, однако единственным специфическим средством предупреждения паралитического полиомиелита остается иммунизация живой оральной полиомиелитной вакциной (ОПВ) из аттенуированных штаммов Сэбина или инактивированной полиомиелитной вакциной (ИПВ). Вакцинация проводится в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок.

Клиническая картина непаралитических форм острого полиомиелита

Инапарантная форма протекает как вирусоносительство и не сопровождается клиническими симптомами. Диагностика осуществляется только по данным вирусологического обследования.

Абортивная форма (малая болезнь) характеризуется следующими симптомами: умеренная лихорадка, интоксикация, головная боль, иногда незначительные катаральные явления со стороны верхних дыхательных путей, разлитые неинтенсивные боли в животе, дисфункция кишечника. Признаки поражения нервной системы отсутствуют.

Менингиальная форма протекает с синдромом серозного менингита. Ликвор сохраняет прозрачность, давление обычно повышено. Количество клеток в ликворе увеличивается от нескольких десятков до 200-300 в 1 см 3 . Белок в ликворе сохраняется нормальным или умеренно повышается, что особенно характерно для случаев с болевым синдромом.

Читайте также: