Набор для диагностики токсоплазмоз животных

Обновлено: 12.05.2024

Изобретение относится к области ветеринарии. Сущность способа заключается в исследовании сыворотки крови собак и кошек для обнаружения специфических антител к токсоплазменному антигену в реакции непрямой иммунофлюоресценции. Разведение, при котором наблюдается слабое, но явное зеленое свечение периферии клетки не менее 50% токсоплазм в поле зрения, считают титром сыворотки и при выявлении высоких титров антител (1:256-1:512) или нарастании титров антител в 4 и более раз в двух образцах сыворотки, полученных от одного животного с интервалом 2-3 недели, ставят диагноз на токсоплазмоз. Изобретение обеспечивает снижение числа компонентов реакции и ее трудоемкости и, как следствие этого, упрощение выполнения исследований и уменьшение затрат времени на получение результата диагностических исследований. 1 табл.

Формула изобретения

Способ диагностики токсоплазмоза у собак и кошек, включающий исследование сыворотки крови этих животных, отличающийся тем, что исследуемую сыворотку крови, предварительно титрованную до разведения 1:16, вносят в лунки предметных стекол с корпускулярным антигеном токсоплазм, инкубируют во влажной камере 20 мин при +20°С, затем избыток сыворотки однократно отмывают физиологическим раствором 20 мин при +20°С и высушивают при этой же температуре, затем в каждую лунку добавляют люминесцирующие антитела против IgG собак или кошек соответственно, снова инкубируют во влажной камере при +20°С, предметные стекла еще раз отмывают и высушивают и затем просматривают в люминесцентном микроскопе, при обнаружении флюоресценции зеленого цвета по периферии клеток токсоплазм, четко контрастирующей с телом клетки, делают заключение о присутствии в исследуемой сыворотке специфических антител к токсоплазменному антигену, при положительном результате сыворотки в разведении 1:16 проводят ее дальнейшее титрование и разведение, при котором наблюдается слабое, но явное зеленое свечение периферии клетки не менее 50% токсоплазм в поле зрения, считают титром сыворотки, при выявлении высоких титров антител (1:256-1:512) или нарастании титров антител в 4 и более раз в двух образцах сыворотки, полученных от одного животного с интервалом 2-3 недели, ставят диагноз на токсоплазмоз.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лабораторной серологической диагностики токсоплазмоза у животных. Способ основан на непрямом методе выявления флуоресцирующих антител.

Решение проблемы диагностики паразитарных болезней животных с помощью серологических методов является перспективным направлением. Имеются данные об иммунологических методах, которые значительно ускоряют способ диагностики и повышают ее чувствительность [5, 6]. Реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) является одной из наиболее чувствительных и простых в серодиагностике токсоплазмоза у людей [1, 2].

Наиболее близким аналогом по технической сущности к изобретению является применяемая в настоящее время в ветеринарии для диагностики токсоплазмоза реакция связывания комплемента (РСК) [4]. В основе реакции лежит способность комплемента специфически связываться с комплексами антиген + антитело. Для выявления этой связи в виде лизиса эритроцитов требуется внесение в определенной последовательности дополнительных компонентов (инактивированной гемолитической сыворотки и эритроцитов барана). В реакции участвуют: структурный белок микробной клетки в качестве антигена, сыворотка крови животного с возможными антителами, комплемент, эритроциты барана, гемолитическая сыворотка. Недостатком этой реакции по сравнению с заявленной является многокомпонентность, высокая трудоемкость и долговременность (процесс связывания комплемента должен проводится в течение 16-18 часов), низкая чувствительность и специфичность [1, 2, 3].

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является повышение чувствительности диагностики на всех стадиях заболевания токсоплазмозом, обеспечение надежности выявления инфекции на ранних стадиях при малом содержании антител в исследуемой сыворотке больного животного, сокращение времени и трудоемкости анализа.

Технический результат изобретения заключается в снижении числа компонентов реакции, упрощении выполнения исследования, в понижении ее трудоемкости и уменьшении затрат времени.

Сущность изобретения сводится к следующему. Предлагаемая РНИФ выполняется при наличии корпускулярного антигена токсоплазм, нанесенных промышленным путем в лунки предметных стекол, сыворотки животного и антител к иммуноглобулинам животного, меченных флюорохромом.

Отличия от прототипа: в реакции участвуют более специфичные компоненты (корпускулярный антиген токсоплазм, флюоресцирующая сыворотка), результат реакции учитывается с использованием люминесцентного микроскопа по наличию крупных светящихся комплексов.

Реакция может быть выполнена следующим образом: исследуемая сыворотка титруется до определенного разведения, вносится в лунки с антигеном. После экспозиции и отмывания избытка сыворотки в каждую лунку добавляются люминесцирующие антитела против IgG собак или кошек (конъюгат) в зависимости от вида исследуемых животных. Стекла еще раз отмывают, подсушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе. Обработанный люминесцирующими антителами комплекс антигена с антителами приобретает способность светиться. Интенсивность свечения прямо пропорциональна содержанию антител к антигенам токсоплазм в сыворотке. За результат реакции принимается последнее разведение исследуемой сыворотки, где интенсивность свечения выражается двумя крестами и более.

В качестве практического испытания предлагаемого способа диагностики токсоплазмоза были проведены обследования собак и кошек методами РНИФ и параллельно РСК в лаборатории протозойных инфекций ГУ НИИ ЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН. Забор проб крови производился утром натощак. С целью отделения сыворотки кровь центрифугировали при 2000 об/в мин в течение 3-х минут. Исследовали два образца сыворотки одного и того же пациента, полученных с интервалом 3 недели. РНИФ выполнялась на тест системах "ТоксоФлюоСкрин" производства ООО "НИАРМЕДИКПЛЮС" с использованием люминесцентных конъюгатов против кошек и собак. Для РСК применялся "Набор для диагностики токсоплазмоза животных" производства ООО НПФ "Биоцентр" Омск-001 [4].

Перед проведением РНИФ готовятся рабочие разведения К+ (контрольная положительная сыворотка того вида животного, которое исследуется в реакции) и К- (контрольная отрицательная сыворотка того вида животного, которое исследуется в реакции). Для приготовления рабочих разведении контрольных и исследуемых сывороток используют 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор).

На каждую лунку стекла с антигеном, нанесенного промышленным путем в лунки предметных стекол, наносят по 7-10 мкл анализируемых сывороток от собак или кошек. Стекла инкубируют во влажной камере 20 мин при +20°С. После этого стекла однократно отмывают 20 мин в физиологическом растворе и высушивают при +20°С.

Затем готовят рабочий раствор БСА (альбумин бычий сухой, меченный родамином).

Рабочий раствор ИФ (иммуноглобулины флюоресцирующие против глобулинов собак или кошек в зависимости от вида обследуемого животного) готовится на рабочем растворе БСА.

1. Контроль с положительной сывороткой того вида животного, которое исследуется в реакции.

2. Контроль с отрицательной сывороткой того вида животного, которое исследуется в реакции.

3. Контроль на отсутствие неспецифического свечения ИФ и БСА (антиген + иммуноглобулины флюоресцирующие против глобулинов собак или кошек в зависимости от вида обследуемого животного с БСА в рабочем разведении).

Учет результатов начинают с оценки контролей. В положительном контроле при разведении 1:16 должна наблюдаться яркая флюоресценция зеленого цвета по периферии клеток токсоплазм, четко контрастирующая с телом клетки. По мере разведения сыворотки интенсивность свечения уменьшается. Титром сыворотки считается разведение, при котором наблюдается слабое, но явное зеленое свечение периферии клетки не менее 50% токсоплазм в поле зрения, причем оболочка клетки должна светиться полностью (свечение только полюсов клеток токсоплазм не учитывается). В контроле с отрицательной сывороткой и контроле №3 с ИФ и БСА свечение по периферии токсоплазм должно отсутствовать.

При отсутствии в исследуемых сыворотках специфических антител свечение по периферии токсоплазм не наблюдается. Наличие свечения свидетельствует о присутствии в исследуемой сыворотке специфических антител к токсоплазменному антигену. При положительном результате сыворотки в разведении 1:16 проводят ее дальнейшее титрование. Окончательный титр сыворотки определяется так же, как и в положительном контроле. Для диагностики заболевания (особенно острой формы) одного исследования недостаточно. Диагноз может быть установлен на основании исследования двух образцов сыворотки одного и того же животного, полученных с интервалом 2-3 недели. Выявление высоких титров антител (1:256-1:512) или нарастание титров антител в 4 и более раз следует рассматривать как заболевание.

Таким образом было обследовано 52 собаки и 47 кошек. В их число входили здоровые животные и с различными клиническими состояниями. Сопоставление результатов определения антител против токсоплазм в РНИФ и РСК приведено в таблице.

Из таблицы следует, что предложенным способом было выявлено 29 (29,3%) случаев инфицирования токсоплазмой из 99-и, по сравнению с 1-м (1,0%) сомнительным в РСК. При обследовании животных в динамике (через 3 недели) серопозитивные образцы получены у 29 особей (29,3%) и обнаружены только в РНИФ. Затраты по времени проведения РНИФ и РСК составили соответственно 2,5 ч и 16-18 ч.

Использование РНИФ как способа прижизненной иммунодиагностики токсоплазмоза у кошек и собак обеспечивает по сравнению с используемой в ветеринарии РСК следующие преимущества: повышение чувствительности в десятки раз, сокращение времени исследования в 6-7 раз.

РЕЗУЛЬТАТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ТОКСОПЛАЗМ В РНИФ и РСК
Учитываемые показатели	РНИФ	РСК
1. 0бшее количество в группе:
гол.	99	99
2. Из них положительных:
гол.	29	1
%	29,3	1,0
при титре антител	от 1:16 до 1:256	1:256
3. При повторном обследовании через 3 недели:
гол.	29	отриц.
%	29,3	отриц.
при титре антител	от 1:16 до 1:256	отриц.
4. Затраты времени на проведение реакции:
час.	2,5	16-18

1. Воробьева М.Н., Равилов Р.Х., Герасимов В.В. Серологическая диагностика токсоплазмоза кошек // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Мат. Сибирской международной научно-практ. конф. Новосибирск, 2004. - С.67-68.

2. Грачева Л.И. Проблема токсоплазмоза // Вестник ветеринарии. - 1998. №7. - С.63-68.

3. Королева С.Н., Новак А.И. Эпизоотологический и эпидемиологический мониторинг при токсоплазмозе в центральном районе Российской федерации // Тр. Костромской гос.с/х академии. - Кострома, 2001. Вып.59. - С.24-29.

4. Наставление по применению набора для диагностики токсоплазмоза в РСК. Утверждено Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия 04.12.97 (13-7-2/1107).

Токсоплазмоз - это паразитарное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы, глаз, скелетной мускулатуры и мышцы сердца, а также увеличением лимфоузлов, печени и селезенки. Склонно к хроническому течению.

Распространенность токсоплазмоза в мире невероятно высока, в основном за счет стран Африки, а также Латинской и Южной Америки, в которых инфицированность населения доходит до 90%. Показатели в Европе и Северной Америке ниже – 25-50% населения.

Что провоцирует / Причины Токсоплазмоза:

Возбудитель токсоплазмоза Toxoplasma gondii относится к типу простейших (Protozoa), классу споровиков (Sporozoa), отряду кокцидий (Coccidia). Токсоплазмы подвижны и имеют форму дуги, арки или напоминают дольку апельсина. Встречаются также овальные и округлые формы. Тип движения у токсоплазмы скользящий.

Патогенез (что происходит?) во время Токсоплазмоза:

Жизненный цикл токсоплазмы включает стадии полового и бесполого размножения. Токсоплазмоз распространен во многих странах. Человек заражается от домашних животных, чаще всего от кошек, которые являются окончательным хозяином паразита. В их организме происходит половое размножение возбудителя. Больные токсоплазмозом животные выделяют паразитов с мочой, слюной, молоком. Человек является промежуточным хозяином. Заражение происходит алиментарным (наиболее часто), капельным, через поврежденные кожу и слизистые оболочки, трансмиссивным (при укусе членистоногих) путем. Возможно, внутриутробное заражение при проникновении паразита от матери к плоду через плаценту. Токсоплазмой инфицированы от 50 до 80% взрослого населения.

Пути заражения токсоплазмозом
Заражение человека происходит при употреблении мясных продуктов и яиц, не прошедших достаточную термическую обработку. Не исключена возможность заражения при попадании возбудителя на слизистые оболочки и поврежденные кожные покровы, трансмиссивным и др. путём. Наблюдается и внутриутробное заражение.

Факторы, которые могут способствовать появлению в организме паразита и повышают риск возникновения токсоплазмоза:
• Дотрагиваться грязными руками до рта после контакта с землей, после уборки кошачьего туалета, или любого другого контакта с кошачьими экскрементами.
• Принимать в пищу сырое или не до конца приготовленное мясо, особенно свинину, мясо ягненка или оленину.
• Прикасаться ко рту после контакта с сырым или непрожаренным/непроваренным мясом.
• Пересадка органов или переливание крови (очень редко).
• Если женщина беременна, и она заразилась токсоплазмозом, инфекция может от нее передаться ребенку, что может привести к серьезным последствиям.

В организме человека токсоплазмы размножаются в кишечнике, распространяются лимфогенным и гематогенным путем. Фаза лимфогенного заноса (увеличиваются и воспаляются лимфатические узлы) сменяется гематогенной диссиминацией. Стадия нахождения паразита в крови короткая (несколько дней). Попадая во внутренние органы, токсоплазмы вызывают в них воспалительные явления. Особенно часто поражаются нервная система, сетчатка, печень, миокард. В этих органах токсоплазмы находятся внутриклеточно и экстрацеллюлярно. Скопления паразитов называются псевдоцистами. Токсоплазмы способны образовывать цисты в тканях, вызывая состояние латентной инфекции. Активизация паразита происходит при неблагоприятных для макроорганизма условиях и снижении его иммунологической реактивности. В патогенезе токсоплазмозного поражения нервной системы имеют значение очаговые воспалительные явления (некротизирующий энцефалит), дисциркуляторные нарушения, связанные с васкулитом, обструкция ликворных путей, приводящая к гидро- и микроцефалии.

Наиболее грубые морфологические изменения нервной системы наблюдаются у детей. При макроскопическом исследовании выявляется расширение желудочков с перивентрикулярной зоной некроза. Обнаруживаются рубцы, замещающие участки некроза, облитерация межжелудочкового отверстия и латеральной апертуры IV желудочка. Гидроцефалия может быть выражена, приводя к истончению и деформации вещества полушарий.

Морфологические проявления токсоплазмоза мозга у взрослых многообразны. При микроскопическом исследовании наиболее характерны рассеянные по всему головному и спинному мозгу милиарные гранулемы, состоящие из больших эпителиоидных клеток, лимфоцитов, моноцитов, иногда эозинофилов. Гранулемы содержат многочисленных паразитов, окружены зоной отека с некротическими очажками, обусловленными васкулитом. Типично для токсоплазмоза обызвествление мелких очагов. При наличии токсоплазм в субарахноидальном пространстве возникает серозно-продуктивный лептоменингит.

У большинства зараженных нет клинических проявлений заболевания. У части больных наблюдается вялотекущие хронические формы и крайне редко - острые, с тяжелым течением заболевания. При внутриутробном заражении в первые месяцы беременности часто происходит выкидыш и гибель плода. Не исключается возможность внутриутробных уродств плода и рождения детей с дефектами развития. Если заражение произошло в поздние сроки беременности, рождается ребенок с генерализованным токсоплазмозом.

Симптомы Токсоплазмоза:

Токсоплазмозом заболевают лица любого возраста, однако наиболее часто - дети. Выделяют приобретенный и врожденный токсоплазмоз.

Приобретенный токсоплазмоз. Инкубационный период - от 3 до 14 дней. Продромальный период с общим недомоганием, мышечными и суставными болями - обычно несколько недель, иногда месяцев. Острая стадия заболевания проявляется повышением температуры, ознобом, лимфоаденопатией. Появляется генерализованная макулопапулезная сыпь, отсутствующая только на подошвах, ладонях, волосистой части головы. Наряду с общими признаками инфекционного заболевания имеется клиническая картина поражения различных органов: миокардит, пневмония, очаговый некротический нефрит, гепатит. Поражение нервной системы проявляется менингитом, энцефалитом, менингоэнцефалитом, энцефаломиелитом. Редко наблюдаются радикулоневритическая и малосимптомная формы (последняя может быть обнаружена лишь с помощью серологических реакций).

Наиболее типичной формой токсоплазмоза является менингоэнцефалит, в клинической картине которого имеются общемозговые и менингеальные симптомы, парезы конечностей, тонико-клонические судороги, глазодвигательные (диплопия) и координаторные нарушения. Иногда развиваются одиночные или множественные токсоплазмозные абсцессы в головном мозге. Характерны расстройства сознания, летаргия, утрата памяти и ориентировки в пространстве. В крови обнаруживаются лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, увеличение СОЭ, в цереброспинальной жидкости - лимфоцитарный плеоцитоз, умеренное увеличение содержания белка.

Выделяют острую, хроническую и латентную формы с подразделением последней на первично-латентную, без клинических проявлений, и вторично-латентную, возникающую после острой формы или рецидива хронической.

Острый токсоплазмоз характеризуется внезапным началом, лихорадкой, явлениями общей интоксикации. У больных отмечаются лимфаденопатия, макулопапулезная сыпь, увеличиваются печень, селезенка. Могут развиться признаки энцефалита, менингоэнцефалита и миокардита.

В зависимости от преобладающего синдрома выделяют энцефалитическую, тифоподобную и смешанную формы острого токсоплазмоза.

После стихания процесса острый токсоплазмоз переходит во вторично-хроническую или, реже, вторично-латентную формы.

Хронический токсоплазмоз может развиться как первично-хроническое, так и вторично-хроническое заболевание. Он характеризуется торпидным, длительным течением, при котором наблюдаются периоды обострения и ремиссии. Основные клинические симптомы - интоксикация, субфебрилитет, миалгии, артралгии. У больных отмечаются раздражительность, снижение памяти, невротические реакции. Частым симптомом является генерализованная лимфаденопатия. Вследствие мезаденита возникают ноющие боли и вздутие живота, запор, тошнота. К числу важных симптомов заболевания относятся специфический миозит (в толще мышц иногда можно прощупать уплотнения и даже кальцификаты) и миокардит. У многих больных обнаруживают признаки вегето-сосудистой дистонии, эндокринные нарушения (расстройства менструального цикла, импотенция, вторичная надпочечниковая недостаточность и др.). Нередко встречается поражение глаз в форме хориоретинита, ретинита, увеита. В периферической крови - лейкопения, нейтропения, относительный лимфоцитоз, тенденция к эозинофилии. СОЭ в пределах нормы.

Однако преобладающей формой течения приобретенного заболевания является латентный токсоплазмоз. Он чаще имеет первично-латентный и, значительно реже, вторично-латентный характер. Латентный токсоплазмоз диагностируется только при серологическом исследовании. Латентная и хроническая формы болезни могут переходить в тяжелое генерализованное течение, что встречается при ВИЧ-инфекции и других состояниях, приводящих к иммунодефициту. Наиболее часто у больных ВИЧ/СПИДом встречаются менингоэнцефалит и абсцессы мозга, вызванные токсоплазмами. В диагностике большое значение имеет компьютерная томография. В процесс также вовлекаются легкие, сердце, миокард и другие органы. Токсоплазмоз - одна из причин гибели больных ВИЧ/СПИДом.

Врожденный токсоплазмоз. При заболевании матери токсоплазмозом в первой половине беременности плод, как правило, погибает вследствие несовместимых с жизнью пороков развития. При инфицировании матери во второй половине беременности ребенок рождается с тяжелым поражением мозга. Острая стадия заболевания протекает внутриутробно, рождается ребенок с активно текущим менингоэнцефалитом или его последствиями. Неврологические проявления менингоэнцефалита разнообразны: полиморфные эпилептические припадки, клонико-тонические судороги, спастические парезы, тремор, миоклонии, парезы глазных и мимических мышц, нистагм, контрактуры мышц, менингеальные явления. Иногда имеются симптомы поражения спинного мозга.

Для врожденного токсоплазмоза характерна триада признаков: гидроцефалия, хориоретинит и интрацеребральные кальцификаты. При гидроцефалии увеличиваются размеры головы, кости черепа истончаются, роднички напряжены. Гидроцефалии обычно сопутствует микрофтальмия. Если гидроцефалия развивается до рождения ребенка, то в родах приходится прибегать к краниотомии. Однако во многих случаях увеличение объема головы не обнаруживается и гидроцефалия выявляется только при пневмоэнцефалографии. Хориоретинит часто бывает двусторонним, фокальным, включающим макулярную область. Возможны также ирит, увеит, катаракта, первичная или вторичная атрофия зрительных нервов. Интрацеребральные кальцификаты диаметром 1-3 см располагаются в коре и базальных ганглиях и выявляются на краниограммах КТ и МРТ головного мозга.

Дети с врожденным токсоплазмозом отстают в умственном развитии вплоть до олигофрении. У них наблюдаются также разнообразные психотические состояния (депрессия, психомоторное возбуждение, галлюцинации, кататония). Иногда у детей с врожденным токсоплазмозом обнаруживаются желтуха, увеличенные печень и селезенка. Температура обычно остается нормальной. Ликворное давление при люмбальной пункции обычно нормальное. Отмечается высокое содержание белка и умеренный мононуклеарный плеоцитоз, иногда ксантохромия.

Осложнения врожденного токсоплазмоза - следствие поражения мозга и глаз, ведущего к истощению, параличам, умственной отсталости, слепоте. Присоединение вторичной инфекции обусловливает развитие гнойного менингоэнцефалита и пиоцефалии. Смерть наступает от прогрессирующего поражения головного мозга.

Течение токсоплазмоза
Ранее считалось, что врожденный токсоплазмоз приводит к смерти в течении первых лет жизни ребенка. В настоящее время возможны стабилизация инфекции и даже полное выздоровление с остаточными явлениями, выраженность которых зависит от степени поражения центральной нервной системы (кальцификаты, хореоретинит, эпилептический синдром, отставание в умственном развитии и др.). У взрослых наряду с острым течением часто отмечается подострое или даже хроническое развитие заболевания. Нередко приобретенный токсоплазмоз, особенно у взрослых, протекает без выраженных в той или иной степени клинических симптомов (инаппарантная форма).

Диагностика Токсоплазмоза:

Диагноз токсоплазмоза устанавливают на основании комплекса показателей, которые включают клинические данные и результаты лабораторного подтверждения. Относительное значение имеют эпидемиологические предпосылки, такие как контакт с кошками, условия общения с ними, особенности пищевых привычек (употребление сырого, полусырого мяса, проба сырого фарша, немытых овощей, фруктов), соблюдение личных гигиенических навыков, профессия и др.

Чрезвычайное многообразие клинических проявлений, отсутствие симптомов, характерных только для токсоплазмоза, затрудняет клиническую диагностику и позволяет в определенных случаях только предположить диагноз, который формируется при проведении полноценной дифференциальной диагностики и при анализе результатов лабораторного исследования.

Методы лабораторной диагностики токсоплазмоза делят на две группы: паразитологические и иммунологические.

Паразитологические методы основаны на возможности обнаружения возбудителя или выделении его при заражении восприимчивых животных - биопроба.

К ним относится прямая микроскопия мазков - отпечатков пораженных органов (миндалины, биоптат лимфоузлов, головного мозга, внутренние органы погибших эмбрионов или плодов) или мазков из осадка спинномозговой жидкости, крови, окрашенных по Романовскому - Гимзе. Можно исследовать гистологические препараты этих органов.

К сожалению, технические сложности обнаружения post mortum, а также редкие случаи обнаружения токсоплазм в крови, спинномозговой жидкости затрудняют использование этих методов.

Биологическая проба на белых мышах, хомяках, зараженных исследуемым материалом и проведением последующих 5-6 слепых пассажей, требует особых условий содержания животных, лабораторий со специальным режимом работы и применяется только в научных целях.

В широкой практике используют преимущественно иммунологические методы, которые включают серологические реакции и внутрикожную пробу. Эти методы, достаточно специфичные и чувствительные, определяют, прежде всего, состояние инфицированности, а серореакции - и заболеваемости. Эти понятия неоднозначны, ибо заболеваемость во много раз ниже инфицированности.

Из методов серологической диагностики используют реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА). Диагноз подтверждается достоверным нарастанием титра антител - динамикой титров в парных сывороротках, взятых с интервалом 2-4 недели.

РСК становится положительной со 2-й недели после заражения и наибольших титров - 1:16 - 1:320 достигает через 2-4 месяца. Через 1-3 года может стать отрицательной или сохраниться в низких титрах (1:5, 1:10), которые не имеют самостоятельного значения.

РНИФ становится положительной с 1-й недели инфекции и максимальных показателей (1:1280 - 1:5000) достигает на 2- 4 месяце. В низких титрах 1:10 - 1: 40 может сохраняться 15-20 лет.

ИФА в соответствии с ориентацией на международный стандарт ВОЗ является наиболее объективным методом. О положительной реакции свидетельствуют оптические показатели более 1,5, в иммуноферметных единицах - больше 60; в международных - больше 125, в титрах антител - 1:1600 и больше.

Диагностика врожденного токсоплазмоза у ребенка начинается с акушерского анамнеза матери, эпиданамнеза и показателей серологических реакций. Обязательны консультации специалистов для дифференциации с герпетической, цитомегаловирусной, листериозной, хламидийной инфекциями, а также рентгенография черепа и обследование в медикогенетическом центре.

Следует напомнить, что 20 - 30% женщин имеют антитела - это здоровые носители антител. Они не требуют лечения. 70 - 80%, показавших отрицательные серореакции, составляют группу риска и нуждаются в повторном обследовании.

На протяжении первого года жизни ребенка необходимо проводить параллельные серологические обследования матери и ребенка в динамике.

Лечение Токсоплазмоза:

При остром токсоплазмозе используются химиотерапевтические препараты.

Делагил (по 0,5г 2 раза в сутки) в сочетании с сульфаниламидами (по 0,5г 2 раза в сутки) в течение 10 дней. Фансидар назначается в количестве 5 таблеток на курс: по 1 табл. через 2 дня или в виде внутримышечных инъекций по 1 ампуле в 2,5 мг один раз в 2 дня в количестве 5 инъекций. Проводится один или два курса лечения.

Из антибиотиков назначаются: линкомицина гидрохлорид (по 0,5г 2 раза в сутки); метациклина гидрохлорид (по 0,3г 2 раза в сутки) в течение 5-7 дней в сочетании с сульфаниламидами; ровамицин.

Лечение хронического токсоплазмоза во много раз труднее, чем острого, так как химиопрепараты не оказывает значительного эффекта. Главное место занимает гипосенсибилизирующая и иммуномодулирующая терапия. В комплекс лечения включают витамины, десенсибилизирующие средства, лидазу, церебролизин и пр.

Имеются данные о положительном действии левамизола в терапии хронического токсоплазмоза. Левамизол назначается по 150 мг 3 дня подряд с перерывами 1 нед между циклами, всего 2 - 3 цикла.

Профилактика Токсоплазмоза:

Профилактика инфицирования токсоплазмами заключается в употреблении в пищу только хорошо термически обработанного мяса и мясопродуктов, чисто вымытых овощей, фруктов и ягод. В процессе приготовления пищи запрещается пробовать на вкус сырой мясной фарш. Необходимо тщательно мыть руки после обработки сырых мясопродуктов, работе в саду, огороде, детям после игры на детской площадке и, особенно, в песочнице. Следует тщательно соблюдать санитарно-гигиенические правила содержания в квартире домашних животных, не забывая мыть руки после контактов с ними.

При наступлении беременности каждая женщина должна быть обследована на токсоплазмоз в женской консультации. При выявлении у беременной клинических проявлений токсоплазмоза, а также обнаружение антител к токсоплазмам класса IgM, следует решить вопрос о необходимости лечения или прерывания беременности.

К каким докторам следует обращаться если у Вас Токсоплазмоз:

Вас что-то беспокоит? Вы хотите узнать более детальную информацию о Токсоплазмоза, ее причинах, симптомах, методах лечения и профилактики, ходе течения болезни и соблюдении диеты после нее? Или же Вам необходим осмотр? Вы можете записаться на прием к доктору .

Токсоплазмоз у детей является врожденным (при внутриутробном заражение) или приобретенным заболеванием, вызванным паразитами, для которого характерно хроническое течение, поражение ЦНС, миокарда, органов ретикулоэндотелиальной системы*, мышц, глаз.

*Ретикулоэндотелиальная система или система макрофагов — это вид клеток, рассеянных в разных отделах человеческого организма, несущих барьерную (защита от инфицирования) и фагоцитарную (уничтожение патогенных микроорганизмов) функцию и функцию обмена веществ. Больше всего таких клеток сконцентрировано в селезенке, лимфатических узлах и костном мозге.

Что провоцирует / Причины Токсоплазмоза у детей:

Возбудитель заболевания – простейший паразит Toxoplasma gondii семейства трипаносомид. Данный паразит существует в 3 формах: трофозоиты, цисты и ооцисты. Размножение трофозоитов происходит внутриклеточно во всех клетках животных, и обнаруживается в тканях на острой стадии инфекции. Цисты основываются в организме хозяина, создавая собственную оболочку. Они могут сохраняться долгие годы в организме. Большая часть их задерживается в миокарде, скелетных мышцах, ЦНС. Ооцисты поселяются в слизистой оболочке тонкой кишки кошек и выделяются с испражнениями. Ооцисты в благоприятной среде сохраняются до 1 года и более, именно они влияют на передачу инфекции.

Источниками заражения человека являются животные и птицы. Паразитируя в организме животного, через испражнения токсоплазма попадает во внешнюю среду, становясь причиной инфицирования других животных и людей. Инфицироваться можно через:

зараженную землю – песочница, кошачий туалет, пикник в парке и прочее;
грязные фрукты и овощи, находившиеся в непосредственном контакте с инфицированной средой;
мясные и молочные продукты, содержащие цисты, не прошедшие термическую обработку;
внутриутробное заражение. Паразит попадает через плаценту и поражает плод, провоцируя тяжелые заболевания мозга и глаз у ребенка. В случае заражения женщины в первом триместре беременности вероятность врожденного токсоплазмоза возрастает до 15-20 %. Беременность протекает в тяжелой форме. Заражение в третьем триместре отражается на детях в 65%. В случае инфицирования женщины до зачатия, за 6 месяцев и более, внутриутробного влияния на плод не будет, а если заражение произошло в период планирования ребенка, непосредственно перед наступлением беременности, появляется риск инфицирования ребенка;
при переливании крови, если донор болен токсоплазмозом.

Патогенез (что происходит?) во время Токсоплазмоза у детей:

Токсоплазма проникает в организм, далее попадает в лимфоузлы, вызывая их гиперплазию и воспалительно-гранулематозный процесс. Для острой стадии главный симптом – увеличение лимфоузлов. Далее токсоплазмы перемещаются в кровь, которая разносит их по организму, после чего паразиты поселяются в органах и тканях – селезенка, скелетные мышцы, печень, ЦНС, сердце и т.д. В этих органах образуются воспалительные очаги паразитов – цисты, сохраняющиеся на протяжении длительного времени, иногда даже пожизненно, также образуются очаги некроза, приводящие к отложению соли кальция, таким образом, появляются кальцинаты. Для острой формы токсоплазмоза в организме характерно наличие тахизоиты, для случаев подострого и хронического течения – образование цист (наибольшее их количество находят в мышцах и головном мозге). Внутриутробное заражение при гематогенном инфицировании плода приводит к различным повреждениям зависимо от срока беременности и массивности инвазии. В случае инфицирования в первом триместре беременности возникает тяжелый генерализованный процесс, последствиями которого могут стать гибель плода, мертворождение, выкидыши или рождение ребенка с хроническим врожденным заболеванием. Если женщина заразилась на поздних сроках беременности, то у её ребенка наблюдается острая форма токсоплазмоза, поражающая, гепатолиенальную систему и поперечно-полосатую мускулатуру.

Различают нижеприведенные формы врожденного токсоплазмоза у детей:

Острый врожденный токсоплазмоз. Проявляется симптомами: повышенная температура тела, увеличение печени и селезенки, желтуха, пневмония, миокардит; возможным осложнением является геморрагический синдром.
Подострый врожденный токсоплазмоз: проявляется симптомом менингоэнцефалита.
Хронический врожденный токсоплазмоз. Характерны крайне тяжелое течение, различные дефекты развития, выраженные дегенеративные изменения ЦНС с кальцификатами головного мозга. Осложнениями токсоплазмоза ЦНС являются задержка психомоторного развития, эпилептический синдром, глухота, слепота.

Симптомы Токсоплазмоза у детей:

Обе формы токсоплазмоза, как врожденная, так и приобретенная переходят в острое заболевание. У новорожденных наблюдается выраженная интоксикация, лихорадка, озноб, слабость, помутнение хрусталика, развитие косоглазия, пневмония, изменения формы и состояния внутренних органов, нервной системы, экзантема. У детей появляются элементы сыпи, которые состоят из небольших пятен розовой или красной окраски. Сыть обильно выражается на конечностях, внизу живота, её длительность до 2 недель, клонические и тонические судороги, паралич конечностей. Повышенный показатель давления ликвора указывает на токсоплазмоз. Заболевание развивается и прогрессирует, что может привести к летальному исходу в первые 2 недели жизни ребенка.

Диагностика Токсоплазмоза у детей:

В случае подозрения у новорожденного токсоплазмоза необходимо провести комплексное исследование слуховой, зрительной и нервной систем. Для диагностирования заболевания проводится микроскопия возбудителя (проверяется кровь, спинномозговая жидкость, плодные оболочки, пунктат лимфоузлов). Электронная микроскопия позволяет выявить возбудителя в тканях мозга.

Для диагностики также применяются следующие способы:

Иммунофлюоресценция. Выявление титров IgM. Наличие IgM у новорожденного свидетельствует об инфицировании. IgM определяют через 2 недели после рождения или инфицирования.
Проба Сэбина-Фельдмана на окрашивание токсоплазм. Решающий тест при обследовании новорожденных. Для его проведения используются парные сыворотки, 4-кратное увеличение титров указывает на наличие острой инфекции.
Кожная проба с токсоплазмином.
МРТ головного мозга.
Биопсия мозга и наличие паразитов в пероксидазно-антипероксидазном тесте.
Если на ультрасонографии размер латеральных желудочков увеличен, это косвенно указывает на наличие инфекции.

Лечение Токсоплазмоза у детей:

Лечебная терапия токсоплазмоза у детей должна быть комплексной. Лечение может проходить как при беременности – матери и ребенка, так и после рождения малыша, но есть исключения. Беременным с положительными результатами внутрикожной пробы и анализов, но при отсутствии симптомов заболевания лечение не назначается. Беременным женщинам с хроническим токсоплазмозом назначается профилактическая иммунотерапия. Самая большая опасность для беременной скрывается в свежем инфицировании. В таком случае проводится 1-2 курса химиотерапии. Но препараты химиотерапии не рекомендованы для применения в первом триместре, так как большинство из них имеют тератогенное действие на плод (развитие уродств).

Основными препаратами в лечение принято считать антибиотики первого ряда – сулъфадиазин (сульфазин) и пириметамин (хлоридин). К альтернативному препарату относится спирамицин 3 г/сут в течение 3 нед. (при беременности). Клиндамицин 900-1200 мг 3 раза в день внутривенно. Глюкокортикоиды – при токсоплазмозе ЦНС, антибактериальные препараты резерва – азитромицин, кларитромицин.

Острый токсоплазмоз новорожденных и беременных (после 16 недель). Сульфадиазин 100-200 мг/кг в сутки (2-6 г/сут – взрослым) с пириметамином (хлоридин) 2 мг/кг в сутки в течение 3 дней, затем 1 мг/кг в сутки до 25 мг в сутки в течение 4 нед. (взрослым 200 мг в 1-й день, затем 25-50 мг в сутки на 4 нед.).

Профилактика Токсоплазмоза у детей:

Основной профилактикой токсоплазмоза у детей есть скрупулезное соблюдение правил гигиены: мытье рук по возвращению с прогулки, после игр с животными, особенно с кошками, перед приемом пищи. Беременные женщины не должны контактировать с объектами, представляющими потенциальную угрозу, чистка кошачьего туалета должна проводиться только в перчатках. Домашние животные должны проходить проверку на наличие у них антител к токсоплазмам. Для профилактики хронического врожденного токсоплазмоза назначают сульфадиазин 100 мг/кг ежедневно, пириметамин 1 мг/кг каждые 2 дня и лейковорин 5 мг/кг каждые 2 дня. Профилактическое лечение продолжают до 1 года. Для токсических эффектов назначают лейковорин (кальция фолинат) по 5 мг в сутки через день (женщинам по 10 мг в сутки). Поддерживающая терапия проводится сочетанием этих препаратов в течение 3-4 мес.

К каким докторам следует обращаться если у Вас Токсоплазмоз у детей:

Вас что-то беспокоит? Вы хотите узнать более детальную информацию о Токсоплазмоза у детей, ее причинах, симптомах, методах лечения и профилактики, ходе течения болезни и соблюдении диеты после нее? Или же Вам необходим осмотр? Вы можете записаться на прием к доктору .

Для данного исследования лаборатория принимает следующий биоматериал:

Подготовка к исследованию

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования

Токсоплазмоз — инфекция, вызываемая облигатным внутриклеточным паразитом Toxoplasma gondii, характеризующаяся полиморфизмом клинических симптомов.

Заражение людей происходит преимущественно пероральным путем, при употреблении плохо обработанных продуктов питания и трансплацентарно — от матери плоду.

У лиц без нарушений иммунной системы инфекция находится в латентном состоянии. Тяжелые варианты заболевания (диффузная энцефалопатия, энцефалит, пневмония, миокардит) встречаются только у взрослых с иммунодефицитом (ВИЧ-инфекция) и у внутриутробно инфицированных недоношенных детей.

Своевременное установление диагноза у беременных женщин определяет тактику ведения беременности.

Антитела класса IgМ к Toxoplasma gondii — маркёры острой фазы заболевания. Появляются в первые 2 недели от момента инфицирования и сохраняются в среднем в течение нескольких месяцев. Выявление IgМ у новорожденного говорит о внутриутробной инфекции.

Показания к исследованию:

Планирование беременности;
Беременные женщины, в т. ч. при наличии отягощенного акушерского анамнеза или патологии при текущей беременности;
Новорожденные при подозрении на внутриутробную инфекцию (врожденный токсоплазмоз);
Наличие инфекционного синдрома (длительный субфебрилитет; лимфадениты, особенно шейный и затылочный; гепатоспленомегалия; гепатит и миокардит неясного генеза; подострый или хронический энцефалит; хориоретинит, увеит, прогрессирующая близорукость; острое лихорадочное заболевание с сыпью неясного генеза);
Вторичные иммунодефициты.

Параметр	Референсные значения
Anti-Toxo IgM (качественное определение антител класса IgM к возбудителю токсоплазмоза)	Не обнаружено

Отсутствие контакта с токсоплазменной инфекцией
Ранний период инфицирования
Перенесенная хроническая инфекция

Первичное инфицирование токсоплазмами
Ложноположительный результат (беременность, аутоиммунные заболевания, болезни соединительной ткани и др.)

При единовременном заказе нескольких услуг, услуга по сбору биоматериала оплачивается только один раз.

Читайте также: